يقيس فحص Flypub السلوكيات المثبطة تحت تأثير الكحول. وبالتالي تسهيل الدراسة الآلية لاضطراب تعاطي الكحول. الكحول هو واحد من أكثر المخدرات المتاحة بسهولة وتعاطيها على نطاق واسع في العالم.
ومع ذلك، فإن الآلية العصبية البيولوجية التي تقوم عليها اضطراب تعاطي الكحول مفهومة بشكل غير كامل. ذبابة الفاكهة، Drosophila الميلانوغاستر، وقد استخدمت على نطاق واسع لدراسة آثار الإيثانول على النشوة، و الحركة، والثني، والتخذيب، والتخذيب. كما أنها تستخدم لدراسة تغييراتها الطويلة والدائمة في السلوك ذات الصلة للإدمان مثل التسامح, التوعية, والتماس الإيثانول.
تركز العديد من الدراسات في دروسوفيليا وغيرها من النماذج الحيوانية على آثار تنشيط الايثانول الحركي. التأثير المتميز من الإيثانول هو disinhibition السلوكي. ومع ذلك ، فإن الدراسة هي ناقصة إلى حد ما.
لمعالجة هذه المسألة الرئيسية، قمنا بتطوير مقايسة فلايبوب لقياس السلوك المثبط تحت تأثير الإيثانول. لتجميع غرفة Flypub، خذ زجاجة مستديرة وقطع الجزء السفلي من علامة 25 ملليلتر بشفرة حلاقة. إنشاء ثقب عند علامة 50 ملليلتر باستخدام الحديد لحام الساخنة.
هذه هي نقطة الوصول حيث سيتم إدخال الذباب. ضع شبكة مستديرة قطرها 54 ملليمترًا عند علامة 75 ملليلتر، واضمنها باستخدام الغراء الساخن. ضع ورقة بلاستيكية واضحة قطرها 70 ملليمترًا في الطرف السفلي المفتوح ، وآمن باستخدام الغراء الساخن.
لضمان أن يتم إرفاق البلاستيك بقوة إلى أسفل، والضغط على أسفل باستخدام الأوزان. جمع الذباب الذكور في مجموعة من 33. ضعها على جانب قارورة الطعام.
وضعها في حاضنة 25 درجة مئوية مع ما لا يقل عن 50٪ الرطوبة النسبية و12 ساعة ضوء، 12 ساعة دورة داكنة لمدة 2 أيام قبل التعرض الإيثانول. إعداد محطة فحص Flypub عن طريق تشغيل الأضواء، جهاز كمبيوتر، وكاميرا لتسجيل الفيديو. إعداد ست حانات لمجموعة من التجارب.
تسمية لهم مع الأرقام من واحد إلى ستة. أدخل الذباب بلطف إلى الحانة باستخدام قمع صغير. أغلق الحانة باستخدام شريط.
التأقلم الذباب لمدة 10 دقائق. أثناء التأقلم، قم بضبط تركيز الكاميرا وسجل آخر خمس دقائق من التأقلم. أثناء التأقلم إعداد منصات القطن لتسليم الإيثانول.
قطع وسادة القطن إلى أربعة أرباع متساوية ومن ثم تقليم الزوايا لجعلها تناسب طبق بيتري. أضف وسادة قطنية إلى طبق بيتري. إضافة ملليلتر واحد من 95٪ الإيثانول إلى وسادة القطن.
تأكد من أن يتم توزيع محلول الإيثانول بالتساوي على كامل مساحة الوسادة. سرعان ما تغطية طبق بيتري مع مناديل المختبر. ضع بعناية الإيثانول الذي يحتوي على طبق بيتري تحت كل حانة.
محاذاة الحانات على المسرح. بدء التسجيل وبدء في وقت واحد جهاز ضبط وقت. سجل حتى الذباب وقف التودد أو التحرك.
إزالة الإيثانول التي تحتوي على طبق بيتري عندما يتم تخدير أكثر من 90٪ من الذباب. نقل بلطف الذباب مخدر مرة أخرى إلى قوارير الطعام. ضعهم مرة أخرى في الحاضنة.
كرر الخطوات السابقة كل 24 ساعة لمدة ستة أيام متتالية. افتح الفيديو باستخدام مشغل وسائط. ثم يسجل عدد الذكور المشاركين في أنشطة المغازلة كل 10 ثوان.
وتشمل أنشطة المغازلة لدرجة التالية: امتداد الجناح الأحادي الجانب ، سلسلة المغازلة ، دائرة المغازلة ، الانحناء البطني والتركيب. تظهر هي تسجيلات تمثيلية لسلوك الذبابة. أثناء تأقلم حيث الذكور لا تظهر الكثير من النشاط.
خلال التعرض الأول حيث يظهر الذكور المغازلة متفرقة. وخلال التعرض السادس حيث يعرض الذكور التودد إلى النشاط. أدخل عدد الذكور الذين يعرضون المغازلة في كتلة 10 مرة ثانية.
استخدام العدد الأقصى من التودد الذكور إلى ثلاثة متتالية 10 كتل مرة ثانية كنقطة بيانات تمثيلية. ويمثل متوسط 10 نقاط بيانات متتالية ذات أعلى قيمة النسبة المئوية للمغازلة بين الطوائف لكل حانة. نوع البرية معرض كانتون-S زيادة تدريجيا أنشطة المغازلة المثبطة على التعرض الإيثانول المتكررة.
وهذا يمثل التوعية السلوكية لتأثير disinhibition من الإيثانول. درسنا دور الأخطبامين في التوعية عن طريق اختبار الذباب التي تفتقر إلى الثيامين بيتا هيدروكسيلاس، تي بيتا H، وبالتالي نقص في الأخكتوتامين. وعلى غرار كانتون-س، أظهرت طفرات T beta H ردوداً متصاعدة على التعرض المتكرر للأيثانول، ولكن عند مستوى مخفض.
عندما قارنا تي بيتا H وكانتون-S, لاحظنا أن الذكور بيتا H متحولة تي عرض أقل المغازلة غير المثبطة من الذكور كانتون S في كل التعرض مما يدل على أن الأخطبامين قد تكون مهمة للتوعية. الآن يمكنك إعداد، والسلوك، وتحليل السلوكيات الناجمة عن الإيثانول باستخدام مقايسة Flypub. النقاط الرئيسية التي يجب أن نضع في اعتبارنا، واحد، التجمع السليم للحانة.
اثنان، تسليم الإيثانول ثابت، وثلاثة، دقيقة وغير متحيزة درجة السلوك. إن فحص Flypub له العديد من المزايا. انها بسيطة وغير مكلفة لإعداد ، وسهلة للتعلم.
كما يمكن تحليل مجموعات متعددة من الذباب في وقت واحد، مما يسهل هذه الدراسة لتحديد آثار التلاعب الجيني أو التجريبي. إن مقايسة Flypub قابلة لجذب التجارب على جميع المستويات بما في ذلك المرحلة الابتدائية من خلال المدرسة الثانوية وطلاب المرحلة الجامعية والدراسات العليا ومستندات البريد وأعضاء هيئة التدريس. باختصار، ستسمح لك مقايسة Flypub بتحديد اللاعبين الجزيئيين والمسارات الخلوية ودوائر الدماغ وعوامل الخطر التي تساهم في اضطراب تعاطي الكحول.
