Name: long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs
Uploaded: 2016-03-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
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The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.

Todos os procedimentos em animais experimentais descritas, tanto no vídeo e manuscrito foram aprovados pelo Comitê Cuidado e Uso Institucional Animal e seguiu as orientações estabelecidas pelo Conselho Canadense de Animal Care. 1. anestesia cirúrgica e preparo cirúrgico do Pigs Neonatais <ol><li> Em uma antecâmara separada, premedicate 25 kg porcos perto da base do pescoço, com um cocktail de drogas sedativo-anestésico intramuscular contendo: azaperona (0,3 mg / kg), cloridrato de cetamina (10 mg / kg), a dexmedetomidina (15 ug / kg). Nota: Adicionar buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) no coquetel de drogas pré-anestésica para maior controle da dor intra-operatória. </li><li> Anestesiar os porcos com gás para inalação de isoflurano inalado (4-5% de isoflurano em 500 ml-1000 ml / min O 2) usando uma máscara facial. Visualizar as cordas vocais usando um espaço da laringe veterinário (lâmina reta 17-25 cm de comprimento), e aplicar tópica 10% spay lidocaína ao vocalcabos. Permitir que o spray de lidocaína a contactar as cordas vocais 30-60 seg antes da intubação para reduzir a possibilidade de espasmo das cordas vocais e obstrução das vias aéreas. </li><li> Entubar os porcos por meio de um tubo endotraqueal (5,0-7,0 mm de diâmetro interno (ID)) entre as cordas vocais e manter a anestesia com isoflurano gás (0,5-2,0% de isoflurano em 1.000-2.000 ml / min de O2) usando um fechada circuito de reinalação sistema anestésico durante toda a cirurgia. Avaliar o nível de anestesia pelo tom mandíbula, e ambas as respostas reflexas dos pedais e da pálpebra. gás anestésico expirado é eliminado e ventilado fora do centro cirúrgico. </li><li> Limpar a superfície exterior da orelha com uma solução de limpeza cirúrgica 2,0% de clorexidina seguido por uma lavagem com álcool isopropílico a 70%. Com um cateter intravenoso 20 L, catheterize uma veia da orelha para fornecer fluidos intravenosos (solução de lactato de Ringer; 5-10 ml / kg / hr) durante a cirurgia. Garantir um oxímetro de pulso à superfície da mucosa da língua, com medfita iCal para monitorar a frequência cardíaca ea saturação de oxigenação do sangue periférico (SpO2). </li><li> Coloque o porco anestesiado em uma posição reclinada dorsal e raspar o abdômen ventral a partir de meados do tórax caudalmente ao aspecto ventral do púbis. Limpar esta área com os dois alternando 2,0% clorexidina cirúrgico esfrega e lavagens de água estéril. </li><li> Transferir o porco anestesiados ao centro cirúrgico e aplicar a paramentação final de 70% lavagem de álcool isopropílico, deixe-a secar, e depois armar o animal. </li><li> Insira uma sonda de temperatura rectal cerca de 2-4 cm no recto para monitorizar a temperatura do corpo. Coloque os suínos de uma almofada de aquecimento de recirculação de água para manter a temperatura corporal normal (38-40 ° C) durante o procedimento cirúrgico. </li><li> Armar o porco com quatro toalhas cortinas colocadas em um padrão quadrante sobreposta em torno do abdômen. Coloque a primeira cortina em todo processo xifóide do esterno, a segunda cortina junto aspecto lateral do abdômen cerca de 5 cm lateral à linha média abdominal. Coloque a terceira cortina entre a crista do íleo da pelve e a quarta cortina, como a segunda cortina (embora no lado oposto), é colocada ao longo da face lateral do abdómen cerca de 5 cm lateralmente à linha média abdominal. </li><li> Coloque uma grande cortina de mesa, com uma fenda de abertura permitindo o acesso ao local da cirurgia, sobre as cortinas toalha subjacentes e cubra o porco e toda mesa cirúrgica. A cortina final é um Steri-cortina descartável colocado sobre a grande cortina mesa. </li></ol> 2. Cirurgia Abdominal e cateterismo do Tronco linfático intestinal <ol><li> Faça uma incisão na pele 20 cm, com uma lâmina de bisturi para expor os músculos abdominais subjacentes. Inciso as camadas musculares abdominais com electrocauterização mono-polar (20 configuração Watts) para expor o peritoneu parietal. Abra um segmento linear 20 cm de peritônio parietal com uma tesoura Metzenbaum para acessar as vísceras abdominais e vasos linfáticos. </li><li&gt; Coloque um retractor na face craniana da incisão cirúrgica para manter a cavidade abdominal aberta para a duração da cirurgia. </li><li> Humedecer todos os tecidos com água morna (37 ° C) de soro fisiológico estéril por todo o procedimento cirúrgico. Levante cuidadosamente um grande segmento do intestino incluindo o de cólon, ceco, íleo e jejuno da cavidade abdominal e exteriorizar-lo para o flanco esquerdo do porco para acessar a parte superior do abdome, fígado e vasos linfáticos. Fixe o intestino exteriorizado na posição com cortinas toalhas adicionais para formar um estilingue para apoiar delicadamente o intestino. </li><li> Localize o vaso linfático, estabelece aproximadamente 4 cm crânio-medial da veia renal direita, 6 cm ventral caudal-medial- dos capatazes cava e sob o aspecto visceral do lobo direito do fígado perto do pâncreas 22,36,37. Identificar o vaso linfático como uma estrutura transparente justaposto ao segmento ventral direito da veia porta 36,37. </li><li> Separe o Vess linfáticael dos fascia em torno suavemente provocando afastado o tecido anexado com aplicadores Q-tip. Uma vez que os aspectos laterais do recipiente são separados a partir do tecido circundante, criar uma abertura &quot;túnel&quot; debaixo do navio com excelentes sem corte com ponta fórceps. </li><li> Passe três 2-0 suturas de seda por baixo do vaso linfático com uma pinça fina. Ligadura da sutura mais caudal primeira para ocluir, dilatar e encher o recipiente com linfa. Propositadamente deixar as extremidades deste fio de sutura relativamente longo (4 cm), para fixar o cateter para o vaso linfático. Colocar duas outras suturas separadas de 1,0 cm um do outro e são de aproximadamente 1,0-1,5 cm cranianos à sutura caudal garantido. Deixar estas duas suturas com um &quot;laço solto ligadura único&quot; para permitir a fixação mais rápido do cateter para dentro do vaso. Nota: