Name: transurethral instillation procedure in adult male mouse
Uploaded: 2017-11-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 1 s
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Os autores não têm qualquer reconhecimentos.

todos os procedimentos com animais, incluindo o método e a duração da anestesia, bem como os cuidados pós-operatórios, foram discutidos com um veterinário e aprovados pelos cuidados institucionais do Animal e uso Comité (IACUC) na instituição afiliada. Neste manuscrito, todos os procedimentos foram realizados com 8 para camundongos machos de 15 semanas C57BL/6 e o protocolo segue as diretrizes de cuidado animal, aprovadas pelo IACUC da Universidade do Colorado.
 1. preparação da tubulação Nota: para incutir o inóculo, uma agulha anexado para o tubo de polietileno (PE) ( figura 1A) e um de pequeno calibre (&#60; 24 G) angiocatheter pode ser usado ( a Figura 1). O uso de um angiocatheter não exige nenhuma preparação diferente de esterilização com 70% de etanol (EtOH). O inóculo é a substância que é instilado/injetado/depositado no tracto urinário. Isso pode ser uma solução que contém bactérias, vírus ou uma substância química. Isto é preparado antes do tempo e pelo protocolo de pesquisa. Por exemplo, se o estudo visa avaliar os efeitos da Escherichia coli infecção no trato urinário inferior, o pesquisador precisará preparar o inóculo contendo bactérias, que podem ser inoculadas/instilado no trato urinário inferior.
<ol><li>Preparação da agulha anexada à tubagem de PE é simples e consiste no seguinte: escolha o tamanho da tubulação do PE baseada o órgão-alvo e a idade de um animal. Para um animal mais jovem do que 12 semanas, usar tubos de PE-10 (diâmetro externo é de 0,024 polegadas e diâmetro interior é 0,011 polegadas). Tubagem de PE-10 é sugerida para ser aplicáveis para (1) a semeadura primária de inóculo na próstata anterior (AP) e vesículas seminais (SV), ou (2) a semeadura primária de inóculo na bexiga de um animal mais jovem do que 12 semanas de idade. Tubos de PE com um diâmetro maior do tamanho 50 PE (diâmetro exterior até 0,038 polegadas e diâmetro até 0,023 polegadas interno) pode ser usado para a semeadura primária de inóculo na bexiga dos animais mais velhos até.</li>
	<li>Cortar aproximadamente 2,5 polegadas de tubo PE.</li>
	<li>Selecione uma agulha que vai caber o diâmetro PE selecionado para ser usado. Uma agulha 27G pode caber no lúmen do tubo de PE-10, e uma agulha 22g se encaixa o lúmen do tubo de PE-50.
	<ol><li>Prepare a agulha antes da inserção para o tubo de PE, esfregando a ponta afiada da agulha sobre uma pedra de óleo comercialmente disponíveis ( figura 1A -B) para torná-lo maçante ou use um blunt comercialmente disponível agulha.</li>
	</ol></li> <li>Introduzir a agulha ( Figura 1) o lúmen do tubo de PE. Evite danos para o lúmen ou a entrada em um falso lúmen, assegurando o agulha permanece no centro do lúmen. ( Figura 1 -E). Se os tubos de PE é danificado durante a inserção da agulha maçante, corte a extremidade danificada e reiniciar o processo.</li>
	<li>Coloque os tubos de PE conectados a agulha em 70% de EtOH para esterilização até seu uso para o procedimento. Resplendor a 70% EtOH através do tubo da agulha-PE para esterilizar o lúmen e assegurar lá não é nenhum escapamento da tubagem PE de danos durante o processo de inserção da agulha. Se houver vazamento, descartado o tubo de agulha-PE. 
	Nota: A ponta do tubo de PE precisa ser suave antes da cateterização. Para evitar problemas com a introdução do tubo de PE na uretra, recomenda-se cortar a ponta do tubo de PE imediatamente antes da cateterização ( Figura 1F). O comprimento mínimo sugerido da tubulação do PE é de 1,5 polegadas, que inclui a parte ao redor da agulha.</li>
</ol> 2. Procedimento de cateterização <ol><li>antes da indução da anestesia, esvaziar a bexiga de mouse.
	<ol><li>Aplique uma pressão suave e massagem no abdômen inferior do mouse. Estas manobras normalmente levam a micção espontânea. A bexiga cheia pode resultar na diluição ou vazamento imediato qualquer inóculo inculcado. 
		Nota: Uma opção adicional para garantir uma bexiga vazia em um rato é privar o animal de água pelo menos 1 hora antes do início do procedimento transuretral instilação. Privação de água deve ser aprovada pela instituição como parte do protocolo animal.</li>
	</ol></li> <li>Usar uma máquina de anestesia com isoflurano fluxo (2%) para induzir anestesia.
	<ol><li>Uma vez que o animal é anestesiado, coloque-o sobre um cobertor quente e cubra-o com uma almofada azul com seu nariz dentro de um cone de nariz para a manutenção da anestesia contínua.</li>
		<li>Confirmar que o animal está sob anestesia, verificando o reflexo pedal (pitada de dedo do pé).</li>
	</ol></li> <li>Uma vez que o reflexo do pedal está ausente, proceder de retrair o prepúcio.
	<ol><li>Imprensa região pubiana com o polegar e o dedo indicador de uma mão ( figuras 2A e 2B) e puxe para fora o pénis de glândulas usando o dedo polegar e indicador do outro (de mão a Figura 2). Quando isso é feito corretamente, o prepúcio, glande e corpo do pênis permanecem expostas. ( Figura 2D e Figura 2F). Não use pinça para retirar o pênis de glândulas como isto irá resultar em danos ao tecido.</li>
	</ol></li> <li>Lubrifique a ponta do cateter e a glande com lubrificante cirúrgico estéril antes da inserção do cateter. Isto irá facilitar a inserção do tubo de PE. 
	Nota: Embaladas individualmente praças de lubrificante cirúrgico, em vez de um tubo grande, são recomendadas para cada uso manter condições estéreis.</li>
	<li>Pressione cuidadosamente a ponta do pênis usando fórceps maçante e apertar suavemente a glande para causar o meato uretral abrir.</li>
	<li>Segurar a seringa com a agulha PE-tubulação ou com conexão PE tubulação própria e inserir os tubos de PE através do meato uretral. 
	Nota: Um aperto de tripé da seringa com agulha-anexado PE-tubulação ou o PE tubos si mesma usando o polegar, dedos indicador e médio é recomendado para estabilidade. 
	Nota: O caminho do cateterismo deve ser curvado devido a curvatura natural da uretra rodeada pela glande e corpo do pênis no rato adulto masculino, como mostrado na Figura 3A e Figura 3B. A tubagem de PE catheterized pode encontrar resistência durante o cateterismo, portanto, é recomendável ajustar o ângulo inclinando o tubo de cima ou para baixo para ajuda avanço da tubulação do PE na sequência o órgão-alvo. Se necessário, os tubos de PE podem ser girado ligeiramente para ajudar a manobrar através de várias curvas da uretra. Quando há muita resistência, o tubo deve ser puxado para trás e em seguida, avançar novamente com pressão mínima. Puxando o PE-tubo para fora completamente e usar mais lubrificação pode ser útil.</li>
	<li>Executar a instilação do inóculo, uma vez que o PE-tubo alcançou o órgão desejado, empurrando o êmbolo de agulha para incutir o volume desejado do inóculo (volume de 5-200 µ l é sugerido).
	<ol><li>Para instilação do inóculo para a bexiga urinária, avançar o tubo de PE até aproximadamente 0,75 polegadas de tubo de PE está inserida ( Figura 3A). 
		Nota: para instilação do inóculo no AP e SV, geralmente, thtubulação e inserido encontra resistência quando atingir o ponto de abertura para a próstata anterior. Ajustando o ângulo inclinando o tubo de cima ou para baixo, os tubos de PE vão avançar ainda mais até que aproximadamente 1 polegada de tubo PE foi inserido ( Figura 3B).</li>
