Este trabalho foi financiado pelo Conselho de Pesquisa sueco.

Todos os procedimentos são realizados de acordo com o Guia NIH para Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. 1. Animal Care e Habitação <ol><li> Após a chegada na colônia, os ratos casa machos Wistar pesando 200-225 g à chegada em pares em uma temperatura (21 ° C) e meio ambiente com humidade controlada, com um ciclo claro-escuro de 12 h revertida. Nota: Dependendo da lógica dos experimentos, os ratos podem ser alojados individualmente. </li><li> Permitir que os ratos para se aclimatar ao biotério e o ciclo de luz por pelo menos uma semana antes de iniciar uma experiência e lidar com eles diariamente. Pesar os animais uma vez por semana. </li><li> Dê ratos livre acesso à comida e água da torneira para a duração do experimento (privação de água não é necessário iniciar responder 12). Realizar todos os testes de comportamento durante a fase escura do ciclo claro-escuro de uma sala de testes escuro. Nota: Embora nós usam rotineiramente jovens ratos Wistar machos adultos (dias pós-natal 62 - 65), este protocolo pode, teoricamente, ser adequado para investigar outras estirpes de ratos, assim como as diferenças de sexo e / ou idade. </li></ol> 2. Formação Operant <ol><li> Realizar todo o treinamento comportamental e testes em câmaras operantes idênticos medindo 30,5 × 29,2 × 24,1 cm e contendo pisos de arame e panelas de resíduos alinhados com roupa de cama (trocadas entre animais para reduzir marcas olfactivas), alojados em cubículos de atenuação de som equipados com exaustores para ventilação . Nota: Os ratos são treinados por operante condicionado a partir de um dia de formação (uma resposta numa alavanca é necessária para obter um reforçador) entre + + 1 h e 8 h de escuro no ciclo. Não há pré-exposição ao álcool, nem comida ou a elaboração de líquidos antes do treino álcool. </li><li> Equipar cada câmara operante com luzes de estímulo, bombas de seringa e duas alavancas retrácteis posicionado lateralmente para um receptáculo copo de líquido. câmaras de interface e controle de um computador utilizando o software apropriado. Nota:A maioria dos fornecedores irá fornecer pacotes de auto-administração que contêm todos os componentes necessários, bem como software e interfaces necessárias para controlar as câmaras. </li><li> Escrever um programa operante condicionado que inicia o esquema de razão fixa (FR) de reforço 20% de etanol (a programação operante no qual uma resposta é reforçada só depois de um determinado número de respostas) de acordo com as instruções do fabricante. Por exemplo, em uma proporção fixa 1, os ratos têm uma resposta para produzir obter um reforçador (ver a secção suplementar arquivos de código para um exemplo de um programa de FR1). Execute os seguintes comandos. <ol><li> Estender duas alavancas para marcar o início da sessão e para sinalizar a disponibilidade do álcool. Nota: Uma pressão da alavanca sobre a alavanca associada com etanol (activa) é recompensado através da entrega de um volume de 100 uL de 20% de etanol em água no adjacente beber bem e inicia a 5 s período de tempo limite concomitante assinalado pela iluminação docue-luz acima da alavanca. O cue-luz é introduzido no dia 1 do treinamento. </li><li> Durante o período de tempo limite, ficha responder ainda que não tem consequências programadas. Registre as respostas na outra alavanca (inativo), embora eles nunca ter consequências comportamentais. Nota: A alavanca inactiva serve como um controlo para avaliar o comportamento não-específica. </li><li> Grave o número de respostas na alavanca ativa (taxas de resposta) e o número de 20% de etanol recompensas ganhos. </li><li> Após 30 minutos terem decorrido, retrair as duas alavancas para sinalizar o fim da sessão e para sinalizar o fim da disponibilidade de álcool. </li><li> Salvar e arquivar todos os dados. </li></ol></li><li> Antes de iniciar a sessão de treinamento, verificar o bom funcionamento de todos os dispositivos em cada câmara operante (alavancas retrácteis, distribuidor de fluidos). </li><li> Preparar a solução de etanol v / v de 20% a partir de 190 de prova (95%) de etanol diluído em água da torneira. Nota: Etanol solução pode ser guardada à temperatura ambiente. dependendosobre o fabricante, as soluções estoque de etanol pode ser de até 99,98%. Note também que, enquanto em manuscritos mais publicados, as concentrações de etanol são geralmente apresentados como volume / volume, alguns podem apresentá-los como peso / volume. </li><li> Encha a seringa com a solução de etanol a 20% e se certificar de que não há vazamentos ou bolhas de ar nas linhas de infusão. empurrar manualmente um pequeno volume de etanol por meio das linhas de infusão para se certificar de que o etanol será correctamente entregue no receptáculo a partir da primeira resposta reforçada. Secar o recipiente com uma toalha de papel e certifique-se de que ele está vazio antes de iniciar a sessão. </li><li> Carregar o software que controla a programação FR de reforço de etanol a 20% </li><li> Train operant- e ratos virgens de tratamento sob um cronograma FR1 para auto-administrar 20% de etanol sem privação de água durante 30 sessões min. <ol><li> Transportar os ratos provenientes do biotério para a sala de ensaios utilizando uma jaula de transporte. </li><li> Atribuir cada rato para uma câmara.Tome cada rato individual da jaula de transporte e colocá-lo na câmara de auto-administração atribuído. </li><li> Tente manter as condições da experiência consistente cada dia. Portanto, sempre testar ratos na mesma câmara auto-administração ou menos na mesma hora todos os dias. </li><li> Inicie o software que inicia a programação FR1 de reforço de etanol a 20%. </li><li> No final da sessão, remover os ratos das câmaras de auto-administração e devolvê-las para o viveiro. </li><li> A fim de confirmar que manualmente a solução de álcool é consumido pelos animais, usar uma toalha de papel e verificar se o recipiente é seco. Em alternativa, usar um 1 ou 2 ml da seringa e recolher o fluido remanescente no receptáculo para estimar o volume que não é consumido. Nota: Para uma medição mais precisa (mas também mais caro), é possível equipar cada uma das câmaras com um sistema lickometer ligado ao receptáculo copo de líquido que permite uma contagem precisa do pingos produzidos por os ratos durante a sessão de auto-administração. </li><li> Limpar as paredes e o piso de grade de cada câmara, com um desinfectante de superfície. </li><li> Após a