Este método pode ser usado para reproduzir os eventos inflamatórios que ocorrem na pancreatite biliar aguda. É possível estudar alterações no tecido pancreático em seus estágios iniciais, o que geralmente não é possível na clínica. As principais vantagens dessa técnica são que ela é rápida e fácil de reproduzir para um pesquisador treinado, e oferece resultados semelhantes à pancreatite aguda em humanos.
O método pode ser usado para estudar respostas imunes farmacológicas de moléculas de drogas e outras intervenções terapêuticas, pois permite o estudo de células inflamatórias mediadores no pâncreas e órgãos adjacentes. Ao tentar esse protocolo, localizar os órgãos e estabelecer a região de cannulação é crucial. Memorize a localização dos órgãos e exerça a aplicação da injeção primeiro usando uma solução colorida como azul metileno.
Depois de verificar a profundidade da anestesia com uma pitada de dedo do dedo do dedo, limpe a área abdominal de um rato anestesiado com uma solução de iodo povidone de 5%. Usando um aparador, remova o cabelo entre o peito e o abdômen inferior e limpe uma área cirúrgica de aproximadamente dois centímetros quadrados com 70% de álcool. Imobilize o animal na placa cirúrgica e use uma tesoura para cortar cinco milímetros da pele horizontalmente na parte superior do abdômen e um centímetro abaixo do processo xifoide.
Repita o corte no peritônio para realizar a laparotomia com exposição mínima da cavidade. Usando um retrátil, puxe o fígado em direção à cabeça a aproximadamente um centímetro do intestino e localize a região do pâncreas e do duodeno. Usando fórceps, levante o fígado em direção à cabeça do animal.
Puxando suavemente a porção do intestino delgado, fixar as duas extremidades laterais com uma sutura de polipropileno 6-0 para uma melhor visão da porção distal do ducto biliar comum também. Usando um clipe de micro vaso, oclui temporariamente o ducto biliar comum proximal. Expor o órgão da cavidade abdominal.
Em seguida, faça uma oclusão temporária do ducto biliar comum distal com um 8-0 sutura. Para acessar o ducto biliar comum, perfure a região periampulária, que aparece como uma parte esbranquiçada da parede do intestino delgado. Com uma agulha de 0,4 milímetros conectada a um tubo de polietileno de 0,54 milímetros, inicie a bomba de infusão para infusão de 2,5% de infusão de solução taurocholate de sódio a uma velocidade constante de 10 microliters por 10 gramas de peso corporal por três minutos.
Após a infusão, remova o clipe do micro vaso, o 8-0 temporário sutura, ea agulha de injeção do ducto biliar pancreático. Sutura o abdômen com uma sutura de polipropileno monoboxileno nãoabsorbente 6-0. O tempo entre a laparotomia e a sutura final não deve ser superior a 30 minutos.
Após a cirurgia, abriga os animais em caixas de polietileno forradas com aparas de madeira e água e ad libitum alimentar. Segure suavemente o animal com a pele puxada para trás, promovendo uma leve saliência do globo ocular, e posicione o animal com o olho voltado para cima. Incutir um gota de pomada ocular contendo anestésico local no olho do animal.
Posicione a extremidade de um tubo capilar no canto medial do olho e insira-o suavemente sob o globo ocular em um ângulo de aproximadamente 30 a 45 graus. Gire o tubo capilar até que o fluxo sanguíneo comece. Uma vez que a coleção acabou, certifique-se de homeostase mantendo as pálpebras fechadas com compressão leve.
Mais tarde, usando uma agulha calibre 27, injete quatro mililitros de PBS gelado na cavidade peritoneal do rato. Após a injeção, massageie suavemente o peritônio por 10 segundos para remover as células aderidas. Usando tesouras e pinças, faça um pequeno corte de 0,5 centímetros na pele interna e musculatura para expor a cavidade abdominal.
Insira uma pipeta de bulbo no peritônio e colete o máximo de fluido possível, tomando cuidado para não aspirar tecido gorduroso. Recolhe uma parte do pâncreas da região principal para posterior processamento. Deposite o fluido coletado em tubos mantidos no gelo.
Em seguida, centrifugar o fluido peritoneal a 250 vezes G por cinco minutos e estocar o supernatante para dosagem interleucina-6. Para obter soro, centrifugar as amostras de sangue coletadas a 700 vezes G durante 15 minutos e estocar o sobrenatante para amilase e dosagem interleucina-6. A análise do tecido pancreático 12 horas após a indução de pancreatite aguda mostrou inflamação intensa no órgão afetado quando comparada com amostras de tecido do grupo sham.
Resultados semelhantes foram representados por exame histológico após a coloração de eosina de hematoxilina de amostras de tecido de sham e APTA. A análise do soro sanguíneo apresentou um aumento significativo na concentração de amilase sérico e interleucina-6 no grupo AP em comparação com o grupo sham. Ao mesmo tempo, a concentração interleucina-6 foi significativamente maior no fluido de cavidade peritoneal no grupo AP.
A gravidade da pancreatite neste modelo depende proporcionalmente da concentração, do volume e da pressão da infusão e do tempo de indução aguda da pancreatite. Com a ajuda dessa técnica, podem ser estudados os efeitos da lavagem peritoneal contínua na pancreatite aguda grave.
