Method Article
During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.
Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.
A doença cardíaca continua a ser a principal causa de morte em todo o mundo 1,2. Não só é o ventrículo esquerdo (VE) da câmara mais muscular, responsável pelo bombeamento de sangue do coração para o corpo inteiro 3, é um comum local da lesão cardíaca pós-enfarte do miocárdio 4. morte do tecido ventricular esquerda muitas vezes resulta em insuficiência cardíaca sistólica. modelos animais de doença cardíaca são fundamentais para o avanço da pesquisa cardiovascular biomédica. A estirpe C57BL / 6 de camundongos têm sido uma escolha popular para modelos animais devido ao seu tempo de reprodução rápida, de baixo custo e facilidade de alterações genéticas. A maioria dos modelos cirúrgicos murinos para o estudo de doenças cardíacas envolvem a oclusão da LAD ramo da artéria coronária esquerda. A LAD é chamado às vezes à esquerda obtusa marginal 5,6. O LAD fornece sangue ao anterior do ventrículo esquerdo e as paredes ântero-lateral. estudos de oclusão LAD visam induzir infartos anteriores, às vezes estendendo-se into das regiões de parede inferior e lateral 7.
Dois modelos que são usados com freqüência para estudos de infarto do miocárdio incluem infarto do miocárdio oclusão crônica e lesão de isquemia / reperfusão do miocárdio. A oclusão crônica é criado por sutura cirúrgica ao redor e bloquear permanentemente o fluxo de sangue através do LAD. A lesão de isquemia / reperfusão é criado muito da mesma maneira única com um transiente, geralmente 30-60 min, período isquémico. Para alcançar a isquemia transiente, os laços de oclus de sutura em torno do LAD e um tubo de PE-10 pequeno que é colocado paralelamente à ADA na superfície do epicárdio do coração, seguido por um período de reperfusão em que a tubagem e a oclusão de sutura é retirado e o sangue é deixado fluir uma vez mais através da artéria e no miocárdio. A cirurgia de isquemia / reperfusão foi considerado clinicamente relevante devido à natureza da lesão de reperfusão em paralelo com o tratamento de enfartes do humanos, que inclui promangioplastia pt coronariana e implante de stent da artéria, ou cirurgia de revascularização. Tipicamente, durante estas cirurgias, isquemia do VE em um coração de rato é confirmada pela palidez visível da parede miocárdica. No entanto, simplesmente realizando as cirurgias em uma almofada de eletrocardiograma (ECG) em condições de monitoramento constante, mudanças visíveis pode ser observada na forma de onda ECG, confirmando assim isquemia e reperfusão do miocárdio mouse.
Embora o coração de murídeo é semelhante ao coração humano em muitos aspectos, incluindo a sua estrutura de quatro câmaras, os corações também têm diferenças. Uma diferença óbvia é a frequência cardíaca média de repouso de camundongos adultos é de 600 - 700 batidas por minuto (bpm), enquanto que a dos humanos adultos é ~ 60-100 bpm 8,9. Além disso, em ratinhos, as ondas de repolarização J e t, frequentemente fundir-se com o QRS complexo despolarização fazendo uma clara do segmento ST difícil discernir 10. Para complicar o processo de electrocardiographicallY confirmando isquemia do miocárdio, é a elevação da onda T e do segmento ST, que são utilizados como marcadores para o diagnóstico de lesão de isquemia e enfarte do miocárdio em seres humanos, clinicamente referido como ST E levation m yocardial i nfarction ou IAM. Uma das principais diferenças entre as formas de onda humana e murina é que o S-onda é imediatamente seguido ser um J-ondas que transfere diretamente para uma onda T negativa. Durante a isquemia miocárdica aguda em ratos diminui a amplitude da onda S e é directamente seguida por uma J-onda anormal e uma onda T invertido 11. A onda T não parece representar uma parcela significativa da repolarização em ratos 11. Apesar de nomenclatura e rato vs. diferenças humanas, ECG confirmação da isquemia miocárdica murino e reperfusão é ainda viável e relativamente simples. Por uma questão de simplificação da interpretação da forma de onda, o segmento entre o SJT é referido como ST-SEGMENT aqui.