O segmento do vaso linfático localizado entre o fio de sutura ligaï¿½o da sutura e mais caudal do meio (de as duas suturas cranianas) é o local para a cateterização. Em relação sumaterial de ture, poliglactina 2-0 sutura pode substituir o fio de seda 2-0, se necessário. </li><li> Corte um pequeno buraco dentro do vaso com íris tesouras e dilatar o vaso com uma pinça sem corte finas. Inserção de aproximadamente 1,0-1,5 cm de tubo de cateter especializado (4,06 Diâmetro exterior (OD) X 2,31 milímetros ID) com uma extremidade chanfrada para dentro do vaso e amarrar as duas suturas cranianas para fixar o cateter no lugar. Use as extremidades longas de sutura da sutura de caudal para fixar o cateter para o recipiente. </li><li> Lave o intestino exteriorizado com grandes quantidades de solução salina quente e devolvê-lo suavemente para a cavidade abdominal garantindo posicionamento anatômico correto do intestino. </li><li> Exteriorizar o cateter no flanco meados esquerda (5-10 cm ventral da fossa paralombar). Adicione uma incisão na pele com um bisturi e passar um trocarte a partir da cavidade abdominal para a superfície da pele para criar uma abertura para a exteriorização do cateter. Use um grande fórceps de Kelly para exteriorizar o cateter da cav abdominaldade através da abertura trocar. </li><li> Fechar o peritônio parietal com um padrão de sutura simples contínua de poliglactina 2-0 sutura com uma agulha rodada (cônico). Feche as camadas musculares abdominais com um padrão de sutura simples interrompido com uma sutura de poliglactina 2-0 em uma agulha rodada. </li><li> Feche a pele em um padrão subcuticular com poliglactina 2-0 sutura em uma agulha de corte. Fixe o cateter exteriorizada na pele com um padrão de sutura em bolsa e uma sutura 2-0 nylon em uma agulha de corte. </li><li> Coloque um revestimento especializado no porco enquanto ainda anestesiados para facilitar sua colocação e reduzir o estresse do porco durante a recuperação. </li></ol> Recuperação 3. pós-cirúrgica e Cobrança A linfa <ol><li> Cerca de 10 minutos antes da interrupção da anestesia inalatória, administrar bupenorphine (0,1 mg / kg) por via intramuscular para fornecer imediato analgesia pós-cirurgia. Continuar bupenorphine (0,1 mg / kg) a cada 12 h durante 24-48 h, para manteranalgesia pós-cirurgia. </li><li> Monitorar os porcos para complicações pós-cirúrgicas a cada 8-12 horas, por um período de 7 dias. </li><li> Recolha a linfa em 500 ml de frascos de lavagem de polipropileno, revestido com ácido etilenodiamina tetraacético (EDTA), e suplementado com antibióticos; penicilina (6000 UI), estreptomicina (6 mg) e anfotericina B (3 mg) a cada 12 h durante um período de 7 dias. </li></ol> 4. Quantificação de Lipoproteína apoB48, triglicerídeos, colesterol e proteína total arrecadado de linfa <ol><li> Centrifugar a amostra de linfa a 1.800 xg durante 5 min a 4 ° C. Recolhe-se o sobrenadante e usá-lo para a quantificação de triglicéridos, colesterol e proteína total. </li><li> Divide-se o sobrenadante em três amostras: uma amostra não diluída, uma amostra diluída 1:20 água destilada e uma amostra final foi diluído 1: 100 com água destilada. </li><li> Utilizar o sobrenadante não diluído para medir os níveis de colesterol, com um kit disponível comercialmente. </li><li> Use a 1:20 e 1:100 amostras diluídas para medir triglicérido e os níveis totais de proteína com um kit comercialmente disponível e o ensaio de proteína total de ácido bicinconínico respectivamente. </li></ol> 5. Quantificação de Lipoproteína apoB48, coletados a partir de linfa 38 <ol><li> Determinar a concentração de lipoproteína de apoB48 com um método imunológico Ocidental adaptado Blotting 38. linfa total de separada, com 3-8% de dodecil sulfato de sódio a electroforese em gel de poliacrilamida Tris-etilo-(SDS-PAGE). </li><li> Transferir as proteínas separadas para uma membrana de fluoreto de polivinilideno (0,45 um) e incube-as com um anticorpo policlonal de cabra para a ApoB (1: 4000), então ligá-lo com um anticorpo secundário anti-cabra. </li><li> Quantificar a lipoproteína apoB48 com quimiluminescência usando uma comparação densitométrica linear com padrão de proteína apoB48 purificado roedor. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Coleta de linfa intestinal é um excelente método para investigar mecanismos envolvidos na lipídico 8-12 e 13-15 de drogas metabolismo, a metástase do câncer 16,17, o tráfico de celular e função imunológica 18-26, em vários modelos animais experimentais. Com efeito, a capacidade de colher grandes quantidades de um ou outro periférico (aferente) e central (eferente e grandes vasos do tronco) linfa durante um período prolongado tem sido particularmente importante para compreender alterações temporais que ocorrem nas populações de células seguintes desafios com agentes moduladores imunes 18-22 , 25,26. De igual modo, a recolha de linfa central tem sido úteis para delinear os processos envolvidos no metabolismo de lipoproteínas de 12/08. O utilitário de recolha de linfa é dependente do sucesso do procedimento de cateterização e a permeabilidade do cateter no interior do vaso linfático. Cateterismo dos principais vasos linfáticos envolvidos nadrenagem linfática intestinal em animais de grande porte geralmente usa uma das três abordagens cirúrgicas. A primeira técnica utiliza uma abordagem cranial ombro para entrar no ducto torácico sobrepondo-se a veia jugular comum (vaca ducto torácico) 5. A segunda utiliza uma abordagem flanco superior sobre o aspecto médio-lateral do rim direito 32,33. A terceira técnica, tal como descrito neste vídeo emprega quer uma linha média ventral ou paramediana 22,35 laparotomia para expor o tronco linfático intestinal perto do pâncreas e justaposta à face ventral direito da veia portal 22,36,37. Embora tanto o flanco superior e da linha média ventral técnicas cirúrgicas permitem cateterismo do tronco linfático intestinal, nós acreditamos que a abordagem ventral permite uma melhor exposição do navio com espaço adequado dentro do abdômen superior de manusear e manipular o navio. Importante, como em qualquer cirurgia experimental existem passos que são particularmente crucial para o êxito do procedimento experimental. Há quatro áreas-chave que exigem atenção