	</ol></li></ol> 3. Na Vivo Imagem do trato urinário inferior e rins Nota: O propósito da imagem latente na vivo neste manuscrito é: (1) para confirmar a localização espacial do inóculo; e (2) avaliar a incidência de refluxo do inóculo para o rins. Para este efeito, pode ser usado qualquer um rato anestesiado ou sacrificado.
<ol><li>Para visualizar o trato urinário inferior de um rato adulto masculino, realizar laparotomia de linha média abdominal inferior para expor a bexiga, próstata e vesículas seminais.
	<ol><li>Faça uma incisão na pele na linha média do osso púbico até um pouco abaixo do processo xifoide, usando tesouras.</li>
		<li>Elevar a pele de tecido celular subcutâneo.</li>
		<li>Identificar o avascular linea alba localizado na linha média e incise isto para entrar na cavidade peritoneal onde todos os órgãos estão localizados.</li>
		<li>Confirmar a localização espacial pela visualização de corante azul ou outro agente de rastreamento adequado.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Lee, S., Yang, G., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+urinary+frequency+in+adult+mice.">Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice.</a> PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).</li><li>Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+fibrosis+in+a+mouse+model+of+chronic+bacterial+infection.">Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection.</a> PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).</li><li>Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+bacterial+infection+and+inflammation+incite+reactive+hyperplasia+in+a+mouse+model+of+chronic+prostatitis.">Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis.</a> Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).</li><li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate.">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+inflammation+of+the+lower+urinary+tract.">Models of inflammation of the lower urinary tract.</a> Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).</li><li>Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transurethral+induction+of+mouse+urinary+tract+infection.">Transurethral induction of mouse urinary tract infection.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cystitis+is+accompanied+by+increased+peripheral+thermal+sensitivity+in+mice.">Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice.</a> J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).</li><li>Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+and+host+responses+to+Escherichia+coli+urinary+tract+infection+in+genetically+distinct+mouse+strains.">Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains.</a> Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).</li><li>Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+resiniferatoxin+decreases+spinal+c-fos+expression+and+increases+bladder+volume+to+reflex+micturition+in+rats+with+chronic+inflamed+urinary+bladders.">Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders.</a> BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).</li><li>Cayan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Botulinum+toxin+type+A+may+improve+bladder+function+in+a+rat+chemical+cystitis+model.">Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model.</a> Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).</li><li>Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+mouse+bladder+inflammatory+response+to+E.+coli+lipopolysaccharide.">Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide.</a> Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS-sensory+peptide+communication+in+experimental+cystitis.">LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).</li><li>Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+invasion+augments+epithelial+cytokine+responses+to+Escherichia+coli+through+a+lipopolysaccharide-dependent+mechanism.">Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism.</a> J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discriminators+of+mouse+bladder+response+to+intravesical+Bacillus+Calmette-Guerin+(BCG).">Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG).</a> BMC Immunol. 8, 6 (2007).</li><li>Bjorling, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+acrolein-induced+cystitis+in+mice.">Acute acrolein-induced cystitis in mice.</a> BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).</li><li>Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+bladder+distention+evoked+visceromotor+responses+as+a+model+for+bladder+pain+in+mice.">Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice.</a> J Vis Exp. (86), (2014).</li></ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Este manuscrito descreve detalhadamente um método de instilação transuretral no rato adulto masculino. Diferencial área de semeadura primária pode ser alcançada por meio de tubos de PE de diâmetros diferentes. PE-50 é recomendado para alcançar com êxito o lúmen da bexiga urinária, enquanto um diâmetro superior que PE-10 é usado para alcançar o AP e SV (Figura 3A-B). A escolha do tamanho do órgão-alvo para inoculação e tubo de PE, além de outros fatores, tais como o volume de inóculo inculcado, também desempenham um papel na localização final e distribuição da solução. Nossos experimentos demonstram que instilação transuretral de 100 µ l de azul tingir usando qualquer PE-10 ou PE-50 não aciona o refluxo instantâneo da tintura para os rins. No entanto, o refluxo da urina para os rins pode acontecer durante o período pós instilação e pode resultar em infecção renal, como foi mostrado anteriormente em ratos fêmeas adultas8. Portanto, a avaliação histológica dos rins é altamente recomendada para confirmar a ausência de contaminação indirecta dos rins de instillations transuretral.
Existem várias etapas-chave importantes para realizar uma bem sucedida transuretral instilação do inóculo. Primeiro, a tubulação do PE deve ser de comprimento suficiente — pelo menos de 2,5 polegadas. Isto permitiria ajustes adicionais do comprimento do tubo, se necessário, durante o processo de preparação da tubulação, ou após o processo de instilação transuretral. Várias tentativas e falhas durante a etapa 9 do presente protocolo podem causar um bloqueio do fim do tubo de PE inserido por fluidos corporais. Nesta situação, a ponta do tubo de PE deve ser cortada para ter uma dica clara para as tentativas subsequentes. Uma vez cortada a ponta do tubo de PE, o lubrificante cirúrgico deve ser reaplicado. Em segundo lugar, uma aderência adequada da seringa ou PE tubulação própria aumenta a taxa de sucesso. Em terceiro lugar, deve ser inserido um comprimento suficiente da tubulação do PE e do prepúcio, glande e corpo do pênis devem ser rigidamente alinhados sem aperto de mão durante o processo de cateterismo. Caso contrário, o refluxo do inóculo pode acontecer quando o êmbolo da seringa é empurrado.
Melhores resultados para o procedimento transuretral instilação podem ser resultado de prática acompanhada, evitando danos ao órgão uretra e alvo durante o procedimento. Resultados de desempenho podem ser validados usando corantes coloridos ou corantes fluorescentes como o procedimento para confirmar a localização primária do inóculo e sinais de refluxo para os rins.

