Técnicas de manuseio e contenção de roedores

Fonte: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universidade de Notre Dame, IN

Foi demonstrado que mesmo o manuseio mínimo de ratos e ratos é estressante para os animais. O manuseio para troca de gaiolas e outros procedimentos não invasivos causa um aumento na frequência cardíaca, pressão arterial e outros parâmetros fisiológicos, como os níveis de corticosterona sérica. As flutuações podem continuar por até várias horas. Os métodos de contenção necessários para injeções e retiradas de sangue também causam alterações fisiológicas que podem afetar potencialmente os dados científicos. O treinamento no manejo adequado de ratos e ratos é necessário para minimizar os efeitos aos animais. ¹ Ratos e ratos podem ser contidos manualmente com dispositivos de contenção, ou com agentes químicos. Os métodos manuais e o uso de dispositivos de contenção são abordados neste manuscrito. Todos os métodos de contenção incluem o processo de retirada dos animais de sua gaiola doméstica.

Métodos comuns para remover um rato ou um rato de sua gaiola envolvem levantar o animal pela cauda, usar fórceps para agarrar o escrúpulo do pescoço ou base da cauda, usando um tubo ou outro dispositivo de enriquecimento,² agarrando ao redor do corpo, ou enfiando o animal na palma da mão. ^3,4

Ao levantar um rato ou rato pela cauda, é imperativo que a cauda seja agarrada na base perto da garupa do animal. Caso o animal seja levantado da extremidade da cauda, a pele da cauda pode deglove e ser arrancada pelo estresse do peso corporal; uma lesão degloving resultará na amputação da cauda. ³ Mover um animal de uma gaiola para outra, ou para uma superfície de trabalho, deve ser feito de forma rápida e constante. Suspender o animal no ar por qualquer período de tempo não só causará angústia, mas também pode causar a torção ou luta do animal, possivelmente resultando em danos à cauda. O manipulador não deve colocar a mão sob o animal porque- como ele é levantado por sua cauda - é instintivo para o animal tentar agarrar a mão para a segurança, resultando em uma mordida.

Em muitas instalações de produção de camundongos, fórceps são usados para remover animais de suas gaiolas. Isso é feito para a biossegurança, pois acredita-se que há menos chance de contaminação cruzada de animal para animal. As pontas dos fórceps devem ser armazenadas em álcool entre o manuseio de animais individuais ou grupos de animais. Há uma variedade de fórceps usados para agarrar ratos. Os mais usados incluem fórceps de curativo longo com pontas atraumáticas ou com tubos de borracha, plástico ou silicone colocados sobre as extremidades dos fórceps para fornecer um fórceps de almofada ou língua com apertos de borracha. ⁴

Fórceps podem agarrar um rato no pescoço ou na base da cauda. A maioria dos ratos se acostuma com esse método rapidamente e não luta. No entanto, paciência e prática são necessárias para se tornarem adeptos à captura dos animais. Os iniciantes precisarão ser treinados sobre o quão firmemente para agarrar os ratos, especialmente no scruff, pois isso poderia interferir na respiração. Ao usar fórceps na cauda, deve-se tomar cuidado para colocar as fórceps perto da base da cauda para evitar ferimentos.

Para animais ansiosos ou que exibem estereótipos, colocar tubos na gaiola pode diminuir a dificuldade de manuseio e reduzir a resposta de voo/susto à criação diária de animais. Um tubo feito de um material não poro pode ser adicionado para enriquecimento, e servir como um lugar para o animal se abrigar ou buscar refúgio seguro. Esses tubos podem ser abertos ou tampados em uma extremidade. A maioria dos ratos ou ratos entrarão voluntariamente nos tubos quando sua gaiola for aberta, ou eles podem ser facilmente guiados para o tubo. Uma vez que o animal está dentro do tubo, a extremidade aberta é coberta para transportar o animal para o novo local. Quando colocado em uma gaiola fresca, o tubo pode ser suavemente inclinado para cima para encorajar os animais a deixá-lo. Os animais são facilmente condicionados a este método de mudança de gaiola e entrarão imediatamente nos tubos, tornando este método tão rápido e fácil quanto outros para mover animais de um lugar para outro. Embora os tubos não precisem estar presentes na gaiola doméstica para serem eficazes, ter um tubo no recinto primário aumenta o reconhecimento de um local seguro familiar, bem como proporciona enriquecimento da gaiola. ²

