저자는 낭 뜨에서 대학 병원 동물 시설 (UTE) 낭트의 축산 관리, 셀룰러 및 tissular 이미징, 낭트 대학 (MicroPICell)의 핵심 시설을 이미징에 대 한 그리고 Cytometry 시설 (Cytocell)의 직원을 감사 합니다. 대 한 그들의 전문 기술 지원. 이 작품은 INSERM, CNRS, 대학교 드 낭트, 인 국가 뒤 암 (잉카 #PLBio2014-155), 국가 리그 죄수 르 암 (AO 국제 2017), 그리고 유럽 컨소시엄 시대 Net Transcan2에 의해 투자 되었다 (Immunoglio). 팀은 Fondation 부 라 검색 Medicale (DEQ20170839118)에 의해 자금이 다. 이 작품은 LabEX IGO의 맥락에서 실현 하 고 IHU Cesti 프로그램에서 지 원하는는 국가 연구 기관 Investissements d'Avenir 통해 프로그램 ANR-11-LABX-0016-01 ANR-10-IBHU-005, 각각. IHU-Cesti 프로젝트도 낭트 메트로폴와 드 라 루아르 지역에 의해 지원 됩니다. 저자는 원고 수정에 도움을 제공 하는 Chirine Rafia 감사 합니다.

