저자 2017-231-001UCV를 통해이 작품에 대 한 재정 지원에 대 한 대학 Católica 드 발렌시아 산 비센테 Mártir를 인정 하 고 싶습니다 고 2018-231-001UCV 부여 합니다.

1. 샘플 준비
<ol><li>원통형 펀치 10mm 직경 10 mm 직경 디스크에 소재 샘플을 잘라. 참고: 취 성 재료 1 시간에 대 한 적합 한 살 균 용 매에 부드럽게 고 디스크를 잘라 될 수 있습니다. 예를 들어 아연 alginate 같은 친수성 재료가이 프로토콜에 따라 테스트 하 고 압력가 마로 소독 물에 습 하 게 했다 샘플 위반을 피하기 위하여 그들을 절단 하기 전에. 그러나, poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) 같은 다른 소수 성 물질 절단 제대로 하려면 이전 붓기의 어떤 종류를 필요 하지 않습니다.</li>
	<li>진공 오븐에서 60 ° C에서 샘플 소재 디스크 건조 (< 10-2 Torr) 24 h에 대 한. 참고: 일부 재료는 높은 건조 온도 할 수 있습니다. 그러나, 그것은 중요 자료를 저하 열 수 온도 도달 하지 않습니다.</li>
	<li>디지털 캘리퍼스와 소재 필름 두께 측정 합니다. 참고:이 프로토콜은 다른 물질의 항균 활동을 비교할 때 상수와 비슷한 두께와 소재 영화의 활용을 권장 합니다.</li>
	<li>10 분에 대 한 에탄올 70%와 각 면 당 1 시간에 후속 자외선 (UV) 방사선에 침수에 의해 각 견본을 소독. 참고: UV 방사선 수행할 수 있습니다 12.0 W 램프 UV C 방사선의 각 표본 층 류 두건 내부 살 균 페 트리 접시에 배치. 주의: 연구원 노출 하면 안 스스로 UV 방사선 때문에 돌연변이.</li>
	<li>1.1, 1.2, 1.3, 1.4 단계를 수행 합니다. 와 제어 소재 디스크. 참고: 폴 리 에틸렌 테 레프 탈 산 (애완 동물) 또는 대체 비 항균 물질 제어 디스크 확산 및 접촉 방법으로 사용 될 수 있습니다. 또한, 나노 복합 재료 또는 치료 재료 특성화 때 제어 자료로 기본 재료를 사용 해야 합니다.</li>
</ol>2. 권장된 미생물
참고: 우리는 다양 한 미생물에 대 한 시험된 물질의 항균 능력을 공부 하는 3 다른 미생물의 사용을 권장.
<ol><li>3 미생물의 순수 문화를 사용 하 여: 그람 양성 박테리아 포도 상 구 균, 대장균, 그람 음성 박테리아와 효 모 Candida albicans. 참고: 다른 미생물 종도 테스트할 수 있습니다이 프로토콜 부 화 조건이 필요한 경우 수정 하 여. 주의: 필요한 biosafety 측정이이 프로토콜에는 미생물의 종류에 따라 다음 합니다.</li>
	<li>미리 살 균 또는 압력가 소재와 작업과를 사용 하 여 분 젠 버너 미생물 조작 또는 생물 안전 캐비닛의 전체 과정 (필요한 경우) 무 균 조건을 보장 합니다. 참고: 권장된 고압 조건 작업 소재 및 생물 학적 잔류물 20 분 동안 문화 매체와 121 ° C 15 분 동안 121 ° C는.</li>
</ol>3. 한 디스크 확산 시험 (확산 방법)
참고: 항균 성 화합물의 액체 확산, 신소재의 주요 항균 메커니즘을 수도 보급 방법 이러한 물질의 항균 능력에 대 한 매우 유용한 정보를 제공할 수 있습니다. 한 천 격판덮개의 센터에 있는 소재 디스크 미생물의 성장 억제 발생 후 24 h 문화의 투명 한 링 영역 (후광)을 형성할 수 있다 ( 그림 1참조).
<ol><li>
확산 테스트 절차
	<ol>
<li>준비 및 고압 tryptic 간장 agar (TSA) 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>분 젠 버너 또는 층 흐름 후드를 사용 하 여 무 균 조건 하에서 무 균 페 트리 디쉬에 TSA를 부 어. 참고: TSA 격판덮개는 4-6 m m 두께 여야 합니다.</li>
		<li>Aerobically 37 ° c.에 인큐베이터에 TSA와 페 트리 접시에서 18-24 h에 대 한 테스트를 다른 미생물 문화</li>
		<li>준비와 압력솥 tryptic 간장 국물 (TSB) 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>분 젠 버너 또는 층 흐름 후드를 사용 하 여 무 균 조건 하에서 미리 살 균된 혈 청 학적인 피 펫 50 mL 미리 멸 균된 원심 분리기 튜브에는 TSB를 붓는 다.</li>
		<li>Resuspend 멸 균 면봉과 소용돌이 사용 하 여 메 마른 분리기 관에 포함 된 TSB의 단계 3.1.3에서 25 mL에서 몇 식민지 균일 한 혼합을 달성 하기 위해 1 분에 대 한 그들.</li>
		<li>흡 광도 조정 (540에서 nm)의 mL 당 단위 (CFU)를 형성 하는 식민지의 적당 일 분 광 광도 계와 문화: 약 1.5 x 108 CFU/mL 박테리아 및 1 x 106 5 x 106 CFU/mL 효 모에 대 한. 참고: 문화와 베트 볼륨에서 흡 광도 측정 하는 분 광 광도 계 활용의 종류에 따라 선택 되어야 합니다.</li>
		<li>소용돌이 미생물 분산을 개선 하 고 짧게 살 균 면 잠수함을 5 초 동안 미생물 국물이 미생물 현 탁 액에 면봉. 문화를 포함 하는 관 벽에 눌러 면봉에서 액체의 과잉을 제거 합니다.</li>
		<li>균등 하 게 미생물으로 그들의 전체 표면을 커버 하는 접종 후 5 분 동안 말리 3 비행기에서 TSA 격판덮개의 표면에 멸 균 면봉으로 미생물 국물 정지 행진. 참고: 모든 습기를 제거 하려면 TSA 격판덮개 배치 되어야 합니다 열기는 접종 하기 전에 10-15 분 동안 37 ° C에서 거꾸로 위치에.</li>
		<li>96% 에탄올과 비 커에서 그들을 immersing 및 다음 분 젠 버너 또는 알코올 버너와 함께 그들을 불타는 핀셋 한 켤레를 소독.</li>
		<li>테스트 하 고 멸 균 핀셋의 쌍을 사용 하 여 TSA 격판덮개의 센터에서 디스크 제어 샘플 디스크를 놓습니다.</li>
		<li>Aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 거꾸로 위치에 TSA 격판덮개를 품 어. 참고: 모든 오염 위험을 피하려면, 그것 것이 좋습니다 거꾸로 위치에 TSA 격판덮개를 품 어. 그러나, 샘플 디스크 TSA 격판덮개에서 분리를 하는 경우 수행 하지 않습니다이 단계를 거꾸로 위치에. 이 경우에, 층 류 두건에 접시를 건조 하는 것이 좋습니다. 이 항균 성 테스트를 적어도 quadriplicate에 재현성을 보장 하기 위해 다른 일에 수행 되어야 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
미생물 현 탁 액 농도 및 순도 확인 참고: 다음 단계는 미생물 농도 단계 3.1.7에서에서 분 광 광도 계 결정 올바른지 확인 하 고 미생물 환경 오염 없이 있었다는 것을 확인 하기 위해 필요 합니다. 미생물 환경 오염 문화 24 h 후 미생물 식민지의 다양 한 종류의 모양으로 쉽게 검색할 수 있습니다. 또한, 소수 직렬 희석에는 조작 하는 동안 TSB 매체의 미생물 오염 없이 부정적인 TSB 컨트롤 플레이트 보장 되어야 합니다.<ol>
<li>무 균 조건에 적합 한 압력가 팁는 micropipette를 사용 하 여 살 균 microcentrifuge 튜브 (3.1.4 단계에서 준비) 살 균 TSB 분배. 그들 중 하나는 부정적인 TSB 제어로 활용 될 것입니다.</li>
		<li>TSB를 포함 하는 메 마른 microcentrifuge 튜브에 3.1.9 단계에서 활용 하는 미생물 국물 중단 소수 직렬 희석을 수행 합니다.</li>
		<li>미리 멸 균된 Drigalski 주걱 또는 다른 악기를 사용 하 여 TSA 격판덮개에 각 희석의 100 µ L를 확산. 또한 부정적인 TSB 제어 접시로 TSA 격판덮개에 (단계 3.2.1에서에서 준비) 미생물 없이 100 μ TSB 매체의 확산.</li>
