Prêmios da National Institutes of Health apoiou esta pesquisa (R01DC013588 de NAC, R21DC013886 NAC e DRR e NIDCD administrativos pesquisa suplemento para promover o surgimento de clínico-cientistas na investigação Chemosensory para JED). Foram coletados dados do genótipo do equipamento comprado em parte com os fundos do NIH de OD018125.

A Universidade de Pensilvânia institucional diretoria aprovou este protocolo. Que excluímos sujeitos se eles eram menores de 18 anos de idade ou estavam grávidos.
1. avaliação da cavidade oral: Doença avaliação e identificação da papila
<ol><li>Instrua o assunto para abrir a boca.</li>
	<li>
Usando uma fonte de luz como uma lanterna ou farol, iluminar a cavidade oral e examinar os sete subsites da área (língua, assoalho da boca, mucosa bucal, mucosa labial, gengiva, palato duro e trígono retromolar).
	<ol>
<li>Visualize a superfície dorsal da língua. Instruir o sujeito que levanta a língua e examinar a superfície ventral da língua e assoalho da boca, certificando-se de estender a análise posterior para os molares.</li>
		<li>Usando um depressor, lateralize bochecha do sujeito para visualizar a mucosa bucal, bem como a gengiva lateral bilateral em torno dos dentes superiores e inferiores.</li>
		<li>Estenda o exame anteriormente, levantando os lábios superiores e inferiores para visualizar as superfícies da gengiva anterior e na mucosa labial.</li>
		<li>Finalmente, visualize o palato duro e trígono retromolar.</li>
		<li>Observação de lesões, abrasões e massas ou sinais de inflamação.</li>
		<li>Mais uma vez, pedir o assunto para abrir a boca e estender a língua.</li>
		<li>Use uma fonte de luz para visualizar a superfície dorsal da língua.</li>
		<li>Identificar a presença ou ausência de FP, por exemplo, uma superfície lisa de língua</li>
	</ol>
</li>
	<li>Observe os resultados do exame cavidade oral antes de prosseguir com o teste de sabor. Se os investigadores realizar este teste de sabor em um contexto médico, resultados inesperados devem solicitar mais check-up.</li>
</ol>2. teste de sabor psicofísica
Nota: Recursos e descrições para o sabor psicofísica testes que se seguem também estão disponíveis na página web seguinte: https://osf.io/hn87s/.
<ol><li>
Preparação tastant
	<ol>
<li>Prepare soluções conforme indicado abaixo. Fazer de cada solução usando um balão volumétrico para garantir a precisão das concentrações a ± 0,0002 M. dissolver amostras usando água ultrapura. Adaptar a escolha de compostos para os objetivos da pesquisa. Os compostos incluídos aqui servem como um exemplo.<ol>
<li>Benzoato de denatónio (amargo): prepare uma solução stock de 4,99 x 10-3 M benzoato de denatónio dissolvendo 2,228 g de benzoato de denatónio em 1 litro de água. Adicione 180 µ l desta solução para um balão volumétrico de 500 mL. Adicione água para o volume para 500 mL, produzindo uma solução com uma concentração final de 1,8 µM.</li>
			<li>PTC (amargo): colocar 0,0135 g do PTC em um balão volumétrico de 500 mL. Adicione água para o volume para 500 mL. PTC é difícil dissolver, então coloque uma barra de agitação no balão e aqueça a solução a 70 ° C, em um prato quente. Use a barra de agitação para misturar a solução até dissolver todo soluto (~ 15 min). Isso produz uma solução com uma concentração final de 180 µM.</li>
			<li>Quinino (amargo): colocar 0,011 g de quinino HCl dihidratado num balão volumétrico de 500 mL. Adicione água para o volume para 500 mL, produzindo uma solução com uma concentração final de 56 µM.</li>
			<li>Cloreto de sódio (sal): Coloque 7,5 g de cloreto de sódio em um balão volumétrico de 500 mL. Adicione água para o volume para 500 mL, produzindo uma solução com uma concentração final de 0,25 M.</li>
			<li>Sacarose (doce): colocar 60 g de sacarose em um balão volumétrico de 500 mL. Adicione água para o volume para 500 mL, produzindo uma solução com uma concentração final de 0,35 M.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Loja sabor soluções a 4 ° C. Alguns comumente usados compostos de sabor são sensíveis à luz, e os investigadores devem envolvê-los em papel ou outros materiais para reduzir sua exposição a luz.</li>
		<li>Para identificar erros comuns na preparação da solução, encha um copo de degustação com a velha solução e outra com a nova solução. Saborear cada solução para verificar se que eles são idênticos nos força.</li>
		<li>Inclua a água como uma solução de controle, apresentada na primeira posição para verificar assuntos entendem o procedimento de teste. Apresentam temas com cada tastant e o controle tastant duas vezes, tendo o cuidado de evitar apresentar a mesma tastant consecutivamente. Por exemplo, para testar cinco tastants exclusivos, apresentam doze amostras no questionário (ver 2.2): os cinco tastants e água, cada um apresentado duas vezes. Alíquota de 5 mL de água em frascos de vidro individuais cintilação. Rotule os tampões de frasco com uma etiqueta azul escura, o algarismo 1.</li>
		<li>Repita este processo para cada tastant. Tampões de frasco de rótulo com um adesivo circular de acordo com a ordem de apresentação e um código de cor, exemplo detalhado abaixo; coincidir com os rótulos dos frascos com as etiquetas do questionário de sabor (ver 2.2). Água (azul escuro) Quinino (luz azul) NaCl (verde) PTC (amarelo) Sacarose (laranja) Benzoato de denatónio (vermelho) NaCl (azul escuro) Benzoato de denatónio (luz azul) Água (verde) Quinino (amarelo) Sacarose (laranja) PTC (vermelho)</li>
		<li>Pacote de samples, colocando-os em duas caixas, amostras de 1 – 6 e 7 – 12 em caixas rotuladas "caixa A" e "caixa B," respectivamente (Figura 1); outras estratégias de embalagem são possíveis.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56705/56705fig1v2.jpg"> Figura 1: kit de sabor. Assuntos usam o kit de intensidade de sabor de taxa e a qualidade dos vários tastants codificados por cores. A caixa contém amostras 1 – 6, caixa B contém 7 – 12. <a href="/files/ftp_upload/56705/56705fig1v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="2"><li>
Questionário de sabor
	<ol>
<li>Prepare o questionário gosto usando uma escala de categoria para classificar a intensidade de sabor e uma escolha forçada para identificar a qualidade de sabor de cada tastant (Figura 2).</li>
		<li>Coloque etiquetas circulares da cor adequada e o número ao lado da amostra adequada no questionário sabor (consulte 2.1.6).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56705/56705fig2.jpg"> Figura 2: entrada de questionário, constituído por uma escala de categoria para classificação de intensidade de sabor e forçado a escolha resposta para tastant qualidade. O questionário de sabor incluirá uma entrada para cada um do tastants Color-coded testado. <a href="/files/ftp_upload/56705/56705fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="3"><li>
Administração de teste de gosto
	<ol>
<li>Fornece temas com caixa A, casa B, uma garrafa de água, copo vazio, caneta e papel e caneta gosto questionário contendo entradas para 12 amostras. Use a mesma marca de água engarrafada durante toda a duração de qualquer determinado estudo. Como uma alternativa a um questionário de papel, porta o material em software de pesquisa online e administrado via tablet ou desktop/Laptop. Um modelo de amostra está disponível em https://osf.io/hn87s/.</li>
		<li>Instrua a temas que eles serão convidados a avaliar a intensidade e a qualidade (por exemplo, salgado, azedo, amargo, doce ou sem sabor) de cada tastant. Além disso, informe assuntos podem não ter todas as qualidades.</li>
