Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в регенеративной области, такие как, как сердечная регенерация прогрессирует после травмы миокарда. Основным преимуществом этого метода является то, что он обеспечивает высокое разрешение, неинвазивную и повторяемую оценку сердечной функции в аксолотле. Кроме того, этот метод может быть применен и к другим организмам-амфибиям, таким как ньюты и ксенопу.
Начните с позиционирования обезболивающего аксолотля на спине в кровати животного в форме губ. Когда среда добавляется, животное будет плавать, поэтому она должна быть обеспечена с рыхлыми резинками. Затем заполните кровать средой, содержащей анестетики, так что грудная клетка составляет от трех до пяти миллиметров в глубину.
Если только с помощью B-режима, цвет-доплеровского режима и импульсно-волновых данных режима Доплера, то аксолотль может быть начеку для этой процедуры. В этой ситуации, положение животных, склонных в гамаке, и дайте ему оправиться от стресса в течение 30 до 60 минут, прежде чем продолжить. Для белых или альбиносов животных, имеют холодный источник света готовы помочь разместить предуцера.
Для превлододелца используйте модель 40 или 50 герц в зависимости от массы животного. Затем приготовьте ультразвуковой гель преобразования и приступайте к сбору данных. Начните с позиционирования ультразвукового препонера над средней линией животного в грудной области и параллельно его длинной оси.
Небольшая часть желудочка, расположенная справа в грудной полости, должна появиться в кадре у желудочковой диастолы. Большая часть обеих атрий также должны быть видны, как и синус венозы. Эти структуры должны быть идентифицированы в диастоле или систроле зрения.
Затем переведимите превидуатора от одного до трех миллиметров вправо, чтобы получить желудочковый вид длинной оси. В конечном счете, правильное положение достигается, когда поперечная область желудочка конца сизола находится на максимуме. Правильные 2D ультразвуковые измерения в значительной степени зависят от правильного позиционирования препонера.
Тщательно практикуй размещение предуцера и выполняй межоператорский анализ, чтобы свести к минимуму субъективность. Теперь, в B-режиме, приобрести по крайней мере три сердечных циклов, как минимум 50 кадров в секунду. Выберите между использованием общего режима визуализации или кардиологического режима.
Затем перевемите предуц вдоль длинной оси животного до тех пор, пока центр желудочка не будет в середине экрана. Затем поверните трансдуцер на 90 градусов по часовой стрелке, чтобы получить вид на середину окантовой короткой оси. С этой позиции оцените круговую форму желудочка, перевезув предуц вдоль длинной оси сердца.
Затем верните предуц в плоскость длинной оси и переввемите его обратно в середину, чтобы получить предсердие длинноосного двухкамерного вида. Правильное положение достигается, когда поперечные области конечной ситоловой атрии находятся на их максиме, и две атрии вместе взятые предполагают контур числа восемь, когда наклонен около 45 градусов влево. Затем соберите изображения B-режима.
Чтобы продолжить, перевести предуц вправо, пока отток тракта появляется. Вид желудочкового конца сизола является правильным, когда диаметр оттока находится на самом большом, и когда, во время средней инъекции, два полулюминесцентных клапана, на входе оттока, видны. С этой точки зрения измерения скорости и потока могут быть сделаны с помощью доплеровского изображения.
Нанесите режим цвета-доплера, чтобы сопоставить скорости кровотока в тракте оттока во время сердечной инъекции. Далее, применить цвет-Doppler изображений и власти доплеров изображения для визуализации кровотока в желудочковом представлении, и сделать то же самое в предсердии зрения. Далее используйте режим color-Doppler, направленный на расположение максимальной скорости крови в оттоке тракта, бегущего прямо к предукеру.
Когда отток не полностью перпендикулярен трансдукеру, нанесите угол луча и угловую коррекцию, чтобы исправить изображение до 45 градусов. Затем соберите данные о скорости времени в режиме импульсной волны Доплера. Во время ни одной фазы сердечного цикла спиральный клапан не должен перекрывать вид оттока.