EAMCEST orientações publicadas em 2013 recomendar um tempo paciente porta-para-balão inferior a 90 min 12 .Este significa que o período de tempo desde a identificação de oclusão da artéria coronária do paciente até que a artéria é reaberto deve ser inferior a 90 min. O coração batendo está trabalhando constantemente e, portanto, tem um alto metabolismo oxidativo e um alto nível de consumo de oxigênio 3. Para proporcionar esta, uma rede de capilares é acessível a cada um dos miócitos 3. Leva apenas um coração alguns batidas de esgotar seu oxigênio e nutrientes. Em uma janela de 90 minutos, uma região isquêmica do coração em um ser humano terá sido impedido de receber entre 5.400 e 9.000 coração bate pena de sangue rico em oxigênio. Nessa mesma janela de 90 minutos, um rato teria 54.000 para 63.000 batimentos cardíacos. Os pontos de tempo experimentais para a lesão de isquemia / reperfusão murino são tipicamente entre 30 e 60 min.
A importância de desenvolvering um método complementar de confirmar isquemia do miocárdio e reperfusão num modelo murino tem profundas implicações sobre a consistência e reprodutibilidade dos dados em estudos de isquemia / reperfusão miocárdica. A prática corrente de se observar visualmente o coração por uma mudança na cor do tecido não é adequada como um stand-alone de diagnóstico. Além disso, a reperfusão após a remoção do tubo de sutura e não é garantida. Embora a artéria não está mais ligada off, a artéria pode ter danos sofridos durante o procedimento e pode tornar-se impossível de reperfusão. Seria benéfico para ter um registro de alterações eletrocardiográficas para confirmar reperfusão em vez de confiar em observações de palidez do miocárdio e rubor (cor vermelha). Corações que não mostram os marcadores de lesão de isquemia / reperfusão pode então ser rapidamente sinalizado e uma decisão sobre como proceder podem ser feitas pelos investigadores.
Por último, o estabelecimento de um registro de ECG muda da linha de base em todo the períodos de isquemia e reperfusão permite aos investigadores continuam a monitorar o coração após a cirurgia inicial. Os investigadores atualmente perder de vista o coração, logo que a cirurgia está concluída. ECG é uma maneira simples para obter insights sobre as mudanças que ocorrem nas horas miocárdio dias após a cirurgia. ECG registrados em pontos de tempo após a cirurgia poderia revelar ondas Q de desenvolvimento tardio indicando continuação ou piora da morte do tecido. No entanto, para calibrar eficazmente novos ou agravamento marcadores eletrocardiográficos, um ECG de base devem estar disponíveis para comparação.
Este protocolo irá demonstrar como preparar, obter e interpretar o ECG para confirmar isquemia e reperfusão do coração mouse usando 8 - do sexo masculino 12 semanas de idade C57BL / 6.
Todos os procedimentos cirúrgicos realizados em animais devem ser realizadas de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório 13 ou outras diretrizes éticas adequadas. Os protocolos devem ser aprovados pelo comitê de bem-estar animal na instituição adequada antes de prosseguir.
1. Preparação para o ECG
NOTA: Antes de começar, don equipamento de protecção individual, incluindo luvas, óculos e um casaco de laboratório limpo ou bata descartável.
