Устройство оценки орофациальной боли, или OPAD, является ценным инструментом для доклинических исследований боли, поскольку оно использует парадигму оперантного конфликта вознаграждения. Это включает в себя ноцицепцию, обучение и мотивацию, которые важны для человеческого болевого опыта и улучшенной трансляционной валидности. Существенным преимуществом OPAD перед традиционными рефлекторными анализами является то, что он полностью автоматизирован, что устраняет необходимость сдерживать животных, предотвращая связанные с этим стрессовые эффекты, а также уменьшает предвзятость экспериментаторов.
Демонстрировать операцию CCI инфраорбитального нерва будет Даррис Монтгомери, лаборант из моей лаборатории. Начните с настройки устройства для оценки орофациальной боли или OPAD, поместив лотки для капель молока, клетки из плексигласа и металлические решетки для напольных покрытий. Прикрепите проводку к клеткам и наденьте держатель бутылки на металлический столб в задней части устройства.
Затем поместите бутылки с молоком на держатель бутылки таким образом, чтобы животное могло дотянуться до носика. Затяните левую ручку держателя, чтобы закрепить бутылку на месте. Затем включите переднюю панель и включите клетки.
Чтобы настроить протокол, откройте программное обеспечение, введите пароль и нажмите кнопку Войти или нажмите Enter. Щелкните Новый пустой эксперимент и меню Протокол. В разделе Устройство щелкните Безымянный протокол и выберите режим, который будет использовать этот протокол.
В разделе Режимы для конкретного оборудования выберите Режим механической клетки OPAD и назовите протокол. Убедившись, что все клетки включены, добавьте клетки OPAD, щелкнув Устройство и Добавить элемент в верхней части панели протокола, а затем выберите Новая клетка OPAD и Добавить все подключенные клетки OPAD. Чтобы добавить этапы тестирования эксперимента, перейдите на вкладку Тестирование, чтобы выбрать этапы, и вкладки Первый этап, а затем назовите этап.
Добавьте 10 минут в качестве продолжительности теста. Добавьте дополнительные этапы, щелкнув вкладку Добавить элемент, а затем Новый этап. Затем назначьте группы, щелкнув Дополнительная информация и Группы лечения.
Установите флажок Использованные группы лечения, а затем выберите опцию Пользователь вручную назначит животных своим группам. Назначьте идентификацию животных, щелкнув меню Протокол. В разделе Дополнительная информация нажмите на Идентификатор животного и отметьте опцию Использовать мои удостоверения для ссылки на животных.
Задайте эксперимент, введя название эксперимента, прежде чем щелкнуть Просмотреть обработки и ввести имена обработок. Добавьте животных и назначьте методы лечения и идентификаторы животных, щелкнув Просмотреть животных и Добавить животных. Введите количество животных, подлежащих тестированию, а затем Ok.
Как только появится список животных, добавьте идентификатор животного и лечение для каждой крысы. Сохраните протокол, щелкнув меню Протокол, а затем Сохранить протокол. Введите имя файла и пароль программного обеспечения и нажмите кнопку Сохранить.
Затем сохраните файл эксперимента, щелкнув файл, затем Сохранить, введя пароль программного обеспечения и щелкнув вкладку Сохранить. После включения клеток ищите зеленый свет на клетке, обозначающий, что клетка готова к тестированию. Откройте сохраненный файл эксперимента двойным щелчком мыши.
Введите пароль, нажмите «Войти в систему» или нажмите «Войти». В левой части экрана отметьте количество животных и соответствующую клетку, этап, запущенный в этот день, и статус тестирования. Наблюдайте за идентификатором подопытного животного на экране клетки.
Поместите крысу в клетку и нажмите кнопку на соответствующей клетке. Обратите внимание, что зеленый свет превращается в оранжевый после начала тестирования. Убедитесь, что животное может получить доступ к бутылке с наградой, при этом достаточно контактируя с механическими шипами.
В правой части экрана наблюдайте за картой каждого животного, показывающей количество облизываний и контактов. Предупреждающий звук слышен по окончании сеанса тестирования. Поместите обезболенную крысу на хирургический верстак и удерживайте ее.
Поддерживайте температуру тела на уровне 37 градусов цельсия с помощью грелки. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы они не пересыхали. Используйте лезвие скальпеля 15, чтобы сделать небольшой разрез между дорсальной десной и губой.
Удалите мягкие ткани с помощью лезвия скальпеля и выявите ветвь инфраорбитальных нервов, или ИОН. С помощью тупо изогнутой шприцевой иглы поместите две 5-О хромные лигатуры кишечника вокруг ИОНА, затем закройте рану с помощью тканевого клея. Здесь представлены данные о попытках контакта и облизывании одной крысы CCI ION и Sham во время стандартного 10-минутного сеанса тестирования на исходном уровне, а также через две недели, четыре недели и шесть недель после операции.
Модель показала, что во время нетоксичных периодов крысы проводят длительные сеансы питья. После травмы животное не может поддерживать лицевой контакт с шипованными брусками в течение длительного времени, что приводит к уменьшению количества облизываний. В группе Шам существенных изменений за период употребления алкоголя не наблюдалось.
Среднее количество облизываний между крысами CCI ION и Sham на исходном уровне не показало существенных различий. Тем не менее, CCI ION значительно уменьшал количество облизываний до четырех недель после операции и увеличивал латентность для первого облизывания в течение послеоперационной недели и одной недели после повреждения нерва, что указывает на механическую гипералгезию. Не было никаких существенных изменений в крысах, управляемых Sham.
При использовании OPAD оптимизируйте расстояние до бутылки с молоком и ширину шипов. Важно поддерживать эту согласованность, чтобы уменьшить количество ошибок во время сбора данных.