utilização, manter as linhas de infusão limpando-os com uma solução de etanol a 70%. Quando não estiver em uso, coloque a tampa para evitar mofo e poeira. </li></ol></li><li> Após cada sessão, coletar e analisar os dados gerados. Mais particularmente, calcular o número médio de prensas alavanca activa, o número médio de frutos obtidos de álcool, bem como o número médio de prensas alavanca inactiva. Nota: Na maioria dos papéis, o consumo de álcool também é apresentado como o consumo de etanol em g / kg (peso corporal). A ingestão de etanol pode ser calculada usando a seguinte fórmula: <img alt="equação1" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation1.jpg" /> Com volume consumido (mL) - número de recompensas ganhas ± unitária de volume / recompensa e densidade de etanol à temperatura ambiente - 0,789 g / mL. Por exemplo, se um rato pesa 400 g ganhou 20 rewaRDS de solução a 20% v / v etanol: <img alt="Equation2" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation2.jpg" /></li><li> Realizar sessões de 5/6 dias por semana, até a estabilização do desempenho (definido como um mínimo de 15 sessões e nenhuma alteração superior a 15% do número total de recompensas ganhas durante as últimas 3 sessões). Observação: Uma vez que os ratos tenham atingido uma linha de base estável em FR1, o programa de condicionamento operante pode ser modificado de acordo com as instruções do fabricante para aumentar o número de respostas necessárias para obter uma recompensa de álcool. A proporção fixa pode por exemplo ser aumentado para FR2 ou FR3, a fim de minimizar o reforço acidental. </li><li> Medir as concentrações de etanol no sangue: <ol><li> Para confirmar que os frutos obtidos de uma sessão de auto-administração são consumidos pelos ratos, medir as concentrações de etanol no sangue a seguir a auto-administração. Uma vez que os ratos tenham atingido uma linha de base estável, recolha de sangue a partir da veia lateral da cauda imediatamente depoisa sessão. Inserir uma agulha G 23, para dentro do vaso sanguíneo e recolher amostras de sangue de 50 uL utilizando um tubo capilar. </li><li> Transferir as amostras de sangue de 50 ul e 10 frascos de headspace ml e adicionar 50 uL de 1: 1000 de álcool isopropílico como padrão interno. Prepara-se uma curva padrão de 10 a 300 mg / dL a partir de padrões de etanol. Amostras de processo com um amostrador headspace com uma coluna de cromatografia 13 de acordo com as definições do fabricante. </li></ol></li><li> razão progressiva <ol><li> Use cronogramas progressivos relação (PR) para avaliar a motivação dos animais para consumir uma recompensa de 14. PR é uma programação operante em que o número de respostas para obter um reforçador é aumentada gradualmente (em outros termos, os ratos têm de trabalhar mais para cada recompensa sucessiva). Nota: Ao contrário do FR sessões, uma sessão PR não é cronometrado e só vai ser encerrado, uma vez 30 min tenha decorrido sem um rácio concluída. <ol><li> Coloque ratos em suas caixas operantes atribuídos e permitir-lhes responder por 20% de etanol sob uma programação PR de reforço: Mantenha todas as condições experimentais idênticas às utilizadas no cronograma FR (ver passo 2.3), excepto aumentar o requisito de resposta ou de custos dentro de sessões (isto é, o número de pressões da alavanca necessária sobre a alavanca activa para receber uma única recompensa etanol) de acordo com a fórmula seguinte: 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24, 28, 32 ... Nota: um exemplo do programa de RP é fornecido na seção Supplemental arquivos de código. </li><li> Encerrar a sessão PR uma vez 30 min tiver decorrido sem uma recompensa. Nota: O ponto de ruptura é definida como a última exigência resposta completado durante a sessão de PR. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Teste a validade preditiva de um modelo operante de álcool auto-administração Nota: Uma vez que os ratos adquiriram uma linha de base auto-administração estável (ver passo 2), é possível avaliar a validade preditiva do modelo detestar a eficácia de naltrexona, um fármaco actualmente aprovado pela FDA para a dependência de álcool na redução de 20% de etanol a auto-administração. Recomendamos fazer este teste no mais alto FR alcançado durante o treinamento (FR2), quando as respostas são seguramente alta. Uma vez validade preditiva é estabelecida, o modelo pode ser usado para avaliar os novos candidatos a fármacos. <ol><li> Antes do dia de teste, dar ratos injecções de solução salina subcutânea 30 minutos antes das sessões de auto-administração de habituar-los para a injecção durante um mínimo de duas sessões de auto-administração consecutiva ou até responder por etanol não é afectada pelas injecções de solução salina (definida como qualquer alteração superior a 15% do número total de recompensas ganhas durante os últimos 2 sessões). </li><li> Dissolver naltrexona em solução salina e ajustar o pH a atingir a neutralidade para facilitar as injecções aos animais. Injectar a droga a um volume de 1,0 ml / kg 30 minutos antes da sessão, utilizando a via de administração subcutânea. Nota: O litrotura proporciona uma boa evidência de uma escolha de dose entre os intervalos de 0,1 - 1 mg / kg, de modo que 0,1, 0,3 e 1 mg / kg são utilizados no presente protocolo. Nota: A pesquisa indica o uso de ambas as vias subcutânea e intraperitoneal de administração para a naltrexona, embora a sua potência pode diferir com a injecção subcutânea sendo 30 vezes mais potente do que 15 injecções intraperitoneais. Por esta razão, recomenda-se utilizar a via subcutânea como a utilização desta via para a injecção de naltrexona foi validado e replicado por vários laboratórios, a um intervalo de concentrações entre 0,1 e 1 mg / kg 12,15,16. </li><li> Durante o dia do teste, ratos injectar numa ordem equilibrada / aleatório num desenho entre sujeitos através de um dos quatro ciclos de naltrexona dosagem (0, 0,1, 0,3 e 1 mg / kg) 30 minutos antes da sessão de auto-administração. </li><li> Entre cada ciclo de dosagem, permite ratos à lavagem do fármaco com um mínimo de duas sessões de auto-administração consecutiva ou até para responderetanol está de volta à linha de base. Observação: Como resultado, no final do ensaio, todos os ratos foram injectados com cada uma das quatro doses. </li><li> Após esta fase, seleccionar a dose mais eficaz (1 mg / kg) e testar o efeito da naltrexona na motivação dos animais de consumir álcool, usando um programa de razão progressiva (ver passo 2.12). </li></ol>

