Ensaio simples para Quantificação de Prevenção Social

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

O objetivo deste método é quantificar facilmente um novo aspecto do comportamento social simples em Drosophila melanogaster, independente do namoro e agressão.

As interações sociais são cruciais para o bom desenvolvimento e saúde dos indivíduos dentro de uma sociedade, bem como a funcionalidade de um grupo social como um todo. A elevada complexidade destas interacções exige grandes tamanhos de amostra e um sistema que permite a simplificação do comportamento como as bases genéticas e neurais do comportamento social são ainda pouco compreendidos. Drosophila melanogaster é um poderoso modelo genético que pode ser usada para identificar os factores genéticos e bases neurais de interações sociais. Com efeito, D. melanogaster tem um repertório de comportamentos sociais complexos e algumas medições diretas de socialização já foram feitas ^1-7. No entanto, a maioria desses esforços têm sido focados em comportamentos sociais relativamente complexas, como aggresinterações sive ^3,6, vários aspectos do namoro ^3,8-12, e como experiência social afeta outros comportamentos como a aprendizagem, ou ritmo circadiano ^13-17. Além disso, muitos desses ensaios dependem de analisar os padrões de interacção complexas de grupos de moscas, usando o acompanhamento de vídeo e software de computador para analisar a abundância resultante de dados. Essas análises são de valor inestimável, e levar a novos conhecimentos importantes, como a dinâmica das interações fly-fly em grupos de ^sete. Uma limitação, no entanto, é a inacessibilidade destes ensaios para a comunidade em geral, e o limitado conhecimento dos mecanismos subjacentes reconhecimento dos outros. Em outras palavras, com base na emissão de um sinal por um indivíduo e o seu reconhecimento por outro ainda está mal compreendida ^18.

Em contraste, as moscas também exibem um comportamento simples, evitação social, onde os indivíduos se afastar de um sinal emitido por moscas estressados: o D. Melanogaster Estresse Odorant ou DSO ^19. Em um ensaio de elevado débito, este comportamento pode ser quantificada como a prevenção de um sinal de tensão emitida por outros, moscas ou evitação social ^19. As moscas são colocadas num aparelho de labirinto em T e dada a opção de evitar um frasco contendo DSO. Utilizando este ensaio, CO ₂ mostrou ser um componente do DSO, e parte do circuito neural necessário para responder ao CO ₂ foi dissecada ^19.

O ensaio de evitação social aqui apresentada é semelhante conceitualmente para os ensaios comportamentais simples desenvolvido no laboratório de Seymour Benzer que permitiram gerações de pesquisadores para dissecar comportamentos complexos ^20. Análise de evitação social pode ser levada a cabo de forma eficaz em termos de custos, utilizando o ensaio de labirinto em T, para permitir um estudo mais generalizada do comportamento social. Por exemplo, com este ensaio que recentemente demonstrou que diferentes riscos genéticos para autismo têm efeitos contrastantes em b sociaisensaios ehavior. Mutantes para um gene candidato para o autismo - neurobeachin ^21,22 - deficiências presentes tanto no espaço social (descritos em outros ²³⁾ e evitação social ^24. Sinalização dopaminérgica anormal também é proposto para desempenhar um papel na etiologia de autismo em humanos ^25,26. Em contraste com os resultados obtidos com neurobeachin, descobrimos que o desempenho evitação social não foi afectada por um aumento ou diminuição dos níveis de Drosophila vesicular da monoamina transportador (VMAT) em células dopaminérgicas, embora espaço social foi directamente correlacionada com estes níveis de VMAT ^27. Os resultados contrastantes obtidos com neurobeachin e VMAT ressaltam a possibilidade de identificar várias formas de comportamento anti-social e, assim, os diferentes circuitos neurais subjacentes modulando a resposta para os outros.

1. equipamentos e reagentes criados em casa (Veja a lista de material para os outros)

1. Prepare um aparelho de anestesia Drosophila frio para realizar o trabalho real.
   1. Cortar uma folha de polietileno poroso para cobrir uma pequena caixa de plástico (12.7 cm de comprimento, 10,2 cm de largura), normalmente a tampa superior de uma caixa de pontas de pipeta (12.7 cm de comprimento, 10,2 cm de largura, 3,8 cm de profundidade).
   2. Preencha a caixa com gelo picado, cubra com a folha de polietileno poroso.
2. Prepare um aparelho T-maze; adaptar o aparelho anteriormente descrito em detalhes ^28-31.
3. Preparar um aspirador de mosca como descrito ^32.
4. Prepare um aparelho de resposta phototaxis para deslocar moscas dentro e fora de frascos de teste sem estresse:
   1. Usar um aparelho em contracorrente, tal como descrito por ^29,33.