cuidadosa utilizando a abordagem ventral para acessar o vaso linfático intestinal. Em primeiro lugar, excelente fornecimento de sangue ao intestino exteriorizado é necessário, com o seu prolongamento circulação comprometida para o intestino induz necrose da mucosa intestinal isquémica e falha cirúrgica. Neste procedimento uma &#39;funda toalha&#39; reduz a tensão sobre os vasos sanguíneos mesentéricos por suportar o peso dos intestinos que asseguram excelente perfusão tecidual. Em segundo lugar, as manipulações cuidadosas do vaso, incluindo: a libertação do recipiente a partir circundante fáscia e do tecido adiposo, a inserção e a firmemente fixar o cateter no interior do vaso para a recolha de linfa de longo prazo é crítica para cateterismo bem sucedida. Com efeito, sugeriu-se que a integridade estrutural dos vasos em porcos recém-nascidos não é tão robusto como em animais maduros e, como tal, pode facilmente rasgar 39,40 </sup&gt;. Usando aplicadores Q-Tip para lenta e suavemente separada camadas fasciais e instrumentos terminou-cegas finos para passar a sutura debaixo do navio reduz muito a punção inadvertida ou rompimento do vaso linfático. O manuseio descuidado do navio, muitas vezes cria uma embarcação friável com fraca estrutura de tomada de cateterismo muito desafiador. Em terceiro lugar, uma causa comum de falha é a cateterização não intencional &#39;puxando-o para fora do cateter&#39; a partir do vaso linfático. Protegendo o cateter directamente para o recipiente reduz a incidência de perda de cateter. Isto é conseguido mediante a ligação do cateter directamente ao vaso com fio de sutura caudal utilizado para dilatar o vaso. Finalmente, é importante para assegurar um bom fluxo linfático está presente cateterismo seguinte e antes do fechamento do abdómen. Com efeito, se o fluxo de linfa é lento durante o procedimento, ao longo do tempo este induz a formação de coágulos no interior do cateter e reduz acentuadamente o período de colheita de linfa. Em exper do investigadorIENCE, com recolha de linfa longo prazo da linfa não-intestinal de ovinos 41, é muito difícil de remover do coágulo a partir do cateter que o coágulo desenvolve no interior do cateter e é profunda no interior do vaso linfático. Consequentemente, isso irá reduzir significativamente (aproximadamente 40%) o número de animais sondados com sucesso a longo prazo de experimentação (dados não publicados). Portanto, se o fluxo de linfa é retardado ou foi descontinuado durante o procedimento, o cateter linfático deve ser reinserido cranialmente 0,5-1 cm do local inicial cateterismo. Todos os modelos utilizados para investigar questões científicas têm limitações inherant e cateterismo do tronco linfático intestinal não é excepção. A limitação mais pronunciado para o processo é a incapacidade de isolar de forma eficaz, cateterização do vaso linfático, e estabilizar o cateter no interior do vaso. Como tal, este procedimento requer pessoas com excelente habilidade técnica e cirúrgicos. Outra limitação importante é que os tempos cirúrgicos prolongados durante grande cirurgia abdominal aumenta o risco e morbidade e mortalidade pós-cirúrgica. Notavelmente, entretanto, os suínos em nosso experimento recuperou rapidamente da cirurgia e não houve complicações como infecções, íleo intestinal, lesão tecidual excessiva, ou inapetência após o procedimento. Certamente, os porcos foram observados para ser brilhante, ágil, deambulação e comer normalmente 24 horas após a cirurgia e isso continuou durante o período de coleta de linfa de 7 dias. Notavelmente, embora químicas do soro ou hemogramas completos não foram avaliados nestes porcos após o experimento de 7 dias, o trabalho anterior pelos pesquisadores na coleta de linfa de longo prazo em ovinos 41 demonstraram que as ovelhas sondados nunca foi leucopênica, linfopênicos, hypoproteinemic com desequilíbrio eletrolítico ou clinicamente retratando má saúde (dados não publicados). Importante e, como já foi referido, esta observação se correlaciona com catheteriporcos zed também exibindo características clínicas de boa saúde. Curiosamente, os investigadores observaram variações no volume do fluxo da linfa. O fluxo foi maior durante o dia quando os porcos foram alimentação e activa com cerca de 70% da linfa recolhidas diariamente ocorrendo neste momento. Os restantes 30% do fluxo da linfa acontece à noite durante o repouso e sono. A caracterização adicional de amostras linfáticos são fornecidos nas Figuras 1, 2 e Tabela 1. A Figura 1 demonstra uma pequena quantidade de contaminação com aproximadamente 15% de derivado de plasma ApoB100. A presença de lipoproteína de plasma dentro da linfa intestinal é uma observação que muitas vezes ocorre em suínos 42. Em leitões, a maioria da lipoproteína é produzida pelo fígado e libertados no plasma. A partir do plasma, ApoB100 provável infiltra lacteals recolha 42 e então através da rede vascular linfáticodrena para o tronco linfático intestinal. Vários métodos de cromatografia são usados ​​para avaliar o colesterol, triglicéridos e outros conteúdos de fosfolípidos em amostras linfáticos recolhidas 42-45. O único pico na Figura 2 demonstra claramente o colesterol e triglicéridos estão presentes na fracção de quilomicra. Este método é uma técnica conveniente e preciso do perfil de lipoproteínas linfáticos e deve ser considerado na avaliação da pureza das amostras de quilomícrons da linfa intestinal 45. Finalmente, a Tabela 1 fornece os componentes bioquímicos de linfa intestinal colhidas em suínos neonatais 7 dias pós-cirurgia. Em conclusão, a cateterização a longo prazo do tronco linfático intestinal é bem sucedido em porcos jovens. Com esta técnica, a cateterização linfático pode ser utilizado para recolher e componentes de investigar o metabolismo dos lípidos. A pureza da linfa, a quantidade de linfa produzido e as quantidades dos componentes do metabolismo lipídicosão semelhantes aos valores presentes no porco linfático central em outros experimentos 9,25,26,42. Os resultados indicam que o emprego de uma linha média abordagem cirúrgica ventral com dissecção dos tecidos cuidadoso e vaso manusear a cateterização do tronco linfático intestinal em leitões é um excelente método para coletar grandes quantidades de linfa central.