		<li>Aerobically aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 TSA 격판덮개를 품 어.</li>
		<li>CFU/mL 유사 단계 3.1.7에서에서 결정 되는지 확인 하는 식민지의 수를 계산 합니다.</li>
		<li>식민지의 한 유형 가진 TSA 격판덮개에 미생물 환경 오염 없이 확인 합니다.</li>
		<li>아니 식민지를 보여주는 TSB 부정적인 제어 접시에 미생물 오염 없이 확인</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 소재 표면 (접촉 방법)에 항균 성 활동의 측정
 참고: 표면 접촉, 일부 고급 재료의 주요 항균 메커니즘을 있을 때 접촉 방법 이러한 물질의 항균 능력에 대 한 매우 유용한 정보를 제공할 수 있습니다. 이 방법에서는, 미생물 소재 표면에 직접 배치 하 고 그들의 성장 억제 시간이 일정 금액 후 결정 될 수 있다.
<ol><li>
초기 절차
	<ol>
<li>준비 및 고압 TSB 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>분 젠 버너 또는 층 흐름 후드를 사용 하 여 무 균 조건 하에서 미리 살 균된 혈 청 학적인 피 펫 50 mL 미리 멸 균된 원심 분리기 튜브에는 TSB를 붓는 다.</li>
		<li>문화 aerobically 테스트할 다른 미생물 37 ° c.에서 궤도 셰이 커 (140 rpm)에서 TSB와 튜브에서 하룻밤</li>
		<li>대략 10의 농도를 50 mL 미리 멸 균된 원심 분리기 튜브에 TSB의 20 mL에서 하룻밤 문화를 희석6 CFU/mL (540에서 분 광 광도 계 결정 nm). 참고: 문화와 베트 볼륨에서 흡 광도 측정 하는 분 광 광도 계 활용의 종류에 따라 선택 되어야 합니다.</li>
		<li>TSB를 포함 하는 메 마른 microcentrifuge 튜브에 소수 직렬 희석이 문화를 수행 합니다. 100 µ L TSA 격판덮개에 문화의 확산과 aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 품 어.</li>
		<li>약 1 x 106 CFU/mL의 초기 세포 농도 위해 식민지의 수를 계산</li>
		<li>장소 4 24 시간 및 각 유형의 미생물 계산 후에 24 h 분리 무 균 48-잘 접시의 우물에 대 한 시험된 자료의 4 샘플 디스크 후 미생물 계산에 대 한 디스크를 제어 합니다.</li>
		<li>각 디스크 표면에 미생물 현 탁 액의 150 µ L 플라스틱</li>
	</ol>
</li>
	<li>
미생물 제어 및 시험된 자료 (24 시간) 후 세
	<ol>
<li>4.1.6 단계 후 aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 48-잘 접시에 남아 있는 4 샘플 디스크를 품 어. 참고:이 24 시간 보육 시간 짧은 또는 긴 시간에서 성장 억제를 공부 하기 위해 수정할 수 있습니다.</li>
		<li>외피의 24 시간 후 4 샘플 디스크의 표면에 살 균 PBS의 850 µ L 플라스틱와 미생물 현 탁 액의 150 µ L와 함께 섞는다.</li>
		<li>48-잘 접시에서 PBS/미생물 현 탁 액 혼합물 및 각 디스크를 수집 하 고 10 mL 중 소독된 튜브에 그들을 전송.</li>
		<li>소용돌이 PBS/미생물 현 탁 액 혼합 하 고 1 분 동안 각 디스크 sonicate 그것 50 Hz에서 5 분와 아무 가능한 미생물 유지 되도록 1 분 동안 다시 그것은 소재 표면에 고착 하는 소용돌이.</li>
		<li>TSB를 포함 하는 메 마른 microcentrifuge 튜브에서 sonicated 각 문화의 소수 직렬 희석을 수행 하 고 100 µ L TSA 격판덮개에 문화의 확산 aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 품 어.</li>
		<li>각 샘플 및 제어 디스크 표면에 가능한 미생물의 수는 식민지의 수를 계산 합니다. 표현 가능한 셀 (CFU/mL)에서이 수 한다.</li>
		<li>샘플 및 제어 디스크에 대 한 최종 미생물 문화의 사진을 가져가 라.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 항균 결과 분석
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig1.jpg"> 그림 1: "헤일로" 항균의 정규화 된 너비에 대 한 측정. 이 패널에는 억제 영역 (d오늘)의 직경 디스크 직경 (d) 보여 줍니다. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol><li>
확산 방법 결과 분석
	<ol>
<li>금지 영역 (d오늘)의 지름과 디스크 직경 (d)를 측정 ( 그림 1참조) 디지털 캘리퍼스. 참고: 금지 영역 또는 항균 "헤일로" 항균 소재 디스크에 의해 생성 하는 미생물 성장 억제의 결과로 형성 된다 ( 그림 1참조). 미생물 제대로 성장해 왔습니다 접시의 나머지 부분에 비해 샘플에 가까운 투명 한 링 영역 관찰 수 (불투명 영역).</li>
		<li>방정식 (1)을 적용 하 여 항균 각 디스크의 "후광" (nw헤일로)의 정규화 된 너비를 결정 합니다. (1)<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57710/57710eq1.jpg">
</li>
		<li>평균 및 표준 편차 각 샘플의 항균 성 "헤일로" 4 결정 nw헤일로 값의 정규화 된 너비를 결정 합니다.</li>
		<li>소재 디스크와 최종 미생물 문화의 사진을 가져가 라. 참고: 금지 영역 (d오늘)의 지름과 디스크 직경 (d)도 측정할 수 있습니다 적합 한 이미지 프로세싱 소프트웨어를 사용 하 여 단계 5.1.4에서에서 찍은 사진에서.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
접촉 방법 결과 분석
	<ol>
<li>방정식 (2)에 따라 복구 가능한 미생물의 수를 결정 합니다. (2)<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57710/57710eq2.jpg"> 참고: 여기에서, N 은 cm2 테스트 견본; 당 당 복구 가능한 미생물의 수 C 는 격판덮개 조사; D 는 희석 요인; Cm2 샘플 디스크 직경 결정에서 테스트 대상의 표면 영역입니다 .</li>
		<li>방정식 (3)을 적용 하 여 세포 성장 저해를 반영 하기 위해 생존 (LV)의 손실을 결정 합니다. (3)<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/57710/57710eq3v3.jpg"> 참고: 여기, C는 가능한 미생물 (N)의 평균 수 CFU/mL•cm2, 제어 표본에서 발견 한 후 24 h; S는 CFU/mL•cm2, 24 h 후 테스트 표본에서 발견 가능한 미생물 (N)의 수입니다.</li>
