Os autores gostariam de reconhecer o Departamento de Patologia, Universidade do Arizona, pelo apoio financeiro. O projeto é parcialmente apoiado pelo fundo de doação Mark e Jane Gibson para a WZ.

Foi recebida uma aprovação do Conselho de Revisão Institucional da Universidade do Arizona para realizar este estudo. Formulários informados de consentimento do paciente foram obtidos. 1. Seleção de Paciente NOTA: Uma aprovação do Conselho de Revisão Institucional foi obtida da Universidade do Arizona. Um total de 38 pacientes foram recrutados. A idade dos pacientes variou de 32 a 86 anos com uma média de 55 anos, dos quais 26 pacientes pós-menopausa e 12 pacientes pré-menopausa. <ol><li> Obtenha o consentimento informado de cada paciente. </li></ol> 2. Processo de coleção de células de trompa de falópio NOTA: Os pacientes incluídos no presente estudo foram todos agendados para histerectomia total e salpingo-ooforectomia bilateral para redução de risco profilático ou malignidade. Os detalhes da cirurgia foram desconhecidos para o patologista que realizou o estudo de citologia. <ol><li> Imediatamente após o surgiExcisão térmica, examine cuidadosamente a amostra de tecido fresco incluindo o útero, ovários bilaterais e trompas de falópio bilaterais para identificar a trompa de Falópio bilateral. </li><li> Recolher e colocar as células do tubo de Falópio no frasco de solução conservante (ver Tabela de Materiais) dentro de 30 minutos de apertar o suprimento de sangue; O conservante recomendado é uma solução de conservante tamponada a base de metanol. NOTA: use uma escova de toque suave para a coleção de células tubulares (próximas etapas). Com exceção de casos raros em que a trompa de Falópio é submetida à separação do útero, a inserção de uma cabeça de escova para coletar células da fimbria tubária ocorre tipicamente quando a trompa de Falópio está presa ao útero. <ol><li> Com a ajuda de uma pequena pinça, insira a escova (ver Tabela de Materiais ) no lúmen da trompa de Falópio através da extremidade das fimbrias. Gire lentamente no sentido horário e mova a escova para a frente através da porção infundibular da quedaTubo opiano, depois a ampola até chegar ao istmo. </li><li> Gire lentamente e inverta a escova no sentido anti-horário para puxar a escova. Certifique-se de que a velocidade máxima da escova dentro do lúmen seja mais lenta do que 1 cm / s. </li><li> Enxaguar a escova na solução de conservação (em um frasco para injectáveis) girando e girando a escova 10 vezes na solução. </li><li> Aperte a tampa do frasco. </li><li> Registre a informação do paciente e a lateralidade do espécime. </li><li> Armazene o frasco em uma geladeira a 4 ° C (até 6 meses). </li></ol></li></ol> 3. Preparação da corrediça de citologia tubária <ol><li> Coloque o frasco de amostra no processador automatizado para a preparação do slide. NOTA: Usamos o processador automatizado para preparação de slides. As seguintes etapas são realizadas automaticamente após o frasco de amostra ser colocado no processador: (i) As células e detritos são separados e dispersos através da rotação do filtro de teste dentro da amostraFrasco para injectáveis. (Ii) As células tubáricas são coletadas da superfície exterior do filtro por um vácuo suave. (Iii) O filtro é invertido e pressionado contra o slide para permitir que as células adiram à área circular dentro do slide. (Iv) O slide é ainda fixado em um banho fixador celular e pronto para coloração e análise citológica. Infelizmente, não há nenhum método manual alternativo, que pode produzir resultados com uma qualidade similar. </li></ol> 4. Protocolo de coloração de Papanicolaou modificado <ol><li> Mancha as lâminas feitas a partir do passo 3.1, executando o procedimento de manchas automatizado não-gyn, conforme ilustrado na Tabela 1 . NOTA: O método de coloração representa uma modificação da técnica de coloração de Papanicolaou que usamos rotineiramente para espécimes não ginecológicos. Usamos um processador de tecido automatizado para manchar alguns slides. Escolhemos o procedimento de coloração não-Gyn sobre o procedimento de coloração de Gyn neste estudo. A Eosina utilizada é EA-65, em vez da EA-50 utilizada paraEspécimes ginecológicos (amostra de Papanicolau). Além disso, o OG-6 no procedimento de coloração de Gyn, que é principalmente para coloração de células escamosas, não está incluído no procedimento de coloração, uma vez que não se espera que as células escamosas sejam vistas neste estudo. EA65 (Eosin Azure) é uma solução de contra-mancha composta por 3 corantes: Eosina Y, Fast FCF verde e Bismarck Brown Y. O procedimento está ilustrado na Tabela 1 . </li><li> Execute um procedimento rápido manual de manchas de Papa da seguinte maneira. <ol><li> Dip a corrediça feita no passo 3.1 em etanol a 95%, 10 vezes, com cada mergulho tendo aproximadamente 1 s. </li><li> Dip o slide em H 2 O, 10 vezes, com cada mergulho tendo cerca de 1 s. </li><li> Emerge o slide na hematoxilina por 10 a 60 s. </li><li> Dip o slide em H 2 O, 10 vezes, com cada mergulho tendo cerca de 1 s. </li><li> Mergulhe o deslizamento em etanol a 95%, 10 vezes, com cada mergulho tomando cerca de 1 s. </li><li> Emerge o slide na EA65 por 1 a 3 min. </li><li> Dip the slide intO H 2 O, 10 vezes, com cada mergulho tendo cerca de 1 s. </li><li> Mergulhe o deslizamento em etanol a 95%, 10 vezes, com cada mergulho tomando cerca de 1 s. </li><li> Dip o slide no xileno até o slide ficar claro. NOTA: Este é um procedimento de coloração de Papanicolaou modificado. Este método é usado como um método de mancha mais rápido para casos com tempo ou espaço limitado, como aspiração com agulha fina no local e espécimes STAT. Este procedimento fornece coloração de qualidade comparável como o procedimento automatizado de manchas não-Gyn. O procedimento está ilustrado na Tabela 2 . </li></ol></li></ol> 5. Spin Cells em slides NOTA: Três lâminas de cytospin são feitas para cada espécime. Um slide é H &amp; E corado para a comparação morfológica com o slide de citologia. Foram feitas duas lâminas não mantidas para o futuro estudo de coloração com IHC. As etapas detalhadas desta seção não são o foco deste artigo; Portanto, não vamos discuti-los em d prolongadoEtails. <ol><li> Prepare uma citocentrífuga com uma lâmina rotulada, um funil de amostra e um filtro para cada amostra a ser examinada. </li><li> Concentre as células por centrifugação durante 5 min a 200 x g. </li><li> Remova cerca de metade do sobrenadante e depois volte a suspender as células por pipetagem suave. </li><li> Adicione 200 μL de cada suspensão celular a um embutimento de amostra. </li><li> Girar a 250 xg por 5 min. Retire cuidadosamente o (s) slide (s) da citocentrífuga e transfira-os para 95% de etanol para fixação. </li><li> Ar seco antes da coloração e para armazenamento a longo prazo. NOTA: Dependendo da densidade celular nos slides finais, o passo 5.2 e o passo 5.3 podem ser ignorados ou ajustados. Neste estudo, exigimos pelo menos 2 clusters de células presentes por visão de alta potência para densidade celular adequada. </li></ol> 6. Seção e exame extensivo do protocolo Fim de Fim de Função (SEE-FIM) <ol><li> Corrija todo o espécime (incluindo útero, trompas de falópio e ovários)Em 10% de formalina antes da recarga para minimizar a esfoliação. </li><li> Descarte suave e cuidadosamente as trompas de Falópio do útero no istmo usando pinças pequenas e uma tesoura. Se a adesão estiver presente, dissecar cuidadosamente a extremidade fimada da superfície do ovário usando pinças pequenas e uma tesoura; Essas etapas são cruciais para minimizar a contaminação cruzada do tumor entre o ovário e o tubo de Falópio devido à sua proximidade íntima. </li><li> Ampute o segmento de infundíbulo e fimbriae (o distal 1,0 - 2,0 cm de trompa de Falópio) do resto da amostra. </li><li> Corte o infundíbulo e as fimbrias longitudinalmente a intervalos de 2 mm. Submeta todas as seções em toto para exame histológico. </li><li> Corte o istmo e a ampola em intervalos de 2 a 3 mm e envie completamente. </li></ol>

