O objetivo geral deste procedimento é demonstrar a remoção cirúrgica de testículos murinos e ovários de forma rápida, segura e eficaz. A orquiectomia murina é realizada por uma incisão ventral na linha média do saco escrotal, onde os testículos são isolados e removidos, seguido pelo fechamento da incisão da pele. A ooforectomia murina é realizada por uma incisão dorsolateral no abdome onde o ovário é isolado e removido, seguido pelo fechamento da incisão da pele, com a opção de repetir este procedimento do outro lado para realizar uma ooforectomia bilateral.
Para iniciar a orquiectomia murina, comece registrando o peso de um camundongo macho e prepare-se para administrar a medicação para dor e anestésicos apropriados de acordo com suas diretrizes institucionais. Quando o rato estiver sob anestesia, cubra os olhos com um gel lubrificante para os olhos para protegê-los do ressecamento durante o procedimento. Antes de prosseguir, certifique-se de que o mouse esteja em um plano apropriado de anestesia realizando um teste de resposta à pinça dos dedos.
Em seguida, raspe as áreas inguinal e escrotal do rato. Usando um aplicador com ponta de algodão, aplique uma fina camada de creme depilatório depilatório no local cirúrgico e áreas circundantes. Após 30 segundos, retire o creme depilatório com a compressa de gaze limpa.
Transfira o mouse para uma área cirúrgica e verifique se uma fonte de calor está disponível. Use fita adesiva macia para aderir os pés do rato ao tapete cirúrgico. Se os testículos subiram para o abdômen, use uma pressão suave sobre o abdômen para ajudá-los a descer.
Esfregue a pele com solução de Betadine, começando no centro sobre o local cirúrgico e trabalhando prontamente para fora em direção à borda da área raspada. Siga a esfoliação Betadine com uma esfoliação com álcool realizada de maneira semelhante. Repita este processo três vezes para garantir a desinfecção adequada da pele.
Cubra o rato com o campo cirúrgico. Segure a pele e faça uma incisão mediana de cerca de 1 a 1 1/2 centímetros de comprimento. Segurando a borda cortada da pele, use um instrumento de ponta romba para separar a pele do tecido subjacente.
Reserve um tempo para fazer isso nas bordas lateral, superior e inferior da incisão. Em seguida, isole um testículo deslizando a incisão da pele para ficar diretamente sobre ele. Use um par de pinças para agarrar o músculo cremaster fino e transparente que envolve o testículo.
A identificação do tecido correto pode ser confirmada por sua transparência e sua capacidade de se mover independentemente dos tecidos subjacentes dentro dele. Em seguida, incite o músculo cremaster fazendo uma incisão no ápice do tecido. Coloque uma pinça de bloqueio na borda posterior do músculo cremaster cortado para manter a tensão no tecido.
Use um par de pinças para agarrar o testículo e exteriorizá-lo de sua bainha cremaster. Uma vez que o testículo está fora, enrole o tecido lateralmente e localize o ponto de inserção cremaster que conecta o músculo cremaster ao testículo e ao epidídimo na face posterior do testículo. Aperte e rasgue esse tecido para cortar essa conexão.
Exteriorize o coxim de gordura inguinal puxando-o lentamente para fora. Ao fazer isso, observe os sinais de sangramento e certifique-se de não prejudicar nenhum dos vasos sanguíneos no processo. Em seguida, use um par de hemostáticos de bloqueio para prender o cordão espermático e os vasos sanguíneos.
Enquanto mantém uma leve tensão no testículo, cauterize o cordão espermático e os vasos sanguíneos distais à pinça do hemostático. Solte lentamente o hemostático e garanta que o coto tecidual tenha boa hemostasia e não continue a sangrar. A aplicação de uma ligeira pressão externa sobre o músculo cremaster permitirá que este coto de tecido se retraia para a cavidade do corpo.
Junte os dois lados do músculo cremaster. Usando suturas absorvíveis 4-0 ou 5-0, colocar uma sutura para unir as duas extremidades do músculo cremaster. Uma vez terminada a sutura, aparar as extremidades do material de sutura para ter 1/2 centímetro de comprimento.
Repita esse processo para o outro testículo, deslizando a incisão da pele para ficar em cima do outro lado, e siga os mesmos passos usados para remover o primeiro testículo. Uma vez que ambos os testículos foram removidos e ambos os lados do cremaster foram suturados, evert a pele para cima e prepare-se para aplicar um clipe de ferida na área. Certifique-se de que as extremidades da sutura não ficarão presas no clipe da ferida.
