Fabricación de rejilla de afinidad de estreptavidina para la preparación de muestras de criomicroscopía electrónica

Ha habido muchos avances tecnológicos recientes en crio-EM, incluidos los avances en el hardware del microscopio en sí mismo que mejoran la calidad general de las imágenes, y también los desarrollos en el software que se utilizan para procesar las imágenes crio-EM que pueden comenzar a lidiar con las grandes cantidades de heterogeneidad presentes en muchas de las muestras. La preparación de muestras sigue siendo uno de los mayores cuellos de botella en la crio-EM. La cantidad de muestra puede ser limitante y las proteínas tienden a absorber la interfaz hidrofóbica aire-agua durante la vitrificación.

Esto puede conducir a la desnaturalización de la muestra, la ruptura de complejos proteicos más grandes y las orientaciones de partículas preferidas que están presentes en las imágenes crio-EM. Estas rejillas aprovechan la interacción de alta afinidad entre la estreptavidina y la biotina para atar muestras biotiniladas y protegerlas de la interfaz hidrofóbica aire-agua. Podemos trabajar con cantidades de muestra muy bajas, y la elación aleatoria de biotina de las muestras ofrece una estrategia para superar los problemas de orientación preferencial que pueden observarse cuando se utilizan otras capas de soporte.