XHTW WM Keck Tıp Araştırma Vakfı Seçkin Genç Bilim İnsanı ve aynı zamanda, Ulusal Sağlık Enstitüsü / NHLBI hibe R01-HL089598 ve R01HL091947 ve Müsküler Distrofi Birliği hibe # 69.238 tarafından destekleniyor. Bu çalışma aynı zamanda CaMKII Sinyalizasyon Kalp Vakfı Leducq Alliance tarafından kısmen destekleniyor. NL Kalp Pili Kalp Ritmi Derneği ve 2009-2012 Amerikan Kalp Derneği Doktora Sonrası Bursu ve Elektrofizyoloji 2009-2010 Michel Mirowski Uluslararası Bursu alıcı.

Bölüm 1. Cerrahi hazırlık <ol><li> Steril koşullarda, programlı elektrik stimülasyonu deneylerde farelerin hayatta kalma ameliyatları yapılmaktadır durumda gerekli olacaktır. Ancak, deney en yaygın türü olan düzenli açık cerrahi teknikler yeterli, doğa terminal. </li><li> Izofluran% 2, 0,5 L / dk% 100 O 2 kullanarak fare anestezi . </li><li> Saç kesme makineleri, kürk yaka orta göğüs seviyesine tıraş için kullanılır. </li><li> Bacaklarda ısıtma kartı (İndus Instruments, Houston, Teksas) dahil EKG elektrotları üzerine bantlanmış anestezi fare, yatar pozisyonda yerleştirilir. Ve cerrahi alanında% 10 Povidon İyot ile dezenfekte edilir. Önerilen sistem, vücut ısısı 37.0 tutulur böyle ° C ± 1.0 ° C bir thermoanalyzer sistem tarafından kontrol edilen bir ısıtma yastığı bağlı bir rektal ısı probu, </li></ol> Bölüm 2. Sağ atriyum ve ventrikül içine kanülasyonu ve EP kateter yerleştirilmesi <ol><li> Fare tamamen uyuşturulduktan sonra, bir ayak-tutam tarafından onayladıktan sonra, 1 / 2 inç bir kesi klavikula düzeyinde kaudal uçla orta hatta sağa doğru yapılır. </li><li> Subkutan doku, tükürük bezleri ve lenfatik dokular sağ juguler ven görselleştirmek için künt diseksiyon ile ayrılır. </li><li> Ven proksimal ucunu 6-0 sütür ile bağlıdır. Kateter takarken bu dikiş hafifçe çekerek, internal juguler ven düz devam edecektir. Başka bir dikiş görüntülenmiştir segmentin distal ucunda ven altına yerleştirilir. Bu dikiş kateter kalbin içinde en iyi konulduğunda, hemostaz sağlamak ve istenen pozisyona (Şekil 1) kateter korumak için, kateter çevresinde bağlı olacaktır. </li><li> Bilgisayar tabanlı veri toplama, yüzey EKG ve eş zamanlı intrakardiyak electrograms (yani, Iox-2 kazanım yazılım, Emka Teknolojileri, VA, USA) 4 yol açar kayıtlarına başladı. Intrakardiyak elektrogram kayıt için &quot;kayıt&quot; modunda (yani modeli STG3008, Çok Kanallı Sistemler, Reutlingen, Almanya) bir dış stimülatörü, kateter elektrotlar bağlanır. </li><li> Mikro-makas kullanarak, ven uzunlamasına yönde küçük bir kesi yapılır ve 1.1F octapolar kateter (EPR-800, Millar Instruments, Houston, Teksas), sağ atrium içine damar yoluyla ileri düzeydedir. Proksimal sütür hafifçe çekerek, internal juguler ven düz tutmaya yardımcı olacaktır ve sağ atrium ve ventrikül içine kateter kolay geçişine olanak sağlayacaktır. Doğru kateter pozisyonu sırasıyla sağ ventrikül, sağ ventrikül, atriyoventriküler düğüm ve sağ atrium temel (Şekil 2) zirvesine düzeyinde 4 intrakardiyak electrograms dalga görselleştirme tarafından doğrulandı. </li><li> Distal sütür kateter pozisyonu güvence altına almak ve olası kanama önlemek için kapalı bağlıdır. </li></ol> Bölüm 3. Programlı elektriksel uyarı <ol><li> Seçici atriyal pacing durumda, diğer elektrot çiftleri &quot;kayıt&quot; modunda devam ederken, atrium içinde bulunan elektrot çifti, &quot;recoding&quot; modundan &quot;stimülasyon&quot; modunda açılır. </li><li> Bir fare atriyal aritmiler için artmış bir güvenlik açığı olup olmadığını belirlemek için, sağ atrium programlı elektrik stimülasyonu yapılmaktadır. İlk olarak, atriyal pacing eşik uyaran yakalama tutarlılığını test etmek için farklı temel döngü uzunlukları (BCL) (en az 50) 2 ms akım darbeleri uygulayarak belirlenir. Ilk darbe tren BCL içsel BCL göre biraz daha düşük ve 10 ms (örneğin, 100 ms, 90 ms, 80 ms ve 70 ms) azalır. Uyaran yakalamak için gerekli tipik geçerli genliği 100-200 uA. </li><li> Sinüs düğümü toparlanma zamanı (SNRT) 100 ms BCL 15-atriyal pacing tren uyguladıktan sonra ölçülür. SNRT pacing tren son uyarıcı ve ilk spontan sinüs ritmi başlangıcı arasındaki zaman aralığı olarak tanımlanır. </li><li> Atriyal efektif refrakter dönemi (AERP) birleştiğinde kısa S2 erken uyaran bir sabit BCLs (yani, 100 ms) atriyal pacing tren dizi uygulayarak belirlenir. S1-S2 aralığı giderek 20ms 70ms gelen her Pacing tren 2-ms azalır. AERP S2 (düzenli tren darbe S1, S2 erken uyaran) ile yayılır