다음 절차와 관련 된 동물 과목 (계약 #00186.02; 지역 윤리 위원회는 드 라 루아르 [프랑스]의) 기관 지침에 따라 수행 되었다. 인간의 PBMCs 정보 건강 한 기증자 (Etablissement 프랑스어 뒤 상 낭트, 프랑스)에서 수집 된 혈액에서 분리 했다. 모든 단계는 무 균 조건 하에서 수행 됩니다.
1. 특정 세포 독성 효과 기 T 세포의 확장
<ol><li>준비 하 고 35 Gy에서 피더 세포를 비추는. 2 x 105 -4 x 105 effector 세포 자극에 대 한 세 가지, 건강 한 기증자 로부터 10 x 106 PBMCs 및 1 x 106 BLCLs을 준비 합니다.</li>
	<li>피더 세포와 RPMI 10% 열 비활성화 FCS, 2 mM L-글루타민, 페니실린 (100 IU/mL), 고 스 (0.1 µ g/mL) 및 300 IU/mL 재조합 일리노이-2와 보충의 15 mL에 이펙터 셀 resuspend.</li>
	<li>1 µ g/mL의 최종 농도에 PHA-L을 추가 하 고 신중 하 게 혼합, 96-잘 U 바닥 접시에 잘 당 세포 현 탁 액의 150 µ L를 배포.</li>
	<li>37 ° C에서 그리고 5% CO2 습도 분위기에서 품 어.</li>
	<li>큰 셀 묶습니다 문화 우물에서 때까지 접시를 매일 확인 (~ 7 일).</li>
	<li>1 x 106 셀/mL 신선한 문화 매체에서 문화 플라스 크로 셀을 전송 합니다.</li>
	<li>(주 2)를 계산 하 여 총 셀 수를 결정 하 고 신선한 문화 매체에 1 x 106 셀/mL에서 그들을 유지 합니다. 참고: 이펙터 면역 세포 휴식 상태 (초기 증폭 자극 후 보통 3 주)에서 치료 관리에 대 한 준비 되어야 합니다. 순도 이러한 효과 기 세포의 반응성 vivo에서 한 주사 (예를 들면, 생체 외에서 분석으로) 전에 검사 되어야 한다.</li>
</ol>2. 수술 Effector 세포 준비
<ol><li>이펙터 세포 수를 확인 한 후 원심 분리 (300 x g 5 분)에 의해 50 mL 튜브에 효과 기 세포를 수집 합니다. 참고: 모든 손실에 대 한 보상 (예를 들어, 50 x 106) 세포의 과잉 준비.</li>
	<li>조심 스럽게는 상쾌한을 제거 하 고 살 균 PBS와 300 x g 에 5 분 동안 원심 분리기 세척을 수행의 15 mL에 셀 resuspend.</li>
	<li>신중 하 고 완전히 제거는 상쾌한 하 고 메 마른 PBS의 1 mL에 다음 셀 펠 릿을 resuspend.</li>
	<li>5 분에 대 한 300 x g 에서 원심 분리에 대 한 1.5 mL microtube resuspended 셀을 전송 합니다.</li>
	<li>신중 하 고 완전히 천천히 pipetting 여는 상쾌한을 제거 합니다.</li>
	<li>마우스 마다 살 균 PBS의 8 µ L에서 셀 펠 릿을 resuspend. 참고:이 중요 한 단계입니다.</li>
	<li>micropipette를 사용 하 여 셀 서 스 펜 션의 볼륨을 측정 합니다. 필요한 경우 살 균 PBS (복용량 당 PBS의 15 µ L에서 20 x 106 셀)을 추가 하 고 신중 하 게 혼합.</li>
	<li>마우스 당 최종 볼륨 15과 20 μ (명령적 < 20 µ L) 사이 micropipette를 사용 하 여 확인 합니다.</li>
	<li>정위 적 주입까지 얼음에 셀을 계속. 참고: 이상의 3 h timepoints은 테스트 하지.</li>
</ol>3. 정위 적 주입
<ol><li>
장비 설정
	<ol>
<li>조립 하 고 intracranial 주사 (예를 들어, 주사기 크기, 원하는 볼륨 및 사출 속도)의 정확성을 보장 하는 제조업체의 지침에 따라 작은 동물 정위 적 프레임 보정. 참고: 느린 주입 속도 (즉, 2-3 µ L/min) 좋습니다.</li>
		<li>감염에서 미생물 안전 캐비닛 (MSC) 악기의 불 임을 유지 하 고 쥐를 보호 하기 위해 아래 자료를 설치 합니다. 참고: 장소 "등온선 진영" 37 ° c.에 물 목욕 이 시스템 수술 시 쥐의 저체온증을 제한 한다. 패드는 포스트 절차적 케어에 필요한 난방 지속적인 온도 모니터링 하는 동안 사용 해야 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 동물 준비
	<ol>
<li>케 타 민 (10mg/mL) 및 xylazine (0.1 mg/mL) 마우스의 몸 무게의 10 µ L/g의 복 주사와 마우스 anesthetize</li>
		<li>완전 한 마 취 및 진통 동물의 발가락 핀치 테스트를 수행 합니다. 참고: 모든 운동 비 깊은 진통의 표시 이며, 몇 분 작업을 반복 하기 전에 필요한 경우.</li>
		<li>일단 마우스 제대로 마 취가 위를 사용 하 여 (두 귀, 코까지) 사이 수술 사이트에서 모피를 제거.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 세포 준비
	<ol>
<li>신중 하 게 resuspend는 피 펫 셀 (여러 번) 셀 응집을 방지 하기 위해 각 주입 전에.</li>
		<li>신중 하 게 거품의 열망을 피하기 위해 22-G microsyringe에 필요한 셀 서 스 펜 션 볼륨 (15-20 µ L)를 그립니다. 참고:이 셀 로드 단계는 microsyringe에는 주입 된 볼륨에 분산을 최소화 하는 것이 중요입니다. 셀 응집을 방지 하 고 이펙터 셀 관리는 일대에는 짝수를 위해 절차 사이 각 개별 주입에 대 한 셀을 다시 로드 합니다.</li>
		<li>그런 다음, 적응된 주사기 펌프에 주사기를 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
절차적 케어
	<ol>
<li>Povidone-요오드 5% 솔루션 적어도 3에에서 젖은 면봉으로 수술 부위의 소독 x.</li>
		<li>어떤은 각 막의 건조를 방지 하기 위해 마우스의 눈에서 윤 활 안과 연 고를 배치 합니다.</li>
		<li>위치는 따뜻한 등온선 블록에 정위 적 프레임에 마 취 마우스 수술 하는 동안 마우스의 온도 유지 하 고 사망률을 제한 하는 살 균 플라스틱 포장으로 커버. 참고: 마우스의 코 그리고 치아 해야 적절 하 게 배치 절차 중 적절 한 호흡기 흐름을 보장 하기 위해 치아 바 위에.</li>
		<li>일단 치아 바 위에 마우스를 위치 귀 바 머리를 고정 하는 마우스의 귀 아래 단단히 조입니다. 참고: 고 막 손상 하지 또는 호흡 타협 다는 것을 주의 하십시오.</li>
		<li>후부는 두개골을 폭로 앞쪽에서 두개골의 상단 부분을 따라 살 균가 위는 1-2 cm 중간 화살 피부 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>화살과 코로나 봉합 (Bregma) ( 그림 1참조) 주입 전에 정위 적 지역화에 대 한 랜드마크로 서 역할을 교차로 식별 합니다.</li>
		<li>이 이때 위의 microsyringe를 놓습니다.</li>
		<li>Microsyringe 오른쪽 측면 2 m m와 0.5 m m는 Bregma의 앞쪽을 이동 합니다.</li>
		<li>microdrill를 사용 하 여 미리 결정 된 좌표에 살 균 드릴 비트와 함께 두개골에 작은 구멍을 확인 합니다. 두뇌의 어떤 외상 성 상해를 피하기 위하여 표면 유지 주의 해야 합니다. 참고:이 프로토콜에 면역 세포는 설립된 종양 (종양 세포 주입 후 1 주일) 내 주입 했다. 피부 되어야 재개 (흉터) 및 사출 (구멍은 일반적으로 주사 후 2 주까지 여전히 존재) 종양 세포 이식에 사용 되는 같은 좌표에서 수행 됩니다. 좌표는 뇌 실질13,14에서 종양과 effector 세포를 주입에 대 한 선정 됐다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
면역 효과 기 세포의 주입
	<ol>
<li>조심 스럽게 드릴된 된 구멍에는 microsyringe를 삽입 하 고, 경질에서 아래로 3mm 고 효과 기 세포를 주입 하기 전에 2.5 m m의 최종 깊이를 다음 뒤로 0.5 m m 바늘을 앞으로 천천히 이동.</li>
		<li>2-3 µ L/분 effector 세포 주입을 실행 하 고 주입 시간 따라 마우스를 모니터링.</li>
		<li>주입이 완료 되 면만 1 m m의 바늘을 철회 하 고 천천히 주입 사이트에서 어떤 누설을 방지 하기 위해 microsyringe을 완전히 철수 하기 전에 추가 분 자리에는 microsyringe를 유지. 참고: 정위 적 장치에서 동물의 제거 다음 즉시 곧 실험에 대 한 주입 장비 청소.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 치료 및 마우스의 후속
	<ol>
<li>정위 적 프레임에서 동물을 제거 하 고 즉시 povidone-요오드 5% 솔루션 절 개 사이트에 적용 하 고 적절 한 수술 치료와 피부를 닫습니다.</li>
		<li>상처에 직접 2 %lidocaine 젤을 적용 하 고 0.15 µ g/g buprenorphine의 사후 절차 진통에 대 한 피하 주입에 의해 관리.</li>
		<li>적절 한 마우스 체온을 유지 하 고 어떤 저체온증을 피하기 위해 장소 다시 마 취 마우스 난방 패드 위에 그것의 감 금 소를 37 ° C로 설정 합니다. 참고: 별도 주거 필요는 없습니다.</li>
		<li>그것은 완전히 마 취에서 회복 될 때까지 마우스를 모니터 하 고 주택 룸에 그것을 전송. 참고: 날짜,이 프로토콜은 잘 지원 몇 외 합병증 발생 (주입 된 쥐의 < 5%)으로.</li>
		<li>매일 쥐를 모니터링 하 고 어떤 감소 건강 징후 (예를 들어, 돌출된 자세, 감소 이동성, 의식, 또는 중요 한 몸 무게 감량 [≥ 15%]) 관찰 하는 때 그들을 안락사.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Stupp, R., Roila, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+glioma:+ESMO+clinical+recommendations+for+diagnosis,+treatment+and+follow-up.">Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).</li><li>Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standards+of+care+for+treatment+of+recurrent+glioblastoma--are+we+there+yet?.">Standards of care for treatment of recurrent glioblastoma--are we there yet?.</a> Neuro-Oncology. 15 (1), 4-27 (2013).</li><li>Chen, S. H., Shine, H. D., Goodman, J. C., Grossman, R. G., Woo, S. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li></ol>

저자는 공개 없다.