O sistema linfático é uma área pouco estudada da fisiologia. Modelos pré-clínicos de cateterismo linfático ocorrer em diferentes espécies animais e 1-8 são utilizados pelas indústrias farmacêuticas e instituições de investigação para investigar mecanismos envolvidos em lípidos 8-12 e 13-15 metabolismo da droga, metástase de câncer 16 com tratamento experimental 17, 18 e a função imunológica -26. Este estudo explora o uso de cateterismo intestinal tronco linfático em um modelo de porco doméstico para medir componentes do metabolismo de lipoproteínas. metabolismo das lipoproteínas está envolvido na produção e secreção de quilomicrons, bem como as alterações nos lípidos associados e proteína total. Essas considerações são importantes, pois há grandes diferenças no metabolismo lipídico entre modelos de roedores comumente usados ​​e os seres humanos e, como tal, empregando modelos de suínos para coletar linfa intestinal poderia fornecer informação mais comparável para o estudo de lipídios memetabolização em pessoas 27-31. Várias técnicas cirúrgicas são usados ​​para coletar a linfa intestinal em espécies de animais de grande porte: uma abordagem ombro cranial (ou seja, o cateterismo ducto torácico) 5, uma abordagem lateral superior flanco 32-34, e uma linha média ventral ou abordagem paramediana 22,35. Este vídeo descreve em detalhes o procedimento cirúrgico em suínos utilizando uma abordagem cirúrgica ventral para o cateterismo do tronco linfático intestinal. Cuidadosas autorizações técnicas cirúrgicas este método de cateterismo linfática para recolher grandes quantidades de linfa e dos seus componentes ao longo de períodos de tempo prolongados. Esta técnica abre uma miríade de aplicações para muitas disciplinas que examinam várias funções fisiológicas. Aplicações podem incluir, mas não estão limitados a, todo lipoproteína corpo e o metabolismo lipídico, imunovigilância, génese de tumores e metástases, função intestinal, e a development e progressão da doença inflamatória intestinal.

