The authors thank Mike Crickmore, Dragana Rogulja, and Michelle Frank for comments on the manuscript. Pavel Gorelik provided technical support for manufacturing the behavioral arenas. This work was conducted in Mike Crickmore's lab and is also supported by the Whitehall Foundation (Principal Investigator: Dragana Rogulja). S.X.Z. is a Stuart H.Q. and Victoria Quan Fellow at Harvard Medical School.

NOTA: Este protocolo descreve a preparação (Seções 1 - 3), execução (Seção 4), e análise (Seção 4) de ensaios de saciedade 2-D. Em seguida, utilizando estimulação dopaminérgica, como exemplo, a secção 5 mostra como combinar estimulação termogênico com ensaios de saciedade 2-D para induzir hipersexualidad. Secção 6 descreve 3 maneiras de verificar os resultados de ensaios de saciedade 2-D. Finalmente, a Seção 7 mostra como medir a recuperação da unidade de acasalamento em moscas macho. 1. Confecção de 8 e 32 câmaras Arenas Comportamentais NOTA: cada arena comportamental consiste em diversas camadas de folhas de plástico cortadas a laser mantidas juntas por meio de parafusos e porcas sextavadas polegar em cada um dos quatro cantos (Figura 1A). <ol><li> Fabricar as camadas de arena. Fabricar cada camada utilizando um cortador laser para cortar folhas de plástico acrílico com a forma adequada (ver Figura 1B, 1C pelo produto). NOTA: Muitos institutio pesquisans tem cortadores de laser em suas lojas de máquinas ou espaços fabricante. Se a instituição tem acesso a um cortador de laser, continue com as seguintes etapas. Se não, então siga as instruções na etapa 1.2, em vez. <ol><li> Para cada camada, abra o padrão de design no software do cortador a laser. NOTA: Os desenhos podem ser encontrados em arquivos PDF apropriadamente nomeado (por exemplo, 8-Câmara Arena - Layer 2 - Doors.pdf) em material suplementar 1. Este arquivo também contém anotações para o tipo de plástico a ser utilizado (por exemplo, 1 / 8 polegadas (ou seja, 3,175 mm) acrílico). A espessura exacta de cada camada não é crítica. O principal requisito é permitir que 0,12 polegadas (3 mm) ou mais de espaço livre vertical nas câmaras. </li><li> Ajuste as configurações de laser (energia, foco, etc.) para o tipo e espessura do plástico para ser usado. Coloque plástico na cama cortador de laser e executar o corte a laser. NOTA: Estas definições variam amplamente com base na cutte a laserModelo R e a força de seu laser. Encontrar as configurações adequadas com base na experiência do passado ou fazendo cortes de teste em sucata de plástico. As gravuras hexagonais profundas estão incluídas no projeto de recesso as cabeças dos parafusos hex. Este recurso permite que para o aperto de uma mão das porcas polegar e permite que as arenas para descansar plana no banco (sem salientes cabeças dos parafusos). No entanto, fazendo gravuras profundas é muitas vezes difícil de alcançar, e, usando um cortador a laser demorado. Este passo é opcional e pode ser ignorada sem afetar os resultados comportamentais. </li><li> Ao cortar a moldura da porta (Layer 2, Figura 1A), também usam as configurações de laser adequadas para a gravura os números de câmara incluídos no projeto (como na Figura 1B, 1C). </li></ol></li><li> Coloque uma ordem com um fabricante de corte a laser online. Carregar todos os arquivos de projeto em PDF para a arena 8 e / ou 32 câmaras e especificar o tipo de material (por exemplo, 1/8 de polegada (ou seja, 3,175 mm) clear acrílico) com base nas anotações nos arquivos. Os resultados aparecerão como nas Figuras 1B (arena de 8 câmaras) e 1C (arena de 32 câmaras). </li><li> Montar arenas usando quatro parafusos sextavados e quatro porcas polegar para alinhar e manter unidas as camadas de plástico (Figura 1A). As arenas aparece como na Figura 1D, 1E (8-câmara) e Figura 1F, 1G (32-câmara). NOTA: A parede de alimentos (Camada 4 na Figura 1A) é utilizado apenas para os ensaios de saciedade 2-D e é omitida em arenas 32-câmara, que são utilizados em ensaios de corte. </li></ol> 2. Preparação de Alimentos para 2-D Saciedade Assay Observação: Uma vez que um ensaio de saciedade 2-D estende por 4,5 h, mosca alimentar é usado na arena para fornecer nutrição e água. Este protocolo utiliza, mas não se restringe a, a farinha de milho-agar convencional mosca alimentos. <ol><li> Parcialmente montar o 2-D arena de saciedade (8 câmaras) com camadas 3-6(veja a Figura 1A para atribuições de camadas) e aperte-o com nozes polegar e parafusos sextavados. </li><li> Coloque os alimentos frescos fly em um frasco limpo, micro-ondas. Adicionar água suficiente para cobrir a superfície do fundo do frasco (Figura 2A). </li><li> comida de microondas em alta por 30 - 45 s. Verificar o progresso e mexa a cada 15 s até derreter (Figura 2B). CUIDADO! alimentos voar ferve facilmente sobre. </li><li> Usar um embotados-1000 uL ponta da pipeta (Figura 2C) para transferir lentamente ~ 1 mL derretido alimentos em cada uma das câmaras (Figura 2D). </li><li> Permitir que o alimento resolidify a 4 ° C durante ~ 10 min (Figura 2E), antes de montar completamente na arena (Figura 2F). </li><li> Use a arena concluída para experiências (ver Secção 4) ou armazenar a 4 ° C. </li><li> Armazenar o alimento restante a 4 ° C e reutilização. </li></ol> 3. Preparar Virgens fêmeas para ensaios comportamentais NOTA: 2-D ensaios de saciedade utilizar um grande número de moscas fêmeas virgens (~ 120 - 160 para uma arena comportamental cheio) que são difíceis de recolher, utilizando métodos convencionais. Esta seção descreve uma abordagem alternativa utilizando o transgene HS-HID no cromossoma Y 28, que tem sido utilizado com sucesso em ensaios de corte 25, 29. O estoque usado para gerar fêmeas virgens de olhos brancos tem o w1118 genótipo (X) / hs-HID (Y); + / +; + / + (Bloomington estoque número 24638). <ol><li> Virar voa em uma nova garrafa, uma vez 20 - 50% das pupas têm eclosed (veja a Figura 3A, por exemplo) e há bastante sexo masculino (5 - 10) para propagar as ações. </li><li> Choque térmico a garrafa original em um banho de água quente a 37 ° C durante 1 h para activar suficientemente HS-HID para matar os machos (Figura 3B). Após o choque térmico, a apenas fêmeas Eclose destes frascos e assim permanecerá virgem até oensaios. NOTA: Certifique-se de todos os lados da garrafa são uniformemente aquecido (ver Figura 3A para a linha de água). Estender esse tempo para até 2 h se 1 h não é suficiente para sacrificar todos os homens. </li><li> Isolar fêmeas coletadas por pelo menos 