		<li>평균 및 생존 능력의 손실 각 샘플의 4 결정 LV(%) 값의 표준 편차를 확인 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-haemolytic+beta-aminoacid+oligomers.">Non-haemolytic beta-aminoacid oligomers.</a> Nature. 404 (6778), 565 (2000).</li><li>Gao, Q., Li, P., Zhao, H., Chen, Y., Jiang, L., Ma, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methacrylate-ended+Polypeptides+and+Polypeptoids+for+Antimicrobial+and+Antifouling+Coatings.">Methacrylate-ended Polypeptides and Polypeptoids for Antimicrobial and Antifouling Coatings.</a> Polym Chem. 8 (41), 6386-6397 (2017).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., G&#243;mez-Ribelles, J. L., Monle&#243;n-Pradas, M., Vidaurre-Garayo, A., Suay-Ant&#243;n, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+macroporous+poly(methyl+methacrylate)+coated+with+plasma-polymerised+poly(2-hydroxyethyl+acrylate).">Characterisation of macroporous poly(methyl methacrylate) coated with plasma-polymerised poly(2-hydroxyethyl acrylate).</a> Eur Polym J. 43 (10), 4552-4564 (2007).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Monle&#243;n-Pradas, M., G&#243;mez-Ribelles, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma-induced+polymerisation+of+hydrophilic+coatings+onto+macroporous+hydrophobic+scaffolds.">Plasma-induced polymerisation of hydrophilic coatings onto macroporous hydrophobic scaffolds.</a> Polymer (Guildf). 48 (7), 2071-2078 (2007).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Monle&#243;n-Pradas, M., G&#243;mez-Ribelles, J. L., Rault, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+analysis+of+water+in+reinforced+plasma-polymerised+poly(2-hydroxyethyl+acrylate)+hydrogels.">Thermal analysis of water in reinforced plasma-polymerised poly(2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels.</a> Eur Polym J. 72, 523-534 (2015).</li><li>Monle&#243;n-Pradas, M., G&#243;mez-Ribelles, J. L., Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Gallego-Ferrer, G., SuayAnt&#243;n, J., Pissis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+water+and+polymer+chains+in+poly(hydroxyethyl+acrylate)+hydrogels.">Interaction between water and polymer chains in poly(hydroxyethyl acrylate) hydrogels.</a> Colloid Polym Sci. 279 (4), 323-330 (2001).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Monle&#243;n-Pradas, M., G&#243;mez-Ribelles, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+crosslinking+on+porous+poly(methyl+methacrylate)+produced+by+phase+separation.">Effect of crosslinking on porous poly(methyl methacrylate) produced by phase separation.</a> Colloid Polym Sci. 286 (2), 209-216 (2008).</li><li>Monle&#243;n-Pradas, M., G&#243;mez-Ribelles, J. L., Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Gallego Ferrer, G., Suay Ant&#243;n, J., Pissis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porous+poly+(2-hydroxyethyl+acrylate)+hydrogels.">Porous poly (2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels.</a> Polymer (Guildf). 42 (10), 4667-4674 (2001).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Monle&#243;n-Pradas, M., G&#243;mez-Ribelles, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macroporous+poly(methyl+methacrylate)+produced+by+phase+separation+during+polymerisation+in+solution.">Macroporous poly(methyl methacrylate) produced by phase separation during polymerisation in solution.</a> Colloid Polym Sci. 285 (7), 753-760 (2007).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Llorens-G&#225;mez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+mechanical+analysis+and+water+vapour+sorption+of+highly+porous+poly(methyl+methacrylate).">Dynamic mechanical analysis and water vapour sorption of highly porous poly(methyl methacrylate).</a> Polymer (Guildf). 125, 58-65 (2017).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Campillo-Fern&#225;ndez, A. J., G&#243;mez-Ribelles, J. L., Monle&#243;n-Pradas, M., Gallego-Ferrer, G., Pissis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porous+poly(2-hydroxyethyl+acrylate)+hydrogels+prepared+by+radical+polymerisation+with+methanol+as+diluent.">Porous poly(2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels prepared by radical polymerisation with methanol as diluent.</a> Polymer (Guildf). 45 (26), 8949-8955 (2004).