Algumas instituições preferem que os animais sejam levantados pelo corpo para o manuseio de rotina, especialmente para o manuseio de ratos. Os animais devem ser habituados a este método desde cedo. Ratos jovens entre 2 e 4 semanas de idade tendem a saltar para cima. Colocar uma mão nas costas do rato fará com que ele pule na palma do manipulador, permitindo que ele seja agarrado. Uma segunda mão pode ser necessária para evitar que o rato se contorcesse fora de alcance antes de colocá-lo em outra gaiola. Ratos adultos são suavemente agarrados ao redor do tórax, levantados e rapidamente colocados em outra gaiola, ou em uma superfície.

Ao trocar gaiolas com camundongos ou ratos recém-nascidos, muitas vezes é necessário removê-los mantendo o ninho intacto. Com o uso de duas mãos para colher o ninho e recém-nascidos do fundo da gaiola, o ninho intacto é movido para uma nova gaiola. No entanto, para evitar a queda de filhotes, os dedos de cada mão devem ser mantidos juntos. Uma vez movido para uma nova gaiola, é importante verificar se os filhotes estão todos presentes. É aconselhável contar os filhotes antes e depois de movê-los. Uma colher de plástico pode ser usada em vez das mãos. Se este método for usado, uma mão deve ser colocada sobre a parte superior da colher para evitar que os recém-nascidos se esvaam ou saltem para fora da colher. Este método de transferência de filhotes, em comparação com o manuseio individual dos filhotes, é menos angustiante tanto para os filhotes quanto para as barragens.

A contenção para procedimentos técnicos requer um toque confiante e firme, mas gentil. Abordagens provisórias podem resultar em mordidas de manipulador. Se o manipulador recua como um animal grita, esse animal rapidamente aprende a evitar a contenção. No entanto, o manuseio agressivo pode resultar na lesão ou morte de roedores. Um equilíbrio de uma abordagem assertiva, mas suave, é o objetivo do manuseio de roedores.

Ratos e ratos pequenos podem ser contidos segurando a pele na nuca, referida como scruffing. As precauções para este método incluem tanto agarrar a pele muito firmemente ou muito vagamente. Se a pele for agarrada com muita força, as vias aéreas podem ficar restritas, o que pode levar à morte. Se agarrado muito solto, o animal será capaz de virar a cabeça e potencialmente morder o manipulador.

Animais agitados ou extremamente temerosos são muito mais propensos a morder. É melhor acalmar o animal antes de manusear. Existem várias técnicas calmantes que foram testadas com sucesso variado. O método mais confiável é usar algum tipo de contenção química, na maioria das vezes um anestésico de inalação. Isoflurano ou sevoflurano são anestésicos de inalação de ação curta que podem ser entregues apenas com o manuseio necessário para transferir o animal de sua gaiola para uma câmara de indução. Uma vez que o animal é anestesiado, eles podem ser manipulados ou contidos manualmente para o procedimento.

Um método para acalmar um rato é envolvê-lo em uma toalha grossa, permitindo que ele se esconda sob a toalha. Colocá-lo em uma manga de jaleco para que eles possam enterrar a cabeça nas dobras no cotovelo também pode fornecer uma sensação de segurança segura para o animal. Este mesmo resultado pode ser alcançado colocando o animal em uma área escura por alguns minutos.

1. Scruffing

Os ratos são mais frequentemente contidos usando a técnica de escrúpulos, mas ratos jovens também podem ser contidos com este método. Ratos adultos são mais difíceis de conter com essa técnica devido a um pescoço mais muscular, uma quantidade reduzida de pele solta e uma aversão a este método.