입양 전송 선정 네이티브 또는 조작된 면역 효과 기 세포 효율적으로 제한 비 변형 세포15에 대 한 reactivities의 infiltrative 뇌 암 같은 종양을 치료 하는 유망한 접근 방식을 나타냅니다. 16,,1718. 그러나, 중앙 신경 조직, 두뇌를 구성 하는 혈액-뇌 장벽의 존재와 고아 한 림프 배수 시스템19,20의 부족 때문에 특히 특정 면역 상태. 이러한 생리 적 기능 조직 인신 매매에 영향을 하 고 면역 세포의 조직 주사를 손상 수 있습니다. 극복 하기 위해 이러한 hindrances, intraparenchymal 주사 antitumor 셀 배달 되는 대신 로컬로, 약리 화합물21, 를 포함 하는 스피어에 관해서는 종양 사이트에 밀접 하 게 원칙에 탐험 되어 22. 한 반면에, 기관 내에서 세포의 제한 된 희석 그들의 antitumor 효율성을 향상 시킬 수 있습니다 하지만 그것은 또한 해로운 기계 또는 종양 적응 효과, 뇌 따라 개발 tissular 압축 등 증폭 종양 성장입니다. 이이 절차에서는 immunotherapeutic 주사의 작은 볼륨을 의미 합니다. 이 문제는 뇌에 종양 수 없습니다 수 수술 excised 동물 실험 모델에서 더욱 중요 하다. 이 문서에서는 준비 및 뇌 종양 특정 세포 이펙터, 수용자 인간 T 림프 톨의 정위 적 injection(s)에 따라 로컬 배달에 대 한 치료 방법을 설명 합니다.
이 연구는 인간의 GBM xenografts 들고 immunodeficient NSG 쥐에 준비 및 수용자 인간 Vϒ9Vδ2 T 림프 톨의 stereotaxic 배달을 보여줍니다. 이 프로토콜의 첫 번째 단계는 건강 한 기증자의 PBMCs에서 수용자 T 세포를 증폭, 순수 이펙터 T 림프 톨의 대량 생산 하는 표준 일반적인 PHA-지류-IL2 자극을 사용 하 여, 허용에 대 한 간단한 절차 설명 그들의 치료 이용23,24. 이 문서의 두 번째 단계는 T 림프 구 정지 stereotaxic 관리의 날에 휴식의 준비에 중점을 둡니다. 특히 초점 생존 및 선택한 이펙터 T 림프 톨의 기능에 영향을 주지 해야 높은 세포 밀도 요구 하는이 중요 한 단계에 배치 했다. 마지막으로, vivo에서 실험에 관한 효과 기 T 세포와 종양 코어 내의 그들의 주입의 준비 뿐만 아니라 강조 주변 뇌 조직에서에서 종양 내에서 뿐만 아니라 그들의 보급에 연관 된 그들의 순찰 하 고 침략 적인 종양 세포를 추적 하는 특정 능력. 중요 한 것은, 이러한 준비와 주입 방법 뇌 종양 세포의 특정 인식에 따라 뇌 내에서 활성화 될이 T 림프 톨의 기능을 유지 합니다. 이러한 뛰어난 특성에 T 세포의 기능을 구체적으로 보장 효율적으로 대상 고 GBM25의 특징 깊은 infiltrative 뇌 종양 세포를 제거. 노트의 특별 한 주의를 주입 하 고는 microsyringe의 제거 모든 뇌 병 변을 최소화 하는 또는 이펙터 셀 누수.
결론적으로,이 문서에는 수용자 인간의 안티 종양 세포, 뇌 종양의 주변 안에서 인간의 Vϒ9Vδ2T 세포, 휴식 등의 대용량을 제공 하기 위한 효율적인 절차를 설명 합니다. 중요 한 것은,이 치료 절차 하지 전송된 T 림프 톨 (예를 들면, 생존, 반응성) 또는 뇌 조직에 불리 한 효과와 함께 합니다. 기본 인간 GBM의 murine orthotopic 모델에 따라 최근 연구 Vϒ9Vδ2T 세포 효율적으로 뇌 실질9,11침투 깊이 종양 세포를 포함 하 여 GBM 셀 대상 증명 하고있다. 이러한 요소는 첫 번째 인스턴스에서 orthotopic 뇌종양을 들고 쥐와, 그럼, GBM 환자에 임상 연구에서 소설 입양 T 림프 톨 전송 절차의 적용 될 수 있는 개발을 위한 기회를 엽니다.

