Добро пожаловать в наши видеоинструкции по транзиторной окклюзии средней мозговой артерии у мышей. Меня зовут Рок Истер, и этот эксперимент проходил в Лаборатории регенеративной нейронауки Медицинской школы Университета Загреба.Введение. Метод транзиторной средней мозговой артерии, или сокращенно tMCAO, является наиболее часто используемой животной моделью ишемического инсульта.
В основном это делается у грызунов, таких как крысы и мыши. Два основных оперативных метода, общая сонная артерия и метод наружной сонной артерии, различаются в основном местом артериотомии для введения нити. В этом видео мы представим наши модификации и некоторые ключевые моменты для обеспечения полной реперфузии методом наружной сонной артерии.
Начиная с рекомендуемых инструментов, вам понадобятся два пинцета Dumont type 5, пинцет Dumont type 7 и самозакрывающийся пинцет Dumont type N0, ретрактор mini-colibri и прямые ножницы с микропружинами для артериотомии. Для гемостаза мы будем использовать два сосудистых микрозажима вместе с соответствующим аппликатором. Хирургические ножницы, иглодержатель и хирургические щипцы мы будем использовать для вскрытия и закрытия операционной раны.
В качестве материалов мы будем использовать монофиламентный шовный материал 5/0 для хирургической раны, плетеный шелковый шовный материал 6/0 для лигатур артерий, хирургическую ленту для фиксации животного, глазную мазь гель для защиты глаз животных и лидокаиновый гель для дополнительной местной анестезии. Наконец, для слива лишней крови мы будем использовать заостренные кусочки бумажного полотенца. Стерео операционный микроскоп имеет решающее значение для такой микрохирургической процедуры, как эта.
Грызуны, находящиеся под наркозом, склонны к переохлаждению, поэтому мы будем использовать температурный монитор. Что касается операционной стороны для животного, вам понадобится легко очищаемая нагреваемая поверхность, а также трубка для подачи газа для анестезии, а также способ надежного контроля температуры животного во время процедуры. На столе слева есть еще несколько инструментов и материалов, которые мы будем использовать.
Измерение продолжительности определенных частей процедуры очень важно с точки зрения воспроизводимости, а также для последующего анализа данных. Бетадин и загруженные шприцы для быстрого и удобного использования. Машинка для стрижки шерсти животных для бритья шерсти животного.
Весы для взвешивания, важные для правильного дозирования анестезии. И, наконец, система газовой анестезии для животных, способная подавать азотно-кислородную газовую смесь в соотношении 2:1, вместе с выбивной коробкой для стимуляции анестезии. Все обращения с животными и процедуры, представленные в этом видео, были одобрены Комитетом по этике лицензирования Медицинской школы Университета Загреба и выполнены обученным и лицензированным персоналом. Протокол.
Подготовка животного и место операции. Расположите животное на подогреваемом операционном столе, а его нос поднесите к маске для анестезии. Наносите глазные мази на глаза животных, чтобы защитить их от гидратации и использования газообразного фтора.
Переверните животное на спину и вытяните ему шею, подложив под шею животного небольшую подушку, сделанную из хирургической ленты. Закрепите конечности животного на месте с помощью хирургической ленты. Следите за тем, чтобы не разгибать передние конечности слишком сильно, чтобы случайно не вызвать вывих плечевого сустава.
Смажьте ректальный зонд белым вазелином и введите его в прямую кишку для непрерывного измерения температуры тела. Примените предоперационную инъекцию физиологического раствора и бупренорфина внутрибрюшинно, чтобы животное хорошо увлажнялось и не испытывало боли во время процедуры. Придайте форму шерсти животного в области шеи с помощью аккумуляторной машинки для стрижки животных.
Соберите всю выбритую шерсть с помощью кусочков хирургического скотча. Чтобы участок был полностью свободен от шерсти, дополнительно придайте форму области с помощью бритвы. Накройте операционный стол чистой хирургической простыней.
Нанесите каплю Бетадина на выбритую кожу животного. С помощью ватного тампона втирайте дезинфицирующее средство в кожу круговым образом изнутри наружу. После этого проделайте то же самое с ватным тампоном, смоченным в этаноле.
Повторите этот шаг три раза со свежей парой стерильных ватных палочек для каждого повторения. Нанесите каплю лидокаинового геля на продезинфицированный участок будущего места разреза для местного обезболивания раны. Хирургия индукции ишемии.
Делая первоначальный разрез на продезинфицированной коже с помощью скальпеля, сведите количество разрезов кожи к минимуму, чтобы облегчить заживление хирургической раны. С помощью щипцов 7 и 5 типа оторвите поверхностную фасцию, а слюнные железы отделите от подлежащих тканей. Поместите втягивающее устройство в исходное положение, следя за тем, чтобы слюнные железы не мешали последующим шагам.
Удалите глубокую фасцию шеи с помощью щипцов 7-го типа и отделите грудино-ключично-сосцевидные мышцы от сонной артерии, чтобы переместить ретрактор. Переместите ретрактор так, чтобы он достигал грудино-ключично-сосцевидных мышц, чтобы обеспечить доступ к сонной артерии. Резецируйте подъязычную мышцу, чтобы обеспечить четкий визуальный и более легкий доступ к сонной артерии.