		<li>Explicar o procedimento de teste, como segue: enxaguar a boca duas vezes com água e cuspir no copo fornecido. Despeje tudo de amostra 1 na boca e aí aguarde 5 segundos antes de cuspir a solução no copo. Não gargarejar ou engolir a solução. Círculo-uma das 13 linhas verticais correspondentes com intensidade do exemplo, em uma escala de 0 a 12, de "sem intensidade em tudo" para "extremamente intenso" e escolher uma qualidade única para descrever o sabor. Depois, enxague a boca com água duas vezes antes de prosseguir para a próxima amostra.</li>
		<li>Observe o assunto degustação e classificação da amostra 1 (água). Deve a desviar de classificação de "sem intensidade em tudo" e "sem sabor", reiterar as instruções do questionário antes de permitir que o teste prosseguir.</li>
		<li>Revise o questionário acabado de completude.</li>
		<li>Classificações de intensidade numa escala de 0 a 12, a partir das linhas verticais que circulavam os assuntos de pontuação. Média as duas classificações de intensidade para cada tastant; Esse valor será usado para análise.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. o genótipo
<ol><li>Colete a saliva de cada assunto usando um kit de coleta de DNA de saliva.</li>
	<li>Purifica o DNA genômico da amostra, seguindo as instruções do fabricante.</li>
	<li>Determine o genótipo TAS2R38 usando o SNP genotyping ensaios (rs713598, rs1726866, rs10246939)40.</li>
	<li>Determine o genótipo TAS2R19 usando o SNP genotyping ensaios (rs10772420)36.</li>
</ol>4. genótipo-fenótipo validação
<ol><li>Analisar os dados de controle disponíveis em pool de mais de 800 temas genótipo por TAS2R38 (rs713598, rs1726866, rs10246939) e TAS2R19 (rs10772420) na seguinte página web: https://carayata.shinyapps.io/TasteBoxplots/.</li>
	<li>Com base no genótipo de um sujeito TAS2R38 , compare sua resposta gosto psicofísica para o PTC composto amargo com as normas para os indivíduos com o mesmo genótipo. Respostas devem corresponder; no entanto, em casos raros, o genótipo TAS2R38 não perfeitamente prever PTC resultados sensoriais35.</li>
	<li>Devem respostas mostram divergência significativa, comparar a resposta de sabor do sujeito de quinino com as normas para os indivíduos com o mesmo genótipo de TAS2R19 . Respostas para intensidade de quinino e genótipo devem corresponder a36. Se todos os resultados de sabor não correspondem com o genótipo, é possível que o sujeito (a) não entende a tarefa (b) é fornecer avaliações espúrias ou fingimento ou (c) houve um erro de coleta de dados por parte do investigador.</li>
	<li>Identificar exceções de ponto de dados e talvez excluir da análise (Figura 3). Correspondência dos resultados sensoriais com genotipagem objetiva valida a confiabilidade do procedimento de teste psicofísico.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Cowart, B. J., Young, I. M., Feldman, R. S., Lowry, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+disorders+of+smell+and+taste.">Clinical disorders of smell and taste.</a> Occupational Medicine. 12 (3), 465-483 (1997).</li><li>Ackerman, B. H., Kasbekar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbances+of+taste+and+smell+induced+by+drugs.">Disturbances of taste and smell induced by drugs.</a> Pharmacotherapy. 17 (3), 482-496 (1997).</li><li>Kveton, J. F., Bartoshuk, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+unilateral+chorda+tympani+damage+on+taste.">The effect of unilateral chorda tympani damage on taste.</a> Laryngoscope. 104, 25-29 (1994).</li><li>Fischer, R. A., Griffin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacogenetic+aspects+of+gustation.">Pharmacogenetic aspects of gustation.</a> Drug Research. 14 (14), 673-686 (1964).</li><li>Joyce, C. R., Pan, L., Varonos, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+sensitivity+may+be+used+to+predict+pharmacological+effects.">Taste sensitivity may be used to predict pharmacological effects.</a> Life Science. 7 (9), 533-537 (1968).</li><li>Adappa, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+the+taste+receptor+T2R38+correlates+with+chronic+rhinosinusitis+necessitating+surgical+intervention.">Genetics of the taste receptor T2R38 correlates with chronic rhinosinusitis necessitating surgical intervention.</a> International Forum of Allergy &amp; Rhinology. , (2013).</li><li>Lipchock, S. V., Reed, D. R., Mennella, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+bitter-taste+receptor+genotype+and+solid+medication+formulation+usage+among+young+children:+a+retrospective+analysis.">Relationship between bitter-taste receptor genotype and solid medication formulation usage among young children: a retrospective analysis.</a> Clinical Therapeutics. 34 (3), 728-733 (2012).</li><li>Bartoshuk, L. M., Carterette, E. C., Friedman, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of perception: Tasting and smelling. , 2-18 (1978).</li><li>Coldwell, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gustation+assessment+using+the+NIH+Toolbox.">Gustation assessment using the NIH Toolbox.</a> Neurology. 80 (11 Suppl 3), S20-S24 (2013).</li><li>Mueller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+gustatory+function+in+a+clinical+context+using+impregnated+&amp;#34;taste+strips&amp;#34.">Quantitative assessment of gustatory function in a clinical context using impregnated &amp;#34;taste strips&amp;#34.</a> Rhinology. 41 (1), 2-6 (2003).</li><li>Reed, D. R., Tanaka, T., McDaniel, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+tastes:+Genetics+of+sweet+and+bitter+perception.">Diverse tastes: Genetics of sweet and bitter perception.</a> Physiological Behavior. 88 (3), 215-226 (2006).</li><li>Miller, I. J., Reedy, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+human+taste+bud+density+and+taste+intensity+perception.">Variations in human taste bud density and taste intensity perception.</a> Physiological Behavior. 47 (6), 1213-1219 (1990).</li><li>Shahbake, M., Hutchinson, I., Laing, D. G., Jinks, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+quantitative+assessment+of+fungiform+papillae+density+in+the+human+tongue.">Rapid quantitative assessment of fungiform papillae density in the human tongue.</a> Brain Research. 1052 (2), 196-201 (2005).</li><li>Spielman, A. I., Pepino, M. Y., Feldman, R., Brand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+to+collect+fungiform+(taste)+papillae+from+human+tongue.">Technique to collect fungiform (taste) papillae from human tongue.</a> Journal of Visualized Experiments. 18 (42), 2201 (2010).</li><li>Nuessle, T. M., Garneau, N. L., Sloan, M. M., Santorico, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Denver+papillae+protocol+for+objective+analysis+of+fungiform+papillae.">Denver papillae protocol for objective analysis of fungiform papillae.</a> Journal of Visualized Experiments. (100), e52860 (2015).</li><li>Sanyal, S., O'Brien, S. M., Hayes, J. E., Feeney, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TongueSim:+development+of+an+automated+method+for+rapid+assessment+of+fungiform+papillae+density+for+taste+research.">TongueSim: development of an automated method for rapid assessment of fungiform papillae density for taste research.</a> Chemical Senses. 41 (4), 357-365 (2016).</li><li>Spielman, A. I., Brand, J. G., Buischi, Y., Bretz, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resemblance+of+tongue+anatomy+in+twins.">Resemblance of tongue anatomy in twins.