L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare la rimozione chirurgica di testicoli e ovaie murini in modo rapido, sicuro ed efficace. L'orchiectomia murina viene eseguita mediante un'incisione ventrale della linea mediana nel sacco scrotale, dove i testicoli vengono isolati e rimossi, seguita dalla chiusura dell'incisione cutanea. L'ovariectomia murina viene eseguita mediante un'incisione dorsolaterale nell'addome in cui l'ovaio viene isolato e rimosso, seguita dalla chiusura dell'incisione cutanea, con la possibilità di ripetere questa procedura sull'altro lato per eseguire un'ovariectomia bilaterale.
Per iniziare l'orchiectomia murina, inizia prima registrando il peso di un topo maschio e preparati a somministrare i farmaci antidolorifici e gli anestetici appropriati secondo le linee guida istituzionali. Una volta che il topo è sotto anestesia, copri gli occhi con un gel lubrificante per gli occhi per proteggerli dalla secchezza durante la procedura. Prima di procedere, assicurarsi che il topo si trovi su un piano di anestesia appropriato eseguendo un test di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi.
Successivamente, radere le aree inguinali e scrotali del topo. Utilizzando un applicatore con punta in cotone, applicare uno strato sottile di crema depilatoria depilatoria sul sito chirurgico e sulle aree circostanti. Dopo 30 secondi, rimuovere la crema depilatoria con la spugna di garza pulita.
Trasferisci il mouse in un'area chirurgica e assicurati che sia disponibile una fonte di calore. Utilizzare del nastro adesivo morbido per far aderire i piedi del mouse al tappetino chirurgico. Se i testicoli sono risaliti nell'addome, esercita una leggera pressione sull'addome per aiutarli a scendere.
Strofinare la pelle con la soluzione di Betadine, partendo dal centro sopra il sito chirurgico e procedendo prontamente verso l'esterno verso il bordo dell'area rasata. Seguire lo scrub Betadine con uno scrub alcolico eseguito in modo simile. Ripetere questo processo tre volte per garantire una corretta disinfezione della pelle.
Copri il topo con il telo chirurgico. Afferra la pelle e fai un'incisione sulla linea mediana di circa 1 o 1 1/2 centimetri di lunghezza. Afferrando il bordo tagliato della pelle, utilizzare uno strumento con punta smussata per separare la pelle dal tessuto sottostante.
Prenditi del tempo per farlo sui bordi laterali, superiori e inferiori dell'incisione. Quindi, isola un testicolo facendo scorrere l'incisione cutanea in modo che sia direttamente sopra di esso. Usa un paio di pinze per afferrare il muscolo cremastere sottile e trasparente che circonda il testicolo.
L'identificazione del tessuto corretto può essere confermata dalla sua trasparenza e dalla sua capacità di muoversi indipendentemente dai tessuti sottostanti racchiusi al suo interno. Successivamente, incidi il muscolo cremastere praticando un'incisione nell'apice del tessuto. Posizionare un morsetto di bloccaggio sul bordo posteriore del muscolo cremastere tagliato per mantenere la tensione sul tessuto.
Usa un paio di pinze per afferrare il testicolo ed esteriorizzarlo dalla sua guaina cremastere. Una volta che il testicolo è fuori, arrotolare il tessuto lateralmente e localizzare il punto di inserzione del cremastere che collega il muscolo cremastere al testicolo e all'epididimo sul lato posteriore del testicolo. Clamp e strappa questo tessuto per recidere questa connessione.
Esteriorizzare il cuscinetto adiposo inguinale estraendolo lentamente. Mentre lo fai, fai attenzione ai segni di sanguinamento e assicurati di non danneggiare nessuno dei vasi sanguigni durante il processo. Successivamente, utilizzare un paio di emostatici bloccabili per bloccare il funicolo spermatico e i vasi sanguigni.
Mantenendo una leggera tensione sul testicolo, cauterizzare il funicolo spermatico e i vasi sanguigni distali alla pinza emostatica. Rilasciare lentamente l'emostatico e assicurarsi che il moncone di tessuto abbia una buona emostasi e non continui a sanguinare. L'applicazione di una leggera pressione verso l'esterno sul muscolo cremastere consentirà a questo moncone di tessuto di ritrarsi nella cavità del corpo.
Unisci i due lati del muscolo cremastere. Utilizzando punti di sutura riassorbibili 4-0 o 5-0, posizionare una sutura per unire le due estremità del muscolo cremastere. Una volta terminata la sutura, tagliare le estremità del materiale di sutura in modo che siano lunghe 1/2 centimetro.
Ripeti questo processo per l'altro testicolo facendo scorrere l'incisione cutanea in cima all'altro lato e segui gli stessi passaggi utilizzati per rimuovere il primo testicolo. Una volta che entrambi i testicoli sono stati rimossi ed entrambi i lati del cremaster sono stati suturati, estrarre la pelle verso l'alto e prepararsi ad applicare una clip per ferite sull'area. Assicurarsi che le estremità della sutura non rimangano impigliate nella clip della ferita.
