Medindo níveis de stress biofísicos e psicológicos após visitação a três locais com diferentes níveis de natureza

O objetivo deste trabalho é identificar mudanças nos níveis de estresse após a visitação em três diferentes configurações e descrever os métodos utilizados na identificação de níveis de estresse com base em medidas de cortisol salivar, α-amilase e um autorrelato psicológico Instrumento.

A visitação a ambientes naturais tem sido associada à redução do estresse psicológico. Embora a maioria das pesquisas relacionadas ao estresse dependesse de formatos de autorrelato, um número crescente de estudos agora incorpora hormônios e catalisadores biológicos relacionados ao estresse, como o cortisol e a α-amilase, para medir os níveis de estresse. Aqui apresentamos um protocolo para examinar os efeitos sobre os níveis de estresse biofísico e psicológico após visitação a três locais diferentes com níveis diferentes de natureza. Os níveis de estresse psicológico biofísico e autorrelatado são medidos imediatamente após a entrada dos locais selecionados e pouco antes dos visitantes saírem do local. Usando um método "drool", a medida biofísica consiste em 1-2 mL de amostras de saliva fornecidas por sujeitos do estudo após a entrada em um dos três locais de estudo. Conforme prescrito pela literatura existente, a saliva é coletada dentro de um período de 45 minutos após o término do engajamento do visitante no local. Após a coleta de saliva, as amostras são rotuladas e transportadas para um laboratório biológico. O cortisol é a variável Biofísica de interesse neste estudo e medido por meio de um processo ELISA com um leitor de placas TECAN. Para mensurar o estresse autorreferido, o questionário de estresse percebido (PSQ), que relata níveis de preocupação, tensão, alegria e demandas percebidas. Os dados são recolhidos em todos os três locais no final da tarde até o início da noite. Quando comparados em todas as três configurações, os níveis de estresse, medidos tanto pelos marcadores biológicos quanto pelos autorrelatos, são significativamente menores após a visitação até o cenário mais natural.

Níveis elevados de estresse têm sido ligados a muitas condições de saúde graves, como doenças cardíacas, obesidade e distúrbios psicológicos^1,2,3. Um crescente corpo de pesquisa sugere que a proximidade ou visitação a ambientes naturais, como parque e paisagens não desenvolvidas, pode ter um efeito notável no bem-estar psicológico e diminuição dos níveis de stress^{1,4, 5,6,7,8,9,10}. Explicações para os efeitos das configurações naturais e níveis de estresse incluíram o seguinte: (1) as configurações naturais fornecem locais para a atividade física^8,11 e (2) os visitantes de ambientes naturais têm a capacidade de se concentrar em mais processos de pensamento não-tarefa, levando assim a uma redução na fadiga de atenção¹². Para determinar os efeitos da natureza na redução do estresse, este estudo utiliza um autorrelato de estresse psicológico (PSQ) e dois biomarcadores à base de saliva, cortisol e α-amilase, após visitação a três locais de recreação diferentes. Estes locais variam entre os seus níveis de "naturalidade" e incluem um cenário de natureza selvagem, Parque Municipal e instalações de fitness e recreação locais.

Este estudo tem como objetivo abordar as seguintes questões de pesquisa: (RQ₁) existem diferenças nos níveis de estresse biofísico medidos por cortisol salivar e α-amilase quando comparados em todos os três sítios (isto é, natural, semi-natural, construído)? (RQ₂) Existem diferenças nos níveis de estresse psicológico medidos pelo PSQ (manifestado por quatro construtos: demandas, preocupações, tensão e alegria) quando comparados em todos os três sítios (isto é, natural, semi-natural, construído)?

Este estudo segue as políticas e diretrizes do programa de proteção de pesquisa humana do Conselho de revisão institucional da Universidade de Indiana.

1. seleção de localização

1. Selecione o número de sites (n) com base em diferentes níveis de natureza.
   Nota: escolhemos três sites para o nosso trabalho. Usando um continuum baseado em níveis de "naturalidade", o site A foi considerado o mais natural e é composto por cerca de 1.200 hectares de cumes arborizadas que fazem fronteira com um lago e situado dentro de uma floresta decídua. As atividades mais comuns incluem caminhadas e observação da vida selvagem. O site B foi um parque municipal de 33 hectares com caminhos pedestres, lugares para encontros, playgrounds e espaço aberto para atividades recreativas. O local C era uma instalação urbana, interna do exercício com o mais baixo nível de naturalidade. Todos os três locais estão na proximidade relativamente próxima a uma cidade de tamanho médio (população estimada de 46.000 pessoas) no centro-oeste dos Estados Unidos.