</a> Twin Research and Human Genetics. 14 (3), 277-282 (2011).</li><li>Kalmus, H., Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antimode+and+lines+of+optimal+separation+in+a+genetically+determined+bimodal+distribution,+with+particular+reference+to+phenylthiocarbamide+sensitivity.">The antimode and lines of optimal separation in a genetically determined bimodal distribution, with particular reference to phenylthiocarbamide sensitivity.</a> Annals of Human Genetics. 29 (2), 127-138 (1965).</li><li>Pearson, J., Finegold, M. J., Budzilovich, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tongue+and+taste+in+familial+dysautonomia.">The tongue and taste in familial dysautonomia.</a> Pediatrics. 45 (5), 739-745 (1970).</li><li>Fukutake, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late-onset+hereditary+ataxia+with+global+thermoanalgesia+and+absence+of+fungiform+papillae+on+the+tongue+in+a+Japanese+family.">Late-onset hereditary ataxia with global thermoanalgesia and absence of fungiform papillae on the tongue in a Japanese family.</a> Brain. 119 (Pt 3), 1011-1021 (1996).</li><li>Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+receptor+signalling+-+from+tongues+to+lungs.">Taste receptor signalling - from tongues to lungs.</a> Acta physiologica. 204 (2), 158-168 (2012).</li><li>Lewandowski, B. C., Sukumaran, S. K., Margolskee, R. F., Bachmanov, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amiloride-insensitive+salt+taste+is+mediated+by+two+populations+of+type+iii+taste+cells+with+distinct+transduction+mechanisms.">Amiloride-insensitive salt taste is mediated by two populations of type iii taste cells with distinct transduction mechanisms.</a> Journal of Neuroscience. 36 (6), 1942-1953 (2016).</li><li>Vandenbeuch, A., Clapp, T. R., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amiloride-sensitive+channels+in+type+I+fungiform+taste+cells+in+mouse.">Amiloride-sensitive channels in type I fungiform taste cells in mouse.</a> BMC Neuroscience. 9, 1 (2008).</li><li>Margolskee, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biochemistry+and+molecular+biology+of+taste+transduction.">The biochemistry and molecular biology of taste transduction.</a> Current Opinions in Neurobiology. 3 (4), 526-531 (1993).</li><li>Meyerhof, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+receptive+ranges+of+human+TAS2R+bitter+taste+receptors.">The molecular receptive ranges of human TAS2R bitter taste receptors.</a> Chemical Senses. 35 (2), 157-170 (2010).</li><li>Yee, K. K., Sukumaran, S. K., Kotha, R., Gilbertson, T. A., Margolskee, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+transporters+and+ATP-gated+K++(KATP)+metabolic+sensors+are+present+in+type+1+taste+receptor+3+(T1r3)-expressing+taste+cells.">Glucose transporters and ATP-gated K+ (KATP) metabolic sensors are present in type 1 taste receptor 3 (T1r3)-expressing taste cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. , (2011).</li><li>Tordoff, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium:+taste,+intake+and+appetite.">Calcium: taste, intake and appetite.</a> Physiological Review. 81, 1567-1597 (2001).</li><li>Reed, D. R., Xia, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+fatty+acid+perception+and+genetics.">Recent advances in fatty acid perception and genetics.</a> Advances in Nutrition. 6 (3), 353S-360S (2015).</li><li>Blekhman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+genetic+variation+impacts+microbiome+composition+across+human+body+sites.">Host genetic variation impacts microbiome composition across human body sites.</a> Genome Biology. 16, 191 (2015).</li><li>Hoon, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Putative+mammalian+taste+receptors:+a+class+of+taste-specific+GPCRs+with+distinct+topographic+selectivity.">Putative mammalian taste receptors: a class of taste-specific GPCRs with distinct topographic selectivity.</a> Cell. 96 (4), 541-551 (1999).</li><li>Laffitte, A., Neiers, F., Briand, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+roles+of+the+sweet+taste+receptor+in+oral+and+extraoral+tissues.">Functional roles of the sweet taste receptor in oral and extraoral tissues.</a> Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic. 17 (4), 379-385 (2014).</li><li>An, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tas2r+activation+promotes+airway+smooth+muscle+relaxation+despite+beta2-adrenergic+receptor+tachyphylaxis.">Tas2r activation promotes airway smooth muscle relaxation despite beta2-adrenergic receptor tachyphylaxis.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular. , (2012).</li><li>Fox, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+chemical+composition+and+taste.">The relationship between chemical composition and taste.</a> Science. 74, 607 (1931).</li><li>Fox, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+chemical+constitution+and+taste.">The relationship between chemical constitution and taste.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 18, 115-120 (1932).</li><li>Bufe, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+basis+of+individual+differences+in+phenylthiocarbamide+and+propylthiouracil+bitterness+perception.">The molecular basis of individual differences in phenylthiocarbamide and propylthiouracil bitterness perception.</a> Current Biol.ogy. 15 (4), 322-327 (2005).</li><li>Reed, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perception+of+quinine+taste+intensity+is+associated+with+common+genetic+variants+in+a+bitter+receptor+cluster+on+chromosome+12.">The perception of quinine taste intensity is associated with common genetic variants in a bitter receptor cluster on chromosome 12.</a> Human Molecular Genetics. 19 (21), 4278-4285 (2010).</li><li>Bobowski, N., Reed, D. R., Mennella, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+the+TAS2R31+bitter+taste+receptor+gene+relates+to+liking+for+the+nonnutritive+sweetener+Acesulfame-K+among+children+and+adults.">Variation in the TAS2R31 bitter taste receptor gene relates to liking for the nonnutritive sweetener Acesulfame-K among children and adults.</a> Science Reports. 6, 39135 (2016).</li><li>Allen, A. L., McGeary, J. E., Knopik, V. S., Hayes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bitterness+of+the+non-nutritive+sweetener+acesulfame+potassium+varies+with+polymorphisms+in+TAS2R9+and+TAS2R31.">Bitterness of the non-nutritive sweetener acesulfame potassium varies with polymorphisms in TAS2R9 and TAS2R31.</a> Chemical Senses. 38 (5), 379-389 (2013).</li><li>Roudnitzky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic,+genetic,+and+functional+dissection+of+bitter+taste+responses+to+artificial+sweeteners.">Genomic, genetic, and functional dissection of bitter taste responses to artificial sweeteners.</a> Human Molecular Genetics. 20 (17), 3437-3449 (2011).</li><li>Guo, S. W., Reed, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+phenylthiocarbamide+perception.">The genetics of phenylthiocarbamide perception.</a> Annals in Human Biology. 28 (2), 111-142 (2001).</li><li>Bartoshuk, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeled+scales+(e.g.,+category,+Likert,+VAS)+and+invalid+across-group+comparisons:+what+we+have+learned+from+genetic+variation+in+taste.">Labeled scales (e.g., category, Likert, VAS) and invalid across-group comparisons: what we have learned from genetic variation in taste.</a> Food Quality Prefererences. 14 (2), 125-138 (2003).</li></ol>