<ol>
	<li>Carlson, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serous+tubal+intraepithelial+carcinoma:+its+potential+role+in+primary+peritoneal+serous+carcinoma+and+serous+cancer+prevention.">Serous tubal intraepithelial carcinoma: its potential role in primary peritoneal serous carcinoma and serous cancer prevention.</a> J Clin Oncol. 26 (25), 4160-4165 (2008).</li><li>Kurman, R. J., Shih Ie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+pathogenesis+of+epithelial+ovarian+cancer:+a+proposed+unifying+theory.">The origin and pathogenesis of epithelial ovarian cancer: a proposed unifying theory.</a> Am J Surg Pathol. 34 (3), 433-443 (2010).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+candidate+precursor+to+serous+carcinoma+that+originates+in+the+distal+fallopian+tube.">A candidate precursor to serous carcinoma that originates in the distal fallopian tube.</a> J Pathol. 211 (1), 26-35 (2007).</li><li>Li, J., Fadare, O., Xiang, L., Kong, B., Zheng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+serous+carcinoma:+recent+concepts+on+its+origin+and+carcinogenesis.">Ovarian serous carcinoma: recent concepts on its origin and carcinogenesis.</a> J Hematol Oncol. 5, 8 (2012).</li><li>Przybycin, C. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysplastic+changes+in+prophylactically+removed+Fallopian+tubes+of+women+predisposed+to+developing+ovarian+cancer.">Dysplastic changes in prophylactically removed Fallopian tubes of women predisposed to developing ovarian cancer.</a> J Pathol. 195 (4), 451-456 (2001).</li><li>Crum, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distal+fallopian+tube:+a+new+model+for+pelvic+serous+carcinogenesis.">The distal fallopian tube: a new model for pelvic serous carcinogenesis.</a> Curr Opin Obstet Gynecol. 19 (1), 3-9 (2007).</li><li>Jarboe, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubal+and+ovarian+pathways+to+pelvic+epithelial+cancer:+a+pathological+perspective.">Tubal and ovarian pathways to pelvic epithelial cancer: a pathological perspective.</a> Histopathology. 53 (2), 127-138 (2008).</li><li>Menon, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+screening+has+no+effect+on+disease-specific+mortality.">Ovarian cancer screening has no effect on disease-specific mortality.</a> Evid Based Med. 17 (2), 47-48 (2012).</li><li>Buys, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+screening+on+ovarian+cancer+mortality:+the+Prostate,+Lung,+Colorectal+and+Ovarian+(PLCO)+Cancer+Screening+Randomized+Controlled+Trial.">Effect of screening on ovarian cancer mortality: the Prostate, Lung, Colorectal and Ovarian (PLCO) Cancer Screening Randomized Controlled Trial.</a> JAMA. 305 (22), 2295-2303 (2011).</li><li>Otsuka, I., Kameda, S., Hoshi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+of+ovarian+and+fallopian+tube+cancer+by+examination+of+cytological+samples+from+the+endometrial+cavity.">Early detection of ovarian and fallopian tube cancer by examination of cytological samples from the endometrial cavity.</a> Br J Cancer. 109 (3), 603-609 (2013).</li><li>Dhanani, M., Nassar, A., Dinh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+of+Fallopian+Tube+Cytology+Sampling+to+Develop+a+Model+for+Future+Peritoneal+and+Ovarian+Cancer+Screening.">Classification of Fallopian Tube Cytology Sampling to Develop a Model for Future Peritoneal and Ovarian Cancer Screening.</a> J Am Soc Cytopathol. 3 (5), S35-S36 (2014).</li><li>Rodriguez, E. F., Lum, D., Guido, R., Austin, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic+findings+in+experimental+in+vivo+fallopian+tube+brush+specimens.">Cytologic findings in experimental in vivo fallopian tube brush specimens.</a> Acta Cytol. 57 (6), 611-618 (2013).</li><li>Chen, H., Klein, R., Arnold, S., Chambers, S., Zheng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytologic+studies+of+the+fallopian+tube+in+patients+undergoing+salpingo-oophorectomy.">Cytologic studies of the fallopian tube in patients undergoing salpingo-oophorectomy.</a> Cancer Cell Int. 16, 78 (2016).</li></ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