NOTA: O labirinto em T pode também ser utilizado para outros fins, como descrito por ^28.

5. Certifique-homcondições de iluminação ogeneous: realizar o experimento em um banco coberto com uma capa de banco branco, e na frente de um quadro branco.
   NOTA: Para estas experiências, as linhagens de moscas utilizados foram Drosophila melanogaster tipos selvagens: Canton-S, Oregon e Samarkand voa de nossos estoques de laboratório ^34; Elwood moscas foram coletadas no outono de 2011 no bairro de Elwood de Huntington, em Long Island, Nova York, EUA.

2. Preparar as moscas antes do experimento

1-2 dias antes de realizar o experimento:

1. Manter moscas em meio padrão fubá-agar-melaço de levedura a 25 ° C em um ciclo claro / escuro de 12 horas de luz.
2. Recolher as moscas que respondem sob anestesia frio 1-2 dias antes de se efectuar a experiência
   1. Transferem-se as moscas das garrafas no qual foram colocadas em tubos Falcon de 50 ml, utilizando um funil.
   2. Coloque o tubo de falcão com as moscas sob nível de gelo, em umbalde de gelo isolado.
   3. Coloque o aparelho de anestesia fria com gelo picado a -4 ° C para relaxar.
   4. Espere 5 minutos para as moscas para entrar em um coma frio.
   5. Transferem-se as moscas para a folha de polietileno poroso do aparelho de anestesia frio.
   6. Colete as moscas de resposta sobre o aparelho de anestesia frio. No RT, sob microscópio estereoscópico, separe masculina 3-7 dias de idade de moscas fêmeas e manter essas moscas em grupos de 40.
3. Recolher as moscas emissor 1-2 dias antes de realizar a experiência.
   1. Gentilmente recolher Canton-S mixed-sexo voa de suas garrafas, usando um aspirador de boca, controlando o seu número.
   2. Manter essas moscas no grupo de 60-100, pois eles serão os emissores.
   3. Preparar todas as amostras de emissores como pontos de dados necessários.
4. Permitir que pelo menos uma noite de recuperação após a coleta dos respondentes e emissores, para minimizar qualquer efeito de confusão da anestesia frioe coleta de boca aspirador no comportamento.
5. Abrir o saco de frascos de teste, para permitir que o ar com cheiro plástico obsoleto em que o saco seja substituído por ar fresco, pelo menos 1 dia antes da experiência.

2 horas antes da realização do ensaio:

6. Certifique-se de que a temperatura na sala em que a experiência é realizada é de cerca de 23-25 ​​° C, com luz uniforme, e humidade superior a 30%.
7. Transfira os respondedores e moscas emissores de frutas em frascos de alimentos frescos para garantir que estas moscas não estão morrendo de fome.
8. Deixe que as moscas de fruta ajustar ao ambiente, durante 2 horas, no banco em que o experimento será realizado.

3. a realização do experimento evitação social

1. Executar cada experiência à mesma hora do dia, num intervalo de 3-4 horas, à tarde entre o tempo Zeitgeber ZT5 e ZT9.
2. Coloque o T-maze no teclado batendo, e aperte o parafuso de modo clipe tele é estável elevador.
3. Transfira as moscas de resposta em um tubo de ensaio fresco. Encaixe este frasco contendo as moscas de resposta sobre a parte superior do labirinto-T.
4. Inclinar o aparelho T-maze e coloque-a sobre o tapete batendo tão moscas da fruta cair no elevador.
5. Mover a parte superior do elevador para baixo para que as moscas são entre a secção superior e inferior do labirinto em T, mas prestar atenção para manter o elevador acima do ponto de escolha - para impedir que as moscas de escapar.
6. Obter frascos com DSO (ver seção 5 para gerar DSO-free frascos que foram anteriormente ocupadas por moscas).
   1. Enquanto as moscas de resposta estão se ajustando a esse novo ambiente, coloque as moscas de emissor em um tubo de ensaio.
   2. Coloque um pedaço de algodão para fechar o frasco de modo que as moscas de fruta não escapam.
   3. Mecanicamente isto agitar o frasco numa mini-vórtice do seguinte modo: em vórtice durante 15 seg, remover o frasco de vórtice durante 5 segundos. Repita 3 vezes para um total de 55 seg.
   4. Remove as moscas emissor para fora do frasco fresco - por transferência num frasco de alimentos - e rapidamente colocar esse frasco cheio DSO em um dos dois lados do aparelho de labirinto-T.
   5. Alterne o lado de colocação para o frasco DSO preenchidos em cada nova execução.
7. Coloque um tubo de ensaio fresco no outro lado do labirinto-T.
8. Traga o elevador completamente para baixo, de modo que as moscas de fruta pode escolher entre o tubo de ensaio fresco eo tubo de ensaio com DSO, e iniciar o timer.
9. Deixe as moscas escolher entre o frasco fresco e o frasco DSO, por 1 min, salvo indicação em contrário.
10. Após 1 min, mover o elevador para cima para separar as moscas no frasco fresco, DSO frasco, e os que estão presos no elevador.
11. Contar o número de moscas em cada frasco, e no elevador.
12. Repita esse procedimento para cada genótipo / condição.