A abordagem de instilação transuretral tem sido usada em estudos anteriores como um dos métodos para criar modelos de roedores de bexiga patologias1,2,3,4 e pode ser usada para avaliar a eficácia dos tratamentos entregues localmente em camundongos. Embora modelos animais totalmente não podem recapitular a patologias humanas, identificação dos mecanismos subjacentes em estudos com animais fornece um melhor entendimento dos transtornos LUT humanos tais como a síndrome de dor cistite intersticial/bexiga, neurogênica cistite, doença auto-imune e cistite inflamação prostática5.
O procedimento de instilação transuretral realizado em um rato macho adulto é tecnicamente mais difíceis de instilação intravesical em um rato adulto feminino6. Anatomia da uretra masculina junto com seu pequeno diâmetro naturalmente curvada dificultar tecnicamente realizar a inserção de um cateter transuretral. Portanto, instruções pormenorizadas para a indução transuretral de rato de infecção do trato urinário6 e LUT inflamação7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 via cateter inserido na bexiga foram descritas anteriormente para ratos fêmeas somente. Este manuscrito visa fornecer uma descrição passo a passo da técnica para transuretral instilação de substâncias nos ratos masculinos, incluindo os clipes de vídeo, imagens e ilustrações. Instilação transuretral procedimentos em um rato adulto masculino podem ser realizados com variável inocula semelhante à anteriormente descrita no rato fêmea7 e fundiu-se com técnicas adicionais tais como gravações de Eletromiografia de respostas visceromotor (VMR)16.