A salpingectomia bilateral profilática ou a salopingo-ooforectomia demonstraram diminuir o risco de desenvolver HGSC em populações de alto risco, como mulheres com mutações genéticas de BRCA e história de câncer familiar forte. No entanto, a esterilidade e a menopausa cirúrgica causada pela cirurgia são sérias conseqüências e fazem uma decisão difícil, especialmente para mulheres em idade fértil. O estudo anterior mostrou excelente correlação entre citologia tubária e histologia 17 . Acreditamos que a citologia tubária em células de trompas de Falópio coletadas laparoscopicamente tem grande potencial para se tornar uma ferramenta prática e minimamente invasiva para detecção precoce de câncer. Os passos mais críticos para a coleta bem sucedida de células de trompas de Falópio são: 1) O tempo entre o aperto do suprimento de sangue e a coleta de células; E 2) Manejar suave e correta da escova de toque suave. O tempo (dentro de 30 minutEs) entre aperto e coleta de células é crucial para uma boa preservação da morfologia e detalhes nucleares das células coletadas. A comunicação efetiva entre os patologistas e os cirurgiões assegura que o espécime seja entregue ao local coletor dentro desse período. A grande maioria dos casos incluídos no estudo foram realizados na sala de seção congelada. Para coletar células tubáricas com êxito, a pessoa que realiza a coleção deve tentar o melhor possível para evitar que o pincel toque a superfície serosa do ovário devido à implicação da parada se o caso estiver maligno. Algum tempo, isso pode ser difícil devido à proximidade dos dois órgãos envolvidos e à complexidade da anatomia do espécime. A separação das trompas de Falópio de todo o espécime antes da cobrança pode ser justificada. A escova de toque suave utilizada neste estudo pode coletar um grande número de células que podem ser facilmente transferidas para lâminas ou um frasco para solução conservante,E tem uma ponta de toque suave projetada para minimizar o trauma no canal. Além disso, toda a manobra precisa ser lenta e gentil para evitar perturbações severas das estruturas vilões da mucosa tubária. Para alguns casos, pode ser difícil obter a escova passar toda a trompa de Falópio devido a obstrução. No entanto, é importante tentar o melhor possível para coletar células da fimbria e da porção infundibular, uma vez que acredita-se que a maioria do HGSC se origina da extremidade distal da trompa de Falópio. No entanto, a coleta não deve prosseguir se a integridade do espécime puder ser potencialmente comprometida. Com base em nossa experiência, o espécime pode ser armazenado em solução conservante por vários meses sem comprometer a morfologia das células coletadas. A mancha de Papanicolaou é uma técnica de coloração citológica comumente utilizada em citopatologia. As principais vantagens deste procedimento de coloração incluem: 1) boa definição de detalhes nucleares;E 2) transparência citoplasmática. Neste estudo, são utilizados dois procedimentos de mancha de Papanicolaou modificados para a coloração de lâminas de citologia, incluindo o procedimento de coloração não-gynnizado automatizado e o procedimento de mancha rápida de Pap. Ambos os procedimentos dão coloração deslizante excelente e confiável, o que mostra uma boa preservação de detalhes nucleares e citoplasmáticos e um fundo limpo. Embora os slides de cytospin geralmente tenham maior antecedência quando comparados com slides de citologia, sua mancha de H &amp; E demonstrou qualidade semelhante de coloração celular. A coloração H &amp; E desses slides pode ser um método alternativo adequado para análise de citologia tubária se um processador automático não estiver disponível. O protocolo SEE-FIM é usado para extrair todas as trompas de Falópio incluídas neste estudo, incluindo casos benignos e malignos. O protocolo SEE-FIM foi inicialmente desenvolvido para espécimes profiláticos de salpingo-ooforectomia bilaterais positivos para BRCA, que é uma opção padrão de redução de risco fOu portadores de mutação BRCA. Este protocolo permite a exposição máxima da platina tubária, a partir da qual se acredita que o STIC se origina. Este é atualmente usado como o padrão-ouro para a detecção da extensão tubária HGSC e STIC. A correlação entre o achado citológico tubário com o achado histológico da SEE-FIM é crucial para este estudo validar a eficiência do protocolo atual. Uma preocupação da coleta de células tubárias usando uma escova de toque suave é que a manobra pode perturbar a integridade do epitélio tubário e dificultar a interpretação histológica mais recente de espécimes cirúrgicos, especialmente o estadiamento do tumor, se a malignidade for identificada. No entanto, com base em nossa experiência, cerca de um terço dos casos apresentam distúrbio leve das vilosidades na análise histológica, o que geralmente não interfere na interpretação final da histologia tubária. Nosso estudo anterior mostrou que a citologia tubária é sensível e específicaIc na detecção de HGSC e STIC. Será de grande interesse testar ainda mais se a combinação de citologia tubária com coloração de biomarcadores como P53 e IMP3 pode aumentar a sensibilidade e especificidade da detecção de câncer seroso de origem tubária. O estudo futuro incidirá no desenvolvimento de um procedimento laparoscópico para a amostragem do epitélio de Falópio in vivo .