<ol>
	<li>Koob, G. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+motivation+for+drinking+in+rodents+with+a+focus+on+opioid+receptor+neuropharmacology.+Recent+developments+in+alcoholism+:+an+official+publication.">Animal models of motivation for drinking in rodents with a focus on opioid receptor neuropharmacology. Recent developments in alcoholism : an official publication.</a> of the American Medical Society on Alcoholism, the Research Society on Alcoholism, and the National Council on Alcoholism. 16, 263-281 (2003).</li><li>Samson, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+ethanol+reinforcement+using+a+sucrose-substitution+procedure+in+food-+and+water-sated+rats.">Initiation of ethanol reinforcement using a sucrose-substitution procedure in food- and water-sated rats.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 10, 436-442 (1986).</li><li>Weiss, F., Mitchiner, M., Bloom, F. E., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-choice+responding+for+ethanol+versus+water+in+alcohol+preferring+(P)+and+unselected+Wistar+rats+is+differentially+modified+by+naloxone,+bromocriptine,+and+methysergide.">Free-choice responding for ethanol versus water in alcohol preferring (P) and unselected Wistar rats is differentially modified by naloxone, bromocriptine, and methysergide.</a> Psychopharmacology. , 178-186 (1990).</li><li>Koya, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ventral+medial+prefrontal+cortex+in+incubation+of+cocaine+craving.">Role of ventral medial prefrontal cortex in incubation of cocaine craving.</a> Neuropharmacology. 56, 177-185 (2009).</li><li>Karlsson, R. M., Kircher, D. M., Shaham, Y., O'Donnell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exaggerated+cue-induced+reinstatement+of+cocaine+seeking+but+not+incubation+of+cocaine+craving+in+a+developmental+rat+model+of+schizophrenia.">Exaggerated cue-induced reinstatement of cocaine seeking but not incubation of cocaine craving in a developmental rat model of schizophrenia.</a> Psychopharmacology. , 45-51 (2013).</li><li>Augier, E., Vouillac, C., Ahmed, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diazepam+promotes+choice+of+abstinence+in+cocaine+self-administering+rats.">Diazepam promotes choice of abstinence in cocaine self-administering rats.</a> Addiction biology. 17, 378-391 (2012).</li><li>Cantin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+is+low+on+the+value+ladder+of+rats:+possible+evidence+for+resilience+to+addiction.">Cocaine is low on the value ladder of rats: possible evidence for resilience to addiction.</a> PloS one. 5, (2010).</li><li>Lenoir, M., Serre, F., Cantin, L., Ahmed, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intense+sweetness+surpasses+cocaine+reward.">Intense sweetness surpasses cocaine reward.</a> PloS one. 2, (2007).</li><li>Spangler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opiate-like+effects+of+sugar+on+gene+expression+in+reward+areas+of+the+rat+brain.+Brain+research.">Opiate-like effects of sugar on gene expression in reward areas of the rat brain. Brain research.</a> Molecular brain research. , 134-142 (2004).</li><li>Rassnick, S., Pulvirenti, L., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SDZ-205,152,+a+novel+dopamine+receptor+agonist,+reduces+oral+ethanol+self-administration+in+rats.">SDZ-205,152, a novel dopamine receptor agonist, reduces oral ethanol self-administration in rats.</a> Alcohol. 10, 127-132 (1993).</li><li>Carnicella, S., Yowell, Q. V., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+operant+oral+ethanol+self-administration:+a+dose-response+curve+study+in+rats.">Regulation of operant oral ethanol self-administration: a dose-response curve study in rats.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 35, 116-125 (2011).</li><li>Augier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wistar+rats+acquire+and+maintain+self-administration+of+20+%+ethanol+without+water+deprivation,+saccharin/sucrose+fading,+or+extended+access+training.">Wistar rats acquire and maintain self-administration of 20 % ethanol without water deprivation, saccharin/sucrose fading, or extended access training.</a> Psychopharmacology. , (2014).</li><li>Macchia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+in+biological+fluids:+headspace+GC+measurement.">Ethanol in biological fluids: headspace GC measurement.</a> Journal of analytical toxicology. 19, 241-246 (1995).</li><li>Hodos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+ratio+as+a+measure+of+reward+strength.">Progressive ratio as a measure of reward strength.</a> Science. 134, 943-944 (1961).</li><li>Williams, K. L., Broadbridge, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potency+of+naltrexone+to+reduce+ethanol+self-administration+in+rats+is+greater+for+subcutaneous+versus+intraperitoneal+injection.">Potency of naltrexone to reduce ethanol self-administration in rats is greater for subcutaneous versus intraperitoneal injection.</a> Alcohol. 43, 119-126 (2009).</li><li>Czachowski, C. L., Delory, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acamprosate+and+naltrexone+treatment+effects+on+ethanol+and+sucrose+seeking+and+intake+in+ethanol-dependent+and+nondependent+rats.">Acamprosate and naltrexone treatment effects on ethanol and sucrose seeking and intake in ethanol-dependent and nondependent rats.</a> Psychopharmacology. , 335-348 (2009).</li><li>Stromberg, M. F., Volpicelli, J. R., O'Brien, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+naltrexone+administered+repeatedly+across+30+or+60+days+on+ethanol+consumption+using+a+limited+access+procedure+in+the+rat.">Effects of naltrexone administered repeatedly across 30 or 60 days on ethanol consumption using a limited access procedure in the rat.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 22, 2186-2191 (1998).</li><li>Stromberg, M. F., Casale, M., Volpicelli, L., Volpicelli, J. R., O'Brien, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+effects+of+the+opioid+antagonists+naltrexone,+naltrindole,+and+beta-funaltrexamine+on+ethanol+consumption+in+the+rat.">A comparison of the effects of the opioid antagonists naltrexone, naltrindole, and beta-funaltrexamine on ethanol consumption in the rat.</a> Alcohol. 15, 281-289 (1998).</li><li>Gonzales, R. A., Weiss, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+ethanol-reinforced+behavior+by+naltrexone+is+associated+with+attenuation+of+the+ethanol-induced+increase+in+dialysate+dopamine+levels+in+the+nucleus+accumbens.">Suppression of ethanol-reinforced behavior by naltrexone is associated with attenuation of the ethanol-induced increase in dialysate dopamine levels in the nucleus accumbens.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 18, 10663-10671 (1998).</li><li>Biggs, T. A., Myers, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naltrexone+and+amperozide+modify+chocolate+and+saccharin+drinking+in+high+alcohol-preferring+P+rats.">Naltrexone and amperozide modify chocolate and saccharin drinking in high alcohol-preferring P rats.</a> Pharmacology, biochemistry, and behavior. 60, 407-413 (1998).</li><li>Beczkowska, I. W., Bowen, W. D., Bodnar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+opioid+receptor+subtype+antagonists+differentially+alter+sucrose+and+deprivation-induced+water+intake+in+rats.">Central opioid receptor subtype antagonists differentially alter sucrose and deprivation-induced water intake in rats.</a> Brain research. 589, 291-301 (1992).</li><li>Cooper, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+opiate+agonists+and+antagonists+on+fluid+intake+and+saccharin+choice+in+the+rat.">Effects of opiate agonists and antagonists on fluid intake and saccharin choice in the rat.</a> Neuropharmacology. 22, 323-328 (1983).</li><li>Samson, H. H., Pfeffer, A. O., Tolliver, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+ethanol+self-administration+in+rats:+models+of+alcohol-seeking+behavior.">Oral ethanol self-administration in rats: models of alcohol-seeking behavior.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 12, 591-598 (1988).</li><li>Koob, G. F., Weiss, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacology+of+drug+self-administration.">Pharmacology of drug self-administration.</a> Alcohol. 7, 193-197 (1990).</li><li>Schank, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+Neurokinin-1+Receptor+in+Stress-Induced+Reinstatement+of+Alcohol+and+Cocaine+Seeking.">The Role of the Neurokinin-1 Receptor in Stress-Induced Reinstatement of Alcohol and Cocaine Seeking.</a> Neuropsychopharmacology : official publication of the American College of Neuropsychopharmacology. , (2013).</li><li>Avena, N. M., Bocarsly, M. E., Rada, P., Kim, A., Hoebel, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=After+daily+bingeing+on+a+sucrose+solution,+food+deprivation+induces+anxiety+and+accumbens+dopamine/acetylcholine+imbalance.">After daily bingeing on a sucrose solution, food deprivation induces anxiety and accumbens dopamine/acetylcholine imbalance.</a> Physiology. 94, 309-315 (2008).</li><li>Avena, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+study+of+food+addiction+using+animal+models+of+binge+eating.">The study of food addiction using animal models of binge eating.</a> Appetite. 55, 734-737 (2010).</li><li>Morgan, D., Sizemore, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+addiction:+fat+and+sugar.">Animal models of addiction: fat and sugar.