</li><li>Rodr&#237;guez-Hern&#225;ndez, J. C., Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., G&#243;mez-Ribelles, J. L., Monle&#243;n-Pradas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+nanocomposite+scaffolds+with+ordered+cylindrical+orthogonal+pores.">Three-dimensional nanocomposite scaffolds with ordered cylindrical orthogonal pores.</a> J Biomed Mater Res - Part B: Appl Biomater. 84 (2), 541-549 (2008).</li><li>Br&#237;gido-Diego, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acrylic+scaffolds+with+interconnected+spherical+pores+and+controlled+hydrophilicity+for+tissue+engineering.">Acrylic scaffolds with interconnected spherical pores and controlled hydrophilicity for tissue engineering.</a> J Mater Sci Mater Med. 40 (18), 4881-4887 (2005).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Ruiz-Pividal, J. F., Llorens-G&#225;mez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+water+diffusion+and+compression+performance+of+crosslinked+alginate+with+a+minuscule+amount+of+graphene+oxide.">Enhancement of water diffusion and compression performance of crosslinked alginate with a minuscule amount of graphene oxide.</a> Sci Rep. 7, 11684 (2017).</li><li>Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;., Deb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+irregular+graphene+oxide+tubes+using+green+chemistry+and+their+potential+use+as+reinforcement+materials+for+biomedical+applications.">Synthesis of irregular graphene oxide tubes using green chemistry and their potential use as reinforcement materials for biomedical applications.</a> PLoS One. 12 (9), e0185235 (2017).</li><li>S&#225;nchez-Correa, F., Vidaurre-Agut, C., Serrano-Aroca, A., Campillo-Fern&#225;ndez, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(2-hydroxyethyl+acrylate)+hydrogels+reinforced+with+graphene+oxide:+Remarkable+improvement+of+water+diffusion+and+mechanical+properties.">Poly(2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels reinforced with graphene oxide: Remarkable improvement of water diffusion and mechanical properties.</a> J Appl Polym Sci. , (2018).</li><li>Serrano-Aroc, &. #. 1. 9. 3. ;., Iskandar, L., Deb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+synthetic+routes+to+alginate-graphene+oxide+composite+hydrogels+with+enhanced+physical+properties+for+bioengineering+applications.">Green synthetic routes to alginate-graphene oxide composite hydrogels with enhanced physical properties for bioengineering applications.</a> Eur Polym J. 103, 198-206 (2018).</li><li>Llorens-G&#225;mez, M., Serrano-Aroca, &. #. 1. 9. 3. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Cost+Advanced+Hydrogels+of+Calcium+Alginate/Carbon+Nanofibers+with+Enhanced+Water+Diffusion+and+Compression+Properties.">Low-Cost Advanced Hydrogels of Calcium Alginate/Carbon Nanofibers with Enhanced Water Diffusion and Compression Properties.</a> Polymers (Basel). 10 (4), 405 (2018).</li><li>Bauer, A. W., Kirby, W. M. M., Sherris, J. C., Turck, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+susceptibility+testing+by+a+standardized+single+disk+method.">Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method.</a> A J Clin Pathol. 45, 493-496 (1966).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ISO Specification 22196: measurement of antibacterial activity on plastics surfaces. , 584 (2007).</li><li>Taubes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bacteria+fight+back.">The bacteria fight back.</a> Science. 321 (5887), 356-361 (2008).</li><li>Boucher, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=10+x+'20+progress--development+of+new+drugs+active+against+Gram-negative+bacilli:+an+update+from+the+infectious+diseases+society+of+America.">10 x '20 progress--development of new drugs active against Gram-negative bacilli: an update from the infectious diseases society of America.</a> Clinical Infectious Diseases. 56 (12), 1685-1694 (2013).</li></ol>