4. Analisando os dados evitação social

1. Contar o número de moscas da fruta em cada frasco para cada Genotipo, e transferir os dados para uma planilha.
2. Usando um programa de planilha, calcular o Índice de Desempenho (PI) para cada genótipo, subtraindo o número de moscas no frasco DSO do número de moscas no frasco DSO-livre, e dividindo pelo número total de moscas.
3. Compare dos IPs que consiste em utilizar o software de análise estatística para análise dos resultados.
   1. Idealmente, preparar 2-3 repetições internas de cada experiência, e três repetições independentes, realizadas em dias diferentes, com diferentes garrafas ou ³⁰ atravessa.
   2. Use testes estatísticos de distribuição de Gauss, como os dados seguem uma distribuição normal.
   3. Ao testar um efeito (isto é, densidade - Figura 2), utilizar um ANOVA de uma via, com o pós-teste de comparação múltipla (coluna por coluna), ou um t-teste simples para comparar cada resultado de um controlo.
   4. Quando experimentos do grupo são realizadas, testar ambas as condições e sexos (frascos vazios, destacou umd moscas un-esforçado; e efeito de gênero - Figura 1), usando uma ANOVA de duas vias.

5. Gerar frascos anteriormente ocupado por Flies átonas - Realizar Em vez de 3,5-3,6

1. Use fototaxia para preparar frascos ocupados por moscas que não têm sido destacadas, como um controlo.
2. Transfira as moscas em um tubo de ensaio, e encaixe-o aparelho em contracorrente, com frescos frascos vazios no local oposto.
3. Coloque o aparelho na horizontal, com o frasco distal diretamente em frente a 15 W fluorescente luz cool-branco, e cubra com um pano preto.
4. Deixe as moscas mover suavemente no frasco fresco. Isso pode levar vários minutos. Uma vez que a maioria das moscas estão caminhando em direção à luz no frasco distal, iniciar o temporizador para 1 min.
5. Remova cuidadosamente o pano preto, mudar a localização da luz, recuperar com o pano preto, e permitir que as moscas de deixar o tubo de ensaio.
6. Naquela época, eunitiate o experimento escolha como em 3.2 a 3.5. Ir 3.6 e 3.7.
7. Mover o cursor do aparelho, para separar as moscas que desocupado o tubo de ensaio a partir do outro lado.
8. Use o frasco teste desocupado na T-labirinto de imediato para o experimento escolha, como em 3.7.

O ensaio de evitação social é um ensaio robusto quantificar a capacidade de Drosophila melanogaster para reconhecer um sinal de tensão (DSO) emitidos por outras moscas, e avaliando assim um aspecto de interacções sociais. O ensaio é realizado utilizando um aparelho comumente usado em vários ensaios de comportamento conhecido como T-labirinto, que apresentam as moscas com uma escolha entre duas opções diferentes - a esquerda ou direita ^19,28-31. Neste caso, a eficiência com que as moscas evitar o DSO é quantificado por cálculo e comparando o seu índice de desempenho (PI). Um PI de zero indica uma distribuição não se evita ou 50-50, enquanto um PI de 100 indica que todas as moscas evitado o DSO. E a PI de -100 indicaria que todas as moscas foi dentro do frasco DSO.