</a> Current pharmaceutical design. 17, 1168-1172 (2011).</li><li>Lenoir, M., Cantin, L., Vanhille, N., Serre, F., Ahmed, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+heroin+access+increases+heroin+choices+over+a+potent+nondrug+alternative.">Extended heroin access increases heroin choices over a potent nondrug alternative.</a> Neuropsychopharmacology : official publication of the American College of Neuropsychopharmacology. 38, 1209-1220 (2013).</li><li>Augier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mGluR2+Positive+Allosteric+Modulator,+AZD8529,+and+Cue-Induced+Relapse+to+Alcohol+Seeking+in+Rats.">The mGluR2 Positive Allosteric Modulator, AZD8529, and Cue-Induced Relapse to Alcohol Seeking in Rats.</a> Neuropsychopharmacology : official publication of the American College of Neuropsychopharmacology. 41, 2932-2940 (2016).</li><li>Bice, P. J., Kiefer, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taste+reactivity+in+alcohol+preferring+and+nonpreferring+rats.">Taste reactivity in alcohol preferring and nonpreferring rats.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 14, 721-727 (1990).</li></ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Com este protocolo, estamos apresentando um novo método para adquirir e manter a auto-administração oral estável de 20% de etanol em ratos que, contrariamente aos modelos clássicos de etanol auto-administração, não requerem o uso de privação de água, formação de acesso estendida, ou sacarina / sacarose 12 desvanecimento. Além disso, a naltrexona, um medicamento atualmente aprovado pelo FDA para dependência de álcool, diminui com sucesso álcool auto-administração e a motivação para consumir álcool de ratos Wistar treinados com este protocolo. Este resultado proporciona uma importante validação farmacológica do protocolo, uma vez que é consistente com relatos prévios que demonstram que a naltrexona é eficaz na redução do consumo de álcool em ratos não-dependentes 16-18. A naltrexona é um antagonista do receptor de opiato que tem mostrado resultados promissores em modelos animais de consumo de álcool e ensaios clínicos. Em modelos animais, a naltrexona é eficiente na redução do consumo de álcool e um auto-dministração em animais não-dependentes 16,17,19, sem afetar o comportamento não-específico (prensas alavanca inactiva) 12. Ele também mostrou-se eficaz na redução da ingestão de alimentos. Por exemplo, diminui a ingestão de líquidos com sucesso do rato tanto de uma solução não-calórico doce de sacarina, bem como uma bebida de chocolate altamente saborosos e 20 calórica. Naltrexona também reduz sacarose auto-administração 16, a ingestão de água após a privação de água 21, bem como a escolha de sacarina em um ajuste 22 escolha de dois garrafa. Todos juntos, estes resultados indicam que, provavelmente, naltrexona não afecta álcool responder através da modulação do valor calórico dos reforçadores líquidos, mas mais provavelmente por diminuição do valor de recompensa imediata álcool. Existem várias vantagens importantes para este modelo. Em primeiro lugar, o período de aquisição é mais rápido do que com os paradigmas anteriores. Ratos chegar alavanca taxas prementes ativos para le relevanteVels de etanol 23 em uma semana. Paradigmas-fading Sugar baseados exigem seis a oito semanas de testes para produzir a ingestão de etanol confiável 1,3, desperdiçando, assim, tempo e recursos valiosos. Em segundo lugar, este modelo elimina a acentuada diminuição no consumo de etanol geralmente observado após a remoção de adoçantes, podendo, portanto, diminuindo a taxa de atrito em etanol auto-administração estuda 24. Oito grupos diferentes de ratos de um montante total de 239 ratos Wistar operant- e virgens de tratamento foram executados com este protocolo e apenas 9 reunir critérios por não adquirir auto-administração (definido como um mínimo de 10 prensas de alavanca ativos durante o último 3 estabilizou-ratio fixa 1 sessões). Assim, este protocolo de treinamento romance produz uma taxa de aquisição de sucesso impressionante de 96%. Com este protocolo, os ratos atingiram taxas de responder robustos em menos de duas semanas, o que resulta numa média de ingestão de etanol de 0,86 g / kg. Este nível de consumo é equivalente aos alcançados pelos ratos treinados com a sacarose / sacarina desvanecimento procedimentos que normalmente alcançados um consumo médio de entre 0,5 e 0,8 g / kg 1,2,23,25. Além disso, este modelo simplifica a interpretação de estudos de auto-administração de etanol, removendo confunde devido às propriedades inerentemente gratificantes de sacarina e sacarose em ratos. As potenciais propriedades de habituação de recompensas alimentares e mais particularmente de alimentos saborosos tais como açúcar ter sido um assunto de interesse nos últimos anos e, finalmente, salientam a necessidade de um modelo mais específica de etanol auto-administração. Por exemplo, há evidências para apoiar a ideia de que a sacarose pode por si só ser viciante em ratos, como ratos exibir comportamentos como comer compulsivamente, buscando, ea retirada em resposta a ingestão de sacarose excessiva 26-28. Além disso, sacarose e sacarina são mais reforço de drogas de abuso, como cocaína e opiáceos 6-8,29 e esses adoçantesalterar a activação de Fos em regiões do cérebro, incluindo o nucleus accumbens de uma forma semelhante à de etanol e outras drogas de abuso 9. Finalmente, este modelo é apropriado para estudo de modelos animais de recaída de drogas. Nós temos mostrado previamente que os animais treinados usando este procedimento foram capazes de extinguir robustamente suas respostas para o álcool 12, à semelhança do que é geralmente obtida com modelos clássicos de etanol auto-administração 25. Estes animais podem então ser restabelecido através da utilização de um estressor 12 ou através da reintrodução de uma luz de sinalização 30. O etanol é uma droga ambivalente, que exerce propriedades gratificantes e aversivas. Acredita-se que o gosto aversivo primário do etanol é uma grande barreira para alcançar a auto-administração estável na maioria dos roedores, especialmente em altas concentrações 1. No entanto, um estudo para investigar a reactividade sabor em ratos de uma vasta gama de concentrações de etanol (5 a 40% v / v) surprisingly verificou que o número de hedónico, mas não aversivo, respostas orofaciais tendem a aumentar com concentrações de etanol superiores 31. Além disso, com a exposição repetida a álcool, o número de respostas aversivas orofaciais diminuída quando os ratos foram expostos a altas concentrações de etanol (20 a 40% v / v) enquanto se manteve inalterada, com as concentrações mais baixas (5 a 10% v / v). De igual modo, os ratos que tiveram um acesso operante simultânea a duas soluções de etanol 23 responderam mais para as concentrações mais elevadas (20 ou 40% v / v) do que a mais baixa (10% v / v, a concentração que é usado principalmente em sacarose / sacarina com desvanecimento procedimento) e auto-administração por via oral de etanol exibe uma curva de resposta à dose em forma de U invertido, com maior ingestão de etanol durante a auto-administração, a uma concentração de etanol a 20% 11. Estes dados indicam que as concentrações mais elevadas de etanol poderá ser mais compensadora e menos aversiva para os ratos, que explica por que os ratos adquirem auto-administração de 20% de etanol em Our protocolo sem a necessidade de etanol pré-exposição ou sacarose / sacarina procedimento desaparecendo. No entanto, é importante notar que este modelo não produz nível Escalado do etanol auto-administração e as concentrações sanguíneas de etanol elevados. Por isso, este modelo não induzem dependência física em ratos e devem ser combinados com outros modelos, se o objectivo da experiência é o de induzir o consumo excessivo de álcool, em roedores. Tal como acontece com muitas tarefas comportamentais, o primeiro parâmetro crítico é manter as condições da experiência tão consistente quanto possível a cada dia. Mais precisamente, os ratos devem sempre ser testados na mesma câmara de auto-administração. A sessão devem ocorrer ao mesmo tempo (± 30 minutos) ao longo de toda a experiência. A configuração da câmara (ver passo 2.2) deve permaneceu inalterada. Durante o treinamento de auto-administração, as primeiras sessões pode ser crítico. Deve ser dada especial atenção ao the tubos de administração de fármaco, o receptáculo copo de líquido, a alavanca e as bombas de seringa. É fundamental que o etanol está correctamente entregue no receptáculo a partir da primeira resposta reforçada, como qualquer mau funcionamento pode atrasar ou prejudicar aquisição de etanol auto-administração. Em resumo, o novo modelo de ratos de formação para auto-administração operante de álcool por via oral descrito neste protocolo melhora muito a eficiência, diminuindo o tempo de treinamento, aumentando a taxa de aquisição, simplifica o procedimento geral, bem como a interpretação dos resultados, e é validada como um modelo de som de beber etanol pela experiência naltrexona. Este protocolo é adequado para investigar as propriedades gratificantes e motivacionais de álcool em ratos e pode ser combinado com os procedimentos de auto-administração operante clássicas tais como reintegrações modelos para avaliar a base neural do comportamento de procura de etanol.