Зажмите сонную фасцию на боковой стороне триады сонной артерии и осторожно потяните ее в сторону, чтобы визуально идентифицировать артерию, нерв, вену и все окружающие ветви кровеносных сосудов. Полностью отделите нижнюю часть CCA от подлежащих тканей и фасции с помощью изогнутых щипцов типа 7, убедившись, что она готова к зажиму на последующих этапах. С тщательно подготовленным CCA вместе с двумя соответствующими ветвями поднимите ECA с помощью изогнутых щипцов типа 7 и зажмите его самозакрывающимися щипцами типа N0. Зажав ECA и надежно удерживая пинцетом типа N0, введите две плетеные шелковые нити за ECA.
Полностью завяжите черепную нить, так как она постоянна, и отрежьте лишнюю нить ножницами. Завяжите каудальную нить в свободный фиксирующий узел. С помощью сосудистых микрозажимов зажмите CCA и ICA, чтобы предотвратить кровотечение после артериотомии.
С помощью ножниц с микропружинами сделайте небольшую артериотомию прямо под местом зажима ECA. С углом, совпадающим с углом ЭХА, вставьте филамент в место артериотомии в проксимальном направлении к ОСА, проходя через свободный фиксирующий узел на разветвляющейся стороне ЭХА и вонзаясь в просвет ОСА вместе с нитью. Осторожно откройте микрозажим ICA и снимите его.
Когда филамент частично вставлен в ECA и закреплен внизу, сделайте полную артериотомию, тем самым освободив культю ECA вместе с филаментом MCAO внутри. На этом этапе отпустите самозакрывающиеся щипцы типа N0 и снимите их. Одним набором пинцетов типа 5 сильно зажмите культю ЭХА, и слегка приподнимите ее.
Держась за частично вставленную нить другим щипцом, опустите и осторожно потяните культю ECA, чтобы ориентировать внутренний конец нити в сторону ICA. Никогда не зажимайте силиконовую часть нити накала. Медленно продвигайте нить MCAO через Виллис Круг, пока не почувствуете резкое увеличение сопротивления.
На этом этапе важно наблюдать за оставшейся длиной нити. У взрослой мыши нить должна без усилий продвигаться по крайней мере в семи миллиметрах от точки разветвления ICA. Затяните фиксирующий узел, чтобы нить не сместилась в период ишемии.
Снимите зажим CCA и запишите время, это знаменует собой начало начала ишемии. Снимите проволочный ретрактор, а края операционной раны приблизьте друг к другу. Дайте месту операции осесть на пару секунд, чтобы ткань вернулась в свое анатомическое положение.
Закройте операционную рану с помощью ленточных застежек, чтобы способствовать более быстрому повторному открытию раны после периода ишемии. Период ишемии. Подтвердите успешность операции с помощью МРТ или другого количественного метода измерения перфузии.
Операция по удалению нити. Снимите скотчем с доводчиков и вновь откройте операционную рану с помощью проволочного втягивающего устройства. С помощью щипцов типа N0 сожмите и потяните край культи ECA вентрально, чтобы натянуть культю ECA.
Снова зажмите CCA макрососудистым зажимом. Медленно извлекайте нить MCAO до тех пор, пока кремниевая часть нити не начнет торчать из культи ECA. Слегка затяните фиксирующий узел, чтобы подготовиться к полному извлечению нити.
Когда вы находитесь близко к силиконовому концу нити, затяните фиксирующий узел таким образом, чтобы он выталкивал нить MCAO и закрывал культю ECA одним маневром. Затяните узел полностью после того, как нить выскользнет наружу. Откройте и снимите щипцы вместе с зажимом CCA.
Наложите шов на операционную рану, начиная с периферии, тем самым полностью закрывая рану без видимых подлежащих тканей. Количество необходимых швов зависит от размера операционной раны. Очистите и продезинфицируйте место операции с помощью спиртовых салфеток.
Репрезентативные результаты. После успешной процедуры результаты МРТ должны выглядеть примерно так. Интраоперационно, в период ишемии, вы должны иметь возможность наблюдать четкую область с ишемией на перфузионных взвешенных изображениях.
Кажущееся поражение коэффициентом диффузии должно примерно покрывать ту же область. После операции, после удаления нити, в идеале следует наблюдать гиперперфузное ядро поражения на перфузионных взвешенных изображениях. За исключением ишемизированного ядра, вы должны увидеть восстановление и небольшое превышение значений АЦП в очаге поражения.
На второй день после процедуры очаг поражения должен быть полностью реперфузирован. Значения ADC должны снова упасть в ядре ишемического поражения из-за отека мозга, что также должно быть видно на изображении T2. В случае кровотечения, вызванного нитью, улучшения перфузии или карт АЦП после операции не наблюдается.
Кроме того, на изображениях Т2 можно наблюдать явный признак кровоизлияния, как интраоперационно, так и послеоперационно. Заключение. Благодаря недавним анатомическим исследованиям сосудистой сети мозга мыши, мы можем корректировать и модифицировать нашу модель MCAO на основе новых знаний. Задние коммуникативные артерии, окрашенные в зеленый цвет, являются двусторонними только у 10% наиболее часто используемых линий мышей.
По этой причине можно положиться на них в обеспечении притока крови к ветвям, расположенным проксимальнее MCA. Таким образом, ОСА должен оставаться патентованным в течение периода ишемии, а кремниевая часть нити не должна превышать трех миллиметров в длину. Мы надеемся, что в этом видео мы были информативными и лаконичными.
Спасибо за просмотр.