2. triagem e preparação dos participantes

1. Recrutamento participante completo antes que os sujeitos participem de experiências recreativas.
   Nota: para os sites A e B, os sujeitos foram abordados pelo pesquisador no estacionamento da entrada do parque. Para o site C, os assuntos foram abordados na recepção da instalação de exercício indoor. Para controlar as diferenças no tipo de atividade, os assuntos recrutados para ambos os sites A e B foram predominantemente caminhadas, enquanto que para o site C a atividade principal estava em execução ou andando na pista indoor.
2. Durante o recrutamento, lembre os sujeitos a cumprirem as diretrizes relacionadas à coleta de amostras de cortisol salivar. Eles não devem comer ou beber 10 min antes de fornecer amostras de saliva.
   Nota: deve-se notar que, neste caso, as amostras de saliva não foram normalizadas para volume ou diluição (concentração)-ou seja, se os participantes foram adequadamente hidratados e/ou fizeram mudança de hidratação entre as coletas amostrais.
3. Dê braçadeiras vermelhas (ou vestuário equivalentemente perceptível) para cada participante para permitir a identificação fácil quando emergir no final de seus engajamentos.
4. Atribua uma alocação de tempo de 30-40 min para que todos os assuntos entre os três sites passem um período de tempo semelhante em cada site. Exclua assuntos que gastam substancialmente mais ou menos tempo do que o restante da amostra.
5. Mantenha o tipo de atividade engajado consistente.
   Nota: neste caso, a actividade "Medium" foi caminhar ou fazer caminhadas. Foram excluídos da amostra indivíduos que exerçam atividades substancialmente diferentes de caminhada ou caminhada. Por exemplo, os indivíduos que estavam pescando, picnicking, ou levantamento de peso não foram incluídos nas amostras respectivas.

3. condições e desenho experimental

1. Use um projeto Quasi-experimental do pre-teste/borne-teste.
2. Depois de identificar os sujeitos e ao concordar em participar, peça a cada sujeito que leia e assine um formulário do IRB explicando a natureza voluntária, o propósito e os procedimentos do estudo.
3. Após este processo, dar aos sujeitos uma peça de roupa (por exemplo, braçadeira vermelha) para a identificação futura e obter medidas fisiológicas e psicológicas dos níveis de stress (ou seja, PSQ, 1-2 ml de saliva que é cuspir ou babou em um tubo de ensaio). Colete amostras do final da tarde para o início da noite.
   Nota: estes dados foram coletados por pesquisadores ambos 1) pouco antes de os sujeitos entraram no site e 2) imediatamente após o término da visitação para o site.

4. amostras de saliva

1. Para evitar a diluição da amostra, peça aos sujeitos que não comam, bebam ou enxaguem as bocas 10 min antes de fornecer amostras de saliva.
2. Peça aos sujeitos que forneçam amostras de saliva de 1-2 mL (excluindo espuma) pouco antes da experiência recreativa e imediatamente após a conclusão da experiência.
3. Colete amostras de saliva usando um método de babar passivo:
   1. Forneça aos indivíduos um 2 na palha bebendo plástica para babar em um CryoVial de 2 ml (veja a tabela de materiais).
   2. Instruir os sujeitos a permitir que a saliva para a piscina em suas bocas, em seguida, Baba para baixo a palha e no CryoVial. De acordo com a coleta de saliva e conselhos de manuseio (2011), 1 mL (excluindo espuma) é adequado para a maioria dos testes.
   3. As amostras de rótulos com um número de identificação de 3 dígitos atribuído (ou seja, 001) e uma letra para indicar o tempo de coleta de dados (ou seja, A representa o pré-teste, B representa o pós-teste; onde 001A representa a amostra de saliva fornecida pelo participante 001 antes de conduzir o experiência recreativa).
   4. Depois que a amostra é recolhida e etiquetada, deve então ser armazenada congelada temporariamente em uma caixa esteróide da espuma completamente do gelo seco para não mais do que 2 h.
   5. Transportar as amostras marcadas para um laboratório e armazenar a-80 ° c até ser analisado.