<table><tbody><tr><td>Miller laryngoscope blade</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm length</td></tr><tr><td>Surgivet advisor: Vital signs monitor</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Rectal temperature probe</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Mono-polar electrosurgery generator</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Tuffier retractor</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly forceps-curved (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Allis tissue forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-eye (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Needle Drivers</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Circulating water pump</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip applicators</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Catheterization&amp;nbsp; tubing (4.06 OD X 2.31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Micro-Renethane implantation tubing</td></tr><tr><td>2-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Large animal jacket</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene wash bottles</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Animal Health</td><td></td><td>Stresnil</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&amp;nbsp; Health</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Bupenorphine hydrochloride</td><td>Champion Alstoe Animal Health</td><td></td><td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Endotracheal tube</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Lidocaine spray</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Chlorhexidine surgical scrub</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluted: 2.0% solution</td></tr><tr><td>3M Surgical steri- drape</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % tris acetate</td></tr><tr><td>Polyvinylidene fluoride membrane</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0.45 &amp;mu;m pore size</td></tr><tr><td>ApoB antibody&amp;nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Reagent</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triglyceride Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Total Protein</td><td>&amp;nbsp;Pierce&amp;nbsp;</td><td>23225</td><td>Bicinchoninic Acid Assay</td></tr></tbody></table>