O desenvolvimento de modelos animais para estudar os efeitos reforçadores da droga provou uma ferramenta importante para estudar a toxicodependência humano. Mais especificamente, a auto-administração operante é um modelo comportamental amplamente utilizado que é um dos meios mais eficazes para a avaliação dos efeitos de reforço positivo de uma solução de etanol consumida por via oral. Um problema inicial com o desenvolvimento de um modelo desse tipo era o gosto aversivo primário de altas concentrações de etanol para a maioria dos roedores, um fenómeno que também é compartilhada em seres humanos com pouca ou nenhuma experiência com o álcool 1. Um protocolo padrão para superar essa barreira exige a privação de água e / ou a sacarina ou sacarose desbotamento durante a aquisição e manutenção de auto-administração. No entanto, estas duas abordagens não são vantajosas. Eles exigem longos períodos de treinamento para iniciar simplesmente respondendo para o etanol e obter uma taxa de sucesso relativo de aquisição. A utilização de adoçantes também introduz uma polarização potencial ema interpretação dos dados auto-administração. Essas limitações não se aplicam com o protocolo seguinte. Resumidamente, Sansão e colegas 2 mostraram que a dissolução de etanol em uma solução doce de 20% de sacarose e, em seguida, desaparecendo a doçura ao longo de 4 semanas de treinamento é necessário para iniciar a responder por 10% de etanol em água. Além disso, a ingestão de etanol fiável é geralmente conseguido em 6 a 8 semanas 1-3. Esta abordagem é altamente problemática. Primeiro, exige longos períodos de treinamento antes de os investigadores podem começar a medir o etanol auto-administração. Em contraste, intravenosa auto-administração de cocaína ou heroína requer 0 - 1 dias de treinamento pré-droga em uma alavanca de entrega de alimentos em animais de produção restrita, e estável de responder por droga é muitas vezes conseguida em 10 - 12 dias 4,5. Uma outra limitação deste método é o facto de a sacarina e sacarose são altamente compensador para ratos e induzir padrões de activação cerebral similar para drogas de abuso, introduzindo assim o potencial para confunde em etanol auto-administração estuda 6-9. Finalmente, os ratos adquirem auto-administração de uma solução de etanol usando este método mostra variabilidade na aquisição e resposta taxa de 1,10, com uma proporção substancial de ratos consistentemente excluídas experimentos devido a aquisição bem sucedida e / ou taxa de resposta insuficiente. Por outro lado, com este protocolo, apresentamos um método simples mas eficaz para a aquisição e manutenção de auto-administração oral de uma de etanol a 20% em solução de água que não necessitam de privação de água, sacarose / desvanecimento sacarina ou formação de acesso estendida. Um estudo recente constatou que a auto-administração por via oral de etanol exibe uma curva de resposta à dose em forma de U invertido com maior ingestão de etanol durante a auto-administração, a uma concentração de etanol a 20%, proporcionando assim uma base lógica para a selecção de uma solução de etanol 20% no nosso experimenprojeto ental 11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="577">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Extra Tall MDF Sound Attenuating Cubicle, Interior: 22&#34;W x 22&#34;H x 16&#34;D</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-018MD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Extra Tall Modular Test Chamber with modified Top, Waste Pan and Photobeam</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-007CT-PH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Stainless Steel Grid Floor for Rat or Small Primate</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Retractable Lever</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-112CM</td>
			<td>2 by SA chambers</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Stimulus Light, 1&#34; White Lens, Mounted on Modular Panel</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">ENV-221M</td>
			<td>2 by SA chambers</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Dual Cup Liquid Receptacle with 18ga Stainless Steel Pipes</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td>ENV-200R3AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Single Speed Syringe Pump, 3.33RPM</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">PHM-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Liquid Delivery Kit</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td>PHM-122-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">SmartCtrl 8 Input, / 16 Output Package</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;">DIG-716P2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">MED-PC software</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td>SOF-735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">http://www.mednr.com/</td>
			<td style="width:75px;">Med Associates Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>A website that is open-source and has been created to offer researchers a place to exchange MEDState Notation code</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Kendall Monoject 20cc Syringes, Regular Luer Tip</td>
			<td style="width:75px;">VWR International</td>
			<td>MJ8881-520657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ethanol, Pure, 190 Proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td style="width:75px;">Decon Labs</td>
			<td>2801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.9% Sodium Chloride Injection, USP</td>
			<td style="width:75px;">Hospira</td>
			<td>0409-4888-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Naltrexone hydrochloride</td>
			<td style="width:75px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>N3136-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">23 G BD PrecisionGlide Needles</td>
			<td style="width:75px;">BD</td>
			<td>305145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minivette POCT 50 &#181;l, K3 EDTA</td>
			<td style="width:75px;">Sarstedt</td>
			<td>17.2113.150</td>
			<td>For capillary blood collection&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for evaluating the reinforcing properties of ethanol in rats without water deprivation, saccharin fading or extended access training