저자는 공개 없다.

새로운 고급 재료의 항균 활동 2 보완 절차 2 기존 방법에 따라 구성 된이 따라 하기 쉬운 프로토콜에 의해 분석 될 수 있다: 한 디스크 확산 테스트38 및 항균 활성 측정 ISO 22196:2007 정상39에 따라 소재 표면.
이 연구 분야에서 많은 문학에서 보고 된 항균 테스트 되 높은 분석 결과 따라 다릅니다. 따라서, 그것은 매우 상세한 중요 하 고 일관 된 실험실에서 장소에 프로토콜. 이 기사는 그 방향으로 단계 이다. 또한, 그것은이 분야에서 경험이 부족 하 고 정확한 깊이, 단계별 절차에 따라 요구 하는 많은 연구자에 대 한 매우 유용한 수 있습니다.
이 프로토콜은 10-m m 직경의 디스크 모양으로 잘라 재료의 많은 유형에 사용할 수 있습니다. 취 성 재료 절단 과정을 쉽게 렌더링 하 1 시간을 위한 적당 한 용 매에서 불 수 있다. 따라서, alginates 같은 친수성 물질 압력가 증류수에 하이드레이션 수 있습니다. 에탄올, 케 톤, 등 dichloromethane, 다른 용 매는 그들을 절단 하기 전에 1 시간에 대 한 소수 성 자료를 사용할 수 있습니다. 그러나, poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) 같은 일부 물질 부 될 필요가 없습니다 하 고 그들은 직접 잘라 수 있습니다. 그 후, 샘플 소재 디스크 진공 오븐에서 건조 하 고 오염 위험을 피하기 위해 에탄올과 자외선에 1 시간에 대 한 각 표본 소독 매우 중요 하다.
이 프로토콜 권장 TSA TSB 문화 미디어와 광범위 한 미생물에 도달 3 미생물의 순수 문화를 사용 하 여: 그람 양성 박테리아 포도 상 구 균, 대장균, 그람 음성 세균 그리고 효 모 Candida albicans. 그러나, 대안 문화 미디어와 다른 외피 조건 필요로 다른 미생물도 사용 될 수이 프로토콜. 때때로, 단 1 미생물 새로운 소재의 항균 성 활동의 초기 아이디어를가지고 테스트 됩니다.
보여주는 권장된 3에 대 한 강한 항균 성 활동 다른 미생물의 종류 또한 메 티 실린 내성 포도 상 구 균 epidermidis (MRSE) 같은 항생제 내성 병원 균에 대 한 테스트 해야 하는 재료는 이 프로토콜 성공적으로 이용 되어 있다. 많은 우려를 원인이 되는 다른 중요 한 약물 내성 미생물은 그람 양성 methicillin-내성 황색 포도상구균 (MRSA)과 vancomycin 내성 Enterococci (VRE), 그람 음성 녹 농 균40,41.
Biofilm 억제와 다른 유형의 바이러스, 기생충 등 미생물에 대 한 재료의 항균 활성이이 프로토콜을 테스트할 수 없습니다. 그러나,이 프로토콜 제공 합니다 매우 유용한 출발점을의 새로운 항균 성 연구에 대 한 고급 소재.
항균 agar 디스크 확산 테스트에서 중요 한 단계는 샘플 디스크 일부 자료 접어 최대한 빨리 그들은 한 천 매체 연락 때문에 접시의 중앙에 배치 될 때 발생 합니다. 이 경우에, 신중 하 게 샘플을 펼쳐 핀셋의 멸 균 쌍을 사용 하는 것이 좋습니다. 다른 한편으로, 접촉 방법, 컨트롤을 세척 하는 것이 중요에 샘플 디스크 아주 잘 PBS에 pipetting 4 번 다음 활기찬 vortexing 쥡니다 아무 가능한 미생물을 위해 그들에 의해 남아 자료를 준수 표면입니다.
이 비디오 프로토콜 bioprocess 공학, 조직 공학, 제어 약물 전달, 포장 재료, 폐수 처리, 농업, 바이오와 함께 사용 하는 등 많은 공학 응용 프로그램에서 활용할 수 있는 매우 바람직한 항균 능력입니다.
이 프로토콜으로 얻은 결과 질적 (이미지) 및 정량 (항균 "헤일로" 및 생존 능력의 손실의 정규화 폭)의 재현성 (평균 ± 표준 편차)의 좋은 분석. 일방통행 ANOVA, 터키의 임시 게시물 분석, 그들은, 통계적으로, 크게 공부 하기 위하여 뒤에 의해 보급 및 접촉 방법 결과 분석으로 얻은이 평균값을 분석 해야 비교할 때 다른 재료, 다른 (p < 0.01).