5. quantificação da α-amilase

Nota: neste ensaio, α-amilase hidrolisa 2-chloro-p-Nitrophenyl-α-d-maltotrioside para 2-chloro-nitrophenol e formas de glicose, 2-chloro-p-Nitrophenyl-α-d-maltoside, maltotriose, e glicose. A reação é monitorada em uma absorbância de 405 nm, o que corresponde à atividade da α-amilase na amostra. Este ensaio demonstra linearidade entre 0 e 2000 U/L.

1. Materiais
   1. Utilizou um conjunto de reagentes de amilase líquida (ver tabela de materiais) para quantificar a α-amilase em amostras de saliva. Todos os reagentes são fornecidos como líquidos prontos para uso e armazenados a 0-4 ° c.
   2. Utilize um leitor de vários modos (ver tabela de materiais) capaz de ler uma densidade óptica a 405 nm com uma temperatura controlada para 37 ° c durante o ensaio.
2. Análise
   1. Descongele as amostras no gelo antes da análise.
   2. Diluir amostras 1:10 com 1X PBS (10 μL de saliva + 90 μL de PBS).
   3. Analise cada amostra em duplicado.
   4. Equilibrar o reagente de amilase a 20-25 ° c durante pelo menos 30 min.
   5. Adicionar 0,1 mL de reagente de amilase a uma microplaca de poço de 96 para cada amostra.
   6. Pré-incubar a microplaca a 37 ° c durante um mínimo de 5 min.
   7. Adicionar 2,5 μL da amostra ao reagente de amilase.
   8. Faça uma leitura inicial após 60 s.
   9. Continue as leituras a cada 60 s por um adicional de 2 min.
   10. Calcule a diferença média de absorbância por minuto (Δabs/min).
3. Cálculo
   1. Para calcular a atividade da amilase, use a seguinte fórmula:
      
      Onde ΔABS/min = alterações na diferença de absorvância por minuto; TV = volume total do ensaio (0,1025 ml); * 1000 = conversão de U/mL para U/L; MMA = absorptividade milimolar de 2-cloro-p-nitrofenol = 12,9; SV = volume amostral (0, 25 ml); e LP = caminho de luz (1 cm). Substituindo dá:
      
      Portanto, multiplicar o Δabs/min por 3178x o fator de diluição (10) para obter amilase em U/L.
   2. Para amostras acima de 2000 U/L (linearidade do ensaio) diluir ainda mais (pelo menos 2x usando PBS) e re-ensaio, em seguida, multiplicar o resultado da α-amilase pelo fator de diluição adicional.

6. quantificação do cortisol

Nota: neste ensaio, o cortisol livre é quantificado na saliva usando uma curva padrão de cortisol. Os padrões e as amostras diluídas são adicionados a uma placa do de microtitulação que seja pre-Coated com um anticorpo. Um conjugado da cortisol-peroxidase é adicionado aos poços, seguido pela adição de um anticorpo monoclonal ao cortisol. A quantidade de ligação de cortisol/peroxidase conjugada diminui à medida que a concentração de cortisol na amostra aumenta.

1. Materiais
   1. Use um kit de imunoensaio de enzima cortisol (ver tabela de materiais) para quantificar o cortisol em amostras de saliva. Todos os reagentes necessários para realizar este ensaio estão incluídos no kit. Todos os componentes do kit são armazenados a 0-4 ° c antes de chegarem à data de expiração.
   2. Use um espectrofotômetro capaz de ler uma densidade óptica (OD) em 450 nm (ver tabela de materiais), bem como software capaz de usar gravações od do leitor de placa para executar quatro parâmetros de curva logística (4 PLC) encaixe.
2. Preparação do reagente
   1. Permitir que todos os reagentes equilibrem a 20-25 ° c durante um mínimo de 30 min.
   2. Diluir o tampão de ensaio de cortisol 1:5 utilizando água desionizada.
   3. Diluir o tampão de lavagem 1:20 utilizando água desionizada.
      Nota: os tampões do ensaio e da lavagem são estáveis por 3 meses quando armazenados em 0-4 ° c.
3. Preparação da amostra
   1. Descongele as amostras no gelo antes da análise.
   2. Diluir amostras 1:10 com tampão de ensaio de cortisol (20 μL de saliva + 180 μL de tampão) e utilizar dentro de 2 h de preparação.
4. Elaboração de normas
   1. Tubos de ensaio de vidro da etiqueta #1-#7.
   2. Pipet 225 μL de tampão de ensaio no tubo #1 e 125 μL de tampão em tubos #2-#7.
   3. Adicione 25 μL da solução do estoque do cortisol ao tubo #1 e ao vortex.
   4. Remover 125 μL de tampão do tubo #1 e adicioná-lo ao tubo #2, em seguida, vortex.
   5. Repita as diluições seriais para tubos #3-#7.
      Nota: as concentrações finais de cortisol de cada norma são mostradas na tabela 1.
   6. As normas devem ser utilizadas dentro de 2 h de preparação.