NAC e DRR são co-inventores em uma patente sob revisão (terapia e diagnóstico para infecção respiratória 61/697.652, WO2013112865).

A importância deste método é que ele usa uma abordagem multidisciplinar com características da medicina (exame oral), a psicologia experimental (a prova) e a genética (uma etapa de validação). Informações de sabor são propensas a desenvolver-se como uma ferramenta de diagnóstica e prognóstica porque gosto fornece uma janela para a função das proteínas em outras partes do corpo. Do ponto de vista da psicologia experimental, a adição de um simples exame pode identificar indivíduos que não são apropriados para o estudo da função normativa de sabor. De um ponto de vista da genética, esses procedimentos fornecem uma maneira simples para estudar relações genótipo-fenótipo facilmente reproduzível.
Medir o sabor humano tem várias características essenciais que são intangíveis, mas importante, inclusive ajudando o sujeito sentir-se em facilitar e orientado para a tarefa e especialmente nos ajustes médicos, mantendo o procedimento curto, então a atenção do assunto não Waver. Também é importante intervir se temas aparecem desconfortáveis e resolver suas preocupações, tais como em relação à natureza dos estímulos testes. Assuntos são frequentemente mais tranquilos ao saber que a maioria dos estímulos testes é em alimentos, por exemplo, sal e açúcar. Este procedimento, embora simples, tem limitações significativas. Enquanto o exame oral é rotina para investigadores com formação médica, aqueles com formação psicologia ou genética experimental são susceptíveis de ser menos superficial em reconhecer a doença oral. Outra limitação é a escala de classificação que enquanto facilmente entendido por indivíduos sem formação prévia, pode obscurecer as diferenças entre os indivíduos ou grupos de indivíduos41. Finalmente, a orientação sobre como tratar os assuntos com as incompatibilidades entre genótipo e fenótipo no tratamento estatístico dos dados ainda não é codificada em regras simples, por exemplo, soltando a indivíduos que não cumpram o determinado critério.
Olhando para aplicações futuras, exames de sabor podem tornar-se rotina partes da medicina como visão e testes de audição, que iria aumentar a nossa compreensão de como gosto refere-se ao bem-estar e à doença humana e nos permitirá refinar este teste simples.