임 플 란 트 실패는 종종 항균 예방 및 무 균 작업 조건에도 불구 하 고 발생 하는 미생물 감염의 결과 이다. 이 문제는 매우 높은 의료 비용을 일으키는 이며 환자1가운데 비참 한. 황색 포도상구균 같은 박테리아는 현재 카 및 다른 의료 임 플 란 트와 관련 된 병원내 감염에 매우 위험한 병원 체 것 여겨진다 고 의료 기기2의 주요 오염 물질은 중요 합니다. 따라서, 소설 항균 전략의 개발 매일 및 의료 사용에 대 한 긴급 하 게 필요 합니다.
항균 성 대리인 등 항생제3, 비밀이 암모늄 화합물4, 금속 이온/산화물5, 항균 성 펩 티 드 (암페어)6. 항생제는 점차적으로 때문에 세균 저항7, 항생제 남용8때문에 비효율적 되고있다. 비밀이 암모늄 화합물 미생물 저항9때문에 단기 사용을 위한 매우 효율적인만 있습니다. 금속 이온/산화물 매우 효과적인 항균 대리인으로 이용 되었습니다 오래 고 붕대, 물 필터, 페인트, 등10,,1112를 포함 하 여 많은 일반적인 상용 제품에 사용 됩니다. 그러나, 그것은 이러한 유형의 화합물13포유류 세포 어떤 종류에 독성 수 입증 되었습니다.
앰프는 우수한 항균 및 immunomodulatory 속성14,15, 표시 그리고 박테리아16그들에 대 한 저항을 개발 하기 위해 매우 어려운 찾을 것 같다. 그러나, 순수 앰프를 생산 하는 과정은 비싼; 따라서, 대규모 생산은 실용적 이다. 따라서, 앰프 생산에 문제가 되었습니다 카운터 전략 개발 (예:작은 분자 항균 peptoid 모방17, peptoids18, α 펩 티 드19 , β 펩 티 드20). 메타 크 릴 산-엔드 polypeptides 및 polypeptoids 항균 및 antifouling 코팅21합성 되었습니다.
순수에서 첨단된 소재 등 새로운 항균 제의 개발 또는 하이브리드 형태, 방지 하 고 multidrug 저항 감염을 치료 수는 점점 더 필요 합니다. 광범위 한 조직과 bioprocess 공학 등 다양 한 생명 공학 분야에 대 한 새로운 고급 재료 개발 되었습니다 향상 된 화학 및 물리적 특성을 가진 마지막 십 년간에서 여러 가지 방법을 통해: 플라즈마 중 합에 접목 소수 성 기질22,,2324, 가교 밀도25,26의 조정, 솔루션27,,2829 중 합 , 30, porogen 해산31,32, 나노 소재 그래 핀 산화물 (이동)33,,3435,36 등의 여과 탄소 nanofibers (CNFs)37
이러한 새로운 물질의 항균 능력의 연구 기 하 급수적으로 그들의 잠재적인 생명 공학 적용을 증가할 수 있었다 그리고, 그러므로, 되고있다 필수. 우리는 이러한 새로운 고급 재료의 항균 활동을 계량 하는 따라 하기 쉬운 프로토콜을 제시. 여기, 샘플 준비 후 두 가지 보완 방법 뒤에: 첫 번째는 agar 디스크 확산 테스트38 (확산 방법)에 따라 이며 두 번째는에 항균 성 활동을 측정 하기 위해 ISO 22196:2007 정상39 소재 표면은 (접촉 방법)입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Cylindrical punch&#160;</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >10 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Petri dishes</td>
			<td >soria genlab</td>
			<td >P101</td>
			<td>90 mm diameter, sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tryptic soy agar (TSA)</td>
			<td >Liofilchem</td>
			<td >610052</td>
			<td>Dehydrated medium 500 g (powder)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tryptic soy broth (TSB)</td>
			<td >Liofilchem</td>
			<td >610053</td>
			<td>Dehydrated medium 500 g (powder)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile cotton swab</td>
			<td >EUTOTUBO</td>
			<td >300200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Centrifuge tubes</td>
			<td >VIDRA FOC, SA</td>
			<td >429900</td>
			<td>50 mL, sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol</td>
			<td >VWR</td>
			<td >83813360</td>
			<td>Absolute ethanol</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile 48-wells plate</td>
			<td >COSTAR</td>
			<td >3548</td>
			<td>Flat bottom with lid, tissue culture treated, non-pyrogenic, polystyrene</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >A pair of tweezers</td>
			<td >BRAUN</td>
			<td >24612036</td>
			<td>Toothless</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile phosphate buffered saline (PBS).</td>
			<td >VWR</td>
			<td >E404-100TAPBS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vaccum oven with a connected vacuum pump</td>
			<td >JP Selecta, SA</td>
			<td >5900620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Laminar flow hood</td>
			<td >TELSTAR Technologies, SL</td>
			<td >TELSTAR AH-100</td>
			<td>12.0 W lamp of UV-C radiation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Class II Biological safety cabinet</td>
			<td >LABOGENE</td>
			<td >MARS 1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incubator</td>
			<td >ASTEC CO, LTD</td>
			<td >SCA-165DR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vortex mixer</td>
			<td >Biosan</td>
			<td >V-1 Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Spectrophotometer</td>
			<td >Macherey-Nagel, Germany</td>
			<td >Nanocolor UV/VIS II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bunsen burner</td>
			<td >JP Selecta, SA</td>
			<td >7001539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alcohol burner</td>
			<td >VIDRA FOC, SA</td>
			<td >1658/20</td>
			<td>In case sterilisation is necessary to be performed inside class II biological safety cabinet</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Orbital shaker</td>
			<td >sartorius stedim</td>
			<td >8864845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sonicator</td>
			<td >SELECTA</td>
			<td >3000617</td>
			<td>50/60 Hz</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Digital calliper</td>
			<td >ACHA</td>
			<td >17-260</td>
			<td>0-150 mm</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Serological pipette</td>
			<td >Fisherbrand</td>
			<td >13-678-11</td>
			<td>25 mL, sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Serological pipette</td>
			<td >VWR</td>
			<td >612-4950</td>
			<td>5 mL, sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Serological pipette</td>
			<td >VWR</td>
			<td >612-5541</td>
			<td>10 mL, sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette</td>
			<td >GILSON</td>
			<td >FA10005P</td>
			<td>Pipetman L P200L, plastic 20-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette</td>
			<td >GILSON</td>
			<td >F123602</td>
			<td>Pipetman P1000, 200-1000 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette&#160;</td>
			<td >GILSON</td>
			<td >FA10016</td>
			<td>Pipetman L P12X300L, 20-300 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >TIBP-200-960</td>
			<td>2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >TIBP-1K0-480</td>
			<td>100-1000 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pre-sterilized tube&#160;</td>
			<td >INSULAB</td>
			<td >301402</td>
			<td>10 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Photo camera</td>
			<td >Canon EOS 5D</td>
			<td ></td>
			<td>Any camera with high resolution can also be utilized</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Gram-positive bacteria Staphylococcus aureus</td>
			<td ></td>
			<td >&#160;strain V329</td>
			<td>Cucarella et al. J Bacteriol 183 (9),&#160; 2888&#8211;2896 (2001)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Gram-negative bacteria Escherichia coli</td>
			<td >Colecci&#243;n Espa&#241;ola de Cultivos Tipo CECT</td>
			<td >CECT 101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Yeast Candida albicans</td>
			<td >Colecci&#243;n Espa&#241;ola de Cultivos Tipo CECT</td>
			<td >CECT 1394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge tubes&#160;</td>
			<td >DASLAB</td>
			<td >175508</td>
			<td>1,5 mL</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Autoclave</td>
			<td >JP Selecta, SA</td>
			<td >4002136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Spectrophotometer-cuvettes</td>
			<td >UVAT Bio CB</td>
			<td >F-0902-02</td>
			<td>4,5 mL</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Drigalski spatula</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >SPRP-L05-1K0</td>
			<td>Sterile, disposable&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >glass balls (2 mm diameter)</td>
			<td >Hecht Karl</td>
			<td >1401/2</td>
			<td>Autoclavable, alternative device to the Drigalski spatula</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Autoclave bags</td>
			<td >DELTALAB</td>
			<td >200318</td>
			<td>To sterilize microbiological residues or contaminated material</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Electronic pipette filling device</td>
			<td >JetPip</td>
			<td >JET BIOFIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Laboratory bottle with ISO thread, graduated, borosilicate 3.3</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >SBG3-100-010</td>
			<td>100 mL, for autoclaving culture media</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Laboratory bottle with ISO thread, graduated, borosilicate 3.3</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >SBG3-250-010</td>
			<td>250 mL, for autoclaving culture media</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Laboratory bottle with ISO thread, graduated, borosilicate 3.3</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >SBG3-500-010</td>
			<td>500 mL, for autoclaving culture media</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Laboratory bottle with ISO thread, graduated, borosilicate 3.3</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >SBG3-1K0-010</td>
			<td>1000 mL, for autoclaving culture media</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Latex gloves</td>
			<td >DENIA</td>
			<td >2278000000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Indicator tape for sterilization</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >STAP-A55-001</td>
			<td>Self-adhesive tape with impregnated paper turning to colour when exposed to sterilization process.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Universal test tube rack</td>
			<td >LABBOX</td>
			<td >MTSP-001-001</td>
			<td>To hold centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microcentrifuge tube rack</td>
			<td >VWR</td>
			<td >211-0210</td>
			<td>To hold microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile loop</td>
			<td >ACEFE S.A.</td>
			<td >100140055</td>
			<td >10 &#181;L of capacity for microbial culture&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Material M1</td>
			<td >Universidad Cat&#243;lica de Valencia San Vicente M&#225;rtir (UCV)</td>
			<td ></td>
			<td >Material type 1&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Material M2</td>
			<td >Universidad Cat&#243;lica de Valencia San Vicente M&#225;rtir (UCV)</td>
			<td ></td>
			<td >Material type 2&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Material M3</td>
			<td >Universidad Cat&#243;lica de Valencia San Vicente M&#225;rtir (UCV)</td>
			<td ></td>
			<td >Material type3</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Material M4</td>
			<td >Universidad Cat&#243;lica de Valencia San Vicente M&#225;rtir (UCV)</td>
			<td ></td>
			<td >Material type 4&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Material C</td>
			<td >Universidad Cat&#243;lica de Valencia San Vicente M&#225;rtir (UCV)</td>
			<td ></td>
			<td >Control material</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