yendi oluşturmak için başarısız kulakçıklar için uzun S1-S2 bağlantı aralığı olarak tanımlanır. Her stimülasyon protokolü arasında, en az 30 saniye bir iyileşme dönemi vardı. </li><li> Efektif refrakter dönemde atriyoventriküler (AV) düğüm (AVNERP) birleştiğinde S2 erken bir stimulus ile 100 ms BCL atriyal pacing tren dizi uygulayarak belirlenir. S1-S2 aralığı giderek azalır2 ms 70 ms 20 ms her Pacing tren. AVNERP atriyuma teslim erken uyarılma değil bir QRS kompleksi Onun potansiyeli olan en uzun S1-S2 bağlantı aralığı olarak tanımlanır. Her stimülasyon protokolü arasında, en az 30 saniye bir iyileşme dönemi vardı. </li><li> , Atriyal fibrilasyon (AF) de dahil olmak üzere atriyal aritmiler, Inducibility Verheule ve arkadaşları tarafından açıklanan burst pacing protokolünü kullanarak test edilecek. 2 2 saniyelik atışlarla bir dizi atriyal aritmi inducibility belirlemek için uygulanır . Ilk 2 ikinci patlama 40 ms siklus uzunluğu (CL), ve son CL 20 ms kadar birbirini izleyen 2 ikinci patlama, bir önceki patlamada kısa 2-ms CL. Aritmojenik substrat yokluğunda, kalp pacing protokolü hemen sinüs ritmi devam edecektir. Durumda atriyal flutter, ventriküler elektrogram görüldüğü gibi ventriküler yanıt frekans, tipik olarak yavaş ise atriyal elektrogram görülen hızlı A dalgaların düzenli bir desen var olacaktır. Atriyal fibrilasyon durumunda, yüzey EKG&#39;de P dalgalarının yokluğu düzensiz RR aralıkları gösterecektir. Ayrıca, atriyal elektrogram ventriküler elektrogram düzensiz ve yavaş ventriküler dalgaları (Şekil 3) ortaya çıkaracaktır ise, hızlı ve düzensiz dalgalar ortaya koyacaktır. Aritmi indüksiyon protokolleri genellikle üç nüsha olarak yapılır ve 3 çalışmaların en az 2 uyarılmış olabilir aritmi olarak kabul edilir. 3,4. </li></ol> Bölüm 4. Kateterin çıkarılması <ol><li> Tüm pacemaker protokolleri tamamladıktan sonra, veri toplama durdurulur. Kateterin distal ucunda dikiş yavaşça kateter serbest bırakmak amacıyla kesilir. </li><li> Terminali EP çalışmaları durumunda, düğüm kateter yavaşça serbest bırakmak için gevşetti. </li><li> Çalışmanın bitiminde, fare, izofluran altında servikal dislokasyon kullanırken insanca ötenazi olacaktır. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar Yüzey EKG ve intrakardiyak electrograms in vivo elektrofizyoloji çalışma boyunca aynı anda kayıt altına alınır ve tüm protokolleri tamamlanmasının ardından ayrıntılı olarak gözden geçirilmiştir . Bazal elektrofizyolojik parametreler, PR aralığı, PQ aralığı, QRS süresi, QT aralıkları ve QRS morfolojisi içerir. Bu parametreler, elle ölçülen ya da otomatik veri toplama yazılımı Iox-2 veya EKG-AUTO (Emka Teknolojileri, VA, USA) kullanılarak olabilir. SNRT, AERP ve AVNERP sinüs düğümü &quot;kalp pili&quot; fonksiyonu, atriyal, AV nodal iletim özellikleri, sırasıyla hakkında bilgi verir. Atriyal fibrilasyon indüklenen pacemaker bölüm örnekleri kağıt Chelu ve arkadaşları tarafından bulundu. 4 <img src="/files/ftp_upload/1730/1730fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 farelerde elektrofizyoloji çalışmaları için intrakardiyak kateterizasyon İllüstrasyon A. sağ internal juguler ven izole ve kanüle. Uygun kateter pozisyonu sağlandıktan sonra ven distal ucuna bağlıdır. B. Fare, bu işlem için bir yatar pozisyonda yerleştirilir. C. Cartoon kateter intrakardiyak konumunu resmeden . Elektrot çifti, sırasıyla, sağ ventrikül, sağ ventrikül tabanı, atriyoventriküler düğüm ve sağ atrium apeks düzeyinde konumlandırılmış . 1.1F octapolar kateter-up kapatın. Mathur et al değiştirilmiş Şekil. Circ Arrhtyhm Electrophys 5 izni ile. <img src="/files/ftp_upload/1730/1730fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. Fare Temsilcisi Yüzey EKG ve İntrakardiyak Electrograms. (A) 540 sağ atrium seviyesinde dakika (BE) Bipolar intrakardiyak elektrogram kayıtları başına atım (B), atrioventriküler düğüm (C), ve baz bir frekans ile normal sinüs ritmi gösteren kurşun II yapılandırma Yüzey EKG sağ ventrikül (D) ve (E) sağ ventrikül apeks, sırasıyla. Panel B intrakardiyak bir dalga yüzey EKG&#39;de P-dalga karşılık geldiğini unutmayın. Ventriküler elektrogram V-dalga yüzey EKG&#39;de QRS dalgası karşılık gelir. <img src="/files/ftp_upload/1730/1730fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. Atriyal fibrilasyon, atriyal burst pacing sonra geliştirilen bir fare Temsilcisi yüzey EKG ve intrakardiyak electrograms .