GBM (누가 학년 4 astrocytoma), 성인에서 가장 자주 하 고 공격적인 주 뇌 암 이다. 수술과 라디오 화학 요법을 결합 하는 적극적인 치료에도 불구 하 고 GBM는 매우 빈약한 예 지 (14.6 개월 및 2 년 사망률 > 73%의 메디아 생존)1와 관련 남아 있습니다. 이 몇 가지 효율적인 치료 발전2지난 10 년 동안 검증 된 증거. 더 효과적인 치료 전략3,,45의 디자인에 대 한 후보자, 중 immunotherapies6 현재 탐험 추적 하 고 매우 침략과 라디오/항 암 치료-방지 종양 제거 셀, 신속 하 고 치명적인 종양 재발7에 그들의 주요 기여에 대 한 의심. 다양 한 잠재적인 면역 목표 식별 및 제안 immunotherapies, 자연 관련 된 또는 수정 된 αβ 또는 GBM 특정 종양 항 원 등 스트레스 유발 분자8,9, ϒδ T 림프 톨 했다 10. 선택한 GBM 반응 면역 세포 이펙터 관리 가능성 잔여 악성의 사이트에 직접 효과 기 림프 톨의 높은 금액을 제공 하는 독특한 기회를 나타냅니다. 이 전략을 지원 하기 위해 우리가 최근에 나타났습니다 orthotopic 기본 인간의 GBM xenografts를 충실 하 게 수행 하는 immunodeficient 마우스에 따라 모델 GBM 환자9,11에서 뇌 종양의 개발을 정리. 또한, 이러한 모델 adoptively 전송된 수용자 인간 Vϒ9Vδ2T 림프 톨의 강한 antitumor 효율을 보여 주기 위해 사용 되었다.
이 프로토콜 GBM, 수용자 T 림프 톨의 입양 이동에 따라 같은 뇌종양의 정위 적 immunotherapies를 달성 하기 위한 중요 한 실험 단계를 설명 합니다. 문서 쇼: (i) 인간 림프 톨 Vϒ9Vδ2T; 같은 치료 수용자 면역 효과 기 T 세포의 증폭 (ii) 분사;에 대 한 이러한 이펙터 T 림프 톨의 준비 (뇌 종양 근처에서 정위 적 관리를 위한 절차 iii). 이 문서는 또한 정위 적 주입 후 이러한 셀룰러 이펙터의 동작에 대 한 통찰력을 제공합니다.
여기에 제시 된 치료 방법은 20 x 106 effector 세포 당 복용량의 각 뇌 종양 베어링 immunodeficient 마우스에 대 한 주입을 기반으로 합니다. 초기 생체 외에서 확장 단계는 면역 세포의 대량 생산 해야 합니다. 따라서, 일반적인 셀 확장 phytohemagglutinin (PHA-L)를 사용 하 여 수행 됩니다 및 수용자 피더 세포 반구: 건강 한 기증자와 엡 스타인 바 바이러스 EBV 변형 B lymphoblastoid 셀에서 주변 혈액 단 세포 (PBMCs) 라인 (BLCLs), 포함 하는 EBV 문화 비단 B95-8 셀 라인 1 µ g/mL cyclosporin A의 존재에서 표면에 뜨는 생체 외에서 감염에 의해 PBMCs에서 파생 된
GBM 반응 이펙터 면역 세포는 비교 하 고 분석 실험 체 외에 9에서 선택. 이러한 효과 기 세포 활성화 되 고 증폭 된 표준 프로토콜을 사용 하 여 (예를 들어, 인간의 Vγ9Vδ2 T 림프 톨9 또는 인간 항 헤 르 페 스 바이러스 αβ T 림프 톨12) 그들의 성격에 따라 정기적으로 > 80%의 최소 순도와 cytometric 분석에 의해 확인. 아래 상세한 셀 확장 프로시저는 다양 한 인간 림프 톨 부분 집합에 적용 됩니다.

<table><tbody><tr><td>PBMCs</td><td></td><td></td><td>from 3 different healthy donors</td></tr><tr><td>BLCLs</td><td></td><td></td><td>from 3 different donors</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>31870-025</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Dutscher</td><td>S1810-500</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>penicillin/streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>IL-2</td><td>Novartis</td><td>proleukin</td><td></td></tr><tr><td>PHA-L</td><td>Sigma</td><td>L4144</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic frame</td><td>Stoelting Co.</td><td>51600</td><td></td></tr><tr><td>Mouse adaptator for stereotaxic frame&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Stoelting Co.</td><td>51624</td><td></td></tr><tr><td>microsyringe pump injector&amp;nbsp;</td><td>WPI</td><td>UMP3-4</td><td></td></tr><tr><td>NanoFil Syringe</td><td>WPI</td><td>NF34BV-2</td><td></td></tr><tr><td>NSG mice</td><td>Charles River</td><td>NSGSSFE07S</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Merial</td><td>Imalg&amp;egrave;ne 1000</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer</td><td>Rompur 2%</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>WPI</td><td>201758</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>WPI</td><td>501215</td><td></td></tr><tr><td>OmniDrill 115/230V</td><td>WPI</td><td>503598</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Ethicon</td><td>VCP397H</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaine</td><td>Astrazeneca</td><td>3634461</td><td></td></tr></tbody></table>

stereotactic adoptive transfer of cytotoxic immune cells in murine models of orthotopic human glioblastoma multiforme xenografts

세포종 님 (GBM), 성인에서 가장 자주 하 고 공격적인 주 뇌 암은 일반적으로 빈약한 예 지와 연결 하 고 지난 10 년간 부족 한 효율적인 치료 제안 되었습니다. 새로운 치료 전략을 디자인 하기 위한 유망한 후보자 중 세포 immunotherapies는 높게 침략 적 제거 하 표적이 되었습니다 및 항 암 치료-radioresistant 종양 세포, 가능성이이 암의 신속 하 고 치명적인 재발 있습니다. 따라서, 종양 주변 인간 Vϒ9Vδ2 T 림프 톨 같은 수용자 GBM 반응 면역 세포 이펙터의 administration(s) 것이 효율적 제공 하는 독특한 기회 나타내고 고도로 집중에 직접 치료제를 뇌 악성 사이트입니다. 여기, 선물이 orthotopic 인간의 기본 뇌 종양을 들고 immunodeficient 마우스에 준비 및 수용자 인간 림프 톨의 stereotaxic 관리에 대 한 프로토콜. 이 연구는 타당성과 intrabrain 종양 침대에서 수용자 인간 림프 톨의 정위 적 주사에 의존 하는 이러한 세포 immunotherapies의 antitumor 효능에 대 한 전 임상 증거의 개념을 제공 합니다.

