Отслеживание линий и клональный анализ при разработке коры головного мозга с использованием мозаичного анализа с двойными маркерами (MADM)

Мозаичный анализ с помощью технологии Double Markers является мощным методом, который может предоставить высококоличеную информацию о поведении пролиферации и выводах погребов отдельных стволовых клеток. Уникальной особенностью этой техники, является то, что она позволяет отслеживания линии и функционального генетического анализа генов-кандидатов на уровне одной клетки.demontrating к процедуре будет, Кармен Streicher, ваш техник, Николь Amberge, пост-док, Gisselle Cheung, пост-док и Энди Хансен, аспирант из моей лаборатории. Для того чтобы навести события рекомбинации MADM в экспериментальных мышах, используйте шприц 1ml оборудованный с иглой 25 датчика для того чтобы поставить одиночную впрыску Tamoxifen Intraperitoneal в timed к супоросой запруде. От клонального анализа MADM до постнатальных точек времени. В эмбриональные дни с 18 до 19, поместите беременную мышь в положение на спине и дезинфицировать мех с 70%этанола. Сделайте небольшой разрез на коже в нижней части живота над маткой и сделать второй разрез через мышцы и брюшной мышечной стенки, чтобы выявить брюшной полости. Используйте ножницы, чтобы отделить матку от окружающих тканей и поместить неповрежденную матку в перчатку с теплой водой. Затем используйте тонкие ножницы и пальцы, чтобы тщательно открыть стенки матки, чтобы освободить эмбрионы. Очистите щенков мягко нажав сундуки время от времени, чтобы начать дыхание перед передачей пренатальных животных приемной матери. Для сбора нервной MADM Клон Ткань место анестезированные животные в положении на спине на перфузии хирургии лоток и дезинфицировать мех с 70% этанола. Используйте ножницы и типсы, чтобы сделать один разрез через кожу и один разрез через мышечный слой. Когда грудной полости видна, нюхать и поднимать диафрагму, чтобы выявить сердце и тщательно обрезать и приколоть грудную клетку к хирургической tray.insert иглы подключен к перистальтической трубки насоса заполнены PBS в левом нижнем желудочков сердца и использовать небольшие ножницы Iris, чтобы сделать разрез в задней части правого атриума. Perfuse сердечно-сосудистой системы с PBS следуют сразу же перфузии со свежеприготовленным ледяным холодом 4%paraformaldehyde в PBS. Когда перфузия завершена, удалить мозг через тщательное вскрытие и место собранного органа, по крайней мере в пять раз объем мозга свежих 4%paraformaldehyde ночь на 4