1. O método de contenção com uma mão é utilizado mais frequentemente em cepas de camundongos que são muito calmas, como o nu atímico, SCID e algumas cepas GEM. No entanto, há um risco maior de ser mordido com este método. Os manipuladores de animais novatos devem ficar confortáveis com a técnica de contenção de duas mãos antes de tentar o método de uma mão.
   1. Coloque o animal em uma superfície que eles possam segurar, como uma barra de arame superior ou um tapete.
   2. Segure a cauda entre o terceiro e o quarto dedos da mão não-ominante, e aplique tração suave para trás. Isso faz com que o animal se segure na superfície, e resulta em corpo sendo esticado e alongado.
   3. Vire a mão para que a palma esteja voltada para o corpo do animal.
   4. Com o dedo indicador e o polegar, fixe o roedor sobre os ombros.
   5. Deslize suavemente o polegar e o dedo indicador para a frente, e posicione-os na base do crânio. Segure a pele solta no pescoço e levante o animal.
   6. Use o dedo médio para estabilizar o animal ao longo das costas, fixando a pele dorsal contra a base do polegar.
2. Contenção de duas mãos
   1. Coloque o animal em uma superfície que eles possam agarrar.
   2. Segure a cauda na base (dentro de 1-2 cm do corpo) com a mão dominante, e aplique tração suave para trás. Isso faz com que o animal se segure na superfície, e resulta em corpo sendo esticado e alongado.
   3. Com o dedo indicador e o polegar da outra mão, fixar o roedor sobre os ombros.
   4. Deslize suavemente o polegar e o dedo indicador para a frente, e posicione-os na base do crânio. Segure a pele solta no pescoço e levante o animal.
   5. Use os dedos restantes para estabilizar o animal ao longo das costas, fixando a pele dorsal contra a base do polegar.
   6. Fixar os traseiros fixando a cauda contra a palma com o quarto dedo, ou permitindo que os membros traseiros descansem sobre uma superfície sólida.

Figura 1: Método de contenção com uma mão e duas mãos para ratos

2. Luvas

Há uma variedade de luvas disponíveis para os manipuladores usarem para proteção contra mordidas de ratos. Eles geralmente são inadequados para o trabalho com ratos devido à perda de destreza. Muitas vezes, as desvantagens de muitos tipos de luvas superam as vantagens.

1. As luvas de trabalho de lona de algodão não são resistentes à mordida, mas fornecem uma pequena quantidade de proteção contra dentes e unhas. Eles não fornecem uma boa aderência, pois deslizam facilmente sobre a pele.
2. Luvas de couro de boa qualidade são resistentes a mordidas. No entanto, sua rigidez causa uma redução na destreza. A espessura do couro, embora protetora, reduz a acuidade tátil e a mobilidade das mãos.
3. Luvas de correio de corrente fornecem uma sensação psicológica de segurança para o manipulador de animais. No entanto, eles são pesados e a maioria dos dentes de ratos pode penetrar entre as ligações. Além disso, essas luvas diminuem a destreza manual, e se usadas de forma inadequada são mais perigosas tanto para o animal quanto para o manipulador.
4. Luvas isoladas de borracha que são comumente usadas em casas para lavar pratos fornecem uma superfície palmar texturizada, e permitem um aperto seguro na camada de cabelo dos roedores. A superfície elástica do látex é espessa o suficiente para resistir à perfuração por incisivos de roedores, e fina o suficiente para ser capaz de sentir e controlar o animal. A maior desvantagem é que eles são feitos de látex, o que é uma preocupação para pessoas com alergia ao látex. Além disso, essas luvas se deterioram à luz, e precisam ser substituídas regularmente.

3. Contenção corporal

1. O "T. rex grip" é um método de contenção de duas mãos para ratos.
   1. Coloque um rato em uma superfície que pode ser agarrada.
   2. Segurando a base da cauda com uma mão, traga a outra mão para cima e para trás com o índice e os dedos médios rachados.
   3. Coloque a mão sobre o ombro com o dedo indicador em um lado da cabeça, e o dedo médio do outro lado. Os dedos de cada lado da cabeça restringem o movimento lado a lado da cabeça.
   4. Encote o corpo atrás das pernas dianteiras com o terceiro dedo, o quarto dedo e o polegar. Deve-se tomar cuidado para evitar comprimir o peito e comprometer as respirações. Esta aderência impede que o rato se mova para frente ou para trás para fora da mão.
   5. Estabilize a cauda e o traseiro, agarrando a base da cauda com ou sem segurar os pés traseiros.
   6. Essa contenção funciona bem com ratos maiores, e quando o acesso à cabeça é necessário.
2. O método de cruzamento de membros dianteiros é um método de contenção de duas mãos.
   1. Coloque o animal em uma superfície que eles possam agarrar.
   2. Segure a cauda na base (dentro de 1-2 cm do corpo) com a mão dominante e aplique tração suave para trás. Isso faz com que o animal se agarre à superfície, e resulta em esticadas e alongadas pelo corpo.
   3. Traga a outra mão por trás.
   4. Segure o rato diretamente atrás dos ombros, com os dedos de um lado e o polegar do outro lado do peito, e deslize a mão para a frente, forçando assim as pernas dianteiras para a frente.
   5. As pernas dianteiras atravessarão sob o queixo do rato, criando uma barreira física e impedindo que o rato mova sua cabeça para baixo em direção aos dedos.
   6. Tome cuidado para evitar comprimir o peito e comprometer as respirações.