As moscas são apresentados com um frasco contendo DSO emitida por moscas mecanicamente agitados, e um fresco (DSO-free) frasco. Os resultados representativos aqui apresentados ressaltam a strength deste ensaio, bem como algumas condições conhecidas necessárias para obter melhores resultados.

Evitar DSO não é sexo específico, mas depende de moscas que está sendo forçada. O sexo de moscas respondedoras não tem efeito sobre a sua prevenção de DSO (Figura 1). No entanto, não é suficiente para as moscas ter ocupado o tubo de ensaio para provocar uma fuga do que frasco, as moscas deve ter sido forçado - neste caso, agitado mecanicamente (Figura 1). Se não há moscas tinham ocupado o frasco de teste, ou se as moscas ter entrado e saído do frasco, sem stress usando phototaxis, os respondedores provocar nenhuma preferência como foi relatado anteriormente ^19.

Embora a Figura 1 reproduz resultados conhecidos, também é um exemplo do tipo de dados obtidos em condições sub-óptimas. Com apenas 2-5 repetições internas, e há estudos independentes, as barras de erro representam o intervalo. No entanto, existe uma significativa diferemcia entre frascos previamente ocupadas por moscas estressados ​​e moscas não estressado ou vazio, conforme relatado anteriormente ^19. Neste contexto, as moscas ainda apresentam uma forte PI de evasão. Isso reforça a robustez do ensaio. Além disso, o PI para a escolha entre dois frascos frescos é negativo (diferente de 0, para o sexo feminino p <0,05, e reunidas sexo p <0,01). Isto indica uma preferência para um lado do labirinto em T, ou uma tendência devida ao pequeno tamanho da amostra. Esta limitação pode ser contrariada por alternando o lado em que o tubo de ensaio é colocado no labirinto-T nas repetições internas, como é feito nas experiências subsequentes apresentados.

Apesar da falta de efeito do sexo na resposta para o DSO, respondedores foram separados por sexo para evitar possíveis efeitos de confusão. Por exemplo, no caso de mutações que possam ter efeitos específicos do sexo, tais como as que afectam os genes envolvidos em sinalização ³⁶ olfactiva. Os seguintes representati ve resultados concentrar em respondedores macho, e os emissores de sexo misto.

Prevenção da DSO é independente do número de moscas que respondem testados.

Experimentos anteriores ¹⁹ usaram um padrão de 40 Canton-S voa em testar evitação social, que mostrou uma alta PI, indicando que a maioria das moscas preferiu o frasco DSO-livre fresco. Para testar o efeito do tamanho do grupo no PI dos respondedores, uma gama de 10-80 moscas foi testada, como pode ser visto na Figura 2. Um mínimo de dois ensaios independentes e três repetições internas em cada experiência foi realizada. A t-teste não mostrou significância estatística na comparação entre o PI de cada um dos diferentes número de moscas de resposta para o índice do controle (quarenta respondedor moscas) performance. Assim, o número de moscas que respondem não tem nenhum efeito sobre a prevenção de PI DSO e o efeito que tem sobre evasão mutações pode ser testado mesmo se mutantes estão disponíveis em pequenas quantidades.

Para determinar a extensão para a qual o número de moscas emissor afectado o DSO e na prevenção da mesma, também testaram o efeito da quantidade de moscas estressadas. Em experimentos últimos ^19, e este protocolo, usaram um padrão de 70 Canton-S moscas. Nós agora testados 10 a 160 moscas emissor (Figura 3). O desempenho de evitação está directamente relacionada com o número de emissores, embora não haja aumento da evitação com mais de 80 emissores. Curiosamente, a evasão substancial ainda foi detectado com apenas 10 estressado moscas. Mais uma vez, isto permite testar as capacidades de emissão de alguns moscas de cada vez.

Base genética afeta o desempenho evasão DSO.

Drosophila melanogaster é um modelo forte organismo para estudos genéticos. Assim foi importante determinar se o ensaio pode ser usado para Discriminate diferentes origens genéticas. A resposta de quatro tipos selvagens diferentes foi medida (Canton-S, Oregon-R, Samarkand e Elwood) em relação à sua prevenção da DSO emitida pelo Canton-S (Figura 4). Canton-S e Elwood têm um PI superior em comparação com Oregon e Samarcanda (p <0,05). Estes resultados demonstram que há um componente genético subjacente a intenção de evitar o DSO, e que este ensaio tem o poder de executar um estudo desta influência genética.

Período de tempo escolha afetar o desempenho.