métodos de auto-administração oral operantes são comumente usados ​​para estudar as propriedades de reforço de etanol em animais. No entanto, os métodos convencionais exigem a sacarina / desvanecimento sacarose, privação de água e / ou formação estendida para iniciar responder operante em ratos. Este artigo descreve um método novo e eficiente para iniciar rapidamente responder operante para o etanol que seja conveniente para experimentadores e não necessita de privação de água ou sacarina / desvanecimento sacarose, eliminando assim a confundem potencial do uso de adoçantes em etanol estudos de auto-administração operante. Com este método, ratos Wistar tipicamente adquirir e manter a auto-administração de uma solução de etanol a 20% em menos de duas semanas de formação. Além disso, as concentrações de etanol no sangue e recompensas são correlacionados positivamente para uma sessão de auto-administração 30 min. Além disso, a naltrexona, um medicamento aprovado pela FDA para a dependência do álcool que tem sido mostrado para suprimir a auto-administração de etanolem roedores, dependente da dose, diminui o consumo de álcool e a motivação para consumir álcool em ratos auto-administração de 20% de etanol, validando assim a utilização deste novo método para estudar as propriedades de reforço de álcool em ratos.

A Figura 1 mostra o comportamento auto-administração representante de ratos Wistar operant- e virgens de tratamento (oito coortes diferentes perfazendo um total de 239 ratos) treinados em uma programação FR1 para auto-administrar 20% de etanol, sem privação de água ou sacarina / desvanecimento sacarose durante sessões de 30 minutos. Com este protocolo, os ratos iniciar alavanca pressionando para obter uma recompensa de etanol muito rapidamente, já a obtenção de mais de 10 recompensas durante as primeiras sessões (Figura 1A). Eles atingem taxas de responder estáveis na alavanca ativa por sessão de 10 de auto-administração, obtendo uma média de 23,7 ± 0,7 recompensas em FR1 (Figura 1B), que corresponde a um consumo médio de etanol de 0,86 g / kg. A Figura 2 mostra os efeitos de diferentes doses de naltrexona em álcool auto-administração. Para avaliar a validade preditiva de ummodelo animal de busca etanol, a eficácia de naltrexona, um medicamento atualmente aprovado pelo FDA para dependência de álcool, deverá ser verificada em um grupo de animais treinados sob um esquema de reforço prolongado de razão fixa-3 (FR3). Um tratamento com naltrexona é esperada para produzir uma diminuição dependente da dose na administração de álcool auto-(Figura 2A e 2B), assim como uma redução da motivação para se obter o álcool avaliada utilizando um programa de razão progressiva (Figura 2C). <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/53305/53305fig1.jpg" /> Figura 1: ratos Wistar adquirir e manter a auto-administração de 20% de etanol. A: recompensas média (± SEM) ganhou durante as sessões de 30 minutos de auto-administração (FR1, fase de aquisição) de 20% de etanol (n = 239 ratos). B: recompensas médios obtidos durante as sessões de auto-administração de 30 min (FR1, FR2, estávelfase) de 20% (n = 239 ratos). C: média prensas ativos e inativos alavanca (± SEM) concluídas durante as sessões de auto-administração de 30 minutos (FR1, FR2, fase estável) de 20% (n = 239 ratos). D: Número de recompensas ganhas durante uma sessão de auto-administração de 30 minutos contra o BEC (mg / dl) (n = 36 ratos, R 2 = 0,67, p &lt;0,001). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53305/53305fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53305/53305fig2.jpg" /> Figura 2: Naltrexone reduz tanto a auto-administração e motivação para consumir álcool. A: A média de prensas activas alavanca (± SEM) completadas durante uma sessão de 30 minutos a auto-administração (FR3) de 20% de etanol seguintes solução salina ou tratamento de naltrexona (0,1, 0,3 ou 1 mg / kg) em ratos Wistar (n = 16) (** = p &lt;0,01,*** = P &lt;0,001). B: recompensas média (± SEM) ganhou durante uma sessão de 30 minutos a auto-administração (FR3) de 20% de etanol seguinte solução salina ou tratamento de naltrexona (0,1, 0,3 ou 1 mg / kg) em ratos Wistar (N = 16) ( ** = p &lt;0,01, *** = p &lt;0,001). C: A média de ponto de interrupção (± SEM) alcançada durante uma sessão de RP de 20% de etanol, quer após o tratamento naltrexona (1 mg / kg) em ratos Wistar ou solução salina (n = 16) (* = p &lt;0,05). D: Número de recompensas (± SEM) durante uma sessão de ganho de RP de 20% de etanol, quer após o tratamento de solução salina ou a naltrexona (1 mg / kg) em ratos Wistar (N = 16) (* = p &lt;0,05). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53305/53305fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training at JoVE.com