O carcinoma seroso de alto grau de ovário (HGSC) é o tipo de câncer de ovário mais comum e letal e continua sendo uma grande ameaça à saúde pública. Na última década, os pesquisadores sugeriram que a grande maioria dos casos de HGSC surgem da trompa de Falópio em vez do próprio ovário 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 . O carcinoma intra-epitelial tubárico seroso (STIC) é amplamente aceito como o precursor de HGSC 1 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 . Até agora, a detecção precoce do câncer de ovário permanece difícil. O protocolo de rastreio atual com antígeno de câncer combinado 125 (CA-125) e ultra-sonografia transvaginal mostrouPouco efeito sobre a mortalidade dos pacientes 12 , 13 . A amostragem endometrial para detecção de câncer de ovário mostrou uma sensibilidade extremamente baixa 14 . Dois estudos pioneiros 15 , 16 exploraram o uso da amostragem direta laparoscópica de trompas de Falópio benignas e caracterizaram as características citológicas do epitélio tubárica benigno. Acreditamos que a amostragem direta da trompa de Falópio também pode ser uma maneira prática e direta de detectar STIC ou HGSC em um estágio inicial quando o tumor não é visualizado por imagem. Embora o objetivo final seja a utilidade do rastreio laparoscópico minimamente invasivo em pacientes com fatores de alto risco, os objetivos imediatos do presente estudo são: 1) estabelecer as características citológicas basais do epitélio tubáreo benigno; E 2) testar a sensibilidade e especificidade da citologia tubária na detecção de câncer de ovárioPrecursores de câncer e câncer. Desta forma, desenvolvemos o seguinte método basal de citologia tubária para testar a eficácia deste protocolo na detecção de HGSC e seu precursor STIC 17 . Neste estudo, aproveitamos o grande volume de espécimes cirúrgicos recebidos regularmente e realizamos amostragem direta da trompa de falópio excisada cirurgicamente, além dos procedimentos de cobrança de rotina. Nosso estudo recente 17 mostrou que o diagnóstico citológico de malignidade ou suspeita de malignidade está altamente correlacionado com o diagnóstico histológico de HGSC (100%). Além disso, a avaliação citológica tubária identificou neoplasia intratubal nos dois únicos casos de STIC confirmados histologicamente envolvidos neste estudo. Acreditamos que a citologia tubária tem um grande potencial na detecção precoce e proporcionará informações valiosas para o gerenciamento de pacientes.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cytobrush plus GT gentle touch of Medscand sample collection kit</td>
			<td>CooperSurgical</td>
			<td>C0112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThinPrep preservCyt solution</td>
			<td>HOLOGIC</td>
			<td>234005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThinPrep 2000 Processor</td>
			<td>HOLOGIC</td>
			<td>70031-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papanicolaou Stain, EA 65</td>
			<td>sigma aldrich</td>
			<td>HT40432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% Ethanol</td>
			<td>sigma aldrich</td>
			<td>652261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Ethanol</td>
			<td>sigma aldrich</td>
			<td>493538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>sigma aldrich</td>
			<td>214736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>sigma aldrich</td>
			<td>H9627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sakura Tissue Tek 2000 tissue processor</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>TISSUE-TEK VIP 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Dissecting Scissors,5.5 straight</td>
			<td>Pilgrim medical equiment</td>
			<td>FA710-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemware Forceps</td>
			<td>United state plastic corp</td>
			<td>76122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades,short</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>4785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades handle,short</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>4786</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tubal cytology of the fallopian tube as a promising tool for ovarian cancer early detection

Atualmente, é amplamente aceito que a grande maioria do carcinoma seroso de alto grau ovariano (HGSC) é originário da trompa de Falópio. No entanto, devido à falta de marcadores ou ferramentas para a identificação do câncer de ovário, a detecção precoce do HGSC continua sendo desafiadora. A amostragem direta da trompa de Falópio pode aumentar a sensibilidade para a detecção de células neoplásicas quando o tumor não é visivelmente visível. Desenvolvemos um procedimento para coletar células do tubo de Falópio diretamente dos espécimes cirúrgicos recém-recebidos, o que mostrou excelente correlação com os achados histológicos. Esta abordagem estabelece uma base para a utilidade futura do rastreio laparoscópico minimamente invasivo em populações de pacientes de alto risco.