<table><tbody><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10</td><td>BD Medical</td><td>63019-004</td><td></td></tr><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50</td><td>BD Medical</td><td>63019-048</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath</td><td>BD Medical</td><td>311411</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (EtOH)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>205155</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>305129</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS27</td><td></td></tr><tr><td>6&quot; Long x 2&quot; Wide x 1&quot; Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone</td><td>Norton</td><td>40204034</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac</td><td>Surgilube</td><td>281020543</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fluriso</td><td>13985-528-60</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Forceps, Curved</td><td>vwr</td><td>82027-392</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 ml Syringe</td><td>BD Medical</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer</td><td>Alfa Aesar</td><td>J61007</td><td></td></tr><tr><td>8~12 weeks old male C57B/6 Mice</td><td>Jackson Lab</td><td>#000664</td><td></td></tr></tbody></table>

transurethral instillation procedure in adult male mouse

Transuretral instilação pode ser usada para entregar soluções diferentes com ingredientes ativos (por exemplo, drogas, produtos químicos, bactérias e vírus) localmente em bexiga urinária para induzir a modelos animais de patologias de bexiga ou avaliar o eficácia dos tratamentos intravesicais. Mais roedores modelos de patologias inferiores do trato urinário (LUT) são induzidos em ratos fêmeas devido à facilidade de instilação intravesical das substâncias através da uretra feminina. No entanto, devido a diferenças anatômicas entre o feminino e masculino LUT, transuretral instilação em um rato masculino foi considerada um procedimento muito desafiador, e não foi previamente descrito. Neste manuscrito, nós fornecemos uma descrição detalhada de como preparar tubos de polietileno (PE) para posterior inserção na uretra de um rato masculino. Além disso, discutimos os tipos ideais de tubos de PE para ser usada dependendo do local desejado da inoculação. Além disso, descrevemos como preparar um animal para uma bem sucedida instilação transuretral evitar danos à uretra e assegurar a entrega da solução para o local desejado para o ponto por ponto. O procedimento é iniciado por retrair o prepúcio e glande para expor a abertura do meato uretral. Em seguida, a glande são agarrados pela contundente fórceps não-esmagamento para estabilizar o pênis e os tubos de PE. A tubagem de PE primeiro é inserida no meato uretral paralelo ao organismo animal e, em seguida, seu ângulo é ajustado pela inclinação do cateter para manobrá-lo para acompanhar a curvatura natural da uretra. Esta técnica pode ser usada para modelos murino induzidos de patologias de bexiga e/ou avaliar a eficácia dos tratamentos intravesical em ratos masculinos.