Figura 2: T-rex aderência e método de cruzamento de membros dianteiros para conter ratos

4. Dispositivos de contenção

Figura 3: Dispositivo de contenção estilo Broome

Figura 4: Cabente de roedor de fundo plano

1. Dispositivos rígidos vêm em uma variedade de tipos, e geralmente são feitos de material não poroso que é facilmente desinfetado.
   1. A contenção ao estilo Broome foi projetada para fornecer acesso à cauda para injeções intravenosas. Ele é construído com um slot que percorre toda a extensão do dispositivo, o que permite que o animal seja puxado para o traseiro de contenção primeiro. Uma peça de nariz de plástico é inserida para manter o animal no lugar.
      1. Remova a peça do nariz do corpo do tubo de contenção afrouxando o parafuso.
      2. Segure o animal na base da cauda, e oriente o tubo de contenção para que a fenda que percorre o comprimento do tubo esteja voltada para cima. Puxe suavemente o animal para o dispositivo de contenção primeiro.
      3. Muitas vezes é vantajoso colocar o animal em uma superfície lisa para facilitar sua colocação no tubo.
      4. Uma vez que o animal está totalmente no tubo - e foi atraído para o fechamento final deslize a peça de nariz plástico para o tubo para ocluir a abertura.
      5. Coloque o conjunto da peça do nariz para que o nariz do animal esteja na abertura central. Não posicione a peça do nariz tão firmemente que o animal não possa respirar.
   2. O cabidor de roedores de fundo plano é um meio cilindro com aberturas que permitem o acesso a partir da parte superior e inferior do dispositivo de contenção. Um portão de plástico rígido é inserido em uma das várias ranhuras graduadas para segurar o animal dentro do dispositivo.
      1. Segure o animal pela base da cauda com a mão dominante em uma superfície lisa, ou em um topo de gaiola.
      2. Segure o tubo de contenção de fundo plano na outra mão, e dimensione-o para que a extremidade aberta esteja na cabeça do animal em um ângulo de 45° para a superfície superior da mesa/gaiola.
      3. Alguns animais entrarão imediatamente no tubo, enquanto outros estão relutantes e exigem que o manipulador os guie para o tubo.
      4. Coloque o tubo sobre a cabeça do animal. Bata imediatamente na garupa do animal e mantenha a pressão para evitar que o animal se recupere.
      5. Uma vez que o animal esteja no dispositivo de contenção, deslize o portão de plástico para dentro da fenda apropriada para segurar o animal no dispositivo de contenção.
   3. As restrições do tubo são cilindros plexiglass com uma extremidade fechada contendo orifícios ou fendas para circulação de ar. Alguns são modificados com uma faixa de fenda larga do comprimento do cilindro para acomodar a exposição de um membro traseiro para injeções intramusculares, coleta de sangue safeno e femoral, ou acesso à superfície dorsal para injeções subcutâneas.
      1. Segure o animal pela base da cauda com a mão dominante em uma superfície lisa, ou em um topo de gaiola.
      2. Segure o tubo de contenção na outra mão e dimensione-o para que a extremidade aberta esteja na cabeça do animal em um ângulo de 45° para a superfície superior da mesa/gaiola.
      3. Alguns animais entrarão imediatamente no tubo. Outros animais estão relutantes e exigem que o manipulador os guie para o tubo.
      4. Coloque o tubo sobre a cabeça do animal. Bata imediatamente na garupa do animal e mantenha a pressão para evitar que o animal se recupere.
      5. Escroto e guia manualmente animais incontroláveis para o tubo, permitindo que a pele que está sendo mantida deslize através da fenda no tubo.
      6. Uma vez que o animal está no dispositivo de contenção, é necessário ocluir a abertura para evitar que o animal se recupere.
      7. Dependendo do procedimento, vários dedos são colocados em toda a abertura.
      8. Enfie uma luva de látex grande na abertura. As luvas são geralmente texturizadas e vão segurar a superfície plexiglass.
      9. Alguns tubos de contenção terão fechamentos específicos para esse estilo ou tamanho.