Nosso estudo anterior mostrou que a amostragem diretamente da trompa de Falópio excisada usando uma escova de toque suave poderia produzir amostras quantitativas e qualitativamente adequadas para avaliação citológica adicional. Além disso, a combinação de preparação automatizada de lâminas e coloração com Papanicolaou modificada permite ao patologista visualizar melhor os detalhes citológicos para fazer um diagnóstico preciso. Um exemplo de uma mancha de papel manual rápida de uma amostra de uma trompa de Falópio benigna é ilustrada na Figura 1 . Conforme mostrado na Figura 1 , a manobra da escova resulta em amostragem adequada da amostra. Além disso, a mancha rápida manual de papel fornece boa resolução de detalhes nucleares e transparência citoplasmática, que são essenciais para a avaliação precisa das células tubáricas. A comparação entre o manual Quick Pap StAin de um slide de citologia e a coloração de H &amp; E de um slide de cytospin é mostrada na Figura 2 . Uma das vantagens da preparação de lâmina acima mencionada em comparação com o esfregaço convencional é que ele tem um fundo muito mais limpo e uma melhor resolução de detalhes nucleares e transparência citoplasmática. Um exemplo de SEE-FIM do Protocolo de Tubo de Falópio é demonstrado na Figura 3 . Conforme mostrado na Figura 1 , a presença de duas populações celulares (células ciliadas e células secretoras) é uma característica do epitélio tubárica benigno. A histologia de seções representativas da fimbria e ampulla é mostrada na Figura 4 . A manobra da escova mostra um distúrbio leve da estrutura das vilosidades em cerca de um terço do espécime. Em nosso estudo anterior 17 , o diagnóstico citotrológico correlacionado com o diâmetro histológicoGnose do HGSC muito bem (100%). A aparência citológica de malignidade mostra agrupamentos tridimensionais compostos de células com nucleolos proeminentes e anisonucleose ( Figura 5a ). Em contraste, a citologia atípica reativa apresentada como folhas anguladas compostas por células atípicas com nucleolos pequenos e anisonucleose moderada sem agrupamento tridimensional ( Figura 5b ). Os grupos celulares semelhantes a HGSC foram observados no contexto de folhas anguladas de células epiteliais normais ( Figura 6 ). <img alt="figura 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55887/55887fig1.jpg" /> Figura 1: Exemplo de uma mancha rápida manual de Papanicolau do Epitélio Tubal Benigno. ( A ) Células de fundo. As células de fundo incluem pequenos grupos de células que consistem em grandes células secretoras e pequenas células ciliadas, individuais grandes (presumivelmente segCélulas retóricas) e células pequenas (células presumivelmente ciliadas), grandes e pequenos núcleos nus dispersos. ( B ) Conjunto de pequenas células constituído por pequenas células ciliadas e grandes células secretoras (seta). ( C ) Tira do epitélio ciliado (seta). ( D ) Epitélio tubário com folhas mesoteliais. Observou as células ciliadas aderentes na periferia (seta). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55887/55887fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55887/55887fig2.jpg" /> Figura 2: Comparação entre a mancha rápida manual de Papanicolau de um slide de citologia ( A ) e a coloração de H &amp; E de um slide de citospina ( B ). Um agrupamento de células anguladas benignas está presente no centro da mancha de Papanicolaou e das lâminas de manchas de H &amp; E. Ambos os métodos fornecem boaResolução para avaliação citológica do espécime. No entanto, a mancha de Papanicolau da lâmina de citologia produziu um fundo mais limpo. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55887/55887fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55887/55887fig3.jpg" /> Figura 3: Ilustração de SEE-FIM do tubo de Falópio. Observe a seção longitudinal do segmento infundíbulo e fimbriae e a seção transversal do istmo e ampulla. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55887/55887fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55887/55887fig4.jpg" /> Figura 4: Histologia do epitélio tubário benigno.( A ) segmento Fimbriae. O epitélio tubário consiste em duas populações celulares distintas: células pequenas ciliadas (setas) e grandes células secretoras não ciliadas (círculos). É notado um leve distúrbio de moradias. ( B ) seção Ampulla. Observe o fimbria com os dedos. ( C ) Distúrbio leve da estrutura das vilosidades (seta). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55887/55887fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55887/55887fig5.jpg" /> Figura 5: Comparação entre Cluster Atypical ( a ) e Cluster Maligno Tridimensional ( b ) . A citologia maligna mostra clusters tridimensionais compostos de células com nucleolos proeminentes e anisonucleose ( b ). Citologia atípica mostra folha anguladaS composto de células atípicas com nucleolos pequenos e anisonucleose moderada. Nota: Nenhum agrupamento tridimensional está presente ( a ). Este número foi adotado a partir da referência 17 . <img alt="Figura 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55887/55887fig6.jpg" /> Figura 6: Correlação entre aparência citológica e histológica da neoplasia intra-epitelial. (A) citológica neoplasia intratubal. Neoplasia citológica intratubal mostrando a aquisição de contorno tridimensional e anisonucleose significativa e grande núcleo de cereix vermelho (círculo) no contexto de folhas anguladas de células epiteliais normais (seta). ( B ) Secção de patologia cirúrgica correspondente com carcinoma intra-epitelial tubárica. Observe as células altamente displásticas (círculo) adjacentes às células epiteliais de aparência relativamente normal (seta). Esta figura foiAdoptado a partir da referência 17 . <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55887/55887fig6large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 95% de etanol </td><td> 5 min </td></tr><tr><td> H2O </td><td> 10 seg </td></tr><tr><td> Hematoxilina </td><td> 15 seg - 3 min </td></tr><tr><td> H2O destilado </td><td> 5 min </td></tr><tr><td> 95% de etanol </td><td> 30 segundos </td></tr><tr><td> EA65 </td><td> 2 a 5 min </td></tr><tr><td> 95% de etanol </td><td> 30 segundos </td></tr><tr><td> 95% de etanol </td><td> 30 segundos </td></tr><tr><td> 100% de etanol </td><td> 30 segundos </td></tr><tr><td> 100% de etanol </td><td> 30 segundos </td></tr><tr><td> Xileno </td><td> 30 segundos </td></tr><tr><td> Xileno </td><td> 5 min </td></tr></tbody> &lt;/ Tabela&gt; Tabela 1: Etapas de manchas não-Gyn. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 95% de etanol </td><td> 10 mergulhos </td></tr><tr><td> H2O </td><td> 10 mergulhos </td></tr><tr><td> Hematoxilina </td><td> 10 sec-1 min </td></tr><tr><td> H2O destilado </td><td> 10 mergulhos </td></tr><tr><td> 95% de etanol </td><td> 10 mergulhos </td></tr><tr><td> EA65 </td><td> 1 - 3 min </td></tr><tr><td> 95% de etanol </td><td> 10 mergulhos </td></tr><tr><td> 100% de etanol </td><td> 10 mergulhos </td></tr><tr><td> Xileno </td><td> Dip até ficar limpo </td></tr></tbody></table> Tabela 2: Etapas manuais de manchas rápidas de pap.

