Этот протокол полезен для проверки механической чувствительности в спине. Это особенно интересно для продольных конструкций на крысиных моделях хронической боли в спине, для которых цель состоит в том, чтобы изучить эффективность вмешательства для снижения чувствительности спины к вредным раздражителям. Метод прост, доступен и дает воспроизводимые результаты у обученных экспериментаторов.
Он в значительной степени основан на тесте фон Фрея, который обычно используется для оценки механической чувствительности задней лапы. Как и в случае с любым другим поведенческим тестом, экспериментаторы должны практиковаться в стандартизации применения нитей до тех пор, пока поведение, вызванное механическими стимулами, не будет легко отличаться от других видов поведения. В остальном тест простой, и особых трудностей с его использованием возникнуть не должно.
Продемонстрировать процедуру будет Насим Эскандари, аспирант из моей лаборатории. Чтобы вызвать хроническую боль в спине у крысы, выполните внутримышечную инъекцию адъюванта Фройнда, или CFA, в мышцы спины. Используя иглу 27 калибра, введите 150 микролитров готовой к использованию водомасляной эмульсии CFA в параспинальные мышцы в одностороннем или двустороннем порядке.
Держите иглу на месте не менее трех минут. Затем изготовьте тестовую клетку для двух животных, состоящую из одной камеры для каждого животного, установив две смежные камеры на четырех 33-сантиметровых ножках из плексигласа. Используйте прозрачное оргстекло для стенок камер и черное оргстекло для разделения камер, чтобы животные не видели друг друга.
Затем сделайте пол и потолок испытательной клетки, используя сетку из нержавеющей стали, изготовленную из одномиллиметровой проволоки с восьмимиллиметровым межпроволочным расстоянием. Знакомьте крысу с клеткой для испытаний в течение 30 минут в день в течение пяти-семи дней подряд перед первым тестом. В положении лежа под изофлурановой анестезией сбрейте волосы на спине в интересующей области примерно на 10 уровнях позвонков с помощью триммера для шерсти животных.
Для повторных измерений сбривайте волосы на спине каждые три дня без поведенческой оценки, чтобы гарантировать, что стимулы всегда применяются непосредственно к коже. Нарисуйте отметку на коже перманентным маркером, чтобы гарантировать, что нити всегда наносятся на одну и ту же область при повторении теста в разные дни. В день тестирования поместите крысу в тестовую клетку на 15-30 минут перед тестом, пока крыса не успокоится.
Затем нанесите нити фон Фрея перпендикулярно спине, всегда начиная с двухграммовой нити и используя метод вверх/вниз. Прикладывайте нить в течение двух секунд двусторонне к интересующей области в 10 миллиметрах от позвоночника обрабатывайте каждые 15-30 секунд, когда крыса бодрствует, стоит на четырех лапах и не двигается. Если реакция не наблюдается при применении нити, нанесите следующую нить с более высокой силой в серии.
Если наблюдается положительная реакция, такая как выгибание спины, облизывание, подергивание мышц, отход от нити или вращение, используйте следующую нить с меньшей силой в серии. Продолжайте процедуру до тех пор, пока не будут получены четыре показания после первого изменения поведения. В этом исследовании была исследована обратная механическая чувствительность между CFA и контрольными крысами.
В начале исследования механическая чувствительность была одинаковой между группами. Внутримышечное введение CFA в поясничные мышцы вызывало заметное повышение механической чувствительности от семи до 28 дней. Напротив, контрольные крысы не показали каких-либо существенных изменений.
Далее гистологическое исследование подтвердило наличие хронических воспалительных изменений в мышцах, которым вводили ЦФА с явной лейкоцитарной инфильтрацией. Здоровые мышцы спины у контролируемой крысы после внутримышечной инъекции физиологического раствора показаны в качестве эталона. Механическая гиперчувствительность наблюдалась на задней лапе со стандартным тестом фон Фрея, в дополнение к мышцам спины.
Очень важно следить за тем, чтобы нить всегда прикладывалась одинаково перпендикулярно спине, и чтобы животное не двигалось при ее нанесении. Экспериментатор также должен чувствовать уверенность в различении поведенческих реакций для современных движений.