3 d antes de experiências para garantir que eles são velhos o suficiente para ser sexualmente receptiva 25, 29. NOTA: os machos cromossomo Y-menos ocasionalmente surgem a partir deste estoque. Estes machos têm olhos brancos e não são afetados pelo choque térmico, porque eles não contêm o transgene hs-HID. Eles não podem produzir esperma e, portanto, não pode diminuir a receptividade em mulheres de 30, 31. </li></ol> 4. A realização e marcando 2-D saciedade Ensaios NOTA: É importante para controlar a idade do macho voa como alterações de unidade de acoplamento com a idade. Este protocolo usa machos que são 3-4 d velha 25 </sup&gt;. <ol><li> Ajuste da incubadora para a temperatura desejada (por exemplo, 23 ° C durante padrão, experiências de RT) e humidade (&gt; 30%). No caso de incubadoras sem controle de umidade, deixando um copo de água na incubadora é suficiente. </li><li> Coloque um 2-D arena de ensaio de saciedade no incubador durante ~ 30 minutos para equilibrar a temperatura e para evitar a condensação nas câmaras durante o decurso da experiência. As portas rotativas deve estar na posição aberta. </li><li> Use um aspirador de fly 32 para aspirar 15 - 20 fêmeas virgens em cada câmara da arena (Figura 4). NOTA: É importante que as fêmeas e machos não são anestesiados, no mesmo dia como o ensaio. Em nossa experiência, isso pode afetar a receptividade feminina e comportamento de acasalamento dos machos. </li><li> Aspirar 1 macho em cada câmara. </li><li> Coloque a arena carregado na incubadora sob uma câmara de vídeo de consumo normal (Figura 5) e a película durante 4,5 h. </li><li> Pontuação vídeos observando quando cada macho mosca começa e termina cada (ou seja, a cópula) acasalamento. Este passo pode ser no primeiro demorado. Com a prática, pode-se marcar os vídeos com velocidade 5x ou superior. Observação: Uma vez que as moscas acasalar para ~ 20 min a ~ 23 ° C (duração mais curto a temperaturas mais elevadas) 29, pode-se percorrer os primeiros 15 minutos de cada acoplamento. </li><li> Após o login todos os momentos de acasalamento, somar o número de acasalamentos para cada mosca (ver resultados representativos). </li><li> Use o código fornecido para gerar um etograma. Ver material suplementar para o código 2, instruções e dados de exemplo. </li><li> Use CO 2 ou temperatura fria para anestesiar as moscas antes de removê-los. </li></ol> 5. Usando a manipulação termogênico para inverter Saciedade em 2-D saciedade Ensaios NOTA: Este teste de protocolo se a estimulação termogênico de uma população neuronal definido pode superar saciedade. O FLI experimentales expressam o canal de cátions sensível ao calor TRPA1 em populações definidas de neurónios (UAS-TRPA1). As etapas a seguir aplicam-se à estimulação dos neurónios dopaminérgicos (TH-Gal4), que foram mostrados para promover a unidade de acoplamento 25. Estes passos podem ser usados ​​em conjunto com os outros condutores neuronais para descobrir outras populações que promovem a unidade de acoplamento. <ol><li> Para induzir thermogenetically comportamentos de acoplamento em moscas saciados, aumente a temperatura na incubadora (por exemplo, a partir de 23 ° C a 28,5 ° C) depois de completar um 4,5 H 2-D experimento saciedade completa. </li><li> Depois da incubadora atingir a temperatura desejada, continue a estimulação de calor e marcar os acasalamentos (ie. Cópulas) dos machos para 1 h (ver resultados representativos). NOTA: A temperatura e a duração da estimulação pode variar dependendo do genótipo por isso, é necessário solucionar as condições óptimas que impedem a sobre-estimulação dos neurónios, enquanto continua produzindo um Robufenótipo st. </li></ol> 6. Usando Courtship e locomoção para Verifique Saciedade Nota: Esta secção descreve métodos de 3 opcionais que podem ser utilizados para verificar os resultados de ensaios de saciedade 2-D. Eles não são necessários para cada ensaio. <ol><li> Use ensaios de corte para verificar a saciedade. <ol><li> Aspirar um macho e uma fêmea virgem em cada uma das câmaras 32 numa arena de corte. </li><li> Filmar as moscas para ~ 20 min, utilizando uma câmara de vídeo padrão. </li><li> Pontuação do índice de namoro (CI) para quantificar o namoro 25; esta é a fração de tempo gasto na execução de comportamento de corte (cantando, seguindo, etc.) e acasalamento (ou seja, a cópula) ao longo de uma janela de 5 min. Esta janela começa a partir da primeira instância do comportamento de corte. Se uma mosca macho não iniciar corte nos primeiros 15 min, a sua IC é 0. moscas Naive WT deve mostrar um CI superior a 0,9, ao passo que uma mosca totalmente saciado deve ter um IC below 0,2. Outras medidas de corte também pode ser considerado 23, 33. </li></ol></li><li> Marcando o namoro em ensaios de saciedade 2-D <ol><li> Conseguir a quantidade de tempo que uma mosca macho passa cortejando, ao longo de um período de tempo de um ensaio de saciedade 2-D (por exemplo, o primeiro h). O namoro é definido como o macho de executar qualquer etapa do ritual (cantando, seguindo, etc.). Ao contrário no ponto 6.1.3, este passo não inclui o tempo o macho passa o acasalamento. </li><li> Dividir o tempo de corte acima pelo tempo total do macho não foi acasalamento (ou seja, não copular) no mesmo período de tempo. Por exemplo, se um macho fazer cortes durante 15 min e companheiros durante 20 minutos ao longo da primeira hora, a proporção é de 15 min / (60 min - 20 min) = 0,375. A relação é mostrada como &quot;Fração de nonmating tempo no namoro&quot; em resultados representativos. </li></ol></li><li> Usando o ensaio de locomoção para avaliar exaustão <ol><li> Parcialmente montar o 32-Arena câmara com todas as peças, mas a folha de contraste. </li><li> Aspirar uma mosca macho (sem moscas fêmeas) em cada uma das câmaras 32 numa arena de corte. </li><li> Filmar as moscas para ~ 10 min, utilizando uma câmara de vídeo padrão. </li><li> Acompanhe as moscas com o plugin MTrack2 em ImageJ (http://valelab.ucsf.edu/~nstuurman/ijplugins/MTrack2.html). </li></ol></li></ol> 7. Recuperando Acasalamento unidade depois de 2-D Saciedade Assay <ol><li> Realizar um ensaio de saciedade 2-D, tal como descrito na secção 4, mas aspirar o moscas macho no final do ensaio. </li><li> Isolar as moscas macho a 23 ° C durante o número pretendido de dias. </li><li> Realizar um ensaio de saciedade 2-D com os machos recuperados e marcar seus cruzamentos (ou seja, cópulas) por apenas 1 h (ver resultados representativos). </li></ol>