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Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

Nós exploramos um método citológico de trompas por amostragem da trompa de Falópio, diretamente após a cirurgia, como uma ferramenta de detecção precoce de câncer de ovário. Aqui, apresentamos um protocolo para coletar células do tubo de Falópio de espécimes cirúrgicos recém-recebidos.

Citologia tubária do tubo de Falópio como uma ferramenta promissora para a detecção precoce do câncer de ovário

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

12.2K visualizações.  University of Arizona College of Medicine.  Nós exploramos um método citológico de trompas por amostragem da trompa de Falópio, diretamente após a cirurgia, como uma ferramenta de detecção precoce de câncer de ovário. Aqui, apresentamos um protocolo para coletar células do tubo de Falópio de espécimes cirúrgicos recém-recebidos. 

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In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 percent of women with ovarian cancer develop new metastases, and the recurrence is often fatal2. It is, therefore, necessary to understand how secondary metastases arise in order to develop better treatments for intermediate and late stage ovarian cancer. Ovarian cancer metastasis occurs when malignant cells detach from the primary tumor site and disseminate throughout the peritoneal cavity. The disseminated cells can form multicellular clusters, or spheroids, that will either remain unattached, or implant onto organs within the peritoneal cavity3 (Figure 1, Movie 1). 
All of the organs within the peritoneal cavity are lined with a single, continuous, layer of mesothelial cells4-6 (Figure 2). However, mesothelial cells are absent from underneath peritoneal tumor masses, as revealed by electron micrograph studies of excised human tumor tissue sections3,5-7 (Figure 2). This suggests that mesothelial cells are excluded from underneath the tumor mass by an unknown process. 
Previous in vitro experiments demonstrated that primary ovarian cancer cells attach more efficiently to extracellular matrix than to mesothelial cells8, and more recent studies showed that primary peritoneal mesothelial cells actually provide a barrier to ovarian cancer cell adhesion and invasion (as compared to adhesion and invasion on substrates that were not covered with mesothelial cells)9,10. This would suggest that mesothelial cells act as a barrier against ovarian cancer metastasis. The cellular and molecular mechanisms by which ovarian cancer cells breach this barrier, and exclude the mesothelium have, until recently, remained unknown. 
Here we describe the methodology for an in vitro assay that models the interaction between ovarian cancer cell spheroids and mesothelial cells in vivo (Figure 3, Movie 2). Our protocol was adapted from previously described methods for analyzing ovarian tumor cell interactions with mesothelial monolayers8-16, and was first described in a report showing that ovarian tumor cells utilize an integrin &#x2013;dependent activation of myosin and traction force to promote the exclusion of the mesothelial cells from under a tumor spheroid17. This model takes advantage of time-lapse fluorescence microscopy to monitor the two cell populations in real time, providing spatial and temporal information on the interaction. The ovarian cancer cells express red fluorescent protein (RFP) while the mesothelial cells express green fluorescent protein (GFP). RFP-expressing ovarian cancer cell spheroids attach to the GFP-expressing mesothelial monolayer. The spheroids spread, invade, and force the mesothelial cells aside creating a hole in the monolayer. This hole is visualized as the negative space (black) in the GFP image. The area of the hole can then be measured to quantitatively analyze differences in clearance activity between control and experimental populations of ovarian cancer and/ or mesothelial cells. This assay requires only a small number of ovarian cancer cells (100 cells per spheroid X 20-30 spheroids per condition), so it is feasible to perform this assay using precious primary tumor cell samples. Furthermore, this assay can be easily adapted for high throughput screening.

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

The mesothelial clearance assay described here takes advantage of fluorescently labeled cells and time-lapse video microscopy to visualize and quantitatively measure the interactions of ovarian cancer multicellular spheroids and mesothelial cell monolayers. This assay models the early steps of ovarian cancer metastasis.

Ensaio in vitro de Apuramento mesotelial que os modelos dos primeiros passos da metástase do câncer de ovário

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Medicina

A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

Genital tract infections with Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) are the most frequent transmitted sexually disease in women worldwide. Inefficient clearance or persistence of the pathogens may lead to ascending infections of the upper genital tract and are supposed to cause chronic inflammatory damage to infected tissues 1,2. As a consequence, severe clinical sequelae like pelvic inflammatory disease (PID), tubal occlusion and infertility may occur 3,4. 
Most of the research with C. trachomatis has been conducted in epithelial cell lines (e.g. HEp-2 cells and HeLa-229) or in mice. However, as with cell- culture based models, they do neither reflect the physiology of native tissue nor the pathophysiology of C. trachomatis genital tract infections in vivo 5. Further limitations are given by the fact that central signaling cascades (e.g. IFN-&gamma; mediated JAK/STAT signaling pathway) that control intracellular chlamydial growth fundamentally differ between mice and humans 6,7. We and others therefore established a whole organ fallopian tube model to investigate direct interactions between C. trachomatis and human fallopian tube cells ex vivo 8,9.
For this purpose, human fallopian tubes from women undergoing hysterectomy were collected and infected with C. trachomatis serovar D. Within 24 h post infection, specimen where analyzed using scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM) to detect Chlamydia trachomatis mediated epithelial damage as well as C. trachomatis inclusion formation in the fallopian tissue.

A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

We describe an ex vivo infection model for visualisation of direct interactions from bacterial pathogens with human fallopian tube cells. The whole organ tissue model was established to investigate C. trachomatis induced pathology to the female fallopian tube under "life-like" conditions.

