Erkennung von Phospholipase C Aktivität im Gehirn Homogenat von der Honigbiene

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im bereichdernaturwissenschaftlichen Bereich zu beantworten, wie z. B. ob und wie SPS-Aktivitäten in verschiedenen Hirnregionen an der Gehirnfunktion der Honigbiene beteiligt sind. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass Forscher ein Experiment mit den Standardlaboreinrichtungen leicht vorstrukturieren können, da dieses Protokoll nur grundlegende Manipulationen erfordert. Zunächst eine 50ml Tube mit Honigbienen für 30 Minuten auf Eis legen, um die Bienen zu anästhesieren. Als nächstes bereiten Sie die Sezierstufe vor, indem Sie ein Stück Zahnwachs in die Hälfte falten und in eine Plastikschüssel legen. Verwenden Sie unter einem binokularen Mikroskop eine Pinzette, um den Kopf der Bienen von ihrem Körper zu trennen. Dann fixieren Sie den Kopf auf dem Zahnwachs und setzen Sie Insektenstifte an der Basis jeder Antenne ein, um das Innere des Kopfes in einer Aufwärtsposition zu halten. Als nächstes gießen Sie genügend Saline-Lösung über den Kopf, um es zu bedecken. Mit einer Pinzette entfernen Sie die Antenne. Danach verwenden Sie ein Skalpell, um einen horizontalen Schnitt in der Nähe der Basen der Antenne und einen Längsschnitt an der Grenze der zusammengesetzten Augen zu machen. Machen Sie einen horizontalen Schnitt an der Oberseite des Kopfes und entfernen Sie die Nagelhaut, um ein Fenster über dem Gehirn zu öffnen. Als nächstes verwenden Sie eine Pinzette, um das Retinauge aus dem Ossikel und die Luftröhre von der inneren Oberfläche des Gehirns zu entfernen. Dann legen Sie die Pinzette direkt unter der Augenhaut, um das Bindegewebe zwischen der Nagelhaut der zusammengesetzten Augen und Retin Auge zu entfernen. Danach entfernen Sie die Nagelhaut und Das Retinauge der zusammengesetzten Augen. Als nächstes verwenden Sie die Pinzette, um die verbleibenden Luftröhre vorsichtig von der inneren Oberfläche des Gehirns zu entfernen. Schneiden Sie dann das Bindegewebe zwischen dem Gehirn und um das Gewebe herum und sezieren Sie das Gehirn von der Kopfkapsel. Mit der Pinzette, schälen Sie die Luftröhre von der hinteren Oberfläche des Gehirns. Verwenden Sie dann ein Skalpell, um die Verbindung zwischen den Pilzkörpern oder MBs und anderen Hirnregionen neben den vertikalen Lappen zu schneiden. Die sezierten MBs und alle verbleibenden Hirngewebe in 1,5ml-Röhren geben und schnell mit Trockeneis einfrieren. Fügen Sie zunächst 10 ml Homogenisierungspuffer in das gefrorene Hirngewebe ein. Verwenden Sie eine Kunststoff-Peselle, um das Gewebe in der 1,5ml-Röhre manuell zu homogenisieren. Danach die homogenisierte Gewebelösung in das nächste Gewebe im Los übertragen und den Homogenisierungsprozess wiederholen. Fügen Sie dann 30 hinzu