Figura 5: Dispositivo de contenção do tubo

2. Os contentores flexíveis são cones plásticos flexíveis descartáveis. Eles estão disponíveis em plástico transparente ou opaco. O plástico é fino o suficiente para permitir a penetração por uma agulha para realizar injeções sem remover o animal do dispositivo de contenção. Eles vêm em uma variedade de tamanhos para caber ratos e ratos, tanto adultos quanto desmaseamento.
   1. Corte o plástico com uma tesoura para permitir o acesso aos membros, à cauda e a outros locais de injeção.
   2. Selecione um tamanho de cone apropriado para o animal. O cone deve ser longo o suficiente para estender 2-3 polegadas além da garupa do animal.
   3. Insira o animal no cone
      1. Abra o cone e segure-o ao redor da metade superior.
      2. Segure o animal pela base da cauda com a mão dominante, colocando-o em uma superfície lisa ou em um topo de gaiola.
      3. Segure o cone de contenção na outra mão, e dimensione-o para que a extremidade aberta esteja na cabeça do animal em um ângulo de 45° para a superfície superior da mesa/gaiola.
      4. Alguns animais entrarão imediatamente no cone. Outros animais estão relutantes e exigem que o manipulador os guie para o cone de contenção.
      5. Coloque o cone sobre a cabeça do animal. Bata imediatamente na garupa do animal e mantenha a pressão para evitar que o animal se recupere. Devido ao diâmetro maior da abertura do cone, os animais são muito mais propensos a se virar para sair do cone.
      6. Assim que o animal entra no cone, segure a extremidade aberta e selá-la para forçar o animal até o fim.
      7. Fixar a abertura dobrando o plástico para um lado da cauda e aplicando o clipe da pasta no plástico dobrado, tomando cuidado para evitar a fixação da cauda ou da pele. Alternativamente, reúna o plástico ao redor da cauda uniformemente, e coloque a gravata o mais próxima possível do corpo para garantir a abertura.