A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

Este protocolo descreve um método novo e eficiente para iniciar rapidamente operante de responder por etanol em ratos, que, contrariamente aos métodos convencionais, não necessitam de privação de água ou sacarina / sacarose desvanecimento para iniciar a responder.

Um método para avaliar as propriedades de reforço de etanol em ratos sem água Privação, Sacarina desvanecimento ou treinamento de Acesso Ampliado

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

a-method-for-evaluating-reinforcing-properties-ethanol-rats-without

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

9.5K visualizações.  Linköping University.  Este protocolo descreve um método novo e eficiente para iniciar rapidamente operante de responder por etanol em ratos, que, contrariamente aos métodos convencionais, não necessitam de privação de água ou sacarina / sacarose desvanecimento para iniciar a responder. 

Vídeo: A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

Um procedimento para estudar o efeito da restrição alimentar prolongada em heroína Buscando em ratos abstinentes

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Comportamento

A Novel Procedure for Evaluating the Reinforcing Properties of Tastants in Laboratory Rats: Operant Intraoral Self-administration

This paper describes a novel method for studying the bio-behavioral basis of addiction to food. This method combines the surgical component of taste reactivity with the behavioral aspects of operant self-administration of drugs. Under very brief general anaesthesia, rats are implanted with an intraoral (IO) cannula that allows delivery of test solutions directly in the oral cavity. Animals are then tested in operant self-administration chambers whereby they can press a lever to receive IO infusions of test solutions. IO self-administration has several advantages over experimental procedures that involve drinking a solution from a spout&#160;or operant responding for solid pellets or solutions delivered in a receptacle. Here, we show that IO self-administration can be employed to study self-administration of high fructose corn syrup (HFCS). Rats were first tested for self-administration on a progressive ratio (PR) schedule, which assesses the maximum amount of operant behavior that will be emitted for different concentrations of HFCS (i.e.&#160;8%, 25%, and 50%). Following this test, rats self-administered these concentrations on a continuous schedule of reinforcement (i.e.&#160;one infusion for each lever press) for 10 consecutive days (1 session/day; each lasting 3 hr), and then they were retested on the PR schedule. On the continuous reinforcement schedule, rats took fewer infusions of higher concentrations, although the lowest concentration of HFCS (8%) maintained more variable self-administration. Furthermore, the PR tests revealed that 8% had lower reinforcing value than 25% and 50%. These results indicate that IO self-administration can be employed to study acquisition and maintenance of responding for sweet solutions. The sensitivity of the operant response to differences in concentration and schedule of reinforcement makes IO self-administration an ideal procedure to investigate the neurobiology of voluntary intake of sweets.

The current study evaluates a novel procedure for assessing the reinforcing effects of palatable solutions in laboratory rats: intraoral self-administration. To this end, operant responding (i.e.&#160;lever pressing) for intraoral infusions of sweet solutions at different concentrations was measured on continuous and progressive ratios schedules of reinforcement.

Um novo procedimento para avaliar as propriedades de reforço de Tastants em laboratório ratos: Intraoral auto-administração operante

This paper describes a novel method for studying the bio-behavioral basis of addiction to food. This method combines the surgical component of taste ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

Um procedimento para Observar Renovação induzida por Contexto de pavloviano condicionado Comportamento Álcool-seeking em Ratos

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Training Rats to Voluntarily Dive Underwater: Investigations of the Mammalian Diving Response

Underwater submergence produces autonomic changes that are observed in virtually all diving animals. This reflexly-induced response consists of apnea, a parasympathetically-induced bradycardia and a sympathetically-induced alteration of vascular resistance that maintains blood flow to the heart, brain and exercising muscles. While many of the metabolic and cardiorespiratory aspects of the diving response have been studied in marine animals, investigations of the central integrative aspects of this brainstem reflex have been relatively lacking. Because the physiology and neuroanatomy of the rat are well characterized, the rat can be used to help ascertain the central pathways of the mammalian diving response. Detailed instructions are provided on how to train rats to swim and voluntarily dive underwater through a 5 m long Plexiglas maze. Considerations regarding tank design and procedure room requirements are also given. The behavioral training is conducted in such a way as to reduce the stressfulness that could otherwise be associated with forced underwater submergence, thus minimizing activation of central stress pathways. The training procedures are not technically difficult, but they can be time-consuming. Since behavioral training of animals can only provide a model to be used with other experimental techniques, examples of how voluntarily diving rats have been used in conjunction with other physiological and neuroanatomical research techniques, and how the basic training procedures may need to be modified to accommodate these techniques, are also provided. These experiments show that voluntarily diving rats exhibit the same cardiorespiratory changes typically seen in other diving animals. The ease with which rats can be trained to voluntarily dive underwater, and the already available data from rats collected in other neurophysiological studies, makes voluntarily diving rats a good behavioral model to be used in studies investigating the central aspects of the mammalian diving response.

Detailed instructions are provided on how to train rats to voluntarily dive underwater through a 5 m long Plexiglas maze. Because the brains of rats have been very well characterized, voluntarily diving rats may help elucidate the central pathways of the mammalian diving response.

Ratos treinamento para Voluntariamente Dive Underwater: Investigações da Resposta Mergulho dos Mamíferos

Underwater submergence produces autonomic changes that are observed in virtually all diving animals. This reflexly-induced response consists of apnea, a ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure multiple dimensions of unconditioned behavior in small laboratory mammals (e.g., mice, rats, tree shrews and small primates). This paradigm is a valuable alternative for the use of a behavioral test battery, since a broad behavioral spectrum of an animal&#8217;s behavioral profile can be investigated in one single test.
The apparatus consists of a box, representing the &#8216;protected&#8217; area, separated from a group compartment. A board, on which small cylinders are staggered in three lines, is placed in the center of the box, representing the &#8216;unprotected&#8217; area of the set-up. The cognitive abilities of the animals can be measured by baiting some cylinders on the board and measuring the working and reference memory. Other unconditioned behavior, such as activity-related-, anxiety-related- and social behavior, can be observed using this paradigm. Behavioral flexibility and the ability to habituate to a novel environment can additionally be observed by subjecting the animals to multiple trials in the mHB, revealing insight into the animals&#8217; adaptive capacities.
Due to testing order effects in a behavioral test battery, na&#239;ve animals should be used for each individual experiment. By testing multiple behavioral dimensions in a single paradigm and thereby circumventing this issue, the number of experimental animals used is reduced. Furthermore, by avoiding social isolation during testing and without the need to food deprive the animals, the mHB represents a behavioral test system, inducing if any, very low amount of stress.

