Изготовление стрептавидин-аффинной сетки для пробоподготовки методом криоэлектронной микроскопии

В последнее время в области крио-ЭМ было достигнуто много технологических достижений, в том числе усовершенствования в самом аппаратном обеспечении микроскопа, которые улучшают общее качество изображений, а также разработки в программном обеспечении, которое используется для обработки крио-ЭМ изображений, которое может начать работать с большим количеством гетерогенности, присутствующей во многих образцах. Пробоподготовка остается одним из самых узких мест в крио-ЭМ. Количество образца может быть предельным, и белки имеют тенденцию поглощаться к гидрофобной границе воздух-вода во время витрификации.

Это может привести к денатурации образца, разрушению более крупных белковых комплексов и предпочтительной ориентации частиц, которые присутствуют на крио-ЭМ изображениях. Эти сетки используют преимущества высокоаффинного взаимодействия между стрептавидином и биотином для связывания биотинилированных образцов и защиты их от гидрофобной границы раздела воздух-вода. Мы можем работать с очень малыми объемами образцов, а случайное выделение образцов биотином предлагает стратегию преодоления проблем с предпочтительной ориентацией, которые могут наблюдаться при использовании других вспомогательных слоев.