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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+resource+of+transgenic+RNAi+lines+for+neurogenetics.">A Drosophila resource of transgenic RNAi lines for neurogenetics.</a> Genetics. 182 (4), 1089-1100 (2009).</li><li>Ni, J. Q., Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-scale+shRNA+resource+for+transgenic+RNAi+in+Drosophila.">A genome-scale shRNA resource for transgenic RNAi in Drosophila.</a> Nature. 8 (5), 405-407 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Estados motivacionais pode ser saciado, mantidos e recuperados 34. Nós apresentamos um ensaio de saciedade 2-D que rapidamente e de forma robusta mede todos esses aspectos do acasalamento unidade na mosca. Este ensaio abre-se a possibilidade de utilizar mosca avançada manipulações genéticas para estudar os componentes moleculares e um circuito de comportamento motivado. O ensaio de saciedade confia na capacidade do homem para o tribunal com sucesso e copular, e para terminar cópulas no momento apropriado. Embora moscas tribunal hipossexuais menos, moscas baixa de corte não são necessariamente hipossexuais; eles podem, por exemplo, têm dificuldade em reconhecer ou rastrear as fêmeas 35. Por esse motivo, o ensaio de saciedade é mais adequado para hipersexualidad teste, um fenótipo que não pode ser observada de forma fiável em um ensaio padrão de corte, porque sem tratamento prévio com os machos de tipo selvagem mostram os índices de corte se aproximam 1. Hipersexualidade no ensaio SH saciedadeould ser considerado em relação à idade do sexo masculino em nossa experiência, os homens mais velhos tendem a acasalar um pouco mais frequentemente do que os 3 dias de idade machos usados ​​aqui. Utilizou-se estimulação de neurónios dopaminérgicos termogênico para exemplificar as manipulações neurogenéticos que podem ser usados ​​neste sistema para investigar os componentes subjacentes motivação. Além disso, os pesquisadores também possível utilizar estimulação termogênico ao longo de um ensaio de saciedade 2-D e olhar para o sexo masculino hipersexuais que são mais lentos para atingir a saciedade. Claro, ensaios de saciedade também podem ser combinados com ferramentas de silenciamento neuronais 36, 37, 38, optogenética mutações genéticas 39, 40, 41, RNAi knockdown 28, 42, 43, 44, etc. </em&gt; Esses recursos tornam possível um interrogatório exaustivo de motivação na mosca que está atualmente inatingível em outros sistemas. O ensaio de saciedade é acessível e escalável. Cada arena pode ser fabricado para o valor de materiais ~ 10 dólares norte-americanos &quot;(mais os custos de corte a laser, se houver) e ocupa menos espaço do que um livro de bolso. Marcando os vídeos também é uma tarefa relativamente simples. Um pesquisador treinado pode marcar um 4,5 horas de vídeo com 8 do sexo masculino voa em ~ 1,5 h. Para mais rastreio de alto rendimento, pode-se marcar apenas o último 2 h, quando as moscas normais apresentam níveis muito baixos de unidade de acoplamento. Alternativamente, pode-se verificar no local os ensaios a cada 30 minutos, pois isso irá capturar a maioria dos ~ 20 acasalamentos mínimo de duração. Esperamos que este sistema será amplamente adaptado e irá contribuir para o surgimento de Drosophila como um sistema poderoso para desvendar os segredos da motivação.