<ol>
	<li>Nattel, S., Shiroshita-Takeshita, A., Brundel, B. J., Rivard, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+atrial+fibrillation:+lessons+from+animal+models.">Mechanisms of atrial fibrillation: lessons from animal models.</a> Prog Cardiovasc Dis. 48, 9-9 (2005).</li><li>Verheule, S., Sato, T., Everett, T. t., Engle, S. K., Otten, D., Rubart-von der Lohe, M., Nakajima, H. O., Nakajima, H., Field, L. J., Olgin, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+vulnerability+to+atrial+fibrillation+in+transgenic+mice+with+selective+atrial+fibrosis+caused+by+overexpression+of+TGF-beta1.">Increased vulnerability to atrial fibrillation in transgenic mice with selective atrial fibrosis caused by overexpression of TGF-beta1.</a> Circ Res. 94, 1458-1458 (2004).</li><li>Sood, S., Chelu, M. G., Oort, R. J. v. a. n., Skapura, D., Santonastasi, M., Dobrev, D., Wehrens, X. H., H, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+leak+due+to+FKBP12.6+deficiency+in+mice+facilitates+the+inducibility+of+atrial+fibrillation.">Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation.</a> Heart Rhythm. 5, 1047-1047 (2008).</li><li>Chelu, M. G., Sarma, S., Sood, S., Wang, S., van Oort, R. J., Skapura, D. G., Li, N., Santonastasi, M., Muller, F. U., Schmitz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calmodulin+kinase+II-mediated+sarcoplasmic+reticulum+Ca2++leak+promotes+atrial+fibrillation+in+mice.">Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice.</a> J Clin Invest. 119, 1940-1940 (2009).</li><li>Mathur, N., Subeena, S., Wang, S., van Oort, R. J., Sarma, S., Li, N., Skapura, D., Bayle, J. H., Valderrabano, M., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sudden+Infant+Death+Syndrome+in+Mice+With+an+Inherited+Mutation+in+RyR.">Sudden Infant Death Syndrome in Mice With an Inherited Mutation in RyR.</a> Circ Arrhythmia Electrophysiol. , (2009).</li></ol>

