Deteção da fosfolipase C atividade no cérebro Homogenate da abelha

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo da neurociência, como se e como as atividades de PLC em diferentes regiões cerebrais estão envolvidas na função cerebral da abelha. A principal vantagem dessa técnica é que os pesquisadores podem facilmente pré-formar um experimento com as instalações de laboratório padrão, pois este protocolo requer apenas manipulações básicas. Para começar, coloque um tubo de 50ml contendo abelhas no gelo por 30 minutos para anestesiar as abelhas. Em seguida, prepare o estágio de dissecção dobrando um pedaço de cera dentária ao meio e colocando-o em um prato de plástico. Sob um microscópio binóculo, use pinças para separar a cabeça da abelha de seu corpo. Em seguida, fixar a cabeça na cera dentária e inserir pinos de inseto na base de cada antena para manter o interior da cabeça em uma posição ascendente. Em seguida, despeje solução salina suficiente sobre a cabeça para cobri-la. Usando pinças, remova a antena. Depois disso, use um bisturi para fazer um corte horizontal perto das bases da antena e um corte longitudinal na borda dos olhos compostos. Faça um corte horizontal na parte superior da cabeça e remova a cutícula para abrir uma janela sobre o cérebro. Em seguida, use pinças para remover o olho de retin da ossícula e a traqueia da superfície interior do cérebro. Em seguida, insira a pinça diretamente sob a cutícula dos olhos para remover o tecido conjuntivo entre a cutícula dos olhos compostos e o olho de retin. Depois disso, remova a cutícula e o olho de retin dos olhos compostos. Em seguida, use a pinça para remover cuidadosamente a traqueia restante da superfície interior do cérebro. Então, corte o tecido conjuntivo entre o cérebro e ao redor dos tecidos e disseca o cérebro da cápsula da cabeça. Usando a pinça, retire a traque da superfície posterior do cérebro. Em seguida, use um bisturi para cortar a conexão entre os corpos de cogumelos ou MBs e outras regiões cerebrais ao lado dos lóbulos verticais. Coloque os MBs dissecados e quaisquer tecidos cerebrais restantes em tubos de 1,5ml e congele-os rapidamente com gelo seco. Primeiro, adicione 10ml de tampão de homogeneização ao tecido cerebral congelado. Use uma peselle plástica para homogeneizar manualmente o tecido no tubo de 1,5ml. Depois disso, transfira a solução de tecido homogeneizado para o próximo tecido do lote e repita o processo de homogeneização. Em seguida, adicione 30