This protocol describes the modified hole board, which is a behavioral test set-up that comprises the characteristics of an open field and a traditional hole board. This set-up enables the differential analysis of unconditioned behavior of small laboratory mammals as well as the analysis of cognitive abilities.

The Hole Board Modificado - Medir Comportamento, Cognição e Interação Social em camundongos e ratos

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

A Treatment Package without Escape Extinction to Address Food Selectivity

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including autism. Behavior analytic interventions for the treatment of feeding difficulties oftentimes include escape extinction as a primary component of treatment. The use of escape extinction, while effective, may be problematic as it is also associated with the emergence of challenging behavior (e.g., extinction burst). Such challenging behavior may be an acceptable side effect in treatment cases where feeding problems are severe and chronic (e.g., failure to thrive). However, in more acute cases (e.g., selective eating), the negative side effect may be unwarranted and undesired. More recent research on the behavioral treatment of food selectivity has begun to evaluate treatments for feeding difficulties that do not include escape extinction (e.g., demand fading, behavioral momentum), with some success. However, research to date reveals individual differences in responsiveness to such treatments and no clear preferable treatment has emerged. This manuscript describes a multi-component treatment package that includes shaping, sequential presentation and simultaneous presentation, for the treatment of food selectivity in four young children with developmental delays. This treatment package extends the literature on the behavioral treatment for food selectivity and offers a multi-component treatment protocol that may be clinically applicable across a range of treatment scenarios and settings.

Feeding difficulties are a common problem for children with developmental disorders, including autism, and behavioral interventions often include escape extinction. Recent research has begun to evaluate treatments that do not include escape extinction. This manuscript describes a multicomponent treatment package that does not use escape extinction to treat feeding difficulties.

Um pacote de tratamento, sem escapar da extinção a Morada Food Seletividade

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

Formação Abordagem Condicionada pavloviano em Ratos

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article describes a rodent version of the PVT&#8212;termed the &#34;rPVT&#34;&#8212;that measures similar aspects of attention (i.e., performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention). Data are presented that demonstrate both the short- and long-term usefulness of the rPVT when employed with laboratory rats. Rats easily learn the rPVT, and learning to perform the basic procedure takes less than two weeks of training. Once acquired, rat performances in the rPVT show a high degree of similarity to these same performance measures in the human PVT, including similarities in, lapses in attention, reaction times, vigilance decrements across session time (i.e., the human &#34;time-on-task&#34; effects), and the response-stimulus interval (RSI) effect described for humans. Thus the rPVT can be an extremely valuable tool for assessing the effects of a wide range of variables on sustained attention quite similar to human PVT performances, and thus can be useful for developing novel treatments for neurobehavioral dysfunctions.

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

A rat version of the human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is described that measures aspects of attention similar to those measured with the human PVT, including aspects of human vigilance such as performance accuracy, motor speed, premature responding, and lapses in attention.

O psicomotora Teste Rodent Vigilância (rPVT): um método para avaliar Neurobehavioral Desempenho em ratos e camundongos

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

The Knob Supination Task: A Semi-automated Method for Assessing Forelimb Function in Rats

Tasks that accurately measure dexterity in animal models are critical to understand hand function. Current rat behavioral tasks that measure dexterity largely use video analysis of reaching or food manipulation. While these tasks are easy to implement and are robust across disease models, they are subjective and laborious for the experimenter. Automating traditional tasks or creating new automated tasks can make the tasks more efficient, objective, and quantitative. Since rats are less dexterous than primates, central nervous system (CNS) injury produces more subtle deficits in dexterity, however, supination is highly affected in rodents and crucial to hand function in primates. Therefore, we designed a semi-automated task that measures forelimb supination in rats. Rats are trained to reach and grasp a knob-shaped manipulandum and turn the manipulandum in supination to receive a reward. Rats can acquire the skill within 20 &plusmn; 5 days. While the early part of training is highly supervised, much of the training is done without direct supervision. The task reliably and reproducibly captures subtle deficits after injury and shows functional recovery that accurately reflects clinical recovery curves. Analysis of data is performed by specialized software through a graphical user interface that is designed to be intuitive. We also give solutions to common problems encountered during training, and show that minor corrections to behavior early in training produce reliable acquisition of supination. Thus, the knob supination task provides efficient and quantitative evaluation of a critical movement for dexterity in rats.

This manuscript describes a semi-automated task that quantifies supination in rats. Rats reach, grasp, and supinate a spherical manipulandum. The rat is rewarded with a pellet if the turn angle exceeds a criterion set by the user. This task increases throughput, sensitivity to injury, and objectivity compared to traditional tasks.

A tarefa de supinação de botão: Um método semi-automático para avaliar a função do Forelimb em ratos

Tasks that accurately measure dexterity in animal models are critical to understand hand function. Current rat behavioral tasks that measure dexterity ...

A New Method for Inducing a Depression-Like Behavior in Rats

Contagious depression is a phenomenon that is yet to be fully recognized and this stems from insufficient material on the subject. At the moment, there is no existing format for studying the mechanism of action, prevention, containment, and treatment of contagious depression. The purpose of this study, therefore, was to establish the first animal model of contagious depression.
Healthy rats can contract depressive behaviors if exposed to depressed rats. Depression is induced in rats by subjecting them to several manipulations of chronic unpredictable stress (CUS) over 5 weeks, as described in the protocol. A successful sucrose preference test confirmed the development of depression in the rats. The CUS-exposed rats were then caged with na&#239;ve rats from the contagion group (1 na&#239;ve rat/2 depressed rats in a cage) for an additional 5 weeks. 30 social groups were created from the combination of CUS-exposed rats and na&#239;ve rats.
This proposed depression-contagion protocol in animals consists mainly of cohabiting CUS-exposed and healthy rats for 5 weeks. To ensure that this method works, a series of tests are carried out - first, the sucrose preference test upon inducing depression to rats, then, the sucrose preference test, alongside the open field and forced-swim tests at the end of the cohabitation period. Throughout the experiment, rats are given tags and are always returned to their cages after each test.
A few limitations to this method are the weak differences recorded between the experimental and control groups in the sucrose preference test and the irreversible traumatic outcome of the forced swim test. These may be worth considering for suitability before any future application of the protocol. Nonetheless, following the experiment, na&#239;ve rats developed contagion depression after 5 weeks of sharing the same cage with the CUS-exposed rats.

This protocol describes a new model by which healthy rats could contract depression over a given time periodthrough contagion by exposure to chronic unpredictable stressed (CUS) rats.

Um novo método para induzir um comportamento parecido com depressão em ratos

Contagious depression is a phenomenon that is yet to be fully recognized and this stems from insufficient material on the subject. At the moment, there is ...