Figura 6: Contenção flexível

5. Métodos de contenção para procedimentos técnicos específicos

1. A exposição ventral é necessária para injeções intraperitoneais.
   1. Scruffing
      1. Escro o animal e gire a mão para que o abdômen seja exposto.
      2. Incline o animal para que a cabeça esteja apontando para baixo em um ângulo de 30°.
      3. Segure o traseiro prendendo a cauda contra a palma usando o quarto dedo.
      4. Alternativamente, os traseiros podem ser imobilizados fixando o excesso de pele ao longo das costas entre os dedos e a base do polegar.
   2. T. rex aderência e métodos de contenção de cruz
      1. Segure o animal (somente ratos) usando qualquer uma das técnicas acima.
      2. Com a mão livre, segure as duas patas traseiras acima do hock, e estenda-as caudally.
      3. Apoie o peso do animal com a palma da mão nas costas.
      4. Incline o animal para que a cabeça esteja apontando para baixo em um ângulo de 30°.
      5. Uma segunda pessoa faz a injeção.
   3. Contenção rígida
      1. A maioria dos dispositivos rígidos de contenção não pode impedir que o animal instintivamente enrole para permanecer ereto.
      2. Se um contidor rígido for empregado, gire o animal para que sua cabeça seja apontada para baixo e seja perpendicular à mesa.
   4. Contenção flexível
      1. Quando colocado corretamente em um cone de plástico flexível, o animal é incapaz de virar ou virar.
      2. Deve-se tomar cuidado para posicionar o animal de tal forma que os membros traseiros estejam suficientemente separados para permitir o acesso ao abdômen.
      3. Como o animal é comprimido, é imperativo que a injeção seja baixa o suficiente na superfície ventral para evitar perfurar o baço, fígado, rim ou estômago.
2. A exposição dorsal é necessária para injeções no espaço subcutâneo.
   1. Scruffing
      1. Esmague o animal e deixe suas patas traseiras descansarem sobre uma superfície plana e sólida.
      2. Levante o scruff para criar uma tenda de pele sobre o pescoço e ombros.
      3. Coloque o peso da mão sobre a mesa ao injetar ratos. Colocar peso no mouse pode causar sufocamento.
      4. Segure os ratos no lugar com peso no traseiro, mas nunca no peito.
      5. Injete a substância no espaço abaixo dos dedos no corpo do animal.
   2. Restrições rígidas
      1. Coloque o animal em um dispositivo de contenção com uma abertura grande o suficiente para puxar a pele para cima.
      2. Pode ser necessário usar fórceps para agarrar a pele.
      3. A maioria dos animais permanece na postura adequada, a menos que a contenção seja girada.
      4. Não injete um volume que impeça a pele de recuar da abertura assim que a injeção estiver completa.
3. A contenção do membro traseiro é necessária para injeção intramuscular; retirada sanguínea da veia safena, veia femoral ou artéria femoral; e injeção no footpad.
   1. Escrúpulos de ratos e ratos pequenos (abaixo de 200 g)
      1. Escro o animal e gire a mão para que o abdômen seja exposto.
      2. Acesse o pé traseiro colocando o pé entre os dedos.
      3. Este método é melhor utilizado apenas para injeções de footpad.
   2. T. rex aderência ou membro dianteiro crisscross
      1. Este método requer duas pessoas: uma para contenção do corpo e outra para contenção do membro e desempenho da injeção.
      2. Estenda a perna traseira do rato segurando o pé para acesso à veia safena, veia femoral ou artéria, ou o músculo para injeção.
      3. Segure a perna logo acima do hock para injeção do footpad.
   3. Restrições rígidas
      1. Coloque o animal em uma cabeça de tubo de contenção primeiro.
      2. Exponha a cauda e o traseiro puxando-os suavemente para trás do tubo.
      3. Imobilize a perna segurando a pele do flanco e travando o joelho reto. Isso fornece acesso ao músculo quadríceps para injeção no rato ou rato, e impede que o animal saia do dispositivo de contenção.
      4. Em dispositivos com ranhuras grandes, posicione a perna fora do tubo para acesso aos vasos sanguíneos para amostragem ou injeção de footpad.
      5. Esses tubos de contenção com peças de extremidade plana permitem que o tubo repouse sobre a mesa e estabilize o dispositivo durante o procedimento.
      6. Como o animal é protegido dessa forma, é possível realizar injeções ou amostragem de sangue de ratos por um único técnico.
   4. Contenção flexível
      1. As restrições plásticas flexíveis podem ser modificadas cortando aberturas para acomodar a exposição de membros.
      2. As vagas feitas podem ser personalizadas para cada animal, ou para procedimentos específicos.
      3. Como o animal é protegido desta forma, é possível que um único técnico realize injeções ou amostragem de sangue de ratos.

O manuseio rotineiro para troca de gaiolas e procedimentos técnicos é motivo de estresse para animais experimentais. Embora esse tipo de estresse não seja uma ameaça ao bem-estar geral do animal, pode causar flutuações nos parâmetros fisiológicos que podem ter um efeito adverso nos dados da pesquisa. O uso de pessoal qualificado, técnicas adequadas e equipamentos pode mitigar parte do estresse.

1. Balcombe, J.P., Barnard, N.D., and Sandusky, C. 2004. Laboratory routines cause animal stress. Contemporary Topics. 43:6. 42-51
2. Gouveia, K. and Hurst, J.L. 2013. Reducing mouse anxiety during handling: effect of experience with handling tubes.
3. AALAS Learning Library*. Animal handling and restraint in: Working with the laboratory rat. https://www.aalaslearninglibrary.org/Pages/Courses/CourseAllPages.aspx?intLessonID=27691
4. AALAS Learning Library*. Animal handling and restraint in: Working with the laboratory mouse. https://www.aalaslearninglibrary.org/Pages/Courses/course.aspx?intCourseID=2451&intPageID=94993

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