Il topo è ora pronto per continuare con il monitoraggio postoperatorio. Per prepararti all'ovariectomia murina, pesa un topo femmina e somministra farmaci antidolorifici e anestesia secondo le linee guida istituzionali. Somministrare gel lubrificante per gli occhi e verificare che il mouse non abbia una risposta al pizzicamento delle dita dei piedi.
Radere le regioni dorsolaterali della schiena del topo per preparare il sito chirurgico. Utilizzando un applicatore con punta in cotone, applicare uno strato di crema depilatoria depilatoria sulla zona rasata. Dopo 30 secondi, rimuovere la crema con una spugna di garza pulita.
Trasferisci il mouse su un tappetino chirurgico e assicurati che sia disponibile una fonte di calore. Strofinare la pelle con la soluzione di Betadine, partendo dal centro e procedendo prontamente verso l'esterno verso il bordo della zona rasata. Seguire strofinando la pelle con una soluzione alcolica al 70% applicata in modo simile.
Ripetere questo processo per un totale di tre volte per garantire una corretta disinfezione della pelle. Pianificare l'incisione chirurgica come dettagliato nel protocollo scritto. Posizionare un telo chirurgico sul sito chirurgico del topo.
Afferrare la pelle con una pinza e incidere la pelle con un'incisione di un centimetro. Usa uno strumento con punta smussata o un semplice paio di emostatici per separare la pelle dal tessuto sottostante. Prenditi del tempo per farlo sui bordi laterali, superiori e inferiori dell'incisione.
Afferrare la parete addominale e incidere con un'incisione di 1/2 centimetro. Usa un paio di pinze per individuare l'ovaio all'interno dell'incisione e tira per esteriorizzarlo. Una volta identificati i tessuti, utilizzare un paio di emostatici per bloccare e schiacciare il corno uterino distale.
Utilizzare un secondo paio di emostatici o un paio di pinze per bloccare appena distale al primo morsetto. Tenendo fermo l'emostatico inferiore, tirare il morsetto superiore verso l'alto e lontano dal corpo per eseguire uno schiacciamento e uno strappo del corno uterino distale. Rilasciare lentamente l'emostatico e osservare per assicurarsi che non vi sia un'eccessiva emorragia proveniente dal sito chirurgico.
Unire i due lati della parete addominale e suturare l'incisione chiusa, utilizzando un'unica sutura con materiale di sutura riassorbibile 4-0. Una volta fissata la sutura, tagliare le estremità del materiale di sutura in modo che siano lunghe 1/2 centimetro. Riavvicina i due lati della pelle e preparati a posizionare una clip per ferite.
Mentre si estrofletta la pelle, posizionare una clip per ferita sul sito dell'incisione. Il topo è ora pronto per continuare con il monitoraggio postoperatorio. Documentare la data e l'ora della procedura e la somministrazione dell'analgesico secondo le linee guida istituzionali.
Una volta che un topo è stato sottoposto a orchiectomia chirurgica o ovariectomia, trasferiscilo in una gabbia pulita e riscaldata. Una volta che un topo ha riacquistato la decubito sternale, mettilo in una gabbia pulita e fornisci cibo umido e acqua. Durante il loro recupero, controllare frequentemente il sito chirurgico del topo e cercare eventuali segni di infezione o sanguinamento.
Per evitare danni alla clip della ferita, rimuovere eventuali habitat di igloo di roditori dalla gabbia di un topo ovariectomia per una settimana dopo l'intervento chirurgico. Dopo 14 giorni, rimuovere le clip della ferita dalla pelle del topo. Il protocollo dimostrato descrive in dettaglio come eseguire un'orchiectomia e un'ovariectomia in un topo per generare un modello impoverito dagli ormoni sessuali.
Ciò comporta la rimozione dei testicoli attraverso un'incisione della linea mediana nello scroto, seguita dall'esteriorizzazione dei testicoli e dalla recisione del funicolo spermatico nei vasi sanguigni, con conseguente rimozione del testicolo, dell'epididimo e dei cuscinetti adiposi inguinali. L'ovariectomia chirurgica può essere eseguita mediante un'incisione dorsolaterale nel dorso e l'esternalizzazione dell'ovaio, dell'ovidotto e del corno uterino distale. Segue la recisione del corno uterino distale, che porta alla rimozione dell'ovaio e dell'ovidotto.
Un'attenta tecnica chirurgica e un'adeguata cura postoperatoria si tradurranno in siti chirurgici ben guariti. Queste procedure chirurgiche possono essere ulteriormente convalidate analizzando i livelli ormonali in campioni di siero di topo una settimana dopo l'orchiectomia. L'ovariectomia può essere confermata dall'osservazione dell'atrofia uterina in seguito all'asportazione delle ovaie.
Questo protocollo consente la rimozione chirurgica rapida ed efficace di ovaie e testicoli dai topi per generare un modello impoverito di ormoni sessuali. Questo può avere molti usi per studiare come l'esaurimento di questi ormoni influisce su vari organi e processi fisiologici.