2. Aquisição do ECG
3. Procedimento cirúrgico e gravação de ECG
4. Confirmação de reperfusão Usando ECG
Um ECG normal de murino é apresentada na Figura 2 com marcadores alfabéticos para eventos eléctricos P, Q, R, S, J e T. P representa a despolarização atrial inicial. QRS é a onda de despolarização ao longo dos ventrículos. J é repolarização precoce e T representa a repolarização heterogêneo também conhecida como recuperação de 11. Deve notar-se que muitos laboratórios não utilizar a nomenclatura J-ondas e não se referem à SJT do segmento como a do segmento ST 10,15-17. Aqui, os resultados e as análises são representativos e baseado fora de observações de laboratório de 40 ratos. A maioria dos ratos apresentaram progressões de forma de onda semelhantes ao longo da cirurgia. Os ratos que não apresentam formas de onda similares foram marcados para posterior análise e foram considerados animais não-infartados. Resultados similares forma de onda também têm sido relatados por Jong et ai. 15.
corações murino suffering de isquemia regional, devido à oclusão da LAD tipicamente apresentam um aumento de amplitude da onda-R, bem como o pico hiperaguda do segmento JT-seguido pela eventual elevação do segmento ST A Figura 3 mostra o primeiro sinal de isquemia miocárdica aguda.; pico hyperacute do T-wave. Como pode ser visto nesta figura, a onda T aumentou em amplitude de condições da linha de base. No entanto, isto não é ainda elevação do segmento ST, porque a onda S projectam ainda está profundamente e negativamente como o faz na forma de onda de linha de base.
Configuração de linha de base do ECG exibe uma onda S projectam de forma negativa (Figura 2). Com o passar do tempo, alterações no ECG são anotados. O segmento ST é definido como o segmento entre o fim da onda S e o início da onda T. Este segmento ST é clara em humanos. Devido à frequência cardíaca alta, esse segmento é mesclado em ratos e um, repolarização precoce "J-wave" Setembro adicionalarates S- e t-ondas. Portanto, a elevação da onda S para a linha isoeléctrico ou maior deve ser considerado como a versão murina de elevação do segmento ST. Na Figura 4 a progressão da isquemia para enfarte precoce pode ser visto por elevação do segmento ST. Aqui, a onda S exibe na amplitude elevada, acima da linha de isoeléctrico. O J-ondas também é elevada, especialmente quando comparado com a forma de onda de referência (Figura 2). Por conseguinte, o segmento ST é elevada o que é indicativo de lesão / infarto 10.
Figura 5 segue a progressão de um rato a partir da linha de base durante todo o tempo de reperfusão. A primeira forma de onda apresenta um ritmo sinusal normal que foi gravada a linha de base. A segunda forma de onda exibe o ECG 1 min após a ligadura foi amarrado e a artéria tornou-se ocluído. O círculo vermelho nesta linha indica o pico da onda T hyperacute. Se wi comparaçãoth "Linha de Base", é evidente que a onda T é elevado. A terceira forma de onda mostra a elevação do segmento ST completa no ponto de tempo de 5 minutos. Na imagem "1 min de isquemia", a onda S projectam ainda estava negativamente, passando a linha isoeléctrico. No entanto, a 5 min a parte S do complexo não chegar tão longe negativo como deveria antes de avançar para as J- e t-ondas. Isso é descrito como elevação do segmento ST porque o segmento entre o S e ondas T é elevada a partir da linha isoelétrica. Outro marcador electrofisiológico de isquemia regional é alargamento do intervalo QT-16, que se estende desde o início do complexo QRS e continua até ao final da onda T. Aos 20 min de isquemia, o intervalo QT ampliou ea ST-segmento ainda é elevado. Após 45 min de isquemia, os restos do intervalo QT se arregalaram e do segmento ST permanece elevada.