long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

<html> cateterismo linfática do tronco linfático intestinal de suínos neonatal permite a coleta de cerca de 1 L / 24 hr da linfa centro durante um período de 7 dias. A linfa recolhida neste experiências continha componentes do metabolismo de lípidos, proteínas ou seja total de linfa, apoB48 lipoproteína, triglicéridos, proteína total, e colesterol. Tabela 1 destaca valores representativos destes componentes lipídicos de amostras linfáticos agrupados de três porcos. Notavelmente, o fluxo de linfa e componentes lipídicos estão em linha com os valores de linfa centro relatados por outros investigadores seguintes cateterismo dos vasos linfáticos intestinais (linfa flui 570 ± 158 para 979 ± 284 ml / 24 h 25, 360 ± 120 MLL / 24 horas para 1080 ± 720 ml / 24 h 26; triglicérides 687 ± 110 mg / dL 9; colesterol 63,1 ± 5,6 mg / dL 9); que indica a colocação correcta do cateter no interior do vaso linfático. onteúdo &quot;fo: manter-together.within-page =&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig2.jpg" /> Figura 2. Um perfil de Proteínas Rápida cromatografia líquida (FPLC) que demonstra a pureza da preparação de quilomicron no porco neonatal linfático intestinal. Linfáticos coletadas de três porcos é separada usando uma 1,006 g / ml protocolo de gradiente de densidade de ultracentrifugação. O perfil mostra um único pico de (A) colesterol e (B) de triglicéridos na amostra de linfa. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53457/53457fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/53457/53457fig1.jpg" /> Figura 1. A análise de Western blot representante demonstrando a contribuição de apoB48 e ApoB100 lipoproteínas no porco neonatal linfático intestinal. A linfa coletadas de trêssuínos é separado utilizando um 1,006 g / ml protocolo de ultracentrifugação de gradiente de densidade. A figura demonstra uma pequena quantidade de contaminação com aproximadamente 15% do derivado do plasma ApoB100. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53457/53457fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td></td><td> Características linfáticos </td></tr><tr><td> ApoB48 (mg / ml) </td><td> 3022,4 ± 440,4 </td></tr><tr><td> Triglicéridos (mg / dl) </td><td> 607 ± 203,6 </td></tr><tr><td> O colesterol (mg / dl) </td><td> 58,5 ± 9,6 </td></tr><tr><td colspan="2"> Os resultados são expressos como média ± SD (n = 3) </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Componentes de linfa intestinal recolhidos de porcos neonatais 7 dias pós-cirurgia. Os resultados são repetidos measures de linfa e expressos em média SD (n = 3)

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Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Long-Term Cateterismo do tronco linfa intestinal e Recolha de linfa no Neonatais Pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

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Nanyang Technological University

Research

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Medicine

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Vídeo: Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Multispectral Real-time Fluorescence Imaging for Intraoperative Detection of the Sentinel Lymph Node in Gynecologic Oncology

The prognosis in virtually all solid tumors depends on the presence or absence of lymph node metastases.1-3 Surgical treatment most often combines radical excision of the tumor with a full lymphadenectomy in the drainage area of the tumor. However, removal of lymph nodes is associated with increased morbidity due to infection, wound breakdown and lymphedema.4,5 As an alternative, the sentinel lymph node procedure (SLN) was developed several decades ago to detect the first draining lymph node from the tumor.6 In case of lymphogenic dissemination, the SLN is the first lymph node that is affected (Figure 1). Hence, if the SLN does not contain metastases, downstream lymph nodes will also be free from tumor metastases and need not to be removed. The SLN procedure is part of the treatment for many tumor types, like breast cancer and melanoma, but also for cancer of the vulva and cervix.7 The current standard methodology for SLN-detection is by peritumoral injection of radiocolloid one day prior to surgery, and a colored dye intraoperatively. Disadvantages of the procedure in cervical and vulvar cancer are multiple injections in the genital area, leading to increased psychological distress for the patient, and the use of radioactive colloid.
Multispectral fluorescence imaging is an emerging imaging modality that can be applied intraoperatively without the need for injection of radiocolloid. For intraoperative fluorescence imaging, two components are needed: a fluorescent agent and a quantitative optical system for intraoperative imaging. As a fluorophore we have used indocyanine green (ICG). ICG has been used for many decades to assess cardiac function, cerebral perfusion and liver perfusion.8 It is an inert drug with a safe pharmaco-biological profile. When excited at around 750 nm, it emits light in the near-infrared spectrum around 800 nm. A custom-made multispectral fluorescence imaging camera system was used.9.
The aim of this video article is to demonstrate the detection of the SLN using intraoperative fluorescence imaging in patients with cervical and vulvar cancer. Fluorescence imaging is used in conjunction with the standard procedure, consisting of radiocolloid and a blue dye. In the future, intraoperative fluorescence imaging might replace the current method and is also easily transferable to other indications like breast cancer and melanoma.

Fluorescence imaging is a promising innovative modality for image-guided surgery in surgical oncology. In this video we describe the technical procedure for detection of the sentinel lymph node using fluorescence imaging as showcased in gynecologic oncologicy. A multispectral fluorescence camera system, together with the fluorescent agent indocyanine green, is applied.

Imagens em tempo real multiespectrais de fluorescência para detecção intra-operatória do linfonodo sentinela em Oncologia Ginecológica

The prognosis in virtually all solid tumors depends on the presence or absence of lymph node metastases.1-3 Surgical treatment most often combines radical ...

