Flypub анализ меры раскованое поведение под воздействием алкоголя. Тем самым облегчая механистическое изучение расстройства употребления алкоголя. Алкоголь является одним из наиболее доступных и широко злоупотребляют наркотиками в мире.
Нейробиологический механизм, лежащий в основе расстройства употребления алкоголя, однако, не до конца понят. Плодовая муха, Drosophila melanogaster, широко используется для изучения влияния этанола на эйфорию, передвижение, расшажение и седитацию. Он также используется для изучения его длительных и длительных изменений в поведении, имеющих отношение к наркомании, таких как толерантность, сенсибилизация, и этанол ищет.
Многие исследования в Дрозофиле и других моделях животных сосредоточены на локомотивном активировании эффектов этанола. Отличительным эффектом этанола является поведенческая дезибибция. Тем не менее, это исследование довольно недопредставлены.
Для решения этой ключевой проблемы мы разработали анализ Flypub для измерения раскованного поведения под воздействием этанола. Чтобы собрать камеру Flypub, возьмите круглую бутылку и отрежьте ее нижнюю часть 25-миллилитровой марки лезвием бритвы. Создайте отверстие на отметке 50 миллилитров с помощью горячего припоя железа.
Это точка доступа, где мухи будут введены. Поместите круглую сетку диаметром 54 миллиметра на отметку 75 миллилитров и закрелите ее горячим клеем. Распоистите четкий пластиковый лист диаметром 70 миллиметров на открытом нижнем конце и закрестите его горячим клеем.
Чтобы убедиться, что пластиковый раунд прочно прикреплен к нижней, давление вниз с помощью весов. Соберите самца мух в группу из 33 человек. Поместите их на стороне пищевой флакон.
Поместите их в 25 градусов по Цельсию инкубатор с по крайней мере 50% относительной влажности и 12-часовой свет, 12-часовой темный цикл в течение 2 дней до воздействия этанола. Подготовь станцию анализа Flypub, включив свет, компьютер и камеру для видеозаписи. Подготовь шесть пабов к набору экспериментов.
Наклейте на них ярлыки с номерами от одного до шести. Аккуратно ввемите мух в паб с помощью небольшой воронки. Закройте паб лентой.
Акклиматизировать мух в течение 10 минут. Во время акклиматизации отрегулируйте фокус камеры и замелите последние пять минут акклиматизации. Во время акклиматизации подготовьем ватные палочки для доставки этанола.
Разрежьте ватную палочку на четыре равных квадранта, а затем обрежьте углы, чтобы она вписывается в чашку Петри. Добавьте ватную палочку в чашку Петри. Добавьте один миллилитр 95%этанола на ватную палочку.
Убедитесь в том, что раствор этанола равномерно распределен по всей площади колодки. Быстро накройте чашку Петри лабораторными салфетками. Аккуратно поместите этанол, содержащий чашку Петри, под каждый паб.
Выровнять пабы на сцене. Начните запись и одновременно запустите таймер. Запись до тех пор, пока мухи не перестанут приуготовиться или двигаться.
Удалите этанол, содержащий чашку Петри, когда более 90% мух поделись. Аккуратно перенесите подкилышки обратно в пищевые флаконы. Поместите их обратно в инкубатор.
Повторите предыдущие шаги каждые 24 часа в течение шести дней подряд. Откройте видео с помощью медиа-плеера. Затем оценка числа мужчин, участвующих в ухаживания деятельности каждые 10 секунд.
Ухаживание деятельности забить включают в себя следующие: одностороннее расширение крыла, ухаживания цепи, ухаживания круг, брюшной изгиб и монтаж. Показаны репрезентативные записи поведения мух. Во время акклиматизации, где самцы не проявляют большой активности.
Во время первой экспозиции, где мужчины проявляют спорадические ухаживания. И во время шестой экспозиции, где самцы проявляют активность ухаживания. Введите число мужчин, отображающих ухаживания в десяти втором блоке времени.
Используйте максимальное количество придворных самцов в три последовательных 10-секундных блока времени в качестве репрезентативной точки данных. В среднем 10 последовательных точек данных, имеющих наибольшее значение представляют собой процент межмалийных ухаживаний за пабом. Дикий тип Canton-S экспонат постепенно увеличивается деятельность раскованных ухаживания при повторном воздействии этанола.
Это представляет собой поведенческую сенсибилизацию для дезингибиционной эффекта этанола. Мы изучили роль октопамина в сенсибилизации путем тестирования мух, которые не хватает тиамина бета-гидроксилазы, T бета H, таким образом, дефицит октопамина. Как и Canton-S, мутанты T beta H показали эскалацию реакции на повторное воздействие этанола, но на более низком уровне.
Когда мы сравнили T бета H и Canton-S, мы заметили, что T бета H мутант мужчин отображается менее раскованный ухаживания, чем Кантон-S мужчин в каждой экспозиции о том, что октопамин может иметь важное значение для сенсибилизации. Теперь вы можете настроить, провести и проанализировать поведение, вызванное этанолом с помощью анализа Flypub. Ключевые моменты, которые нужно иметь в виду, включают, один, надлежащее собрание паба.
Два, последовательные поставки этанола, и три, точные и беспристрастные поведенческие оценки. Анализ Flypub имеет много преимуществ. Это просто, недорогой в настройке, и легко учиться.
Кроме того, несколько групп мух могут быть анализированы одновременно, облегчая это исследование для выявления последствий генетических или экспериментальных манипуляций. Flypub анализ весьма привлекает экспериментаторов на всех уровнях, включая начальные через среднюю школу, студентов и аспирантов, после документов и преподавателей. Таким образом, flypub анализ позволит вам определить молекулярных игроков, клеточных путей, мозговых цепей, и факторы риска, которые способствуют расстройству употребления алкоголя.