Medidas da percepção humana sabor podem ser parte dos cuidados médicos e um alvo de investigação biomédica, ainda gosto tem recebido pouca atenção em comparação com audição e visão (tabela 1). Do ponto de vista médico, quando os médicos avaliar pacientes queixando-se de perda de sabor, na maioria dos casos a perda real é de cheiro1, que levou à demissão de perda de sabor como uma queixa de apresenta incomum e frequentemente inválida. Gosto de distorções (Disgeusia) são mais comuns e surgem frequentemente dos efeitos secundários de medicamentos ou lesão de nervo periférico2,3, mas nenhum formulário tem um tratamento eficaz (além de parar a medicação). Os médicos também ignoraram a perda de sabor porque até agora teve pouco valor diagnóstico ou prognóstico por conta própria. No entanto, embora a medida do gosto tem sido um remanso, ele pode agora entrar em medicina tradicional com a revitalização de uma apreciação histórica que gosto pode ser uma ferramenta de diagnóstico ou prognóstico4,5. Por exemplo, a percepção de amargura pode prever função imune6 ou a disponibilidade de um paciente para tomar medicação7. No entanto, pesquisadores biomédicos negligenciaram largamente gosto. Esta desatenção pode, em parte, refletem o fato de que o progresso inicial na compreensão deste sistema sensorial tem suas raízes na psicologia experimental8, um campo com o qual aqueles na medicina pode ser relativamente desconhecidos. Além disso, o interesse renovado no gosto inaugurou gosto padronizados métodos9 que constroem em anteriores métodos10, que ao mesmo tempo abrangente são longos e inadequado para situações clínicas. Finalmente, confiança nas medidas de gosto pode ser fraca porque assuntos relatam sobre suas próprias experiências e validação de suas observações até agora tem faltado. Nossa esperança é que uma medida simples que os investigadores ou os clínicos podem facilmente administrar vai ganhar em popularidade com os eleitores. Aqui descrevemos um protocolo de exame de gostos simples que tem três partes: uma avaliação da cavidade oral, o teste de gosto e uma etapa de validação usando Inatos do genótipo. Primeiro, nós fornecemos o contexto biológico para esses procedimentos, que se fundem simples práticas em medicina, medidas sensoriais da psicologia experimental e validação das respostas usando o genótipo e genética.
Percepção de sabor começa na boca, para que um exame eficaz gosto precisa incluir uma breve avaliação clínica para doenças orais óbvias, vermelhidão, inchaço e outra descoloração. A cavidade oral contém sete subsites: a língua, gengiva, assoalho da boca, mucosa bucal, mucosa labial, palato duro e o trígono retromolar. Após estudos do paladar humano focado em participantes saudáveis ou aqueles com doenças bem definidas, mas como gosto de teste torna-se rotina em exames médicos, é importante gravar a condição da cavidade oral como parte do procedimento.
A língua em si é uma estrutura muscular envolvida em mucosa; pontilham sua superfície dorsal é papilas, as pequenas estruturas levantadas que dão a língua sua textura única e contêm células receptoras de sabor. Podemos classificar a papila por sua forma: fungiforme, filiformes, foliate e circunvalada. Papila fungiforme (FP) é anterolateralmente localizado na língua e redonda, com uma forma de cogumelo,11. Os investigadores têm publicado vários métodos úteis para quantificar o FP e instruímos os leitores a estas fontes para medição protocolos12,13,14,15,16. Papilas foliate, dado forma como as páginas de um livro (folia), situam-se exclusivamente na lateral posterior língua superfície11. Papila circunvalada, encontrada no sulco terminalis da base da língua, é grandes estruturas em forma de cúpula, cercadas por paredes da mucosa (latim circum, "surround", + vallum, "parede")11. As papilas mais numerosas, as filiformes, são longas e finas e não contêm receptores de gosto.
As pessoas diferem na anatomia da língua. Enquanto as fontes desta variação anatômica são desconhecidas, é determinada em parte pela variação genética inata, com investigadores relatando 31% de concordância da anatomia da língua entre dizigóticos gémeos e 60% concordância entre gêmeos monozigóticos17. Densidade papilar também difere entre as pessoas, e apesar de rara, pelo menos uma doença genética (Disautonomia Familiar) resulta em uma ausência congênita de sabor papilas18,19,20. Assim, antes de executar teste psicofísico, é útil confirmar a presença de FP como parte da avaliação breve e observe o tamanho relativo e a cor da língua e evidência de doença oral.
As papilas gosto contêm o sensorial que células quando estimulado a sensação de gosto de iniciar. Os seres humanos são capazes de sensoriamento de pelo menos cinco classes de sabor: salgado, azedo, amargo, doce e umami. Enquanto salgado, doce e gosto umami sinalizar a presença de fontes de alimento valioso contendo cloreto de sódio, glicose e aminoácidos, respectivamente, amargor e acidez sinalizar a presença de ácidos e toxinas potenciais da decomposição bacteriana de alimentos, respectivamente e induzir o comportamento contrário21. Sabores salgados e amargo são transformados através da ativação de canais iônicos, encontrado em alguns tipos de células de sabor, embora o entendimento da transdução de sal está evoluindo e pode exigir tipo I também pilhas22,23. Doce, amargo e umami surgem da ativação de receptores G-proteína-acoplados em células de sabor tipo II, cada um em sintonia com um gosto particular. Heterodímeros de subunidades de três receptores particulares transduce doce e o umami, enquanto compostos amargos ativar um grupo de 25 diferentes receptores amargo24. Estes receptores amargos podem responder a vários compostos amargos, e um único composto amargo estimula muitas vezes mais de um receptor25. Apesar da recente expansão do conhecimento sobre a base molecular do gosto, novela caminhos26 e novas descobertas para além das qualidades de cinco sabor tradicional (por exemplo, percepção de28 27 ou ácido graxo cálcio) podem se avizinham.
Há pelo menos dois aspectos surpreendentes das famílias de receptores de sabor: genes que codificam para estes receptores podem diferem acentuadamente em sequência do DNA e, portanto, funcionam entre as pessoas, e muitos tecidos do corpo expressam esses genes21,29 , 30 , 31. estes sites extraoral incluem o cérebro, tireoide, superior e inferior do trato respiratório e o trato gastrointestinal, entre muitos outros21,29,30,31. Enquanto os receptores de gosto nesses locais não participam na percepção do gosto no sentido tradicional, eles provavelmente sentir o ambiente químico local29,32. Por exemplo, o epitélio ciliado das vias respiratórias superiores expressa o receptor amargo T2R38 (amargo sabor do Receptor 38), que responde à compostos químicos produzidos pelas bactérias e influencia a resposta imune inata32, tais como crescente infralateral e níveis de peptídeos antimicrobianos e óxido nítrico. Este achado tem implicações médicas para rinossinusite crônica, uma doença da infecção bacteriana crônica e inflamação do trato respiratório superior e seios paranasais.
De particular relevância para o sabor exame que descrevemos aqui é que o receptor do sabor amargo T2R38, codificada pelo gene TAS2R38 , apresenta variabilidade genética e, portanto, variável gosto sensibilidade. Diferenças perceptuais para a amarga composta Feniltiocarbamida (PTC) foram descrita pela primeira vez pelo químico Arthur Fox33; mais tarde, este composto foi identificado como um agonista do receptor de T2R3834. As diferenças individuais surgem a partir da sequência de DNA do gene TAS2R38 , que tem três polimorfismos de single-nucleotide, cada rendendo substituições de aminoácidos (A49P, A262V e I296V; R: alanina, prolina p, v: valina, isoleucina i:). Dois haplótipos comuns resultar, PAV e AVI, com indivíduos PAV/PAV, sendo altamente sensível ao PTC ("provadores"), indivíduos AVI/AVI sendo relativamente insensíveis ("não-provadores") e heterozigoto AVI/PAV indivíduos, sendo mais variável na sua sensibilidade 35. existem mais exemplos de variação genética que afetam a percepção do amarga, por exemplo, do receptor do gosto T2R19, codificada pelo gene TAS2R19 , da mesma forma apresenta variabilidade genética e diferentes sensibilidade de sabor para o composto amargo quinino,36. Da mesma forma, a variação em TAS2R31 afeta a amargura percebida de um dos adoçantes de alta potência37,38,39.
Aqui nós descrevemos um método rápido para caracterizar o sentido de um paciente do paladar que desenha em protocolos de alto rendimento em medicina clínica, psicologia experimental e genética.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="850">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Disposable diagnostic penlight</td>
			<td style="width:163px;">Primacare</td>
			<td style="width:124px;">DL-9223</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UltraLite Pro headlight</td>
			<td style="width:163px;">Integra LifeSciences</td>
			<td>AX2100BIF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Millipore Q-Gard 2 water purification system</td>
			<td>EMB Millipore</td>
			<td style="width:124px;">QGARD00D2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Denatonium benzoate&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Phenylthiocarbamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Quinine hydrochloride dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Q1125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1679</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sucrose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass scintillation vials</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1230L59</td>
			<td>Same as Wheaton catalog no. 986580</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oragene Discover OGR-500 DNA collection kit</td>
			<td>DNA Genotek</td>
			<td style="width:124px;">OGR-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">prepIT L2P Protocol reagents</td>
			<td>DNA Genotek</td>
			<td>PT-L2P-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">rs713598 TaqMan SNP genotyping assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C___8876467_10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">rs1726866 TaqMan SNP genotyping assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C___9506827_10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">rs10246939 TaqMan SNP genotyping assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C___9506826_10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">rs10772420 TaqMan SNP genotyping assay</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C___1317426_10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