Kateterizasyon sırasında yoğun kanama, kardiyak kateterizasyon sırasında hipovolemi nedeniyle kalp hızı artırabilir. Bu durumda, (0.3 1.0 mL) steril serum fizyolojik intraperitoneal dolum basıncı normale olabilir ve fare hemodinamik stresi azaltmak. Izofluran 2 saatten daha uzun ya da izofluran, yüksek konsantrasyonlarda (&gt;% 2) maruz kalmak kalp ve solunum fonksiyonları fare bastırmak. Bu nedenle, tüm çalışmalar, en az 2 saat içinde tamamlanmış olması tavsiye edilir. Ayrıca, vücut ısısı 37.0 ± 1.0 ° C normal sınırlar içinde her zaman devam esastır Hem hipotermi ve hipertermi, kalp ritmi ve aritmojenik substrat potansiyel varlığı etkileyecektir. Her deney atriyal yakalama eşikleri belirlenirken başlamalıdır. Atriyal pacing, atriyal eşik, SNRT, AERP ve AVNERP durumda sinüs düğümü, AV düğüm ve atriyal doku iletim özellikleri normal olup olmadığını değerlendirmek için tespit edilmelidir.

programmed electrical stimulation in mice

Genetiği değiştirilmiş farelerde, iletim bozuklukları, atriyal ve ventriküler aritmiler ve ani kardiyak ölüm altında yatan moleküler mekanizmaları çalışmak için tercih edilen bir hayvan modeli olarak ortaya çıkmıştır.<sup&gt; 1</sup&gt; İntrakardiyak pacemaker çalışmaları, juguler ven içine yerleştirilen bir 1.1F octapolar kateteri kullanarak farelerde yapılan, sağ atrium ve ventrikül içine gelişmiş olabilir. Burada, farelerde programlı elektrik stimülasyonu yerine dahil olan adımları göstermektedir. Yüzey EKG ve intrakardiyak electrograms atrium intrakardiyak pacemaker harici stimülatörü kullanılarak gerçekleştirilir ise, kulakçıklar, atriyoventriküler kavşak ve ventriküler miyokardın eş zamanlı olarak kaydedilir. Böylece, farelerde programlı elektrik stimülasyonu iletim kusurları ve kardiyak aritmiler altında yatan moleküler mekanizmalarını keşfetmek için eşsiz fırsatlar sağlar.

Watch this Scientific Journal Video about Programmed Electrical Stimulation in Mice at JoVE.com

Programmed Electrical Stimulation in Mice

Programlı elektrik stimülasyonu, kalp iletim özellikleri belirlemek için yeteneği ve çeşitli pacemaker protokolleri kullanarak kardiyak aritmiler neden ve sona erdirme imkanı sağlar. Transvenöz bir kateter yardımıyla, intrakardiyak elektrogram kayıtları, programlı elektrik stimülasyonu protokolleri aritmojenik substratlar tanımlamak için aşağıdaki farelerde elde edilebilir.

Farelerde Programlı Elektrik Stimülasyon

Genetically-modified mice have emerged as a preferable animal model to study the molecular mechanisms underlying conduction abnormalities, atrial and ...

programmed-electrical-stimulation-in-mice

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

20.3K Görüntüleme.  Baylor College of Medicine (BCM). Programlı elektrik stimülasyonu, kalp iletim özellikleri belirlemek için yeteneği ve çeşitli pacemaker protokolleri kullanarak kardiyak aritmiler neden ve sona erdirme imkanı sağlar. Transvenöz bir kateter yardımıyla, intrakardiyak elektrogram kayıtları, programlı elektrik stimülasyonu protokolleri aritmojenik substratlar tanımlamak için aşağıdaki farelerde elde edilebilir.