Trabalho em Drosophila tem proporcionado uma visão profunda e pioneira em muitos fenómenos biológicos, incluindo a natureza do gene 1, os princípios do desenvolvimento embrionário 2, ritmos circadianos 3, bem como o desenvolvimento e a fiação do sistema nervoso 4, 5, 6. A motivação permanece bastante menos conhecidas do que estes fenómenos, talvez por causa das limitações dos sistemas que foram estudados até agora. A motivação da mosca é estudado principalmente no contexto de fome, que apresenta diversos desafios devido a sua ingestão de alimentos muito pequeno por ataque de alimentação e impede que exoesqueleto sinais evidentes de deposição de gordura. Por conseguinte, existe uma necessidade de expandir os sistemas utilizados para estudar a motivação em tempo real. Nós descrevemos um quadro comportamental para o estudo da unidade de acasalamento emDrosophila. Este sistema tira vantagem das ferramentas neurogenéticos em tempo real, bem como a acessibilidade 7, 8, 9, 10, 11, 12 e o putativo conectoma de seus circuitos dimorfismo sexual 8, 13. Além disso, grande parte da inata 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 e aprendeu 22, 23, 24 circuito sensório-motor namoro controle foi elaborado em detalhes, proporcionando uma rara oportunidadepara localizar o nó de circuito exato em que a motivação colide. Recentemente, relatou que, em tempo real, como nos seres humanos, os níveis de dopamina são centrais para a unidade de acoplamento 25, 26, 27. Ganhamos o acesso genética para o nível do circuito molecular-e detalhada e recebimento de neurônios na mosca, facilitando produtoras de dopamina relevantes análises deste fenómeno conservada utilizando os ensaios aqui descrita 25. Nós adicionar aos ensaios comportamentais em Zhang et ai. 25 uma nova arena comportamental plana que permite pontuação de vídeo, que chamamos de um ensaio de saciedade 2-dimensional (2-D), uma importante melhoria em relação aos métodos anteriores. Consequentemente, o novo ensaio é mais escalável e quantificável e, portanto, mais adequado para telas genéticas de genes e de neurônios envolvidas na motivação. Usamos este novo ensaio, juntamente com ensaios de namoro e neurogemanipulações magnética, para demonstrar como medir e alterar unidade de acasalamento na mosca.