taste exam: a brief and validated test

A importância emergente de gosto em medicina e pesquisa biomédica e novos conhecimentos sobre seus fundamentos genéticos, motivou-nos para complementar os métodos de teste de sabor clássicos de duas maneiras. Primeiro, vamos explicar como fazer uma breve avaliação da boca, incluindo a língua, para garantir que as papilas sabor estão presentes e observe a evidência da doença em questão. Em segundo lugar, desenharmos na genética para validar dados de teste de gosto por comparar relatórios de intensidade percebida de amargura e de genótipos Inatos do receptor. Discordância entre medidas objetivas de genótipo e relatórios subjetivos da experiência de sabor pode identificar erros de coleta de dados, indivíduos distraídos ou aqueles que não tenham compreendido ou seguiu as instruções. Nossa expectativa é que testes de sabor rápido e válido podem persuadir a pesquisadores e clínicos para avaliar o sabor regularmente, fazendo testes de gosto tão comum como testes de audição e visão. Finalmente, porque muitos tecidos do corpo expressam receptores de sabor, sabor respostas podem fornecer um proxy para a sensibilidade dos tecidos em outras partes do corpo e, desse modo, servir como um teste rápido, point-of-care para guia diagnóstico e uma ferramenta de pesquisa para avaliar o receptor do gosto função da proteína.

Resultados do teste do sabor tem sido agrupados para todas as disciplinas avaliadas (n = 840) e são apresentados após a segregação por genótipo. O conjunto completo de dados pode ser acessado em https://carayata.shinyapps.io/TasteBoxplots/ e podem ser revisto para avaliar cada tastant e para TAS2R38 e TAS2R19 de genótipos. Resultados confirmam a existência de diferenças de sabor perceptual para PTC entre assuntos agrupados por genótipo do receptor de TAS2R38 (Figura 3). Classificações de intensidade PTC são significativamente diferentes entre genótipos de TAS2R38 (AVI/AVI, 0,86; AVI/PAV, 6,95; PAV/PAV, 8.18; One-Way ANOVA, p < 0,0001). Resultados da intensidade de quinino também são significativamente diferentes entre genótipo TAS2R19 (A:A, 3.77; A:G, 3,08; G:G, 2.26; One-Way ANOVA, p < 0,0001).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56705/56705fig3.jpg"> Figura 3: PTC gosto resultados questionário por genótipo TAS2R38 . Questionário o sabor pode ser usado para segregar os indivíduos de genótipo TAS2R38 com base em avaliações de intensidade de amargura de PTC em uma escala de categoria (* p < 0,0001). Aqui vemos alguns outliers, dados pontos localizados fora da cerca ("bigodes") deste boxplot (por exemplo, fora 1,5 vezes o intervalo interquartil acima do quartil superior e abaixo o quartil inferior) <a href="/files/ftp_upload/56705/56705fig3large.jpg" target="_blank">por favor clique aqui para ver uma versão maior deste Figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Métrica</td>
			<td>Gosto</td>
			<td>Audiência</td>
			<td>Visão</td>
			<td>Audição/sabor</td>
			<td>Visão/sabor</td>
		</tr>
<tr>
<td>PubMed</td>
			<td>36.302</td>
			<td>123.101</td>
			<td>171.522</td>
			<td>3.39</td>
			<td>4.72</td>
		</tr>
<tr>
<td>Repórter de NIH</td>
			<td>6.144</td>
			<td>23.873</td>
			<td>54.858</td>
			<td>3,89</td>
			<td>8,93</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Foi realizada uma pesquisa de texto de PubMed e NIH repórter usando um sentido particular como uma palavra-chave. PubMed é um banco de dados on-line de resultados experimentais publicados e o NIH repórter é um banco de dados online que listas de pesquisa projectos financiados através do National Institutes of Health. Valores na coluna ' Audição/sabor' mostram uma relação, ou seja, há mais três vezes tantas publicações, referenciando a audiência em comparação com gosto. Temos acesso as URLs abaixo em 31 de janeiro de 2018 em 10 a.m. EST.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">https://www.NCBI.nlm.nih.gov/PubMed/</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">https://projectreporter.nih.gov/reporter.cfm</td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 1: Registros identificados usando 'Sabor' versus 'Audiência' e 'Visão' como palavras-chave.

Watch this Scientific Journal Video about Taste Exam: A Brief and Validated Test at JoVE.com

Taste Exam: A Brief and Validated Test

: Sabor um breve e validado teste exame

Este protocolo mede respostas gosto humano e inclui uma breve avaliação anatômica, um teste de gosto curto e um método de validação usando relatado sensação e gosto do receptor genótipo do assunto.

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

16.2K visualizações.  Perelman School of Medicine at the University of Pennsylvania. Este protocolo mede respostas gosto humano e inclui uma breve avaliação anatômica, um teste de gosto curto e um método de validação usando relatado sensação e gosto do receptor genótipo do assunto.

Vídeo: Taste Exam: A Brief and Validated Test

Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the abilities to extract and use the information encoded in the auditory signal. We refer to these as listening skills (or auditory processing AP). Deficits in these skills are associated with delayed language and literacy development, though the nature of the relevant deficits and their causal connection with these delays is hotly debated.
When a child is referred to a health professional with normal hearing and unexplained difficulties in listening, or associated delays in language or literacy development, they should ideally be assessed with a combination of psychoacoustic (AP) tests, suitable for children and for use in a clinic, together with cognitive tests to measure attention, working memory, IQ, and language skills. Such a detailed examination needs to be relatively short and within the technical capability of any suitably qualified professional. Current tests for the presence of AP deficits tend to be poorly constructed and inadequately validated within the normal population. They have little or no reference to the presenting symptoms of the child, and typically include a linguistic component. Poor performance may thus reflect problems with language rather than with AP. To assist in the assessment of children with listening difficulties, pediatric audiologists need a single, standardized child-appropriate test battery based on the use of language-free stimuli.
We present the IMAP test battery which was developed at the MRC Institute of Hearing Research to supplement tests currently used to investigate cases of suspected AP deficits. IMAP assesses a range of relevant auditory and cognitive skills and takes about one hour to complete. It has been standardized in 1500 normally-hearing children from across the UK, aged 6-11 years. Since its development, it has been successfully used in a number of large scale studies both in the UK and the USA. IMAP provides measures for separating out sensory from cognitive contributions to hearing. It further limits confounds due to procedural effects by presenting tests in a child-friendly game-format. Stimulus-generation, management of test protocols and control of test presentation is mediated by the IHR-STAR software platform. This provides a standardized methodology for a range of applications and ensures replicable procedures across testers. IHR-STAR provides a flexible, user-programmable environment that currently has additional applications for hearing screening, mapping cochlear implant electrodes, and academic research or teaching.

A test battery (IMAP) for performing an in-depth assessment of auditory and cognitive abilities contributing to listening skills is described. It is quick to administer, child-friendly and free from linguistic confounds. Stimulus generation and protocol management are controlled via a software platform (IHR-STAR) to ensure replicable procedures.