O conjunto de dados representativos apresentados nas Figuras 1, 2, 3 e 4 ilustram também o efeito do comprimento de tempo determinado para os respondedores ao decidir que evitam frasco. Quando Canton S-respondedores são dadas de 30 a 45 seg de escolher o seu frasco preferida, eles geralmente atingem resultados em torno PI = 55 (Figura 2, respectivamente machos PI= 57 ± 2; e 52 ± 11). Quando administrado 60 seg, o seu desempenho é mais elevada, como visto na Figura 4 (IP = 77 ± 6,5).

Figura 1. Evitar DSO não é sexo específico, mas depende de moscas que está sendo forçada. Os gráficos de barras representam a variação média ± da PI de evasão de um frasco o odor estresse deixada por moscas agitados (DSO). Os machos (a vermelho) e fêmeas (laranja) foram testados em conjunto (castanho), e, em seguida, contados após a experiência. As moscas realizada da mesma forma, independentemente do seu sexo (two-way ANOVA). Mas eles só evitou um frasco DSO-cheia em que voa já havia sido salientado (agitação mecânica), e não um frasco em que as moscas não tinha sido sublinhado (entrar e sair do frasco por phototaxis, p <0,05, pós de comparação múltipla de Tukey teste), ou frasco fresco (p <0,001, a comparação pós-teste múltipla de Tukey). EmAlém disso, não houve diferenças estatísticas entre o frasco fresco e condições não estressados ​​moscas, apesar de um viés do experimento frasco fresco - n = 2-5 repetições com 40 sexo misto voa cada, com 45 segundos de tempo escolha (n = 3 para fresca frascos, n = 2 para o frasco com arquivos não-stress, n = 5 por frasco com moscas estressadas).

Figura 2. Prevenção de DSO é independente do número de moscas testada. Representativas de dados que mostra o número de Canton-S respondedoras moscas em labirinto em T não tem qualquer efeito sobre a prevenção social do DSO. Moscas resposta foram dadas 30 segundos para decidir entre um frasco de doce e um frasco contendo DSO (n = 2-6 repetições internas por julgamento, 1-2 ensaios, mínimo de 5 pontos de dados por estado, gráficos de barras representam a média ± SEM)

Figura 3. Aumento do número de emissores leva a aumentar a evasão DSO. Representante dados mostra que o número de Canton-S emissor moscas afeta o DSO e sua prevenção (crescente tom de vermelho indica aumento do número de moscas emissor, com 70 emissores esboçadas no azul ). Quando comparado com 70 emissores, apenas os frascos que continham 10 emissores ou aéreas mostraram uma diferença significativa no desempenho (one-way ANOVA p = 0,0001, a comparação pós-teste múltiplo de Dunnett). Os 40 moscas dada uma resposta foram min. para decidir entre um frasco e um frasco fresco contendo DSO (n = 3 repetições internas em cada experiência, três ensaios independentes, os gráficos de barras representam a média ± epm)

Figura tempo 4. Escolha e fundo genético de moscas de fruta afetar a resposta à DSO. Canton-S e genótipos Elwood exibir uma evasão mais forte do DSO de Oregon e Samarkand (p <0,05 *, t-teste comparando a Canton-S). Moscas de Resposta foi dada 1 min. decidir entre um frasco fresco e um frasco contendo DSO (n = 4-5 repetições internas por julgamento, 2 ensaios independentes, gráficos de barras representam a média ± SEM)

Este protocolo descreve um procedimento detalhado para o ensaio de evitação social. Canton-S só vai evitar um frasco em que voa tenham sido previamente stress mecânico, e que o sexo e número de respondentes que não afeta o desempenho evitação social. No entanto, a base genética dos respondentes tem uma grande influência.

Seguem-se vários passos críticos para a realização deste experimento com sucesso: 1) sempre transferir as moscas 2 horas antes do experimento e certifique-se de não perturbar o seu ambiente; 2) a realização da experiência sempre na mesma altura do dia, de preferência entre Zeitgeber ZT5 tempo (horas após o aparecimento de luz) e ZT9 para reduzir a variação no desempenho associada ao ritmo circadiano e, assim, possível a variação dos níveis de actividade de locomoção e; 3) observar as condições de temperatura e umidade, quando a realização do experimento; uma temperatura de cerca de 23-25 ​​° C e humidade superiores a 30% são os melhores; 4) ter certeza de não disturb o aparelho T-maze durante o tempo de decisão moscas; 5) certifique-se de arejar os frascos frescos, pelo menos, 24 horas antes de usá-los; e 6) durante a experiência é importante para alterar sempre a localização do tubo de ensaio no aparelho de labirinto em T para evitar a preferência de um lado do labirinto-T. Embora os testes adicionais precisam ser feitos para confirmar isso, empiricamente, parece que o DSO escapa do frasco "estresse" em menos de 5 min. Em contraste, parece que as moscas são capazes de emitir o DSO até 1 hora depois de ter sido forçado.