이 연구는 종양 침대 내에서 직접 수행 하는 정위 적 주사에 따라 종양을 들고 쥐의 뇌 내 세포 면역 효과 기 세포의 입양 전송의 전략을 설명 합니다.
큰 사출 량과 관련 된 뇌 손상의 모든 위험을 최소화 하려면 effector 세포 현 탁 액 (20 x 106 셀 PBS의 15-20 µ L에) 집중 될 필요가 있다. 이 셀 농도 단계 효과 기 세포의 생존에 영향을 미칠 수 여부를 확인 하려면이 셀 설명된 프로토콜에 따라 준비 하 고는 microsyringe에 로드 된 했다. 효과 기 세포는 microsyringe에 그들을 로드 후 즉시, 또는 10 분을 수집 했다. 셀은 propidium 요오드 화물 (PI)은 세포를 라이브 permeant cytometry 다른 timepoints (0, 24, 그리고 72 시간)에 의해 분석 된 형광 DNA intercalating 에이전트와 얼룩이 있었다. 결과 준비와 로드는 microsyringe에 크게 영향을 주지 않습니다 효과 기 세포의 생존 능력 (그림 2A와 2B) 적어도 24 시간 동안 보여줍니다. 72 시간에서 PI긍정적인 세포의 약간의 하지만-중요 한 증가 (14% 언로드된 셀 11%에 비해) 관찰 되었다. 비슷한 방법으로 준비 하 고 3 시간 동안 얼음에 유지 했다 effector 세포의 antitumor 반응성 분석 했다. 효과 기 세포는 안티 CD107a mAb의 존재 4 시간 동안 뇌 종양 세포와 cocultured 했다. 활성화 마커 CD107a, 유사한 제어 조건에서 얻은 값의 upregulation 효과 기 세포의 반응성 준비와 로드 microsyringe (그림 2C)에 의해 영향을 받지 않습니다 것을 나타냅니다.
효과 기 세포 생존 하 고 그들의 내부 종양 이식, 20 x 106 이펙터에 따라 뇌 실질 내에서 이동 하는 여부를 평가 셀 뇌종양 (GBM-111)를 운반 하는 쥐의 종양 사이트에 주입 했다. 1 주일 후, 두뇌 수집 했다, 고정, sectioned, 그리고 스테인드 되며, 오신, 및 safran 채색 (HES) 및 안티 인간 CD3 mAb (IHC)에 대 한. HES 채색 뇌종양 (그림 3, 왼쪽된 패널)의 구조를 식별합니다. CD3 얼룩 식별 및 지역화 이펙터 면역 T 세포 (여기, 인간 Vϒ9Vδ2 T 세포) (그림 3, 오른쪽 패널). 흥미롭게도, 효과 기 T 세포 검색 (그림 3, 오른쪽 위 패널), 종양 주위 종양 코어 (그림 3, 중간 오른쪽 패널), 뿐만 아니라 contralateral 반구 (그림 3, 하단 오른쪽 패널). 또한, 쥐의 뇌에서 뇌 세포의 2%를 대표 하는 그들의 주입 (4 x 106 αβ T 세포), 후 48 시간 고립 인간 T 림프 톨의 기능 분석 했다. 결과 수집 된 뇌 주입 이펙터 수용자 αβ T 세포 확장 일반적인 PHA 피더 세포 활성화 일리노이-2 (그림 4)의 수행 시 증식 나타냅니다.
함께, 이러한 결과 효과 기 T 세포 준비 하 고이 절차에 따라 관리 시간에 대 한 뇌의 생존과 종양 및 건강 한 뇌 조직 내 순찰 수 보여 줍니다. 이러한 절차 인간의 GBM 뇌 종양9,11의 개발을 제어를 수용자 인간의 휴식 Vϒ9Vδ2 T 세포의 치료 정위 적 행정의 antitumor 효율성을 평가 하기 위한 사용 되었습니다. 이러한 연구 증거 수용자 인간의 이펙터 T 림프 톨 종양 침대에서의 뇌종양을 운반 하는 쥐의 생존을 크게 향상 시킵니다. 흥미롭게도, 살아남은 마우스 감지 종양 세포, 따라서 완전 한 종양 제거를 나타내는 수행 하지 않았다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57870/57870fig1.jpg"> 그림 1 : 마우스 두개골에 주요 해부학 적 랜드마크의 그림. 화살 (빨간 선)와 화관 (파란 선) 봉합 및 사출 사이트의 방향을 하는 데 사용 그들의 교차점 (Bregma) 포함 됩니다. 눈금 막대에 표시 됩니다. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57870/57870fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57870/57870fig2.jpg"> 그림 2 : 생존의 활성화 준비 이펙터 T 림프 톨. 효과 기 세포 (여기, 인간의 주변 Vϒ9Vδ2 T 세포 휴식) 증폭 되었고 설명 된 절차에 따라 준비. Propidium 요오드 화물 (PI)와 세포의 얼룩, 세포, 및 기능 활성화 permeant은 형광 화합물 intercalating DNA 수행 했다. 앞으로 (FSC-H) 대 측 (SSC-H)의 대표 작 흩어 게이팅 effector 세포 (왼쪽 패널)의 (A)이이 패널 표시 합니다. 히스토그램 문이 제어 림프 톨 (오른쪽 패널)의 PI 얼룩을 보여줍니다. PI긍정적인 림프 톨의 백분율 표시 됩니다. (B)이이 패널의 백분율을 나타냅니다 죽은 세포 (PI긍정적인) 즉시 수집 (밝은 파란색 선) 또는 지정 된 timepoints에서 측정은 microsyringe에서 10 분 (진한 파란색 선), 후. 제어, 언로드된 준비 셀 사용 되었다 (회색 선). (n = 3; ± SD; 의미 ns = 중요.) (C) CD107a 표면 동원 cytometry 어느 Vδ2긍정적인 제어 셀 (준비)에 의해 측정 되었다 또는 준비 얼음 (준비 + 3 h) 대상 인간의 기본 뇌 종양 세포와 coculture 다음에 유지 하는 세포. 림프 톨의 백분율은 각 cytometric 사분면에 표시 됩니다. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57870/57870fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57870/57870fig3.jpg"> 그림 3 : 검출 및 이펙터 T 림프 톨 종양 방위 쥐의 뇌에서의 지역화. 1 주일 후 세포종 뇌 종양 이식, 이펙터 면역 세포 (여기, 인간의 주변 Vϒ9Vδ2 T 세포 휴식) 쥐의 두뇌에 주입 했다. Immunotherapeutic 치료 후 1 주일 두뇌 수집, 고정 되었고 구분. 뇌 섹션 immunohistochemistry 분석 (되며, 오신, 및 safran [HES] 채색) 착 색 했다 (왼쪽된 패널) 또는 안티-인간의 CD3 항 체 (오른쪽 패널)로 얼룩진. 표시 된 결과 3 개의 독립적인 실험의 대표. 눈금 막대에 표시 됩니다.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57870/57870fig4.jpg"> 그림 4 : 이펙터 T 림프 톨의 활성화 치료 쥐의 뇌에서 수집. 휴식 인간 T 림프 톨 (여기, 4 x 106 인간 αβ T 림프 톨)는 NSG 쥐의 두뇌에 주입 했다. 48 시간 후, 두뇌 수집 되었고 해리. 인간의 뇌에 침투 T 림프 톨의 백분율 cytometry 안티 인간 CD3 항 체 (하단 패널)을 사용 하 여 측정 했다. 수집 된 셀 96 잘 U 바닥 접시와 자극된 (PHA 피더 세포와 일리노이-2) 20 일 (16 배로 주기)에 대 한 (10 셀/잘) 시드 했다. 하루 10, 13.3 x 10에 참고, 인간 T 림프 톨의6 (오른쪽 패널)를 획득 했다.

