Análise da densidade mitocondrial e distribuição longitudinal em fibras musculares esqueléticas vivas de ratos por microscopia confocal

O remodelamento da rede mitocondrial ocorre em condições fisiológicas de estresse e patológicas. No entanto, os efeitos da remodelação mitocondrial em um músculo esquelético permanecem incompletamente compreendidos. Este protocolo permite quantificar as alterações mitocondriais no músculo esquelético vivo, melhorando nossa compreensão da interação entre as alterações mitocondriais e a função celular.

Trabalhar com músculos esqueléticos vivos apresenta desafios devido à contração das fibras durante o isolamento e sensibilidade à imagem durante a varredura confocal. Este protocolo descreve um processo de isolamento utilizando uma solução de relaxamento, possibilitando a análise de fibras musculares viáveis para avaliação mitocondrial via microscopia confocal. Nosso protocolo aborda a falta de fluxos de trabalho para analisar quantitativamente as redes mitocondriais em fibras musculares esqueléticas.

As etapas aqui descritas permitem que os usuários aproveitem mais as imagens obtidas por microscopia confocal usando processamento de imagens por limiar e análise rápida de Fourier para obter a quantificação da densidade e distribuição mitocondrial. Estamos interessados no estudo das alterações musculares esqueléticas, particularmente da dinâmica mitocondrial e do remodelamento estrutural mitocondrial durante a adversidade e como elas podem ser moduladas através de intervenções como exercício e jejum intermediário.