Сбор данных по крайней мере из трех сердечных циклов. Затем, не перемещая предуцера, приобретайте данные в режиме В как минимум из трех сердечных циклов. Далее, только для обезболивания животных, поверните животное на 90 градусов так, чтобы правая часть животного обращена вверх, и переместите предук к косой пара-жабры зрения, просто параллельно и задней к выступающим жабры.
Эта точка зрения предлагает альтернативное измерение скорости кровотока в трактах оттока. Отток участка должен работать вниз на уровне около 45 градусов, и предтечи должны появиться под оттока тракта во время инъекции. Наконец, переключитесь на импульсно-волновой режим Доплера и распоистите предуцера, чтобы просмотреть максимальную скорость крови, убегая от предуцера в оттоке тракта.
При необходимости используйте до 45 градусов угла луча и угловую коррекцию, чтобы сделать отток перпендикулярным предуцанту. Затем собирайте данные в импульсно-волновом режиме Доплера и в B-режиме из того же положения, что и раньше. 3D приобретение занимает некоторое время, так что аксолотль должен быть анестезировал.
Поместите его на спине в губы формы животного постели. Закрелите его резинками и погрузите его грудную поверхность в три-пять миллиметров ультразвуковой среды, содержащей анестезию. Движения во время 3D приобретения наносят ущерб последующей реконструкции.
Если животное движется во время 3D ультразвукового приобретения, процедура должна быть повторена с самого начала. Далее, поместите преобразовайец над средней линией в грудной области, и поместите его параллельно длинной оси для sagittal 3D записи, или ортогонал к длинной оси для поперечной 3D записи. Затем переведимите претека, чтобы убедиться, что вся сердечная область покрывается последующим 3D захватом.
Перемести его как в плоскость измерения, так и во вне плоскости измерения. Для режима визуализации, если пульс животного составляет от 20 до 60 ударов в минуту, выберите общий режим визуализации. В противном случае выберите кардиологический режим.
Выключите свет. Теперь, на необработавном изображении B-режима, отрегулируйте 2D-выигрыш до уровня, при котором анатомические структуры едва узнаваемы. Это увеличит соотношение сигнала к шуму при финальных реконструкциях.
Затем определите размер толщины шага или ломтика. Теперь переведимите предуцера по одному шагу за раз, записывая 1000 кадров на каждом этапе до тех пор, пока не будет покрыта вся сердечная область. С помощью описанной техники был проведен 2D эхокардиографический анализ 10-граммового 10-сантиметрового аксолотля.
Представление длинной оси обеспечило хорошую отправную точку. В середине плоскости показали синус веноз, атрии, и части желудочка. Просмотр желудочковой плоскости показал желудочек, чтобы быть сферическим и высоко trabeculated.
В предсердий плоскости, предсердий появились более нерегулярные и едва trabeculated. Центр оттокового тракта находится близко к центру желудочка. Измерения сердечного цикла с использованием импульсно-волнового доплера с длинной оси и от косой пара-жаберной плоскости имели некоторый фоновый шум.
Этот шум был непреодолимым при измерении времени скорости интегральным. Цвет-Доплер и власть-Доплер изображения показали, что структура потока через сердечные камеры. Виды были возможны из желудочка, из атрии, и из оттока тракта.
Также была выполнена 3D эхокардиография. Этот многопланарный вид сердца имеет много применений, таких как реконструкция поверхности и объема, или сегментация и генерация 3D-моделей. После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как выполнять 2D и 3D эхокардиографии в аксолотле.
После освоения, 2D ультразвуковой техники может быть сделано менее чем за пять минут на животное, если она выполняется должным образом, в то время как 3D приобретение может занять до часа на животное. После этой процедуры, другие методы, такие как удаление сердца и гистология могут быть выполнены для того, чтобы ответить на дополнительные вопросы, связанные с сердечной структуры и анатомии.