Tabela 1: tabela de preparação da curva padrão.

5. Análise
   1. Use o layout da placa abaixo na Figura 1 como um guia para configurar a microplaca.
   2. Recomenda-se a utilização de uma pipeta multicanal para adição de reagentes.
   3. Adicionar 50 μL de amostras ou normas no número adequado de poços na chapa. Amostras e padrões devem ser executados em duplicado.
   4. Adicione o buffer de ensaio (75 μL) nos poços de ligação não específica (NSB).
   5. Adicione o tampão de ensaio (50 μL) nos poços de ligação máxima (B0) e nos poços padrão zero (em branco).
   6. Adicionar 25 μL do conjugado de cortisol a cada poço.
   7. Adicione 25 μL do anticorpo do cortisol a cada poço, à exceção dos poços de NSB.
   8. Bata suavemente o lado da placa para misturar os reagentes.
   9. Cubra com o aferidor da placa e agitar à temperatura ambiente (RT) a 20-25 ° c por 1 h.
   10. Retire o conteúdo do poço e enxague cada um bem 4x com tampão de lavagem (300 μL). Bata a placa para secar em toalhas absorventes entre laves.
   11. Adicione o substrato TMB a cada poço (100 μL).
   12. Incubar a placa a 20-25 ° c durante 30 min sem agitação.
   13. Adicione a solução de paragem a cada poço (50 μL).
   14. Leia a densidade óptica em cada poço da microplaca em 450 nm.
   15. Média das densidades ópticas para cada padrão, em seguida, amostra e subtrair a densidade óptica média para os poços NSB.
   16. Calcule o% Bound (B/B0) para todas as amostras usando controles de ligação máxima (B0).
   17. Crie uma curva padrão usando software capaz de ajuste de curva de regressão logística de quatro parâmetros, calculado a partir da curva% B/B0.
   18. Multiplicar o resultado pelo fator de diluição (10) para obter valores de cortisol em pg/mL.
   19. As amostras com densidades ópticas que caem acima do padrão o mais elevado devem mais ser diluídas com amortecedor do ensaio e re-analisado, a seguir o resultado deve ser multiplicado pelo fator adicional da diluição.

Figura 1 : Layout da placa de exemplo. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

7. medição psicológica (questionário de stress percebido)

1. Medir os níveis psicológicos dos sujeitos que utilizam o PSQ publicado por Fliege et al.¹³, que inclui quatro fatores (preocupação, tensão, tensão, alegria) e utiliza 20 itens.
2. Peça ao sujeito que preencha o PSQ pouco antes de sua experiência recreativa e imediatamente após a conclusão da experiência.
3. Marque questionários com um número de identificação de 3 dígitos idêntico ao nível de estresse biophysiológico de cada sujeito.

Descrição da amostra
Utilizando uma técnica de amostragem de cotas, este estudo recrutou 35 visitantes de cada um dos três sítios. No total, 105 indivíduos foram recrutados neste estudo, incluindo 63 machos e 42 fêmeas. As idades médias dos visitantes recrutados em três locais diferentes foram de 25,9 anos (site A), 37,2 anos (site B) e 28,8 anos (site C). Também foram registradas as frequências de visitação dos sujeitos aos três sítios selecionados. Para o local A e o local C, a maioria dos assuntos visitou este local um a três vezes por a semana. Para os indivíduos no local B, sua frequência de visitação foi dividida igualmente entre uma a três vezes por semana e mais de três vezes por semana.

Indicadores de estresse biofísicos e psicológicos. As medidas biofísicas dos níveis de cortisol e α-amilase foram utilizadas para identificar alterações nos níveis de estresse fisiológico. As mudanças no stress psicológico foram identificadas através do instrumento de PSQ.