Um Modelo de Tubo de Falópio Humanos para Investigação de<em&gt; C. trachomatis</em&gt; Infecções

Genital tract infections with Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) are the most frequent transmitted sexually disease in women worldwide. Inefficient ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical treatments and improved platinum-based chemotherapies, there has been little improvement in EOC survival rates for more than four decades 1,2. Whilst stage I tumors have 5-year survival rates &gt;85%, survival rates for stage III/IV disease are &lt;40%. Thus, the high rates of mortality for EOC could be significantly decreased if tumors were detected at earlier, more treatable, stages 3-5. At present, the molecular genetic and biological basis of early stage disease development is poorly understood. More specifically, little is known about the role of the microenvironment during tumor initiation; but known risk factors for EOCs (e.g. age and parity) suggest that the microenvironment plays a key role in the early genesis of EOCs. We therefore developed three-dimensional heterotypic models of both the normal ovary and of early stage ovarian cancers. For the normal ovary, we co-cultured normal ovarian surface epithelial (IOSE) and normal stromal fibroblast (INOF)&nbsp;cells, immortalized by retrovrial transduction of the catalytic subunit of human telomerase holoenzyme (hTERT) to extend the lifespan of these cells in culture. To model the earliest stages of ovarian epithelial cell transformation, overexpression of the CMYC oncogene in IOSE cells, again co-cultured with INOF cells. These heterotypic models were used to investigate the effects of aging and senescence on the transformation and invasion of epithelial cells. Here we describe the methodological steps in development of these three-dimensional model; these methodologies aren't specific to the development of normal ovary and ovarian cancer tissues, and could be used to study other tissue types where stromal and epithelial cell interactions are a fundamental aspect of the tissue maintenance and disease development.

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

We describe methodologies for establishing in vitro heterotypic three-dimensional models comprising ovarian fibroblasts and normal ovarian surface or ovarian cancer epithelial cells. We discuss the use of these models to study stromal-epithelial interactions that occur during ovarian cancer development.

Heterotípica tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for Cancer Therapy Monitoring

In molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI) are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. PET is characterized by its excellent sensitivity and quantification ability while OI is notable for non-radiation, relative low cost, short scanning time, high throughput, and wide availability to basic researchers. However, both modalities have their shortcomings as well. PET suffers from poor spatial resolution and high cost, while OI is mostly limited to preclinical applications because of its limited tissue penetration along with prominent scattering optical signals through the thickness of living tissues.
 Recently a bridge between PET and OI has emerged with the discovery of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI)4-6. CLI is a new imaging modality that harnesses Cerenkov Radiation (CR) to image radionuclides with OI instruments. Russian Nobel laureate Alekseyevich Cerenkov and his colleagues originally discovered CR in 1934. It is a form of electromagnetic radiation emitted when a charged particle travels at a superluminal speed in a dielectric medium7,8. The charged particle, whether positron or electron, perturbs the electromagnetic field of the medium by displacing the electrons in its atoms. After passing of the disruption photons are emitted as the displaced electrons return to the ground state. For instance, one 18F decay was estimated to produce an average of 3 photons in water5. 
 Since its emergence, CLI has been investigated for its use in a variety of preclinical applications including in vivo tumor imaging, reporter gene imaging, radiotracer development, multimodality imaging, among others4,5,9,10,11. The most important reason why CLI has enjoyed much success so far is that this new technology takes advantage of the low cost and wide availability of OI to image radionuclides, which used to be imaged only by more expensive and less available nuclear imaging modalities such as PET.
 Here, we present the method of using CLI to monitor cancer drug therapy. Our group has recently investigated this new application and validated its feasibility by a proof-of-concept study12. We demonstrated that CLI and PET exhibited excellent correlations across different tumor xenografts and imaging probes. This is consistent with the overarching principle of CR that CLI essentially visualizes the same radionuclides as PET. We selected Bevacizumab (Avastin; Genentech/Roche) as our therapeutic agent because it is a well-known angiogenesis inhibitor13,14. Maturation of this technology in the near future can be envisioned to have a significant impact on preclinical drug development, screening, as well as therapy monitoring of patients receiving treatments.

Cerenkov Luminescence Imaging CLI for Cancer Therapy Monitoring

Use of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for monitoring preclinical cancer treatment is described here. This method takes advantage of Cerenkov Radiation (CR) and optical imaging (OI) to visualize radiolabeled probes and thus provides an alternative to PET in preclinical therapeutic monitoring and drug screening.

Luminescência de Cerenkov Imaging (CLI) para o Monitoramento Terapia de Câncer

In  molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI)  are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for personalized medicine after stratification, explaining the current interest in developing a reproducible and low-cost xenotransplant model for this disease. The chick chorioallantoic membrane is a natural immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition, it is easily accessed, manipulated and imaged using optical and fluorescence stereomicroscopy. Histology further allows detailed analysis of heterotypic cellular interactions.
This protocol describes in detail the in ovo grafting of the chorioallantoic membrane with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines (Saos-2 and SW1353). The chick survival rates are up to 75%. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior. For localized grafting of single cell suspensions, ECM gel provides significant advantages over inert containment materials. The Ki67 proliferation index is related to the distance of the cells from the surface of the CAM and the duration of application on the CAM, the latter determining a time frame for the addition of therapeutic products.

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The in ovo chorioallantoic membrane (CAM) is grafted with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior.