Video: Programmed Electrical Stimulation in Mice

Transthoracic Echocardiography in Mice

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene expression. Transgenic and gene targeting methods can be used to generate mice with altered cardiac size and function,1-3 and as a result, in vivo techniques are needed to evaluate their cardiac phenotype. Transthoracic echocardiography, pulse wave Doppler (PWD), and tissue Doppler imaging (TDI) can be used to provide dimensional measurements of the mouse heart and to quantify the degree of cardiac systolic and diastolic performance. Two-dimensional imaging is used to detect abnormal anatomy or movements of the left ventricle, whereas M-mode echo is used for quantification of cardiac dimensions and contractility.4,5 In addition, PWD is used to quantify localized velocity of turbulent flow,6 whereas TDI is used to measure the velocity of myocardial motion.7 Thus, transthoracic echocardiography offers a comprehensive method for the noninvasive evaluation of cardiac function in mice.

Transthoracic echocardiography offers a noninvasive method for the evaluation of cardiac function in mice. A combination of ultrasound and Doppler imaging modalities can be used to obtain dimensional measurements of the heart and intracardiac blood flow, which together provide an assessment of cardiac systolic and diastolic performance.

Fareler de Transtorasik Ekokardiyografi

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene ...

Tıp

A Murine Model of Muscle Training by Neuromuscular Electrical Stimulation

Neuromuscular electrical stimulation (NMES) is a common clinical modality that is widely used to restore1, maintain2 or enhance3-5 muscle functional capacity. Transcutaneous surface stimulation of skeletal muscle involves a current flow between a cathode and an anode, thereby inducing excitement of the motor unit and the surrounding muscle fibers. 
NMES is an attractive modality to evaluate skeletal muscle adaptive responses for several reasons. First, it provides a reproducible experimental model in which physiological adaptations, such as myofiber hypertophy and muscle strengthening6, angiogenesis7-9, growth factor secretion9-11, and muscle precursor cell activation12 are well documented. Such physiological responses may be carefully titrated using different parameters of stimulation (for Cochrane review, see 13). In addition, NMES recruits motor units non-selectively, and in a spatially fixed and temporally synchronous manner14, offering the advantage of exerting a treatment effect on all fibers, regardless of fiber type. Although there are specified contraindications to NMES in clinical populations, including peripheral venous disorders or malignancy, for example, NMES is safe and feasible, even for those who are ill and/or bedridden and for populations in which rigorous exercise may be challenging. 
Here, we demonstrate the protocol for adapting commercially available electrodes and performing a NMES protocol using a murine model. This animal model has the advantage of utilizing a clinically available device and providing instant feedback regarding positioning of the electrode to elicit the desired muscle contractile effect. For the purpose of this manuscript, we will describe the protocol for muscle stimulation of the anterior compartment muscles of a mouse hindlimb.

A murine model of neuromuscular electrical stimulation (NMES), a safe and inexpensive clinical modality, to the anterior compartment muscles is described. This model has the advantage of modifying a readily available clinical device for the purpose of eliciting targeted and specific muscle contractions in mice.

Nöromüsküler Elektriksel Stimülasyon tarafından Kas Eğitimi A Mürin Modeli

Neuromuscular electrical stimulation (NMES) is a common clinical modality that is widely used to restore1, maintain2 or enhance3-5 muscle functional ...

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

Use of genetically modified mice enhances our understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders such as a spinal cord injury (SCI). Freehand manual control used to produce a laceration model of SCI creates inconsistent injuries often associated with a crush or contusion component and, therefore, a novel technique was developed. Our model of cervical laceration SCI has resolved inherent difficulties with the freehand method by incorporating 1) cervical vertebral stabilization by vertebral facet fixation, 2) enhanced spinal cord exposure, and 3) creation of a reproducible laceration of the spinal cord using an oscillating blade with an accuracy of &plusmn;0.01 mm in depth without associated contusion. Compared to the standard methods of creating a SCI laceration such as freehand use of a scalpel or scissors, our method has produced a consistent lesion. This method is useful for studies on axonal regeneration of corticospinal, rubrospinal, and dorsal ascending tracts.