Making Sense of Listening: A bateria de testes IMAP

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

Medicina

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic processes that prepare the alimentary canal for digestion. Steady progress is being made towards understanding the early biochemical and molecular events underlying taste transduction (for a review, Breslin and Spector, 20081). However, progress to date has largely resulted from animal models. Yet, since marked differences in receptor specificity and receptor density vary among species, human taste transduction will only be understood by using human taste tissue. Here we describe a biopsy technique to collect human fungiform papillae, visible as rounded pink anterior structures, about 0.5 mm in diameter that contain taste buds. These biopsied papillae are used for several purposes including the isolation of viable taste bud cells, in situ hybridization, immunohistochemistry and, through techniques of molecular biology, the identification of taste-specific novel proteins.

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Knowledge of molecular mechanisms underlying gustatory transduction has recently enjoyed significant advances, largely due to using animal models. However, the wide diversity in taste sensitivity and specificity among mammals warrants studies in human tissue. We describe a biopsy technique to collect living taste cells from the papillae on human tongue.

Técnica para coletar fungiformes (Taste) papilas da língua humana

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting. Protocols that allow researchers to study the biological pathways of the stress response in health and disease are fundamental to the progress of research in stress and anxiety.1 Although numerous protocols exist for inducing stress response in the laboratory, many neglect to provide a naturalistic context or to incorporate aspects of social and psychological stress. Of psychological stress protocols, meta-analysis suggests that the Trier Social Stress Test (TSST) is the most useful and appropriate standardized protocol for studies of stress hormone reactivity.2 In the original description of the TSST, researchers sought to design and evaluate a procedure capable of inducing a reliable stress response in the majority of healthy volunteers.3 These researchers found elevations in heart rate, blood pressure and several endocrine stress markers in response to the TSST (a psychological stressor) compared to a saline injection (a physical stressor).3 Although the TSST has been modified to meet the needs of various research groups, it generally consists of a waiting period upon arrival, anticipatory speech preparation, speech performance, and verbal arithmetic performance periods, followed by one or more recovery periods. The TSST requires participants to prepare and deliver a speech, and verbally respond to a challenging arithmetic problem in the presence of a socially evaluative audience.3 Social evaluation and uncontrollability have been identified as key components of stress induction by the TSST.4 In use for over a decade, the goal of the TSST is to systematically induce a stress response in order to measure differences in reactivity, anxiety and activation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) or sympathetic-adrenal-medullary (SAM) axis during the task.1 Researchers generally assess changes in self-reported anxiety, physiological measures (e.g. heart rate), and/or neuroendocrine indices (e.g. the stress hormone cortisol) in response to the TSST. Many investigators have adopted salivary sampling for stress markers such as cortisol and alpha-amylase (a marker of autonomic nervous system activation) as an alternative to blood sampling to reduce the confounding stress of blood-collection techniques. In addition to changes experienced by an individual completing the TSST, researchers can compare changes between different treatment groups (e.g. clinical versus healthy control samples) or the effectiveness of stress-reducing interventions.1

This article describes a protocol for inducing psychological stress in participants, which enables researchers to measure psychological, physiological and neuroendocrine responses to stress within single participants or between groups.

O Trier Protocolo de teste de estresse social para induzir Estresse Psicológico

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time and temperature restrictions, technical sophistication, and cost of reagents, in particular monoclonal antibodies to measure CD4 on blood cells, the only currently acceptable method. A commonly used cost-saving and time-saving laboratory strategy is to calculate, rather than measure certain blood values. For example, LDL levels are calculated using the measured levels of total cholesterol, HDL, and triglycerides1. Thus, identification of cell-free correlates that directly regulate the number of CD4+ T cells could provide an accurate method for calculating CD4 counts due to the physiological relevance of the correlates.
The number of stem cells that enter blood and are destined to become circulating CD4+ T cells is determined by the chemokine CXCL12 and its receptor CXCR4 due to their influence on locomotion2. The process of stem cell locomotion into blood is additionally regulated by cell surface human leukocyte elastase (HLECS) and the HLECS-reactive active &alpha;1proteinase inhibitor (&alpha;1PI, &alpha;1antitrypsin, SerpinA1)3. In HIV-1 disease, &alpha;1PI is inactivated due to disease processes 4. In the early asymptomatic categories of HIV-1 disease, active &alpha;1PI was found to be below normal in 100% of untreated HIV-1 patients (median=12 &mu;M, and to achieve normal levels during the symptomatic categories4, 5. This pattern has been attributed to immune inactivation, not to insufficient synthesis, proteolytic inactivation, or oxygenation. We observed that in HIV-1 subjects with &gt;220 CD4 cells/&mu;l, CD4 counts were correlated with serum levels of active &alpha;1PI (r2=0.93, p&lt;0.0001, n=26) and inactive &alpha;1PI (r2=0.91, p&lt;0.0001, n=26) 5. Administration of &alpha;1PI to HIV-1 infected and uninfected subjects resulted in dramatic increases in CD4 counts suggesting &alpha;1PI participates in regulating the number of CD4+ T cells in blood 3.
With stimulation, whole saliva contains sufficient serous exudate (plasma containing proteinaceous material that passes through blood vessel walls into saliva) to allow measurement of active &alpha;1PI and the correlation of this measurement is evidence that it is an accurate method for calculating CD4 counts. Briefly, sialogogues such as chewing gum or citric acid stimulate the exudation of serum into whole mouth saliva. After stimulating serum exudation, the activity of serum &alpha;1PI in saliva is measured by its capacity to inhibit elastase activity. Porcine pancreatic elastase (PPE) is a readily available inexpensive source of elastase. PPE binds to &alpha;1PI forming a one-to-one complex that prevents PPE from cleaving its specific substrates, one of which is the colorimetric peptide, succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA3NA). Incubating saliva with a saturating concentration of PPE for 10 min at room temperature allows the binding of PPE to all the active &alpha;1PI in saliva. The resulting inhibition of PPE by active &alpha;1PI can be measured by adding the PPE substrate SA3NA. (Figure 1). Although CD4 counts are measured in terms of blood volume (CD4 cells/&mu;l), the concentration of &alpha;1PI in saliva is related to the concentration of serum in saliva, not to volume of saliva since volume can vary considerably during the day and person to person6. However, virtually all the protein in saliva is due to serum content, and the protein content of saliva is measurable7. Thus, active &alpha;1PI in saliva is calculated as a ratio to saliva protein content and is termed the &alpha;1PI Index. Results presented herein demonstrate that the &alpha;1PI Index provides an accurate and precise physiologic method for calculating CD4 counts.

The &#945;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

A CD4 enumeration method, the &#x03B1;-test, is described which uses whole saliva to provide rapid and accurate CD4 counts. The &alpha;-test costs pennies and eliminates the need for technical training, costly reagents such as monoclonal antibodies, instrumentation, refrigeration, transport of samples, as well as collection and handling of blood.