Efeitos da visitação do local recreativo sobre os níveis de cortisol e níveis de α-amilase
A primeira pergunta de pesquisa perguntou se haveria uma diferença nos níveis de cortisol e α-amilase em função do tipo de local (por exemplo, nível de natureza). Um teste tde amostra pareado resultou em uma diminuição significativa do cortisol salivar após o local de visita a (ajuste natural) [t₃₁ = 3,26, p < .01, ver Figura 2]. Não foram observadas alterações significativas nos níveis de cortisol no local B e C. Ao comparar as alterações dos indivíduos em seus níveis de cortisol em todos os três sítios, os resultados do teste ANOVA indicaram que diferentes sítios (níveis de natureza) não tiveram um impacto global significativo sobre as alterações dos indivíduos nos níveis de cortisol [F_{(2, 95 )} = 1,86, p = 0,16] com pequenos tamanhos de efeito (0,01-0,04).

A mensuração das alterações nos níveis de estresse (pré/pós-visitação) utilizando níveis de α-amilase resultou em achados mistos entre os três locais de estudo. Após a utilização da amostra pareada, os testes tindicam aumentos significativos nos níveis de α-amilase após visitarem o site C [t₃₄ = 2,79, p < . 01. As diferenças estatísticas não foram observadas após a visitação aos sítios A ou ao sítio B. (ver Figura 3). A análise por meio de técnicas de ANOVA indicou que o principal efeito da localização com diferentes locais teve um impacto significativo nas alterações dos indivíduos nos níveis de α-amilase [F_(2.101)= 3,36, p < 0, 5]. Utilizando a análise pós-hoc de Scheffe, os níveis de α-amilase foram significativamente mais elevados depois de visitarem o site C quando comparados com o site B. Houve uma falta de diferenças significativas nos níveis de α-amilase ao comparar os visitantes ao local a e ao local B, ou entre o local A e o local C. os tamanhos do efeito de (0.03-0.01) foram encontrados e determinados ser pequenos.

Efeitos da visitação do local recreativo sobre os níveis de stress psicológico
Testes t de amostra pareados foram aplicados para comparar pré e pós-visita de níveis de estresse psicológico entre os três sítios, respectivamente. Conforme demonstrado na Figura 4 e 5, após visitação aos três locais, observaram-se reduções significativas nos fatores de demanda e preocupação (p < 0, 1). Nenhuma alteração significativa no fator, tensão, foi observada para qualquer um dos três locais. (Consulte a Figura 6). Os aumentos significativos foram relatados nos locais A e no local B para o fator, alegria. Não foi observada alteração significativa para os visitantes do sítio C (ver Figura 7).

Para determinar se qual dos três sites é mais eficaz na redução dos níveis de estresse psicológico dos sujeitos, o resultado dos testes ANOVA indicou diferenças significativas entre os três sítios (p < 0, 1) com análise post-hoc utilizando o Método de scheffe, relatando aumentos significativos nos níveis de alegria depois de visitar o site a, comparado aos visitantes visitando sites B e site C. Não foram encontradas diferenças nas alterações nos níveis de demandas, preocupaçõese tensões (p = 0,27) em três locais.

Em resumo, os visitantes do site a (mais natural) relataram diminuição significativa dos níveis de cortisol; sugerindo uma redução nos níveis de stress biológico. Além disso, como medido pelo PSQ, reduções significativas nos fatores psicológicos das demandas e preocupações, e um aumento significativo no nível de alegria foram observados nos visitantes ao local a. visitantes do site B (semi-natural) relataram reduções nos níveis de demandas e preocupações, e um nível aumentado de alegria. C (ambiente construído) duas diminuições no nível de demandas e de preocupações foram relatadas. Curiosamente, os níveis de α-amilase aumentaram significativamente após a visitação para o local C. Uma pesquisa mais adicional é autorizada a examinar a influência de fatores potenciais, tais como a atividade específica ou o cerco social, particular no catalizador, α-amilylase.