Medicina

A Swine Model of Neonatal Asphyxia

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, perfusion deficit, hypoxic-ischemic encephalopathy, pulmonary hypertension, vasculopathic enterocolitis, renal failure and thrombo-embolic complications. Animal models are developed to help us understand the patho-physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. In comparison to rodents and newborn lambs, the newborn piglet has been proven to be a valuable model. The newborn piglet has several advantages including similar development as that of 36-38 weeks human fetus with comparable body systems, large body size (&tilde;1.5-2 kg at birth) that allows the instrumentation and monitoring of the animal and controls the confounding variables of hypoxia and hemodynamic derangements.
We here describe an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia and allow us to examine the systemic and regional hemodynamic changes during the asphyxiating and reoxygenation process as well as the respective effects of interventions. Further, the model has the advantage of studying multi-organ failure or dysfunction simultaneously and the interaction with various body systems. The experimental model is a non-survival procedure that involves the surgical instrumentation of newborn piglets (1-3 day-old and 1.5-2.5 kg weight, mixed breed) to allow the establishment of mechanical ventilation, vascular (arterial and central venous) access and the placement of catheters and flow probes (Transonic Inc.) for the continuously monitoring of intra-vascular pressure and blood flow across different arteries including main pulmonary, common carotid, superior mesenteric and left renal arteries. Using these surgically instrumented piglets, after stabilization for 30-60 minutes as defined by Z&lt;10% variation in hemodynamic parameters and normal blood gases, we commence an experimental protocol of severe hypoxemia which is induced via normocapnic alveolar hypoxia. The piglet is ventilated with 10-15% oxygen by increasing the inhaled concentration of nitrogen gas for 2h, aiming for arterial oxygen saturations of 30-40%. This degree of hypoxemia will produce clinical asphyxia with severe metabolic acidosis, systemic hypotension and cardiogenic shock with hypoperfusion to vital organs. The hypoxia is followed by reoxygenation with 100% oxygen for 0.5h and then 21% oxygen for 3.5h. Pharmacologic interventions can be introduced in due course and their effects investigated in a blinded, block-randomized fashion.

Large animal models have good translational values in the examination of physiology and pharmacology of neonatal asphyxia. Using newborn piglets, we develop an experimental protocol to simulate neonatal asphyxia which has advantages of studying the systemic and regional hemodynamics, oxygen transport with biochemical and pathologic pathways and correlations.

Um Modelo de Suínos de asfixia neonatal

Annually more than 1 million neonates die worldwide as related to asphyxia. Asphyxiated neonates commonly have multi-organ failure including hypotension, ...

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future therapies. Severe lung injury with a reproducible deterioration of pulmonary gas exchange and hemodynamics can be induced in anesthetized pigs using repeated lung lavages with warmed 0.9% saline (50 ml/kg body weight). Including standard respiratory and hemodynamic monitoring with clinically applied devices in this model allows the evaluation of novel therapeutic strategies (drugs, modern ventilators, extracorporeal membrane oxygenators, ECMO), and bridges the gap between bench and bedside. Furthermore, induction of lung injury with lung lavages does not require the injection of pathogens/endotoxins that impact on measurements of pro- and anti-inflammatory cytokines. A disadvantage of the model is the high recruitability of atelectatic lung tissue. Standardization of the model helps to avoid pitfalls, to ensure comparability between experiments, and to reduce the number of animals needed.

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome ARDS

Repeated pulmonary lavages in anesthetized pigs induce lung injury resembling major aspects of human acute respiratory distress syndrome (ARDS). For this purpose the lungs are repeatedly lavaged with 0.9% saline at 37 &#176;C. The goal of the protocol is a reproducible mitigation of gas exchange and hemodynamics for research in ARDS.

induzida por lavagem de surfactante Esgotamento em porcos como modelo da Síndrome da Angústia Respiratória Aguda (SARA)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future ...

Surgical Placement of Catheters for Long-term Cardiovascular Exercise Testing in Swine

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early cardiopulmonary dysfunction is difficult to diagnose, particularly in animal models, as cardiopulmonary function is often measured invasively, requiring anesthesia. As many anesthetic agents are cardiodepressive, subtle changes in cardiovascular function may be masked. In contrast, chronic instrumentation allows for measurement of cardiopulmonary function in the awake state, so that measurements can be obtained under quiet resting conditions, without the effects of anesthesia and acute surgical trauma. Furthermore, when animals are properly trained, measurements can also be obtained during graded treadmill exercise.
Flow probes are placed around the aorta or pulmonary artery for measurement of cardiac output and around the left anterior descending coronary artery for measurement of coronary blood flow. Fluid-filled catheters are implanted in the aorta, pulmonary artery, left atrium, left ventricle and right ventricle for pressure measurement and blood sampling. In addition, a 20 G&#160;catheter is positioned in the anterior interventricular vein to allow coronary venous blood sampling.
After a week of recovery, swine are placed on a motor-driven treadmill, the catheters are connected to pressure and flow meters, and swine are subjected to a five-stage progressive exercise protocol, with each stage lasting 3 min. Hemodynamic signals are continuously recorded and blood samples are taken during the last 30 sec of each exercise stage.
The major advantage of studying chronically instrumented animals is that it allows serial assessment of cardiopulmonary function, not only at rest but also during physical stress such as exercise. Moreover, cardiopulmonary function can be assessed repeatedly during disease development and during chronic treatment, thereby increasing statistical power and hence limiting the number of animals required for a study.