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Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

정위 적 입양 전송 Orthotopic 인간 세포종 님 Xenografts Murine 모델에서 세포 독성 면역 세포의

여기, 선물이 orthotopic 인간의 기본 뇌 종양을 들고 immunodeficient 마우스에 준비 및 수용자 인간 림프 톨의 stereotaxic 관리에 대 한 프로토콜. 이 연구는 타당성과 세포 immunotherapies intrabrain 전달의 antitumor 효능에 대 한-의 증거-개념을 제공합니다.

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...

stereotactic-adoptive-transfer-cytotoxic-immune-cells-murine-models

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

7.8K 조회수.  CRCINA. 여기, 선물이 orthotopic 인간의 기본 뇌 종양을 들고 immunodeficient 마우스에 준비 및 수용자 인간 림프 톨의 stereotaxic 관리에 대 한 프로토콜. 이 연구는 타당성과 세포 immunotherapies intrabrain 전달의 antitumor 효능에 대 한-의 증거-개념을 제공합니다.

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A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma (glioma) and medulloblastoma. The widely used stereotactic approach only allows for the injection of a single animal at a time, is labor intensive and requires highly specialized equipment. The guide screw method, initially developed by Lal et al.,1 was developed to eliminate cumbersome stereotactic procedures. We now describe a modified guide screw approach that is rapid and exceptionally safe; both of which are critical ethical considerations. Notably, our procedure now incorporates an infusion pump that allows up to 10 animals to be simultaneously injected with tumor cells.
To demonstrate the utility of this procedure, we established human U87MG glioma cells as intracranial xenografts in mice, which were then treated with AMG102; a fully human antibody directed to HGF/scatter factor currently undergoing clinical evaluation2-5. Systemic injection of AMG102 significantly prolonged the survival of all mice with intracranial U87MG xenografts and resulted in a number of complete cures. 
This study demonstrates that the guide screw method is an inexpensive, highly reproducible approach for establishing intracranial xenografts. Furthermore, it provides a relevant physiological model for validating novel therapeutic strategies for the treatment of brain cancers.

In order to evaluate novel therapeutic paradigms for the treatment of glioma, physiological relevant models are essential. We utilize an implantable guide screw procedure for establishment of intracranial xenograft models that is more rapid and safer than stereotactic approaches.

마우스에 Intracranial 이종 이식 연구에 대한 간단한 안내 스크류 방법

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

연구

의학

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the understanding of the mechanics of tumor invasion, and direct intracerebral inoculation of tumor provides the opportunity of observing the invasive process in a physiologically appropriate environment2. As far as human brain tumors are concerned, the orthotopic models currently available are established either by stereotaxic injection of cell suspensions or implantation of a solid piece of tumor through a complicated craniotomy procedure3. In our technique we harvest cells from tissue culture to create a cell suspension used to implant directly into the brain. The duration of the surgery is approximately 30 minutes, and as the mouse needs to be in a constant surgical plane, an injectable anesthetic is used. The mouse is placed in a stereotaxic jig made by Stoetling (figure 1). After the surgical area is cleaned and prepared, an incision is made; and the bregma is located to determine the location of the craniotomy. The location of the craniotomy is 2 mm to the right and 1 mm rostral to the bregma. The depth is 3 mm from the surface of the skull, and cells are injected at a rate of 2 &mu;l every 2 minutes. The skin is sutured with 5-0 PDS, and the mouse is allowed to wake up on a heating pad. From our experience, depending on the cell line, treatment can take place from 7-10 days after surgery. Drug delivery is dependent on the drug composition. For radiation treatment the mice are anesthetized, and put into a custom made jig. Lead covers the mouse's body and exposes only the brain of the mouse. The study of tumorigenesis and the evaluation of new therapies for GBM require accurate and reproducible brain tumor animal models. Thus we use this orthotopic brain model to study the interaction of the microenvironment of the brain and the tumor, to test the effectiveness of different therapeutic agents with and without radiation.