Figura 2 : Alterações nos níveis de cortisol depois de visitar três locais diferentes. Esta figura mostra os níveis de cortisol dos sujeitos medidos antes e depois de visitar três sítios diferentes representando diferentes níveis de natureza: os sítios A, B e C. os dados são apresentados como média ± DP na escala natural do tronco. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 3 : Alterações nos níveis de amilase depois de visitar três locais diferentes. Esta figura mostra os níveis de amilase dos indivíduos medidos antes e depois de visitar os sítios A, B e C. os dados são apresentados como média ± DP na escala natural do tronco. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 4 : Mudanças nos níveis percebidos das demandas depois de visitar três locais diferentes. Esta figura mostra que os níveis de demandas dos sujeitos diminuíram após visitarem os sites A, B e C. os dados são apresentados como média ± DP. por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 5 : Mudanças nos níveis percebidos de preocupações depois de visitar três locais diferentes. Esta figura mostra que os níveis de preocupações dos sujeitos diminuíram após visitarem os sites A, B e C. os dados são apresentados como média ± DP. por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 6 : Mudanças nos níveis percebidos de tensão depois de visitar três locais diferentes. Esta figura mostra que os níveis de tensão dos sujeitos diminuíram após visitarem os sites A, B e C. os dados são apresentados como média ± DP. por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 7 : Mudanças nos níveis percebidos de alegria depois de visitar três locais diferentes. Esta figura mostra que os níveis de alegrias dos sujeitos aumentaram depois de visitar os sites A, B e C. os dados são apresentados como média ± DP. por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

O objetivo deste estudo é identificar potenciais mudanças no estresse por meio de instrumentos biofísicos e psicológicos após visitação recreativa para três diferentes configurações com diferentes níveis de natureza. Tanto o cortisol quanto a α-amilase demonstraram ser indicadores confiáveis de níveis de estresse psicológico. O procedimento do ensaio da amilase descrito neste estudo foi adaptado a um formato do poço 96. Quando os níveis de amilase na saliva são elevados, as mudanças de absorbância ocorrem rapidamente. Portanto, é fundamental limitar o número de amostras analisadas ao mesmo tempo, pois o número de amostras que podem ser analisadas ao mesmo tempo é limitado pela rapidez com que 2,5 μL da amostra podem ser adicionados a cada poço. Neste estudo, os níveis de amilase foram medidos em uma coluna (oito reações) em um determinado momento. Dois sistemas principais estão envolvidos na resposta ao estresse, incluindo o eixo hipotálamo-hipófise-Adrenocortical (HPA) e o sistema simpatio-adrenomedular (SAM). Kirschbaum e Hellhammer¹⁴ relataram que as medições de cortisol salivar estão intimamente correlacionadas com os níveis séricos de cortisol e envolvem menos complicações de hiperestresse relacionadas com técnicas de amostragem de sangue. A alfa-amilase é uma grande enzima salivar tipicamente associada a estímulos simpáticos (SAM)¹⁵ e considerada uma ferramenta de medida útil para avaliar o sistema de Sam¹⁶.

Embora ambas as medidas biofísicas e psicológicas sejam eficazes na detecção de mudanças nos níveis de estresse, várias questões estão presentes neste estudo. Em primeiro lugar, houve incongruência entre os resultados da mensuração do cortisol e da α-amilase, com diferenças observadas em diferentes locais. Nater et al.¹⁷ relataram que há pouca evidência sobre se o HPA (cortisol) ou Sam (amilase) é predominante durante o estresse psicológico. Uma possível explicação foi feita por Takai et al.¹⁸, que sugeriram que o processo pelo qual a α-amilase e o cortisol entram na corrente sanguínea com cortisol, indicando que um sistema mais complexo e demorado está em operação.

Outra explicação dos resultados envolve o nível e a saliência do estresse¹⁷. Os resultados sugerem que os níveis agudos de estresse resultam em maior associação entre cortisol e α-amilase, e níveis mais moderados de estresse resultam em maior desassociação. Neste estudo, o estresse vivenciado durante o engajamento recreativo é considerado moderado na melhor das opções. Assim, em estudos como o apresentado aqui, em que o stress experimentado é baixo a moderado, as diferenças em níveis medidos de cortisol e de α-amilylase devem ser esperadas.

Uma terceira variável que impacta a incongruência entre as medidas de cortisol e α-amilase envolve questões com vazão salivar. Há evidências limitadas sobre a relação entre a vazão salivar, as técnicas de coleta e o estresse¹⁹. Neste estudo, a saliva é coletada via "drooling" em um tubo de ensaio. Os indivíduos são aconselhados a não mastigar chiclete ou comer antes da coleta de dados, mas como eles foram diligentes neste estudo para essas diretrizes é desconhecido. Além disso, usar um dispositivo da salivette pode ser mais eficaz em coletar a quantidade exigida de saliva dentro de um tempo especificado. Nater et al.²⁰ sugeriram que não pode haver diferenças em várias características bioquímicas com base no uso de copos ou salivettes.