Here we present a protocol to assess cardiopulmonary function in awake swine, at rest and during graded treadmill exercise. Chronic instrumentation allows for repeated hemodynamic measurements uninfluenced by cardiodepressive anesthetic agents.

Cirurgia de colocação de cateteres para Cardiovascular Testes exercício de longo prazo em Suínos

This protocol describes the surgical procedure to chronically instrument swine and the procedure to exercise swine on a motor-driven treadmill. Early ...

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces and has been implicated in the clearance of neurotoxic peptides such as amyloid-beta. Impaired glymphatic function exacerbates disease pathology in animal models of neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's, which highlights the importance of understanding this clearance system. The glymphatic system is often studied by cisterna magna cannulations (CMc), where tracers are delivered directly into the cerebrospinal fluid (CSF). Most studies, however, have been carried out in rodents. Here, we demonstrate an adaptation of the CMc technique in pigs. Using CMc in pigs, the glymphatic system can be studied at a high optical resolution in gyrencephalic brains and in doing so bridges the knowledge gap between rodent and human glymphatics.

This article presents a step-by-step protocol for the direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs.

Implantação direta de cânula na Cisterna Magna dos Porcos

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Neurociência

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

Observação microscópica da Dinâmica do Linfócito em Patches de Rat Peyer

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries does not solely rely on the research team's surgical skills; perioperative care and management procedures, like intubation, central venous line, and arterial line placement, are necessary and of the utmost importance for favorable experiment results. As it is uncommon for research teams to have anesthesiologists or any other staff other than the surgical team, the surgical team involved in translational research must acquire and/or develop the skills to perform the perioperative care. The purpose of this paper is to show the techniques of intubation, central venous catheter, and arterial line placement used and perfected at the Toronto Organ Preservation Laboratory over the last 10 years, to be used as a reference for future researchers joining either this team or any other lab performing translational research protocols in swine and/or abdominal transplantation.

To obtain the best possible results, surgeons performing translational research experiments should be proficient at intubation and vascular line placement. This paper describes the techniques used by the Toronto Organ Preservation Laboratory to perform these procedures.

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries ...

Cateter de Hickman para acesso vascular de longo prazo em suínos

Hickman Catheter Use for Long-Term Vascular Access in a Preclinical Swine Model

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood monitoring and reliable intravenous fluid and drug administration. Specifically, the tunneled multi-lumen Hickman catheter (HC) is commonly used in swine models due to its lower extrication and complication rates. Despite fewer complications relative to other CVCs, HC-related morbidity presents a significant challenge, as it can significantly delay or otherwise negatively impact ongoing studies. The proper insertion and maintenance of HCs is paramount in preventing these complications, but there is no consensus on best practices. The purpose of this protocol is to comprehensively describe an approach for the insertion and maintenance of a tunneled HC in swine that mitigates HC-related complications and morbidity. The use of these techniques in &gt;100 swine has resulted in complication-free patent lines up to 8 months and no catheter-related mortality or infection of the ventral surgical site. This protocol offers a method to optimize the lifespan of the HC and guidance for approaching issues during use.

Autor em destaque: Uso do cateter de Hickman para acesso vascular de longo prazo em um modelo suíno pré-clínico  

A reliable and reproducible approach for the insertion and maintenance of a tunneled Hickman catheter for long-term vascular access in swine is described. Placement of a central venous catheter allows for convenient daily sampling of whole blood from awake animals and intravenous administration of medication and fluids.

Uso do cateter de Hickman para acesso vascular de longa permanência em modelo pré-clínico de suínos

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood ...

Long-Term Cateterismo do tronco linfa intestinal e Recolha de linfa no Neonatais Pigs

Resumo

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Imagens em tempo real multiespectrais de fluorescência para detecção intra-operatória do linfonodo sentinela em Oncologia Ginecológica

Um Modelo de Suínos de asfixia neonatal

induzida por lavagem de surfactante Esgotamento em porcos como modelo da Síndrome da Angústia Respiratória Aguda (SARA)

Cirurgia de colocação de cateteres para Cardiovascular Testes exercício de longo prazo em Suínos

Implantação direta de cânula na Cisterna Magna dos Porcos

Observação microscópica da Dinâmica do Linfócito em Patches de Rat Peyer

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Uso do cateter de Hickman para acesso vascular de longa permanência em modelo pré-clínico de suínos

Uso do cateter de Hickman para acesso vascular de longa permanência em modelo pré-clínico de suínos

Uso do cateter de Hickman para acesso vascular de longa permanência em modelo pré-clínico de suínos