The purpose of this article is to describe the use of an orthotopic glioblastoma model for chemoradiation studies. This article will go though cell processing, implanting, and radiotherapy of the mouse using an intracranial model.

Orthotopic 마우스 뇌종양 모델의 조합 방사선 치료

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality treatment consisting of surgical resection, post-operative radiation therapy and temozolomide chemotherapy 1. New therapeutic approaches are clearly needed to improve patient survival and quality of life. The development of more effective treatment strategies would be aided by animal models of GBM that recapitulate human disease yet allow serial imaging to monitor tumor growth and treatment response. In this paper, we describe our technique for the precise stereotactic implantation of bio-imageable GBM cancer cells into the brains of nude mice resulting in tumor xenografts that recapitulate key clinical features of GBM 2. This method yields tumors that are reproducible and are located in precise anatomic locations while allowing in vivo bioluminescent imaging to serially monitor intracranial xenograft growth and response to treatments 3-5. This method is also well-tolerated by the animals with low perioperative morbidity and mortality.

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

We describe an integrated method for the precise, stereotactic implantation of human glioblastoma multiforme cells into the brains of nude mice and subsequent serial in vivo imaging to monitor growth and response to treatment of the resultant xenografts.

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

Primary Orthotopic Glioma Xenografts Recapitulate Infiltrative Growth and Isocitrate Dehydrogenase I Mutation

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary orthotopic xenografts recapitulate the histopathological and molecular features of malignant glioma subtypes in preclinical animal models. To model WHO grades III and IV malignant gliomas in transplantation assays, human tumor cells are xenografted into an orthotopic site, the brain, of immunocompromised mice. In contrast to secondary xenografts that utilize cultured tumor cells, human glioma cells are dissociated from resected specimens and transplanted without prior passage in tissue culture to generate primary xenografts. The procedure in this report details tumor sample preparation, intracranial transplantation into immunocompromised mice, monitoring for tumor engraftment and tumor harvesting for subsequent passage into recipient animals or analysis. Tumor cell preparation requires 2 hr and surgical procedure requires 20 min/animal.

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary orthotopic xenografts recapitulate the histopathological and molecular features of malignant glioma subtypes in preclinical animal models.

1차 성우 성안 성액 제노이식은 침투 성장을 재구성하고 탈수소 효소 I 돌연변이를 이소염시분해합니다.

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo to express chimeric antigen receptors specific for glioma antigens (CAR T cells). The expansion and function of adoptively transferred CAR T cells can be potentiated by the lymphodepletive and tumoricidal effects of standard of care chemotherapy and radiotherapy. We describe a method for generating CAR T cells targeting EGFRvIII, a glioma-specific antigen, and evaluating their efficacy when combined with a murine model of glioblastoma standard of care. T cells are engineered by transduction with a retroviral vector containing the anti-EGFRvIII CAR gene. Tumor-bearing animals are subjected to host conditioning by a course of temozolomide and whole brain irradiation at dose regimens designed to model clinical standard of care. CAR T cells are then delivered intravenously to primed hosts. This method can be used to evaluate the antitumor efficacy of CAR T cells in the context of standard of care.

The lymphodepletive and immunomodulatory effects of chemotherapy and radiation standard of care can be leveraged to enhance the antitumor efficacy of T cell immunotherapy. We outline a method for generating EGFRvIII-specific chimeric antigen receptor (CAR) T cells and administering them in the context of glioblastoma standard of care.

배려의 아교 모세포종 표준의 맥락에서 입양 치료에 대한 자동차 T 세포의 생성

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

면역학 및 감염병학

Translational Orthotopic Models of Glioblastoma Multiforme

Genetically engineered mouse (GEM) models for human glioblastoma multiforme (GBM) are critical to understanding the development and progression of brain tumors. Unlike xenograft tumors, in GEMs, tumors arise in the native microenvironment in an immunocompetent mouse. However, the use of GBM GEMs in preclinical treatment studies is challenging due to long tumor latencies, heterogeneity in neoplasm frequency, and the timing of advanced grade tumor development. Mice induced via intracranial orthotopic injection are more tractable for preclinical studies, and retain features of the GEM tumors. We generated an orthotopic brain tumor model derived from a GEM model with Rb, Kras, and p53 aberrations (TRP), which develops GBM tumors&#160;displaying linear foci of necrosis by neoplastic cells, and dense vascularization analogous to human GBM. Cells derived from GEM GBM tumors are injected intracranially into wild-type, strain-matched recipient mice and reproduce grade IV tumors, therefore bypassing the long tumor latency period in GEM mice and allowing for the creation of large and reproducible cohorts for preclinical studies. The highly proliferative, invasive, and vascular features of the TRP GEM model for GBM are recapitulated in the orthotopic tumors, and histopathology markers reflect human GBM subgroups. Tumor growth is monitored by serial MRI scans. Due to the invasive nature of the intracranial tumors in immunocompetent models, carefully following the injection procedure outlined here is essential to prevent extracranial tumor growth.

Here, we describe a preclinical orthotopic mouse model for GBM, established by intracranial injection of cells derived from genetically engineered mouse model tumors. This model displays the disease hallmarks of human GBM. For translational studies, the mouse brain tumor is tracked by in vivo MRI and histopathology.

다형성 교모세포종의 번역 동소 모델

Genetically engineered mouse (GEM) models for human glioblastoma multiforme (GBM) are critical to understanding the development and progression of brain ...