A reperfusão do miocárdio, que possuisido isquêmico durante 30 minutos ou menos deve resultar no ECG retornando às condições da linha de base em um mouse. Preda e Burlacu estabeleceu uma correlação entre as alterações eletrocardiográficas murino, tempo de isquemia e gravidade do infarto 17. Observou-se que períodos de isquemia de 30 minutos não causar alterações permanentes no ECG enquanto que períodos isquémicos de 1 h causou alterações ECG permanentes. Além disso, a reperfusão da artéria obstruída, após 24 horas de isquemia não teve nenhum efeito residual 17. Normalmente, Q-ondas pode ser identificada como a ligeira saliência para baixo um pouco antes a despolarização QRS-complexo. Significativas, ou patológicas ondas Q pode desenvolver logo após o início da isquemia miocárdica como a morte muscular considerável começa a definir 10. Significativas ondas Q são definidos como pelo menos 1/3 da altura da onda R correspondente, ou por sua vez alongada, o que resulta em uma grande onda Q. Os significativos resultados de ondas Q de uma região do miocárdio mortos electrica desviandol correntes de distância do eléctrodo 7. Após 5 min de reperfusão, a evidência de profundidade, significativas ondas Q começam a aparecer (Figura 5). Além disso, o T-onda retorna à linha isoeléctrico (Figura 5). Após 30 min de reperfusão, as ondas Q negativos permanecem e são propensos mostrando danos permanentes. Neste ponto de tempo, as ondas Q são de largura e profundidade, e indicam que o tecido cardíaco é morrer deflectir as correntes eléctricas em torno da área danificada (Figura 5).
Após isquemia contínua, a progressão de lesões e enfarte leva a projecção T-onda negativa aumentada (Figura 5, 30 min de reperfusão, segundo círculo vermelho). Esta projecção da onda T melhorada devido a um enfarte do verdadeiro será geralmente permanente 7. O segundo circulo vermelho na forma de onda de reperfusão de 30 min mostra o que parece ser uma onda T invertido (Figura 5). Se a 5 umnd T-30 min ondas são comparados, é evidente que a onda T é mais saliente negativamente. Isso, juntamente com as significativas ondas Q fornece evidência para dano tecidual permanente a este coração. Deve notar-se que a anestesia de isoflurano inalado reduz a frequência cardíaca, e, portanto, aumenta QT-intervalos. No entanto, a amplitude de ondas T de recuperação permanece inalterado 18.
As referidas alterações podem ser analisados quantitativamente em termos de tensão. A Figura 6 mostra que a exportação de dados fisiológicos como um ficheiro.csv irá fornecer uma quantidade muito grande de dados. Além de oferecer valores de ECG (amplitudes) a taxas de fracções de milissegundos pode haver opções para incluir outros dados de respirações, sondas de temperatura, medidores de pressão arterial etc., se assim o desejar. Estes dados quantitativos pode ser representada graficamente como apresentado na Figura 7. Representação gráfica de uma série de formas de onda a partir de P-ondas a onda P ajuda a visualizar um ECGtendência de configuração. O período de tempo de 500 ms é um prazo bom para visualizar uma vez que qualquer menos tempo pode não resultar em formas de ondas suficientes e de qualquer tempo adicional fará com que o gráfico aparecer eventos desordenados e eletrofisiológicos podem ser perdidas ou de difícil reconhecer quando visualizado em um monitor de computador padrão .