Há várias considerações que devem ser levados em conta no protocolo. A correlação entre a idade de evitar fly e social é atualmente desconhecido. Portanto, recomenda-se a realização do experimento com não mais do que duas semanas moscas velhas a 25 ° C, como mudanças comportamentais associadas com o envelhecimento não aparecem antes dessa idade ^37. Moscas Mated (sexos mistos alojados) são recolhidos para o experimento comodesconhece-se qual a emissão de DSO é afectada pelo estado de acasalamento das moscas. Embora a saída de comportamento de evitação DSO não é afetado por sexo, os circuitos cerebrais subjacente pode ser dimorfismo sexual, e é aconselhável não misturar as moscas macho e fêmea. Finalmente, uma redução no número de moscas emissor conduz a uma diminuição na fuga, provavelmente associado a uma diminuição no DSO total emitida. No entanto, DSO suficiente ainda está presente com apenas 10 moscas, conduzindo a uma fuga robusta e reprodutível.

Redução do tempo de decisão das moscas de resposta de 60 seg a 30 seg, também resulta em uma redução do PI para Canton-S voa. Este pode ser usado como uma ferramenta para discriminar ou mutações para as condições em que voa melhor do que Canton-S executar. Assim, no seu estado actual, o ensaio de evitação social pode ser usada como um paradigma comportamental para testar o efeito de genes e para o ambiente em evitar DSO. Depois de dominar a técnica, podem ser tomadas medidas futuraspara incorporar o tempo de decisão ideal para evitar DSO e o número exato de moscas emissor que devem ser usados ​​para obter o ensaio de evitação social para trabalhar de forma otimizada.

Uma limitação que surgiria em testes mutantes pode ocorrer se os respondentes têm má locomoção. Experimentalmente determinar um tempo maior escolha para estes mutantes podem contrariar essa má locomoção. Da mesma forma, as moscas com deficiências sensoriais que impediriam a detecção de CO ₂ - um componente principal do DSO, ou outro desconhecido componente do DSO não seria capaz de ser testados neste ensaio.

Não há atualmente nenhum outro ensaio permitindo a quantificação dessa resposta. Embora tenha sido mostrado que o CO ₂ é um componente do DSO ^19, outros componentes do sinal, bem como neurotransmissores envolvidos na escolha feita para evitar outros indivíduos stress ainda não foram determinadas. Da mesma forma, o mecanismo que conduz o flies para emitir o DSO não é conhecido. Este ensaio pode actualmente ser utilizada como uma bancada de topo adicional ensaio de diagnóstico para a determinação do perfil de comportamento social e geral de um mutante, ou tratamento ambiente. Por exemplo, pode-se comparar e contrastar a quantificação do espaço social, ou seja, a distância para o vizinho mais próximo ^{de 23,} com a evitação social das moscas estressados. Ambos os comportamentos exigem resposta à presença de outras pessoas, e tomar a decisão de chegar perto ou para evitá-los. Estas são maneiras muito simples, mas poderosas para dissecar circuitos e neurotransmissores envolvidos cérebro. Estes paradigmas comportamentais também têm um enorme potencial para ser utilizado para fins de rastreio.

The authors declare that they have no competing financial interests.

We thank Rachelle Kanippayoor for her help in identifying the new wild-type strain as being of the melanogaster species. R.W.F, O.F. and A.F.S were responsible for research design; R.W.F, M.N. and O.F. performed the experiments. R.W.F, M.N., O.F. and A.F.S. analyzed the data; R.W.F., I.S.M. and A.F.S. wrote the manuscript.

This work was supported by PSC-CUNY research awards, jointly funded by The Professional Staff Congress and The City University of New York to A.F.S.; by internal funding from Western University to A.F.S. and I.S.M.; by a training support from the National Alliance for Hispanic Health’s Alliance/Merck Ciencia (Science) Hispanic Scholars Program and a University Fellowship from the Yale Graduate School of Arts and Sciences to R.W.F.