A novel technique to create a reproducible in vivo model of cervical spinal cord laceration injury in the mouse is described. This technique is based on spine stabilization by fixation of the cervical facets and laceration of the spinal cord using an oscillating blade with an accuracy of &plusmn;0.01 mm.

Farelerde Kontrollü Servikal yırtığı Sakatlık

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim) for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. It has been extensively used in various clinical settings. Based upon recent discoveries related to the systemic effects of voluntary breathing and intrinsic physiological interactions among systems during voluntary breathing, a new EStim protocol, Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim), has been developed to augment the effects of electrical stimulation. In BreEStim, a single-pulse electrical stimulus is triggered and delivered to the target area when the airflow rate of an isolated voluntary inspiration reaches the threshold. BreEStim integrates intrinsic physiological interactions that are activated during voluntary breathing and has demonstrated excellent clinical efficacy. Two representative applications of BreEStim are reported with detailed protocols: management of post-stroke finger flexor spasticity and neuropathic pain in spinal cord injury.

Breathing-controlled Electrical Stimulation BreEStim for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

The purpose is to present a new method, breathing-control electrical stimulation (BreEStim) for management of neuropathic pain and spasticity.

Nöropatik Ağrı ve Spastisite Yönetiminde Solunum kontrollü Elektriksel Stimülasyon (BreEStim)

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. ...

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of microvasculature at the site of inflammation. Parabiotic partners share their circulating antigens and thus are free of adverse immune reaction. First described by Paul Bert in 18641, the parabiosis surgery was refined by Bunster and Meyer in 1933 to improve animal survival2. In the current protocol, two mice are surgically joined following a modification of the Bunster and Meyer technique. Animals are connected through the elbow and knee joints followed by attachment of the skin allowing firm support that prevents strain on the sutured skin. Herein, we describe in detail the parabiotic joining of a ubiquitous GFP expressing mouse to a wild type (WT) mouse. Two weeks after the procedure, the pair is separated and GFP positive cells can be detected by flow cytometric analysis in the blood circulation of the WT mouse. The blood chimerism allows one to examine the contribution of the circulating cells from one animal in the other.

Parabiotic joining of two organisms leads to the development of a shared circulatory system. In this protocol, we describe the surgical steps to form a parabiotic connection between a wild-type mouse and a constitutive GFP-expressing mouse.

Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

A Multimodal Imaging- and Stimulation-based Method of Evaluating Connectivity-related Brain Excitability in Patients with Epilepsy

Resting-state functional connectivity MRI (rs-fcMRI) is a technique that identifies connectivity between different brain regions based on correlations over time in the blood-oxygenation level dependent signal. rs-fcMRI has been applied extensively to identify abnormalities in brain connectivity in different neurologic and psychiatric diseases. However, the relationship among rs-fcMRI connectivity abnormalities, brain electrophysiology and disease state is unknown, in part because the causal significance of alterations in functional connectivity in disease pathophysiology has not been established. Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) is a technique that uses electromagnetic induction to noninvasively produce focal changes in cortical activity. When combined with electroencephalography (EEG), TMS can be used to assess the brain's response to external perturbations. Here we provide a protocol for combining rs-fcMRI, TMS and EEG to assess the physiologic significance of alterations in functional connectivity in patients with neuropsychiatric disease. We provide representative results from a previously published study in which rs-fcMRI was used to identify regions with abnormal connectivity in patients with epilepsy due to a malformation of cortical development, periventricular nodular heterotopia (PNH). Stimulation in patients with epilepsy resulted in abnormal TMS-evoked EEG activity relative to stimulation of the same sites in matched healthy control patients, with an abnormal increase in the late component of the TMS-evoked potential, consistent with cortical hyperexcitability. This abnormality was specific to regions with abnormal resting-state functional connectivity. Electrical source analysis in a subject with previously recorded seizures demonstrated that the origin of the abnormal TMS-evoked activity co-localized with the seizure-onset zone, suggesting the presence of an epileptogenic circuit. These results demonstrate how rs-fcMRI, TMS and EEG can be utilized together to identify and understand the physiological significance of abnormal brain connectivity in human diseases.