<table><tbody><tr><td>1/16 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K12</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>1/8 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K42</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>3/16 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8560K219</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>1/32 inch black delrin</td><td>McMaster-Carr</td><td>8575K132</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>Hex screws, 1 inch long (50x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92314A115&amp;nbsp;</td><td>Used to make arenas. Can be replaced by 3/4 inch screws (92314A113, McMaster-Carr) for 32-chamber arenas.</td></tr><tr><td>Thumb nuts (25x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92741A100</td><td>Used to make arenas. Can be replaced by regular hex nuts (90480A005, McMaster-Carr).</td></tr><tr><td>Camcorder</td><td>Canon</td><td>Vixia HF R700</td><td>Can be replaced by any consumer comcorder.</td></tr></tbody></table>

measuring and altering mating drive in male drosophila melanogaster

Apesar de décadas de investigação, as bases neuronais e moleculares de estados motivacionais permanecem misteriosas. Recentemente, desenvolvemos um romance, reducionista e sistema escalável para investigação aprofundada de motivação usando a unidade de acasalamento dos machos Drosophila melanogaster (Drosophila), os métodos para as quais detalhes aqui. O paradigma comportamental centra-se na constatação de que a unidade de acasalamento dos machos diminui ao lado de fertilidade ao longo de cópulas repetidas e recupera mais ~ 3 d. Neste sistema, as poderosas ferramentas neurogenéticos disponíveis na mosca convergir com a acessibilidade genética e esquema de ligação putativo disponíveis para o comportamento sexual. Esta convergência permite o isolamento rápido e interrogatório de pequenas populações neuronais com funções motivacionais específicos. Aqui nós detalhe a concepção e execução do ensaio saciedade que é usado para medir e alterar a motivação corte na mosca masculino. usando esteensaio, que também demonstram que a baixa unidade de acasalamento dos machos pode ser superado através da estimulação neurónios dopaminérgicos. O ensaio de saciedade é simples, acessível e robusto às influências de fundo genético. Esperamos que o ensaio de saciedade para gerar muitos novos insights sobre a neurobiologia de estados motivacionais.