Instilação transuretral de corante azul através de tubos de PE 50 resultou em instilação do corante para a bexiga urinária (Figura 4A) e através de tubos de PE 10 na colorização da SV e AP (Figura 4B), respectivamente. Para avaliar se a instilação transuretral realizada provoca um refluxo instantâneo do inóculo para os rins ou não, o rim e ureter foram observadas seguido por instilação de 100 µ l do corante azul e tintura fluorescente (Figura 4A-B). Nenhum do procedimento instilação usando dois diferentes tamanhos de tubos de PE e dois corantes diferentes resultou em colorização dos ureteres ou rins.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56663/56663fig1.jpg"> 
Figura 1: Preparação para inserção em polietileno (PE) tubo 50 de agulha 22 G. A agulha afiada (A) é moída contra uma pedra de óleo (B) para aliviar as bordas afiadas (C). Uma vez que a agulha é maçante, a agulha é inserida no lúmen da tubulação do PE (D) e avançada sobre a agulha com a pinça fina (E). A tubulação é, em seguida, corte a cerca de 1,5 polegadas (F). 24G angiocath (G) também pode ser usado. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56663/56663fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56663/56663fig2.jpg"> 
Figura 2: O prepúcio masculino do mouse cobre a glande e meato uretral (A), com leve tração do prepúcio, a glande pode ser exposto (B), e com ligeira tração da glande (C), o prepúcio inteiro pode ser retraído (D), assim permitindo fácil acesso para o meato uretral e uretra. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56663/56663fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56663/56663fig3.jpg"> 
Figura 3: Ilustrações de órgãos de trato urinário inferiores; bexiga urinária, próstata e vesícula seminal (SV), mostrando a instilação transuretral usando tubos PE 50 (A) e tubos de PE 10 (B) para semeadura primária da bexiga e próstata SV/anterior, respectivamente. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56663/56663fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56663/56663fig4.jpg"> 
Figura 4: Imagens dos órgãos do trato urinário superior e inferior; rins, bexiga, próstata e vesícula seminal (SV), após a instilação transuretral usando tubos PE 50 (A) e tubos de PE 10 (B). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56663/56663fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Instilação transuretral é um procedimento desafiador e não tem sido bem descrita na literatura. O objetivo deste manuscrito é descrever uma técnica transuretral inserção de um cateter para entrega intravesical de líquidos com substâncias activas para a bexiga urinária e/ou próstata em ratos machos adultos.

Procedimento de instilação transuretral no rato adulto masculino

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.5K visualizações.  University of Colorado School of Medicine. Instilação transuretral é um procedimento desafiador e não tem sido bem descrita na literatura. O objetivo deste manuscrito é descrever uma técnica transuretral inserção de um cateter para entrega intravesical de líquidos com substâncias activas para a bexiga urinária e/ou próstata em ratos machos adultos.

Vídeo: Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on Luria-Bertani (LB) agar at 37&deg;C in ambient air. UPEC strains grow as yellowish-white translucent colonies on LB agar. Following confirmation of appropriate colony morphology, single colonies are then picked to be cultured in broth. LB broth can be used for most uropathogenic bacterial strains. Two serial, overnight LB broth cultures can be employed to enhance expression of type I pili, a well-defined virulence factor for uropathogenic bacteria. Broth cultures are diluted to the desired concentration in phosphate buffered saline (PBS). Eight to 12 week old female mice are placed under isoflurane anesthesia and transurethrally inoculated with bacteria using polyethylene tubing-covered 30 gauge syringes. Typical inocula, which must be empirically determined for each bacterial/mouse strain combination, are 106 to 108 cfu per mouse in 10 to 50 microliters of PBS. After the desired infection period (one day to several weeks), urine samples and the bladder and both kidneys are harvested. Each organ is minced, placed in PBS, and homogenized in a Blue Bullet homogenizer. Urine and tissue homogenates are serially diluted in PBS and cultured on appropriate agar. The following day, colony forming units are counted.

This video will demonstrate methods to transurethrally induce mouse urinary tract infections and quantify the extent of resulting infections.