O<em&gt; Em ovo</em&gt; CAM-ensaio como um Xenograftmodel para o Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Osteopathic Manipulative Treatment as a Useful Adjunctive Tool for Pneumonia

Pneumonia, the inflammatory state of lung tissue primarily due to microbial infection, claimed 52,306 lives in the United States in 20071 and resulted in the hospitalization of 1.1 million patients2. With an average length of in-patient hospital stay of five days2, pneumonia and influenza comprise significant financial burden costing the United States $40.2 billion in 20053. Under the current Infectious Disease Society of America/American Thoracic Society guidelines, standard-of-care recommendations include the rapid administration of an appropriate antibiotic regiment, fluid replacement, and ventilation (if necessary). Non-standard therapies include the use of corticosteroids and statins; however, these therapies lack conclusive supporting evidence4. (Figure 1)

Osteopathic Manipulative Treatment (OMT) is a cost-effective adjunctive treatment of pneumonia that has been shown to reduce patients&#8217; length of hospital stay, duration of intravenous antibiotics, and incidence of respiratory failure or death when compared to subjects who received conventional care alone5. The use of manual manipulation techniques for pneumonia was first recorded as early as the Spanish influenza pandemic of 1918, when patients treated with standard medical care had an estimated mortality rate of 33%, compared to a 10% mortality rate in patients treated by osteopathic physicians6. When applied to the management of pneumonia, manual manipulation techniques bolster lymphatic flow, respiratory function, and immunological defense by targeting anatomical structures involved in the these systems7,8, 9, 10.

The objective of this review video-article is three-fold: a) summarize the findings of randomized controlled studies on the efficacy of OMT in adult patients with diagnosed pneumonia, b) demonstrate established protocols utilized by osteopathic physicians treating pneumonia, c) elucidate the physiological mechanisms behind manual manipulation of the respiratory and lymphatic systems. Specifically, we will discuss and demonstrate four routine techniques that address autonomics, lymph drainage, and rib cage mobility: 1) Rib Raising, 2) Thoracic Pump, 3) Doming of the Thoracic Diaphragm, and 4) Muscle Energy for Rib 1.5,11

Pneumonia is one of the top ten leading causes of death in the U.S. Osteopathic manipulative techniques (OMT) may be utilized as an adjunctive therapy in the treatment of pneumonia to enhance biomechanical and immune function; and ultimately, to reduce hospital stay, duration of antibiotics, incidence of respiratory failure, and mortality. In this video-article, we will review randomized controlled studies on the use of OMT in pneumonia patients, as well as demonstrate specific hands-on techniques that are routinely practiced by osteopathic physicians when treating pulmonary infections.

Osteopático manipulativo tratamento como ferramenta adjuvante útil para Pneumonia

Pneumonia, the inflammatory state of lung tissue primarily due to microbial infection, claimed 52,306 lives in the United States in 20071 and resulted in ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

Método para obtenção de células do cancro do ovário primárias de amostras sólidas

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

Avaliação da Eficácia da<em&gt; H. pylori</em&gt; Protein HP-NAP como uma ferramenta terapêutica para o tratamento de cancro da bexiga em um Modelo murino Orthotopic

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

Quantitation of Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metastasis

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States. Mortality is due to diagnosis of 75% of women with late stage disease, when metastasis is already present. EOC is characterized by diffuse and widely disseminated intra-peritoneal metastasis. Cells shed from the primary tumor anchor in the mesothelium that lines the peritoneal cavity as well as in the omentum, resulting in multi-focal metastasis, often in the presence of peritoneal ascites. Efforts in our laboratory are directed at a more detailed understanding of factors that regulate EOC metastatic success. However, quantifying metastatic tumor burden represents a significant technical challenge due to the large number, small size and broad distribution of lesions throughout the peritoneum. Herein we describe a method for analysis of EOC metastasis using cells labeled with red fluorescent protein (RFP) coupled with in vivo multispectral imaging. Following intra-peritoneal injection of RFP-labelled tumor cells, mice are imaged weekly until time of sacrifice. At this time, the peritoneal cavity is surgically exposed and organs are imaged in situ. Dissected organs are then placed on a labeled transparent template and imaged ex vivo. Removal of tissue auto-fluorescence during image processing using multispectral unmixing enables accurate quantitation of relative tumor burden. This method has utility in a variety of applications including therapeutic studies to evaluate compounds that may inhibit metastasis and thereby improve overall survival.

Ovarian cancer metastasis is characterized by numerous diffuse intra-peritoneal lesions, such that accurate visual quantitation of tumor burden is challenging. Herein we describe a method for in situ and ex vivo quantitation of metastatic tumor burden using red fluorescent protein (RFP)-labeled tumor cells and optical imaging.

A quantificação da Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metástase

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. Instead, ovarian cancer cells exfoliated from the primary tumor are carried by peritoneal fluid to metastatic sites within the peritoneal cavity. These sites, most notably the abdominal peritoneum and omentum, are organs covered by a mesothelium-lined surface. To investigate the processes of ovarian cancer dissemination, we assembled a complex three-dimensional culture system that reconstructs the lining of the peritoneal cavity in vitro. Primary human fibroblasts and mesothelial cells were isolated from human omentum. The fibroblasts were then mixed with extracellular matrix and covered with a layer of the primary human mesothelial cells to mimic the peritoneal and omental surfaces encountered by metastasizing ovarian cancer cells. The resulting organotypic model is, as shown, used to examine the early steps of ovarian cancer dissemination, including cancer cell adhesion, invasion, and proliferation. This model has been used in a number of studies to investigate the role of the microenvironment (cellular and acellular) in early ovarian cancer dissemination. It has also been successfully adapted to high throughput screening and used to identify and test inhibitors of ovarian cancer metastasis.

Here, we present a protocol to construct a three-dimensional in vitro model of the lining of the peritoneal cavity, composed of primary human mesothelial cells and fibroblasts layered with extracellular matrix, as a tool to investigate ovarian cancer cell adhesion, invasion, and proliferation.

Modelando os passos iniciais do cancro do ovário Divulgação em uma cultura organotípicas do Peritoneal Cavity Humano

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...