Resting-state functional-connectivity MRI has identified abnormalities in patients with a wide range of neuropsychiatric disorders, including epilepsy due to malformations of cortical development. Transcranial Magnetic Stimulation in combination with EEG can demonstrate that patients with epilepsy have cortical hyperexcitability in regions with abnormal connectivity.

Epilepsi Hastalarında Beyin uyarılabilmenin Bağlantı ile ilgili değerlendirmek için bir Multimodal imaging- ve Uyarım tabanlı Yöntemi

Resting-state functional connectivity MRI (rs-fcMRI) is a technique that identifies connectivity between different brain regions based on correlations ...

Cavernous Nerve Stimulation and Recording of Intracavernous Pressure in a Rat

The stimulation of the cavernous nerve (CN) and measurement of intracavernous pressure (ICP) have been used extensively to test and evaluate therapies for erectile dysfunction. However, the methods used vary between laboratories, and pitfalls still exist. The goal of this study was to describe a surgical technique that would provide a reliable and reproducible model. By exposing the ischiocavernosus muscle at its point of insertion on the ischial tuberosity, the penile crus could be cannulated with minimal dissection and injury to the structures involved in erectile function. Repeated stimulation of the CN, without the need for lifting and drying, was achieved by using a 125 &#181;m bipolar silver electrode and biocompatible silicon glue to isolate the electrode-nerve complex. This method prevents neuropraxia by reducing stretching and drying the nerve and provides complete isolation of the nerve, negating electrical leakage and preventing stimulation of alternative pathways.

This study describes a simplified surgical procedure and technique for performing cavernous nerve stimulation with the isolation of the nerve-electrode complex using silicone glue and intracavernous pressure measurement.

Kavernöz sinir stimülasyonu ve kayıt bir sıçan Intracavernous basınç

The stimulation of the cavernous nerve (CN) and measurement of intracavernous pressure (ICP) have been used extensively to test and evaluate therapies for ...

Updated Technique for Reliable, Easy, and Tolerated Transcranial Electrical Stimulation Including Transcranial Direct Current Stimulation

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a noninvasive method of neuromodulation using low-intensity direct electrical currents. This method of brain stimulation presents several potential advantages compared to other techniques, as it is noninvasive, cost-effective, broadly deployable, and well-tolerated provided proper equipment and protocols are administered. Even though tDCS is apparently simple to perform, correct administration of the tDCS session, especially the electrode positioning and preparation, is vital for ensuring reproducibility and tolerability. The electrode positioning and preparation steps are traditionally also the most time consuming and error-prone. To address these challenges, modern tDCS techniques, using fixed-position headgear and pre-assembled sponge electrodes, reduce complexity and setup time while also ensuring that the electrodes are consistently placed as intended. These modern tDCS methods present advantages for research, clinic, and remote-supervised (at home) settings. This article provides a comprehensive step-by-step guide for administering a tDCS session using fixed-position headgear and pre-assembled sponge electrodes. This guide demonstrates tDCS using commonly applied montages intended for motor cortex and dorsolateral prefrontal cortex (DLPFC) stimulation. As described, selection of the head size and montage-specific headgear automates electrode positioning. Fully assembled pre-saturated snap-electrodes are simply affixed to the set position snap-connectors on the headgear. The modern tDCS method is shown to reduce setup time and reduce errors for both novice and expert operators. The methods outlined in this article can be adapted to different applications of tDCS as well as other forms of transcranial electrical stimulation (tES) such as transcranial alternating current stimulation (tACS) and transcranial random noise stimulation (tRNS). However, since tES is application specific, as appropriate, any methods recipe is customized to accommodate subject, indication, environment, and outcome specific features.

When administering transcranial direct current stimulation (tDCS), reproducible electrode preparation and placement are vital for a tolerated and effective session. The purpose of this article is to demonstrate updated modern setup procedures for the administration of tDCS and related transcranial electrical stimulation techniques, such as transcranial alternating current stimulation (tACS).

Transkraniyal Doğru Akım Stimülasyonu Dahil Olmak Üzere Güvenilir, Kolay ve Tolere Edilen Transkraniyal Elektriksel Stimülasyon için Güncellenmiş Teknik

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a noninvasive method of neuromodulation using low-intensity direct electrical currents. This method of ...