Figura 1:. Posicionamento correto do mouse no ECG do rato Este rato é posicionado em decúbito dorsal. Cada uma das patas do rato são gravadas para os eletrodos correspondentes no teclado de superfície ECG. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: linha de base normal de murinoECG de forma de onda. O ECG de base murino normal é marcado com as letras P, Q, R, S, J e T que são usados para descrever eventos elétricos no coração. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3:. Elevação da onda T também conhecido como T-wave hyperacute ou pico. A onda T é amplificado e maior do que a linha de base da onda T (Figura 2). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4:. Elevação do segmento ST Esta figura displays elevação do segmento ST, que pode ser observado como o segmento ST é maior do que o ponto isoelétrico. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5:. Alterações ECG típicas ao longo de uma cirurgia / isquemia-reperfusão Esta figura segue um mouse sobre a duração da operação de isquemia / reperfusão do miocárdio. A primeira forma de onda apresenta um ritmo sinusal normal que foi gravada a linha de base (linha de base). A segunda forma de onda (1 min de isquemia) apresenta a forma de onda de 1 min, após a ligadura foi amarrado e a artéria tornou-se ocluído. O círculo vermelho nesta linha mostra o pico da onda T hyperacute. O círculo vermelho no terceiro forma de onda (5 min de isquemia) exibe a elevação do segmento ST completa. O círculo vermelho no fou rth forma de onda (20 min de isquemia) apresenta um alargado intervalo QT e a onda S ainda é elevado. O círculo vermelho no quinto forma de onda (45 min de isquemia) mostra alargado QT-segmento e elevada do segmento ST. A sexta forma de onda (1 min de reperfusão) apresenta alterações significativas em comparação com 45 min ischemia.The círculo vermelho no sétimo forma de onda (5 min de reperfusão) apresenta forma de onda Q profunda, significativa. O primeiro círculo vermelho na oitava forma de onda (30 min de reperfusão) mostra ondas Q significativas, enquanto o segundo círculo vermelho mostra realce possível onda T. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6:. Dados fisiológicos Esta figura mostra os dados fisiológicos como ele é exportado como arquivo .csv para planilhas.ref = "https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54814/54814fig6large.jpg" target = "_ blank"> Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 7:. Sobrepostos valores mV O gráfico apresentado nesta figura mostra os valores mV a partir de três formas de onda consecutivos e completa utilizando o ficheiro de dados fisiológico (Figura 6). O gráfico é um gráfico de linha simples usando pontos do arquivo de dados fisiológico. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Usando alterações no ECG como um método complementar para confirmar isquemia do miocárdio e reperfusão assegura o posicionamento preciso da ligadura oclusão. Precisão da colocação da ligadura é fundamental para a redução da variabilidade dos dados entre os animais. O LAD em um coração de rato é uma artéria difíceis de visualizar. Portanto, completando palidez visual, com alterações eletrocardiográficas vai ajudar a garantir o correto posicionamento do dano tecidual ligadura e resultante.
Uma vez que a almofada de ECG permite uma visão não-invasiva do coração, ECGs múltiplos pode ser obtido durante o decorrer do estudo. Isto pode ajudar a fornecer uma melhor compreensão das alterações cardíacas que ocorrem durante e depois da cirurgia. É crítico para se obter uma linha de base do ECG a ser usado para comparação após o procedimento cirúrgico. Mais tarde, a morte do tecido palco e até mesmo aneurisma ventricular pode ser observado por desvios de sinais eletrofisiológicos e alterações de configuração do ECG. Isto pode fornecer uma visãopara a progressão da insuficiência cardíaca.
As vantagens de utilizar a medição de ECG máquina ecocardiográfica incluem a medição simultânea de parâmetros estruturais e funcionais do coração antes ou após a cirurgia da isquemia / reperfusão. As limitações do sistema de registro de ECG incluem o alto custo de comprar uma máquina de ecocardiografia. No entanto, se os experimentos requerem monitoramento ECG constante ao longo de vários dias, há uma variedade de aparelhos disponíveis para gravação de ECG, incluindo unidades de ECG telemetria remotos com software que pode ser programado para registrar e analisar formas de onda em vários intervalos de tempo correspondente. No entanto, muitas das unidades ECG telemetria requerem um procedimento de implante ou habitats especializados. Além disso, existem muitas opções de eléctrodos alterative incluindo clipes e eléctrodos de agulhas. Isquemia cirurgia / reperfusão via toracotomia é um procedimento altamente invasivo. Vantagens de se utilizar o teclado de ECG com um mac ecocardiografiaHine incluem procedimento não-invasivo, sem fios conectados ao animal durante a cirurgia e nenhum procedimento cirúrgico extra. No entanto, os investigadores devem determinar o melhor equipamento para o seu laboratório e necessidades experimentais.