Finalmente, este estudo utiliza o método "drool" de coleta de saliva, conforme descrito por Granger et al.²¹. Este método de coleta de saliva tem várias vantagens em relação a outras abordagens, mas requer um participante competente, complacente, acordado e capaz. Como tal, as crianças com menos de seis anos ou idosos não são tipicamente consideradas respondentes adequados. As vantagens deste método incluem um grande volume de amostra que facilita os ensaios para vários marcadores e o fato de que uma amostra não utilizada pode ser congelada para ensaios futuros. Além disso, o método de babar minimiza os efeitos de substâncias utilizadas para estimular o fluxo de saliva, como goma de mascar e misturas de bebidas.

Outro método de coleta de dados envolve o uso de pledgets de algodão, onde a saliva é absorvida pelo pledget e expressa fora do algodão em um frasco de coleta via centrrigugação. Shirtcliff et al.¹⁹ emitiram uma nota cautelar afirmando que em determinadas situações, filtrar a saliva através do algodão pode causar interferência em imunoensaios. Outras abordagens incluem o uso de papel filtrante e microesponjas de hidrocelulose²¹. Embora cada abordagem tenha vantagens e desvantagens específicas, dado o tamanho amostral utilizado neste estudo, optou-se pelo método de amostragem de babar.

Em conclusão, um corpo acumulador de pesquisas de um amplo espectro de disciplinas sugerem que os ambientes naturais podem ter efeitos positivos na saúde humana^6,22. Típicos desses tipos de configurações incluem parques, espaços verdes, jardins e áreas arborizadas. Fatores associados a esses tipos de áreas que são considerados benéficos para a saúde²³ incluem melhoria da qualidade do ar, aumento das oportunidades de atividade física e contato social, e aumento dos sentimentos de qualidade de vida. Por exemplo, Gidlow et al.²⁴ descobriram que, embora o exercício físico tivesse efeitos Salutogênicos em ambientes naturais e urbanos, as configurações naturais eram muitas vezes mais efetivas na redução dos níveis de estresse.

Usando uma abordagem de método múltiplo envolvendo medições biofísicas de cortisol e α-amalyze e um autorrelato medindo níveis percebidos de estresse, este estudo fornece suporte adicional para o corpo em expansão da literatura sugerindo que os ajustes naturais têm efeitos benéficos sobre questões relacionadas à saúde, como a redução dos níveis de estresse^25,26. Este estudo também sugere que maiores níveis de natureza têm benefícios potenciais mais pronunciados.

Existem várias limitações neste estudo. A primeira é a fidelidade da coleta de dados biofísicos. Quando os visitantes estiveram acoplados na coleção da saliva durante épocas similares, a saber meados de-ao tarde da tarde com a noite adiantada, para dar conta para o ciclo diurna do cortisol, os investigadores tentaram identificar somente aqueles que não tinham comido qualquer coisa menos de 2 h antes a coleta de saliva. Isso foi feito através de questionamento verbal de quando eles tinham ingerido a última comida. Assim, os pesquisadores dependeram da veracidade das respostas dos sujeitos.

Em segundo lugar, devido ao tempo de coleta de dados, as vieses de resposta podem ter ocorrido dentro dessas amostras, que podem ter sido diferentes se a coleta foi feita em um momento diferente ou por seleção aleatória. Ou seja, os indivíduos que visitaram cada local à tarde ou à noite podem não ser representativos de potenciais entrevistados que visitaram em momentos diferentes.

Finalmente, enquanto os dados biofísicos foram coletados e processados por meio de procedimentos bem reconhecidos, não foi verificada a mensuração de níveis crônicos de estresse. Neste caso, estudos futuros devem incluir uma medição de cortisol usando amostras de cabelo ou técnicas semelhantes que determinam os níveis de estresse a longo prazo antes do engajamento em atividades recreativas em vários locais.

Os autores não declaram conflitos de interesse.

Este estudo foi financiado em parte através do programa de subsídio de pesquisa da faculdade (FRGP) patrocinado pela escola de saúde pública da Universidade de Indiana, Bloomington, IN. Os autores gostariam de agradecer a Dr. Alison Voight e Melissa Page por sua assistência editorial e comentários construtivos.