O α-teste: Rapid livre de células CD4 enumeração Utilizando saliva total

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental endoscopy has been highly useful for studies that require repeated assessments in a single laboratory animal, such as those evaluating mechanisms of chronic inflammatory bowel disease and the progression of colorectal cancer. However, the methods used across studies are highly variable. At least three endoscopic scoring systems have been published for murine colitis and published protocols for the assessment of colorectal tumors fail to address the presence of concomitant colonic inflammation. This study develops and validates a reproducible endoscopic scoring system that integrates evaluation of both inflammation and tumors simultaneously. This novel scoring system has three major components: 1) assessment of the extent and severity of colorectal inflammation (based on perianal findings, transparency of the wall, mucosal bleeding, and focal lesions), 2) quantitative recording of tumor lesions (grid map and bar graph), and 3) numerical sorting of clinical cases by their pathological and research relevance based on decimal units with assigned categories of observed lesions and endoscopic complications (decimal identifiers). The video and manuscript presented herein were prepared, following IACUC-approved protocols, to allow investigators to score their own experimental mice using a well-validated and highly reproducible endoscopic methodology, with the system option to differentiate distal from proximal endoscopic colitis (D-PECS).

Over the past few years, new generation endoscopes have emerged as important diagnostic research aids for evaluating murine colitis and colorectal tumors. We present herein a detailed protocol for endoscopic assessment of inflammation and colorectal tumors in mice, as well as a novel scoring system that uses decimal identifiers to document the endoscopic severity of colitis and colorectal tumors.

A colonoscopia flexível em camundongos para avaliar a gravidade da colite e colorretal Tumores Usando um sistema validado endoscópica Scoring

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

Determining The Electromyographic Fatigue Threshold Following a Single Visit Exercise Test

Theoretically, the electromyographic (EMG) fatigue threshold is the exercise intensity an individual can maintain indefinitely without the need to recruit more motor units which is associated with an increase in the EMG amplitude. Although different protocols have been used to estimate the EMG fatigue threshold they require multiple visits which are impractical for a clinical setting. Here, we present a protocol for estimating the EMG fatigue threshold for cycle ergometry which requires a single visit. This protocol is simple, convenient, and completed within 15-20 min, therefore, has the potential to be translated into a tool that clinicians can use in exercise prescription.

This protocol describes the electromyographic fatigue threshold which demarcates between nonfatiguing and fatiguing exercise workloads. This information could be used to develop a more individualized training program.

Determinar o limiar de fadiga eletromiográfica Após um teste de esforço única visita

Theoretically, the electromyographic (EMG) fatigue threshold is the exercise intensity an individual can maintain indefinitely without the need to recruit ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

A Rat carótida Balão Injury modelo para testar Therapeutics remodela Anti-vasculares

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Ultrasound Assessment of Endothelial Function: A Technical Guideline of the Flow-mediated Dilation Test

Cardiovascular disease is the primary cause of mortality and a major cause of disability worldwide. The dysfunction of the vascular endothelium is a pathological condition characterized mainly by a disruption in the balance between vasodilator and vasoconstrictor substances and is proposed to play an important role in the development of atherosclerotic cardiovascular disease. Therefore, a precise evaluation of endothelial function in humans represents an important tool that could help better understand the etiology of multiple cardio-centric pathologies.
Over the past twenty-five years, many methodological approaches have been developed to provide an assessment of endothelial function in humans. Introduced in 1989, the FMD test incorporates a forearm occlusion and subsequent reactive hyperemia that promotes nitric oxide production and vasodilation of the brachial artery. The FMD test is now the most widely utilized, non-invasive, ultrasonic assessment of endothelial function in humans and has been associated with future cardiovascular events.
Although the FMD test could have clinical utility, it is a physiological assessment that has inherited several confounding factors that need to be considered. This article describes a standardized protocol for determining FMD including the recommended methodology to help minimize the physiological and technical issues and improve the precision and reproducibility of the assessment.

The flow mediated dilation (FMD) test is the most commonly utilized, non-invasive, ultrasound assessment of endothelial function in humans. Although the FMD test has been related with the prediction of future cardiovascular disease and events, it is a physiological assessment with many inherent confounding factors that need to be considered.

Avaliação ultra-sons da função endotelial: A Orientação Técnica do Teste de dilatação fluxo-mediada

Cardiovascular disease is the primary cause of mortality and a major cause of disability worldwide. The dysfunction of the vascular endothelium is a ...

A Blood-based Test for the Detection of ROS1 and RET Fusion Transcripts from Circulating Ribonucleic Acid Using Digital Polymerase Chain Reaction

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. Robust detection of cRNA recovered from blood represents a solution to a critical unmet need in clinical diagnostics. The test begins with the collection of whole blood into blood collection tubes containing preservatives that stabilize cRNA. Cell-free, exosomal, and platelet-associated RNA is isolated from plasma in this test system. The cRNA is reverse transcribed to complementary DNA (cDNA) and amplified using digital polymerase chain reaction (dPCR). Samples are evaluated for both the target biomarker as well as a control gene. Test validation included limit of detection, accuracy, and robustness studies with analytic samples. The method developed as a result of these studies reproducibly detect multiple fusion variants for ROS1 (C-Ros proto-oncogene 1; 8 variants) and RET (rearranged during transfection proto-oncogene; 8 variants). The sample processing workflow has been optimized so that test results can consistently be generated within 72 hours of sample receipt.

Detection of circulating ribonucleic acid (cRNA) from blood is an unmet need in clinical diagnostics. Here we describe methods that characterize cRNA from non-small cell lung cancer patients using sensitive and specific digital polymerase chain reaction. The tests meet design requirements to detect fusion variants within 72 hours.

Um sangue com base em teste para a detecção de ROS1 e RET transcrições de fusão do ácido ribonucleico, usando a reação em cadeia da polimerase Digital de circulação

We have developed novel methods for the isolation and characterization of tumor-derived circulating ribonucleic acid (cRNA) for blood-based liquid biopsy. ...

Traditional Trail Making Test Modified into Brand-new Assessment Tools: Digital and Walking Trail Making Test

The Trail Making Test (TMT) is a well-accepted tool for evaluating executive function. The standard TMT was invented more than 60 years ago and has been modified into many versions. With the development of digital technologies, TMT is now modified to a digitized version. The present study demonstrated digital TMT (dTMT) performed on a computer, and Walking TMT (WTMT) on the floor. Both revealed more information compared with the traditional version of TMT.

Here, we present a protocol to show how to perform two types of cognitive assessment tools derived from the paper-pencil version of the Trail Making Test.

Teste tradicional de fazer trilhas modificado em novas ferramentas de avaliação: teste digital e de trilha para caminhadas

The Trail Making Test (TMT) is a well-accepted tool for evaluating executive function. The standard TMT was invented more than 60 years ago and has been ...