Para caracterizar unidade de acoplamento de Drosophila, de 3 dias de idade, Canton WT-S machos foram testados num ensaio de saciedade 2-D. Durante o curso do ensaio (4,5 h), machos acasalam uma média de 4,8 ± 0,3 (média ± erro padrão da média, SEM) vezes. Acasalamentos iniciar principalmente nas primeiras 2 h (78%) (Figura 6A, 6B) e tornam-se menos frequentes como o ensaio avança (Figura 6A, 6B). Esta redução não é devido à falta de parceiros de acasalamento (74% do sexo feminino permanecem unmated ao longo do ensaio) ou fadiga física (Figura 6F). Pelo contrário, este efeito é provavelmente explicada por uma diminuição em corte do macho durante o ensaio, a partir de 42,6 ± 8,0% (média ± SEM) (1 r h) a 2.0 ± 0.7% (média ± SEM) (última hora) de tempo nonmating (Figura 6C). Este declínio no namoro também é visto quando os machos são testados em ensaios de namoro com novas fêmeas (Figura 6D, 6E) </strong&gt;, e recupera depois os machos foram isolados a partir de fêmeas durante 3 d (Figura 6G, 6H). Estes resultados mostram que a unidade de acoplamento mantido internamente em moscas macho pode ser saciado em um ensaio de saciedade 2-D e podem recuperar com o tempo. O ensaio de saciedade 2-D também pode ser facilmente combinado com as manipulações neurais de Drosophila. Nós informou recentemente que a estimulação termogênico dos neurónios dopaminérgicos inverte unidade de acasalamento no sexo masculino saciado voa 25. Utilizando ensaios de saciedade 2-D, descobrimos que a estimulação dopaminérgica (TH&gt; TRPA1, 28,5 ° C), no final do ensaio de saciedade aumentada tanto corte (Figura 7A, 7C, vermelho) e a cópula (Figura 7A, 7B, vermelho). Os efeitos de reversão não são observados com genótipos de controlo parental (Figura 7A - 7C, preto e cinza). Todos estes resultados são consistentes com o estudo recente25 e sugerem que o ensaio de saciedade 2-D, juntamente com os ensaios de corte auxiliares (e locomoção), pode ser utilizado para dissecar os componentes moleculares e neuronais da unidade de acoplamento. <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig1.jpg" /> Figura 1. concepção e montagem de Arenas comportamentais. Uma arena 8-câmara (utilizadas para ensaios de saciedade 2-D) consiste em 6 camadas unidas por porcas e parafusos sextavados polegar (A). Uma arena 32-câmara (utilizado para os ensaios de corte) é fabricado de forma semelhante, mas sem a parede a comida (camada 4). As partes de arena são cortadas com um cortador a laser e as camadas são numerados como (B) para 8-câmara e (C) para 32 câmaras. As arenas de 8 câmaras montadas são mostrados em (D) (vista frontal) e (E) (vista lateral com camadas numeradas). As arenas de 32 câmaras montadas montados de um modo semelhante (f,<html> G), mas Camada 4 (parede de alimentos) é omitido (G) uma vez que nenhum alimento mosca é na arena para ensaios de corte. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55291/55291fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig2.jpg" /> Figura 2. Preparação de 2-D saciedade Os ensaios com os alimentos. Comida normal Drosophila é colocado em um frasco de micro-ondas com água (A). A comida é microondas até derreter (B). Uma ponta de pipeta embotada (C, seta) é usado para transferir alimentos de câmaras de uma arena comportamental parcialmente montada (D). A comida é re-solidificado a 4 ° C (E) antes da arena comportamental é completamente montada (F).pg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig3.jpg" /> Figura 3: Gerando Virgens fêmeas da w1118 (X) / hs-HID (Y) Stock. Garrafas de voar deve ser de calor chocado quando 50-80% das pupas são uneclosed como indicado pela sua opacidade (A). A imagem ampliada mostra exemplos de uneclosed (parte superior) e eclosed (parte inferior) pupas (A). Os frascos são carregados e submersa em 37 ° C banho de água quente durante 1 h com o nível de água um pouco acima da parte inferior das rolhas de garrafa para assegurar uniformidade de aquecimento (B). Veja a seta preta no (A) para a linha de água. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55291/55291fig3large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt = &quot;Figura 4&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 55291 / 55291fig4.jpg&quot; /&gt; Figura 4: Carregamento voa em uma Arena Comportamental. Aspirar cuidadosamente e mantenha 15 - 20 fêmeas na aspirador (A). A ponta da pipeta é utilizado para abrir a porta rotativa (B), e as moscas suavemente lançado para dentro da câmara (C). Use o aspirador para fechar a porta rotativa (D). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55291/55291fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig5.jpg" /> Figura 5: tocar e gravar a 2-D Saciedade de Ensaio. (A) uma câmara de vídeo padrão (a) é utilizado para registar o ensaio num incubador ajustado para a temperatura desejada. A incubadora contém um frasco de água (b) e um detector de humidade (C) para assegurar anível de umidade adequada (&gt; 30%). O ensaio de saciedade 2-D preparado é filmado sob a câmara de vídeo (B). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55291/55291fig5large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig6.jpg" /> Figura 6: Saciação e Recuperação de Fy Acasalamento Drive. Num ensaio de saciedade 2-D, moscas macho mate frequentemente durante as primeiras 2 horas do teste (A, B), mas diminuir o seu namoro (C) e acasalamentos (B) como o ensaio avança. A diminuição progressiva no comportamento de corte é mantida quando os machos são transferidos para um ensaio de corte com fêmeas novas depois de completar um ensaio de saciedade 2-D de 0 h, 1 h, or ou 4,5 h (D, E). As setas vermelhas apontam para os machos exibem namoro e acasalamento comportamentos, enquanto laranja arlinhas apontar para não-acasalamento, as moscas não-namoro (A, D). O declínio no comportamento sexual não é um resultado da exaustão física, como machos mostram níveis equivalentes de actividade locomotora antes e depois do ensaio de saciedade 2-D (F). Os machos recuperar gradualmente seu acasalamento (G) e os níveis de corte (H) mais de 3 d do isolamento das fêmeas. Nesta figura, *** p &lt;0,001, ** p &lt;0,01, NS não significativo para o t-teste (C, F) e ANOVA de uma via com o pós-teste de Tukey (E, G, H). N = 15-16 para cada condição para todas as experiências. As barras de erro representam o erro padrão da média (SEM). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55291/55291fig6large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 7" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig7.jpg" /> Figura 7: termogênico Saciedade<html> Reversão em Male moscas. Como no ensaio de saciedade 2-D padrão, machos mostram uma diminuição nos acasalamentos durante o decurso da experiência, mas a estimulação termogênico de neurónios dopaminérgicos (TH&gt; TRPA1, vermelho), mas não em parental-controlo genótipos (preto e cinzento), repõe acasalamento unidade em homens saciados (a). Sem acasalamentos são marcados quando o eixo X é quebrado em (A). Esta inversão da unidade de acoplamento pode ser quantificada utilizando quer os números de acoplamento (B) ou corte (C). Números do eixo X em (B) e (C) referem-se ao tempo em (A). Cor de fundo laranja indica estimulação termogênico (A - C). Nesta figura, *** p &lt;0,001, não NS significativo para interações entre genótipo e da temperatura em two-way ANOVA com Bonferroni pós-teste (B, C). N = 8 para cada genótipo (B, C). As barras de erro representam SEM..jove.com / files / ftp_upload / 55291 / 55291fig7large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Material suplementar 1. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55291/Supplemental_Material_1.zip" target="_blank">Por favor, clique aqui para fazer o download deste arquivo.</a> Material suplementar 2. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55291/Supplemental_Material_2.zip" target="_blank">Por favor clique aqui para baixar esse arquivo.</a>