암 연구학

Creating Anatomically Accurate and Reproducible Intracranial Xenografts of Human Brain Tumors

Orthotopic tumor models are currently the best way to study the characteristics of a tumor type, with and without intervention, in the context of a live animal &#8211;&#160;particularly in sites with unique physiological and architectural qualities such as the brain. In vitro and ectopic models cannot account for features such as vasculature, blood brain barrier, metabolism, drug delivery and toxicity, and a host of other relevant factors. Orthotopic models have their limitations too, but with proper technique tumor cells of interest can be accurately engrafted into tissue that most closely mimics conditions in the human brain. By employing methods that deliver precisely measured volumes to accurately defined locations at a consistent rate and pressure, mouse models of human brain tumors with predictable growth rates can be reproducibly created and are suitable for reliable analysis of various interventions. The protocol described here focuses on the technical details of designing and preparing for an intracranial injection, performing the surgery, and ensuring successful and reproducible tumor growth and provides starting points for a variety of conditions that can be customized for a range of different brain tumor models.

The brain is a unique site with qualities that are not well represented by in vitro or ectopic analyses. Orthotopic mouse models with reproducible location and growth characteristics can be reliably created with intracranial injections using a stereotaxic fixation instrument and a low pressure syringe pump.

만들기 해부학 적으로 정확하고 인간의 두뇌 종양의 재현 두개 내 이종 이식

Orthotopic tumor models are currently the best way to study the characteristics of a tumor type, with and without intervention, in the context of a live ...

An Immunocompetent Murine Model for Laser Interstitial Thermal Therapy of Glioblastoma

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and has no cure. Laser interstitial thermal therapy (LITT) is a Food and Drug Administration (FDA)-approved treatment for GB and is used in patients who may not be candidates for conventional surgical resection. While the clinical efficacy of LITT has been established, research beyond clinical case studies and case series is limited and hindered by the lack of an established animal model. This protocol uses C57BL/6 mice and syngeneic CT2A glioma cancer cell line to closely recapitulate human GB&#160;while also using a 1064 nm Neodymium-doped Yttrium Aluminum Garnet (Nd:YAG) laser, such as is used in one of the two FDA-approved LITT systems, providing excellent pre-clinical relevance. The successful establishment of this LITT murine model will provide a valuable platform for investigating the unique features of LITT ablation and its effects on the tumor microenvironment, potentially leading to improved therapeutic strategies.

Glioblastoma is a devastating form of primary brain cancer, and laser interstitial thermal therapy is emerging as a promising alternative to conventional surgical resection for inoperable glioblastoma. This protocol describes an optimized pre-clinical mouse model that can be used to study treatment effects or adjuvant and combinatorial treatments.

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of therapeutic stem cells via the intranasal route is a recently discovered alternative strategy, with strong potential for clinical translation, due to its non-invasive nature compared to intracranial implantation or delivery via systemic routes. The lack of blood brain barrier further strengthens the therapeutic potential of stem cells undergoing intranasal brain entry. This article summarizes the essential techniques utilized in our studies and outlines the basic principles of intranasal strategy for stem cell delivery using a mouse model of intracranial glioma xenografts. We demonstrate the optimized procedures that generate consistent and reproducible results with specific predetermined experimental parameters and offer guidelines for streamlined work flow that ensure efficient execution and reliable experimental outcome. The article is designed to serve as a baseline for further experimental customization based on hypothesis, stem cell types, or tumor specifics.

Stem cells are promising therapeutic carriers to treat brain tumors due to their intrinsic tumor tropism. Non-invasive intranasal stem cell delivery bypasses the blood brain barrier and demonstrates strong potential for clinical translation. This article summarizes the basic principles of intranasal stem cell delivery in a mouse model of glioma.

마우스 모델에서 아교 모세포종에 치료 용 줄기 세포 비강 전달

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Image-Guided Resection of Glioblastoma and Intracranial Implantation of Therapeutic Stem Cell-seeded Scaffolds

Glioblastoma (GBM), the most common and aggressive primary brain cancer, carries a life expectancy of 12-15 months. The short life expectancy is due in part to the inability of the current treatment, consisting of surgical resection followed by radiation and chemotherapy, to eliminate invasive tumor foci. Treatment of these foci may be improved with tumoricidal human mesenchymal stem cells (MSCs). MSCs exhibit potent tumor tropism and can be engineered to express therapeutic proteins that kill tumor cells. Advancements in preclinical models indicate that surgical resection induces premature MSC loss and reduces therapeutic efficacy. Efficacy of MSC treatment can be improved by seeding MSCs on a biodegradable poly(lactic acid) (PLA) scaffold. MSC delivery into the surgical resection cavity on a PLA scaffold restores cell retention, persistence, and tumor killing. To study the effects of MSC-seeded PLA implantation on GBM, an accurate preclinical model is needed. Here we provide a preclinical surgical protocol for image-guided tumor resection of GBM in immune-deficient mice followed by MSC-seeded scaffold implantation. MSCs are engineered with lentiviral constructs to constitutively express and secrete therapeutic TNF&#945;-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) as well as green fluorescent protein (GFP) to allow fluorescent tracking. Similarly, the U87 tumor cells are engineered to express mCherry and firefly luciferase, providing dual fluorescent/luminescent tracking. While currently used for investigating stem cell mediated delivery of therapeutics, this protocol could be modified to investigate the impact of surgical resection on other GBM interventions.

Tumor-seeking therapeutic mesenchymal stem cells (MSCs) show promise as a treatment for invasive glioblastoma. Optimal transplantation involves delivery of MSCs into the tumor resection cavity on scaffolds. Here, preclinical techniques to study MSC treatment of glioblastoma are provided including: image-guided tumor resection; implantation of MSC-seeded scaffolds; and postoperative therapy tracking.

세포종과 치료 줄기 세포 시드 장비의 Intracranial 주입의 이미지 기반 절제

Glioblastoma (GBM), the most common and aggressive primary brain cancer, carries a life expectancy of 12-15 months. The short life expectancy is due in ...