Indução transuretral de rato infecção urinária

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Imunologia e Infecção

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

Injeção do mouse parede da bexiga

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Medicina

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

Infecção do trato urinário em um modelo Animal de pequeno porte: transuretral cateterismo de ratos machos e fêmeas

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

Longitudinal Follow-Up of Urinary Tract Infections and Their Treatment in Mice using Bioluminescence Imaging

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, due to increasing microbial resistance, the efficacy of the most used antibiotics has declined. To find alternative treatment options, there is a great need for a better understanding of the UTI pathogenesis and the mechanisms that determine UTI susceptibility. In order to investigate this in an animal model, a reproducible, non-invasive assay to study the course of UTI is indispensable.
For years, the gold standard for the enumeration of bacterial load has been the determination of Colony Forming Units (CFU) for a particular sample volume. This technique requires post-mortem organ homogenates and serial dilutions, limiting data output and reproducibility. As an alternative, bioluminescence imaging (BLI) is gaining popularity to determine the bacterial load. Labeling pathogens with a lux operon allow for the sensitive detection and quantification in a non-invasive manner, thereby enabling longitudinal follow-up. So far, the adoption of BLI in UTI research remains limited.
This manuscript describes the practical implementation of BLI in a mouse urinary tract infection model. Here, a step-by-step guide for culturing bacteria, intravesical instillation and imaging is provided. The in vivo correlation with CFU is examined and a proof-of-concept is provided by comparing the bacterial load of untreated infected animals with antibiotic-treated animals. Furthermore, the advantages, limitations, and considerations specific to the implementation of BLI in an in vivo UTI model are discussed. The implementation of BLI in the UTI research field will greatly facilitate research on the pathogenesis of UTI and the discovery of new ways to prevent and treat UTI.

This manuscript describes the intravesical administration of uropathogenic bacteria with a lux operon to induce a urinary tract infection in mice and subsequent longitudinal in vivo analysis of the bacterial load using bioluminescence imaging.

Acompanhamento longitudinal de infecções do trato urinário e seu tratamento em camundongos usando bioluminescência imagem

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

Ultrassonografia do trato urinário masculino adulto para testes funcionais urinários

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms of human diseases such as cancer. Transgenic and conditional knockout mice have been frequently used for gene overexpression or ablation in specific tissues or cell types in vivo. However, generating germline mouse models can be time-consuming and costly. Recent advancements in gene editing technologies and the feasibility of delivering DNA plasmids by viral infection have enabled rapid generation of non-germline autochthonous mouse cancer models for several organs. The bladder is an organ that has been difficult for viral vectors to access, due to the presence of a glycosaminoglycan layer covering the urothelium. Here, we describe a novel method developed in lab for efficient delivery of DNA plasmids into the mouse bladder urothelium in vivo. Through intravesical instillation of pCAG-GFP DNA plasmid and electroporation of surgically exposed bladder, we show that the DNA plasmid can be delivered specifically into the bladder urothelial cells for transient expression. Our method provides a fast and convenient way for overexpression and knockdown of genes in the mouse bladder, and can be applied to building GEMMs of bladder cancer and other urological diseases.

We describe a novel method for the delivery of DNA plasmid into the urothelial cells of mouse bladder in vivo through urethra catheterization and electroporation. It offers a fast and convenient way for generating autochthonous mouse models of bladder diseases.

Novo método de entrega de DNA do plasmídeo para Mouse bexiga Urotélio por eletroporação

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms ...

Biologia

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

Source: Tham, S. M. et al. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/video/55078" target="_blank">A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

Modelagem de tumor ortotópico de bexiga em modelo de camundongo: um procedimento para administração intravesical de células cancerígenas na bexiga murina

Source: Tham, S. M. et al. A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Pesquisa do câncer

Câncer do trato urinário

Estudos com modelo animal

Urine Depletion and Bladder Rinsing in Mouse Model: A Catheter-based Procedure to Empty and Wash Murine Urinary Bladder

Source: Yu, C. et al. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/video/57649" target="_blank">Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe a catheter-based procedure to empty and rinse the urinary bladder of a mouse model. The prepped mouse can then be used for further experimental procedures.

Depleção de urina e enxágue da bexiga em modelo de camundongo: um procedimento baseado em cateter para esvaziar e lavar a bexiga urinária murina

Source: Yu, C. et al. Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe ...

Transurethral Catheterization and Bacterial Inoculation to Generate a Urinary Tract Infection Model in Male Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A., et al. <a href="https://app-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

Cateterismo transuretral e inoculação bacteriana para gerar um modelo de infecção do trato urinário em camundongos machos

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

Imunologia

Imunopatologia

Modelos de interação hospedeiro-patógeno

Establishment of a Urinary Tract Infection Model in Female Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A. et al., <a href="https://app-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.