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Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Este artigo descreve um ensaio comportamental que utiliza a unidade de acasalamento dos machos em Drosophila melanogaste r para estudar motivação. Usando este método, os pesquisadores podem utilizar técnicas neurogenéticos mosca avançada para descobrir os mecanismos genéticos, moleculares e celulares que fundamentam essa motivação.

Medir e alterando Acasalamento Drive em Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

measuring-and-altering-mating-drive-in-male-drosophila-melanogaster

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

11.0K visualizações.  Boston Children’s Hospital.  Este artigo descreve um ensaio comportamental que utiliza a unidade de acasalamento dos machos em Drosophila melanogaste r para estudar motivação. Usando este método, os pesquisadores podem utilizar técnicas neurogenéticos mosca avançada para descobrir os mecanismos genéticos, moleculares e celulares que fundamentam essa motivação. 

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Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are also a useful scientific model to study motion vision and flight dynamics in a controlled laboratory setting. As the larvae develop in organically polluted water, they are useful models for investigating investment in microbial immunity. While large scale commercial breeding for agriculture already occurs, there are no standardized protocols for maintaining captive populations for scientific studies. This is important as commercial captive breeding programs focusing on mass output during peak pollination periods may fail to provide a population that is consistent, stable and robust throughout the year, as is often needed for other research purposes. Therefore, a method to establish, maintain and refresh a captive research population is required. Here, we describe the utilization of an artificial hibernation cycle, in addition to the nutritional and housing requirements, for long term maintenance of Eristalis tenax. Using these methods, we have significantly increased the health and longevity of captive populations of E. tenax compared to previous reports. We furthermore discuss small scale rearing methods and options for optimizing yields and manipulating population demographics.

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

The overall goal of these procedures is to establish, maintain and refresh a captive population of Eristalis tenax in a research setting.