Como mencionado anteriormente, a anestesia de isoflurano diminui a frequência cardíaca. Além disso, pode ser isoflurano cardioprotector através da activação de canais de K ATP e, portanto, reduzir o tamanho do enfarte, como foi encontrado em cães 19. A anestesia geral em ratos pode ser induzida utilizando agentes injetáveis. anestesia inalatória prevê maior segurança, particularmente para procedimentos prolongados. No entanto, anestesia inalatória requer equipamentos complexos e caros, como vaporizadores de precisão e medidores de vazão, sistemas de respiração específicos e sistemas de exaustão eficientes para prevenir a poluição. As desvantagens dos anestésicos injectáveis incluem dificuldade na escolha de uma dose inicial, sem possibilidade de modular com precisão a profundidade de ane prolongadasthesia, recuperação prolongada, etc. A escolha da anestesia devem ser adaptadas de acordo com a duração do processo e objetivo do estudo 20.
Usando ECG como um método complementar para confirmar a lesão de isquemia / reperfusão em ratos vai ajudar a melhorar a consistência e reprodutibilidade dos infartos, mas também abre a possibilidade para futuras aplicações da técnica, através da identificação das tendências quantitativas. Os investigadores podem notar Configurações de ECG semelhantes dentro de certos grupos experimentais. Por exemplo, um grupo de animais geneticamente modificados podem apresentar intervalos QT-anormalmente grande após a cirurgia, quando comparado com o tipo selvagem. Estes dados informativos teria sido perdida se os investigadores usam as alterações de cor do miocárdio como uma única confirmação de isquemia e reperfusão. Para estudos comparativos entre o tipo selvagem e ratinhos transgénicos, as considerações às orientações Convenções de Lambeth também pode ser valioso, especialmente em relação à idade, sexo, Cegando e randomização dos animais 21.
Em conclusão, a confirmação suplementar de lesão de isquemia / reperfusão do miocárdio oferece vários benefícios. Usando ECG como uma técnica suplementar pode ajudar a estabelecer a consistência na cirurgia. Isto pode ajudar a diminuir o número de animais utilizados, ao mesmo tempo que fornece os dados de maior qualidade. Também permite que os investigadores para monitorar a lesão cardíaca, morte do tecido e / ou remodelação de forma não invasiva ao longo do tempo. Por último, usando ECG como uma confirmação de miocárdio isquemia / reperfusão oferece a possibilidade de estabelecer tendências eletrofisiológicos quantitativos.
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by Merit Review awards (BX002332 and BX000640) from the Biomedical Laboratory Research and Development Service of the Veterans Affairs Office of Research and Development, National Institutes of Health (R15HL129140), and funds from Institutional Research and Improvement account. The project is supported in part by the National Institutes of Health grant C06RR0306551.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Vevo 1100 | Fujifilm Visual Sonics | Echocardiography Machine | |
Mouse Handling Plate | Fujifilm Visual Sonics | Heated ECG plate | |
Signa-Gel | Highly Conductive Multi- | ||
Electrode Gel | Parker | 15-25 | Purpose Electrolyte |
Transpore Medical Tape | 3M | 1527-0 | |
PI-Spray II | Pharmaceutical Innovations | NDC 36-2013-25 | Cleaning agent for ECG plate |
C57Bl6 Mice | The Jackson Laboratory | 000664 | Male, 8 - 12 wk |
IsoThesia-Isoflurane | Henry Schein | NDC 1169-0500-1 | |
Excel | Microsoft | ||
Systane Nighttime Lubricant Eye Ointment | Alcon | 65050935 | |
7-0 Perma-Hand Silk Sutures | Ethicon | 640.O32 | |
5-0 Perma-Hand Silk Sutures | Ethicon | K809.O32 | |
Surgical Scissors | ROBOZ | RS-5881 | |
Forceps | Fine Science Tools | 11052-10 | |
Gauze | Bio Nuclear Diagnostics Inc | DIS-022B | |
Needle Holder | Fine Science Tools | 12565-14 | |
Buprenex CIII | Patterson Veterinary | 0-891-9756 | Buprenorphine Hydrochloride Analgesic |
Betadine | Purdue Products | 67618-150-08 | |
Nair | Church and Dwight Co. | NRSL-22339-05 |
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