O rato está agora pronto para continuar com a monitorização pós-operatória. Para se preparar para a ooforectomia murina, pese uma rata e administre medicação para dor e anestesia de acordo com suas diretrizes institucionais. Administre gel lubrificante para os olhos e verifique se o rato não tem resposta de pinça dos dedos.
Raspar as regiões dorsolaterais das costas do camundongo para preparar o local cirúrgico. Usando um aplicador com ponta de algodão, aplique uma camada de creme depilatório depilatório na área raspada. Após 30 segundos, retire o creme com uma compressa de gaze limpa.
Transfira o mouse para um tapete cirúrgico e verifique se uma fonte de calor está disponível. Esfregue a pele com solução de Betadine, começando no centro e trabalhando prontamente para fora em direção à borda da área raspada. Em seguida, esfregando a pele com solução de álcool a 70% aplicada de maneira semelhante.
Repita este processo por um total de três vezes para garantir a desinfecção adequada da pele. Planejar a incisão cirúrgica conforme detalhado no protocolo escrito. Coloque um pano cirúrgico sobre o local cirúrgico do rato.
Segure a pele com uma pinça e incida a pele com uma incisão de um centímetro. Use um instrumento de ponta romba ou um par simples de hemostáticos para separar a pele do tecido subjacente. Reserve um tempo para fazer isso nas bordas lateral, superior e inferior da incisão.
Segure a parede abdominal e incite com uma incisão de 1/2 centímetro. Use um par de pinças para localizar o ovário dentro da incisão e puxe para exteriorizá-lo. Uma vez identificados os tecidos, use um par de hemostáticos para clampar e esmagar o corno uterino distal.
Use um segundo par de hemostáticos ou um par de pinças para pinçar apenas distal à primeira pinça. Segurando o hemostático inferior imóvel, puxe a pinça superior para cima e para longe do corpo para realizar um esmagamento e ruptura do corno uterino distal. Solte lentamente o hemostático e observe para se certificar de que não há sangramento excessivo vindo do local cirúrgico.
Unir os dois lados da parede abdominal e suturar a incisão fechada, utilizando-se uma única sutura com material absorvível 4-0. Uma vez fixada a sutura, aparar as extremidades do material de sutura para ter 1/2 centímetro de comprimento. Reúna os dois lados da pele e prepare-se para colocar um clipe de ferida.
Ao evertar a pele, coloque um clipe da ferida sobre o local da incisão. O rato está agora pronto para continuar com a monitorização pós-operatória. Documente a data e hora do procedimento e a administração do analgésico de acordo com suas diretrizes institucionais.
Uma vez que um camundongo tenha sido submetido a orquiectomia cirúrgica ou ooforectomia, transfira-os para uma gaiola limpa e aquecida. Uma vez que um rato tenha recuperado o decúbito esternal, coloque-os em uma gaiola limpa e forneça ração úmida e água. Durante sua recuperação, verifique frequentemente o local cirúrgico do camundongo e procure quaisquer sinais de infecção ou sangramento.
Para evitar danos ao clipe da ferida, remova quaisquer habitats de iglu de roedor da gaiola de um camundongo ovariectomizado por uma semana após a cirurgia. Após 14 dias, remova os clipes da ferida da pele do rato. O protocolo demonstrado detalha como realizar uma orquiectomia e ooforectomia em um camundongo para gerar um modelo esgotado de hormônios sexuais.
Isso envolve a remoção dos testículos através de uma incisão na linha média no escroto, seguida pela exteriorização dos testículos e corte do cordão espermático nos vasos sanguíneos, resultando na remoção do testículo, epidídimo e coxins de gordura inguinal. A ooforectomia cirúrgica pode ser realizada por uma incisão dorsolateral no dorso e exteriorizando o ovário, oviduto e corno uterino distal. Segue-se a corte do corno uterino distal, levando à remoção do ovário e do oviduto.
A técnica cirúrgica cuidadosa e os cuidados pós-operatórios adequados resultarão em locais cirúrgicos bem cicatrizados. Esses procedimentos cirúrgicos podem ser validados pela análise dos níveis hormonais em amostras de soro de camundongos uma semana após a orquiectomia. A ooforectomia pode ser confirmada pela observação de atrofia uterina após a remoção dos ovários.
Este protocolo permite a remoção cirúrgica rápida e eficaz de ovários e testículos de camundongos para gerar um modelo de esgotamento de hormônios sexuais. Isso pode ter muitos usos para estudar como a depleção desses hormônios afeta vários órgãos e processos fisiológicos.