Criação e manutenção de longo prazo de Eristalis tenax Hoverflies para estudos de investigação

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...

Ambiente

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

Um método para testar o efeito de sugestões ambientais no comportamento de acoplamento em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Comportamento

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Métodos de Ensaio para Drosophila Comportamento

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Neurociência

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Ensaio simples para Quantificação de Prevenção Social<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Tingimento Insetos para Comportamentais Ensaios: o comportamento de acasalamento dos anestesiado<em&gt; Drosophila</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

Condições que afetam Espaço Social em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This complex behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. As in many organisms, previous fighting experience influences the fighting strategy of flies and the outcome of later contests: losing a fight increases the probability of losing later contests, revealing &#34;loser&#34; effects that likely involve learning and memory 2-4. The learning and memory that accompanies expression of complex social behaviors like aggression, is sensitive to pre-test handling of animals 5,6. Many experimental procedures are used in different laboratories to study aggression 7-9, however, no routinely used protocol that excludes handling of flies is currently available. Here, we report a new behavioral apparatus that eliminates handling of flies, using instead their innate negative geotactic responses to move animals into or out of fighting chambers. In this protocol, small circular fight arenas containing a food cup are divided into two equal halves by a removable plastic slider prior to introduction of flies. Flies enter chambers from their home isolation vials via sliding chamber doors and geotaxis. Upon removal of plastic sliders, flies are free to interact. After specified time periods, flies are separated again by sliders for subsequent experimentation. All of this is done easily without handling of individual flies. This apparatus offers a novel approach to study aggression and the associated learning and memory, including the formation of &#34;loser&#34; effects in fly fights. In addition, this new general-purpose behavioral apparatus can be employed to study other social behaviors of flies and should, in general, be of interest for investigating experience-related changes in fundamental behavioral processes.

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

During fruit fly fights, the behavioral patterns observed, fight dynamics, and associated learning and memory are influenced by experimental conditions. The protocol presented here describes a novel procedure that entirely eliminates handling of flies during experiments. This improves fight dynamics and allows formation of strong &#34;loser&#34; effects.

Uma nova abordagem que elimina a manipulação de Estudos de Agressão e Efeito &quot;perdedor&quot; em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Uma maneira simples para medir alterações na Recompensa comportamento de busca Usando<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Drosophila Courtship Acondicionamento Como Medida de Aprendizagem e Memória

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the number of successful mating events rather than on maximizing survival and viability 1. Sperm competition represents the competition between males after copulating with the same female 2, in which their sperm are coincidental in time and space. This phenomenon has been reported in multiple species of plants and animals 3. For example, wild-caught D. melanogaster females usually contain sperm from 2-3 males 4. The sperm are stored in specialized organs with limited storage capacity, which might lead to the direct competition of the sperm from different males 2,5.
Comparing sperm competitive ability of different males of interest (experimental male types) has been performed through controlled double-mating experiments in the laboratory 6,7. Briefly, a single female is exposed to two different males consecutively, one experimental male and one cross-mating reference male. The same mating scheme is then followed using other experimental male types thus facilitating the indirect comparison of the competitive ability of their sperm through a common reference. The fraction of individuals fathered by the experimental and reference males is identified using markers, which allows one to estimate sperm competitive ability using simple mathematical expressions 7,8. In addition, sperm competitive ability can be estimated in two different scenarios depending on whether the experimental male is second or first to mate (offense and defense assay, respectively) 9, which is assumed to be reflective of different competence attributes.
Here, we describe an approach that helps to interrogate the role of different genetic factors that putatively underlie the phenomenon of sperm competitive ability in D. melanogaster.

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

Differential sperm competitive ability among Drosophila males with distinct genotypes can be ascertained through double-mating experiments. Each of these experiments involves one of the males of interest and a reference male. Readily identifiable markers in the progeny allow inference of the fraction of individuals fathered by each male.

Avaliar as diferenças na capacidade competitiva do esperma em<em&gt; Drosophila</em

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the ...

Medir e alterando Acasalamento Drive em Male

Resumo

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Tingimento Insetos para Comportamentais Ensaios: o comportamento de acasalamento dos anestesiado

Condições que afetam Espaço Social em

Uma nova abordagem que elimina a manipulação de Estudos de Agressão e Efeito "perdedor" em

Uma maneira simples para medir alterações na Recompensa comportamento de busca Usando

Drosophila Courtship Acondicionamento Como Medida de Aprendizagem e Memória

Avaliar as diferenças na capacidade competitiva do esperma em