antimicrobial characterization of advanced materials for bioengineering applications

향상 된 특성을 가진 첨단된 신소재의 개발 다양 한 생명 공학 응용 프로그램에서에서 점점 더 중요 해지고 있다. 따라서, 많은 새로운 생체 모방 제어 약물 전달 및 조직 공학 등 생물 의학 응용 프로그램에 필요한 특정 환경에 설계 되는 합니다. 셀 이나 효소의 동원 정지에 대 한 향상 된 특성을 가진 재료의 개발 bioprocess 공학에서 현재 연구 주제 이기도합니다. 그러나, 이러한 응용 프로그램에 있는 물자의 가장 바람직한 속성 중 어떤 바람직하지 않은 감염을 피하기 위해 항균 능력입니다. 이 위해, 우리 제시 소재 표면 (연락처에 항균 성 활동을 측정 하기 위해 ISO 22196:2007 규범 (ii) (i) 한 디스크 확산 시험 (확산 방법)에 따라 재료의 항균 특성에 대 한 따라 하기 쉬운 프로토콜 방법)입니다. 이 프로토콜은 그람 양성 및 그람 음성 박테리아와 효 모 미생물의 광범위 한 커버를 사용 하 여 수행 되어야 합니다. 예를 들어, 황색 포도상구균, 대장균, 칸디 다 albicans에 대 한이 프로토콜을 따르고 다른 화학 성격으로 4 재료 테스트 합니다. 이 테스트의 결과 첫 번째 소재와 다른 3 재료에 대 한 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대해 항균 활동 증가 대 한 비 항균 활동을 전시 한다. 그러나, 4 재료의 아무도 Candida albicans의 성장을 억제 수 있습니다.

이 프로토콜은 고용 했다, 예를 들어, 3에 대 한 다른 화학 성격을 가진 4 물자의 항균 능력을 테스트 권장 미생물: 황색 포도상구균, 대장균, 칸디 다 albicans . 컨트롤 디스크 (C, 이미지 표시 되지 않음)에서 발생 한 디스크 확산 테스트 (확산 방법)의 결과 첫 번째 자료 (M1)에 대 한 비 항균 활동 전시 및 그람 양성 및 그람 음성에 대 한 항균 활동 증가 박테리아는 다른 3 재료 M2, M3 및 m 4는 ( 그림 2참조).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig2.jpg"> 그림 2: 항균 확산 방법 결과. 이 패널 외피의 24 시간 후 4 소재 (M1, M2, M3 및 m 4) 디스크 (두께 1 m m x 10 m m 직경) S. 균 및 대장균 에 대 한 항균 성 확산 메서드를 보여 줍니다. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
그림 3 항균 "헤일로" (nw헤일로) 자료에 대 한 다른 예제에서는 M1, M2, M3, m 4 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대 한 방정식 (1) 계산의 다른 표준화 된 폭을 보여준다. 그러나, 4 재료의 아무도 효 모 Candida albicans (이미지 표시 되지 않음)의 성장을 억제 수 있었다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig3v2.jpg"> 그림 3: 결과 항균 확산 "헤일로". 이 패널 외피의 24 h 후 각 소재 (M1, M2, M3 및 m 4) 디스크 (두께 1 m m x 10 m m 직경) S. 균 및 대장균 에 대 한 정규화 된 "헤일로" (nw헤일로)을 보여줍니다. 차이 통계적으로 유의 한 (p < 0.01). 그러나, 샘플 M1 항균 활동이 전시. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig3v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
접촉 방법의 결과 또한 첫 번째 자료 (M1)에 대 한 비 항균 활동 전시 컨트롤 디스크 (C)와 Grampositive와 다른 3 자료 (참조에 대 한 그람 음성 세균에 대 한 증가 항균 활동에서 발생 그림 4)입니다.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig4v3.jpg"> 그림 4: 항균 메서드 결과 문의. 이 패널은 S. 구 균 및 대장균 (10-4의 희석 요인)에 대 한 보육의 24 시간 후 4 소재 (M1, M2, M3 및 m 4) 표면 항균 활동 분석 결과의 ISO 22196:2007에 따라 각각 90 m m 접시를 보여줍니다. C 는 외피의 24 h 후 제어 디스크에서 복구 가능한 박테리아 이다. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig4v3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
이 프로토콜에 표시 된 대로 손실 가능성 (%)의 방정식 (2)와 (3)에 의해 결정 되었다 ( 그림 5참조).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig5v2.jpg"> 그림 5: 접촉 방법에 의해 생존의 손실. 이 패널 소재 표면에 M1, M2, M3, 및 S. 구 균 및 대장균 에 대 한 m 4에 대 한 가능성 (%)의 감소를 보여줍니다. 샘플 M1 항균 활동이 전시. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig5v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
그러나, 4 재료의 접촉 방법에 의해 효 모 칸디 다 albicans 의 성장을 중 (이미지 표시 되지 않음)을 억제 수 있었다. 따라서, 이러한 4 신소재 3 긍정적인 항균 결과 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대 한 그리고 따라서 매우 높은 항균 활동이 요구 많은 공학 응용 프로그램에 대 한 도움이 될 수 있습니다. 그러나, 4 재료의 아무도 효 모 성장을 억제 수 있었다.

