Isolamento, expansão e nucleofecção de células-tronco neurais da zona subventricular murina adulta

Nossa pesquisa está focada em estudar como a população de células-tronco neurais é regulada no cérebro de mamíferos adultos. Compreender os mecanismos moleculares intrínsecos e extrínsecos que regulam as células-tronco neurais dentro dos nichos neurogênicos é importante para compreender a biologia e desenvolver futuras aplicações terapêuticas potenciais. Para estudar o comportamento das células-tronco neurais, abordagens in vivo e in vitro são amplamente utilizadas.

As culturas de células-tronco neurais in vitro oferecem ambientes controlados e a possibilidade de manipular e monitorar facilmente essa população de células. Técnicas para preservação da expressão gênica in vitro são uma abordagem versátil para estudar os mecanismos moleculares que governam a biologia celular. No entanto, um método eficiente e reprodutível para superexpressar e derrubar genes candidatos em células-tronco neurais ainda é um desafio no campo.

Os métodos tradicionais de transfecção para entrega de genes provaram ser eficazes em células do sistema nervoso central. Além disso, esses métodos afetam a viabilidade e a funcionalidade celular. Assim, o refinamento de abordagens alternativas é crucial para manipular a expressão gênica em células-tronco neurais.

Com este protocolo, apresentamos um sistema de nucleofecção aprimorado que atinge alta eficiência de entrega de genes em culturas de células-tronco neurais da zona subventricular murina adulta, juntamente com taxas de sobrevivência superiores a 80%