Nosso protocolo foi projetado para realizar um bom ensaio para a mosca-das-frutas, que é um poderoso organismo modelo que permite projetar para todos os genes, receptores, neurônios e uma cabeça neuro-psicológica que estão envolvidas na sensação do teste e no consumo alimentar. Como os humanos voam como comida que tem gosto: doce, levemente salgado, levemente azedo ou rejeitar alimentos que tem gosto amargo, muito salgado ou muito azedo. O poder desta técnica vem da velocidade e conveniência.
Você pode testar muitas moscas diferentes em um curto espaço de tempo PRH sem uma configuração complexa. Nosso método é um excelente e excelente ensaio para entender se moscas como a, assim como um determinado alimento, bem como como certos produtos genéticos influenciam a preferência pelo sabor. Estabelecer se os animais aceitam ou rejeitam certos alimentos pode ser um desafio.
Por isso, é importante estabelecer um protocolo padrão para testar a preferência do gosto animal. Para preparar frascos de fome para o ensaio, compacte vagamente um pedaço de tecido na parte inferior de cada frasco de plástico vazio por tipo de gene de mosca a ser testado. De tal forma que o papel preenche este espaço sem formar uma massa densa, em cerca de três mililitros de água pura em cada frasco para saturar completamente os tecidos sem água parada.
Tomando cuidado para que não haja grandes gotículas de água em excesso nas paredes dos frascos. Alternativamente, cinco mililitros de 1%Agros sem sacarose podem ser substituídos pelo papel encharcado, 24 horas antes do experimento dióxido de carbono anestesiar moscas de dois a quatro dias de idade e classificar as moscas em grupos de aproximadamente 70. Em seguida, adicione cada grupo de moscas a uma vil fome e rotule cada frasco com o genótipo e tempo de iniciação da fome.
Antes de realizar um experimento, prepare uma série de diluições para cada corante usando o mesmo alimento com cada corante diferente. Combinado 0,5 gramas de Agros com 50 mililitros de água pura em um vaso seguro de micro-ondas e aquecer a solução Agro até que tenha dissolvido a agitação conforme necessário. Dissolva cada componente alimentar, incluindo sacarose e quaisquer compostos experimentais na água a uma concentração de 100 vezes ou maior da concentração final testada.
E misture o corante Agro e o composto experimental desejado em tubos cônicos de centrífugas de polipropileno. Depois de misturar coloque os tubos no banho de água de 60 graus Celsius até a distribuição e adicione um mililitro de uma cor das soluções experimentais de alimentos e corantes para um lado do primeiro prato de ensaio. Deixe o Agros esfriar até firmar antes de adicionar um mililitro da solução de alimentos de controle, rotulado com a segunda cor de corante para o outro lado do prato.
Em seguida, repita a preparação do prato de ensaio, com o controle oposto e o par de solução de corante experimental. Use os resultados para identificar duas concentrações de corante que produzem um índice de preferência de zero. Quando nenhum composto experimental é adicionado.
Para realizar um ensaio de alimentação bidirem. Primeiro temporariamente paralisado uma mosca experimental vil por três a cinco minutos no gelo até que nenhuma atividade motora óbvia, como voar e escalar são observadas. Uma vez que as moscas tenham sido imobilizadas, inverta suavemente o frasco e toque para transferir as moscas para a câmara de ensaio, em seguida, rapidamente colocou a tampa sobre a câmara.
Quando todos os grupos foram transferidos, mova todas as câmaras de ensaio para um espaço escuro e fechado por 90 minutos. No final do ensaio inverta as câmaras a menos 20 graus Celsius congelador, por cerca de uma hora. Antes de colocar cada câmara sob um microscópio estéreo para examinar a cor abdominal das moscas em cada grupo experimental.
Conte uma mosca, se o abdômen tiver mais de 50% de cor indicando uma alimentação robusta, descarte qualquer mosca em que o abdômen contenha apenas uma pequena mancha alimentar, o que é indicativo de má alimentação. Quando todas as moscas forem contadas use a equação para quantificar o índice de preferência alimentar de cada grupo. Neste ensaio, um prato de 35 milímetros foi dividido em duas semanas vamos alimentar em compartimentos contendo a comida do Agro, juntamente com corante vermelho ou azul.
Para excluir o viés de corante, as concentrações de corante azul e vermelho foram cuidadosamente refinadas para produzir uma preferência zero aproximada quando apenas esses dois corantes foram adicionados, 90 minutos depois que moscas adultas molhadas carregando cores abdominais bly apareceram como azul ou vermelho. Se o animal consumia predominantemente alimentos azuis ou vermelhos, respectivamente, se uma mosca consumisse azul e vermelho, o abdômen parecia roxo. Apenas moscas que ingeriram uma quantidade considerável de alimentos foram pontuadas, enquanto moscas com ingestão alimentar insuficiente não foram contabilizadas.
Comparando este ensaio baseado em placa de Petri com o ensaio baseado em placas multi-bem revelou que os dois métodos de alimentação deram essencialmente o mesmo que dizer os resultados de alimentação em resposta a alimentos doces, amargos e salgados em moscas do tipo selvagem. Notavelmente, no entanto, é muito mais rápido preparar e distribuir alimentos em uma placa de Petri do que em um prato de 60 bems. Certifique-se de identificar qual concentração de corante usar especialmente depois de fazer um novo lote de dieta.
Esta concentração pode ser diferente entre linhas de mosca. Nosso par hoje é baseado em ensaio de duas escolhas é muito poderoso também. Para você perguntar como as moscas, sinta tanto o quadro interno-externo danificado à alimentação e comportamento adequados ao estado real.