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Antimicrobial Characterization of Advanced Materials for Bioengineering Applications

우리는 고급 재료의 항균 특성에 대 한 프로토콜을 제시. 여기, 소재 표면에 항균 성 활동 서로 보완 하는 두 가지 방법에 의해 측정 된다: 하나는 agar 디스크 확산 테스트 기반 이며 다른 표준 절차 ISO 22196:2007 규격에 따라.

생명 공학 응용 프로그램에 대 한 고급 재료의 항균 특성

The development of new advanced materials with enhanced properties is becoming more and more important in a wide range of bioengineering applications. ...

antimicrobial-characterization-advanced-materials-for-bioengineering

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Bioengineering

21.9K 조회수.  Universidad Católica de Valencia San Vicente Mártir. 우리는 고급 재료의 항균 특성에 대 한 프로토콜을 제시. 여기, 소재 표면에 항균 성 활동 서로 보완 하는 두 가지 방법에 의해 측정 된다: 하나는 agar 디스크 확산 테스트 기반 이며 다른 표준 절차 ISO 22196:2007 규격에 따라.

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Designing a Bio-responsive Robot from DNA Origami

Nucleic acids are astonishingly versatile. In addition to their natural role as storage medium for biological information1, they can be utilized in parallel computing2,3 , recognize and bind molecular or cellular targets4,5 , catalyze chemical reactions6,7 , and generate calculated responses in a biological system8,9. Importantly, nucleic acids can be programmed to self-assemble into 2D and 3D structures10-12, enabling the integration of all these remarkable features in a single robot linking the sensing of biological cues to a preset response in order to exert a desired effect.
Creating shapes from nucleic acids was first proposed by Seeman13, and several variations on this theme have since been realized using various techniques11,12,14,15 . However, the most significant is perhaps the one proposed by Rothemund, termed scaffolded DNA origami16. In this technique, the folding of a long (&gt;7,000 bases) single-stranded DNA 'scaffold' is directed to a desired shape by hundreds of short complementary strands termed 'staples'. Folding is carried out by temperature annealing ramp. This technique was successfully demonstrated in the creation of a diverse array of 2D shapes with remarkable precision and robustness. DNA origami was later extended to 3D as well17,18 .
 
The current paper will focus on the caDNAno 2.0 software19 developed by Douglas and colleagues. caDNAno is a robust, user-friendly CAD tool enabling the design of 2D and 3D DNA origami shapes with versatile features. The design process relies on a systematic and accurate abstraction scheme for DNA structures, making it relatively straightforward and efficient.
In this paper we demonstrate the design of a DNA origami nanorobot that has been recently described20. This robot is 'robotic' in the sense that it links sensing to actuation, in order to perform a task. We explain how various sensing schemes can be integrated into the structure, and how this can be relayed to a desired effect. Finally we use Cando21 to simulate the mechanical properties of the designed shape. The concept we discuss can be adapted to multiple tasks and settings.

DNA origami is a powerful method for fabricating precise nanoscale objects by programming the self-assembly of DNA molecules. Here, we describe how DNA origami can be utilized to design a robotic robot capable of sensing biological cues and responding by shape shifting, subsequently relayed to a desired effect.

DNA 종이 접기에서 바이오 반응 로봇을 설계

Nucleic acids are astonishingly versatile. In addition to their natural role as storage medium for biological information1, they can be utilized in ...

연구

생체공학

Designing Silk-silk Protein Alloy Materials for Biomedical Applications

Fibrous proteins display different sequences and structures that have been used for various applications in biomedical fields such as biosensors, nanomedicine, tissue regeneration, and drug delivery. Designing materials based on the molecular-scale interactions between these proteins will help generate new multifunctional protein alloy biomaterials with tunable properties. Such alloy material systems also provide advantages in comparison to traditional synthetic polymers due to the materials biodegradability, biocompatibility, and tenability in the body. This article used the protein blends of wild tussah silk (Antheraea pernyi) and domestic mulberry silk (Bombyx mori) as an example to provide useful protocols regarding these topics, including how to predict protein-protein interactions by computational methods, how to produce protein alloy solutions, how to verify alloy systems by thermal analysis, and how to fabricate variable alloy materials including optical materials with diffraction gratings, electric materials with circuits coatings, and pharmaceutical materials for drug release and delivery. These methods can provide important information for designing the next generation multifunctional biomaterials based on different protein alloys.

Blending is an efficient approach to generate biomaterials with a broad range of properties and combined features. By predicting the molecular interactions between different natural silk proteins, new silk-silk protein alloy platforms with tunable mechanical resiliency, electrical response, optical transparency, chemical processability, biodegradability, or thermal stability can be designed.

바이오 메디컬 응용 프로그램에 대한 실크 실크 단백질 합금 재료 설계

Fibrous proteins display different sequences and structures that have been used for various applications in biomedical fields such as biosensors, ...

Fabricating Superhydrophobic Polymeric Materials for Biomedical Applications

Superhydrophobic materials, with surfaces possessing permanent or metastable non-wetted states, are of interest for a number of biomedical and industrial applications. Here we describe how electrospinning or electrospraying a polymer mixture containing a biodegradable, biocompatible aliphatic polyester (e.g., polycaprolactone and poly(lactide-co-glycolide)), as the major component, doped with a hydrophobic copolymer composed of the polyester and a stearate-modified poly(glycerol carbonate) affords a superhydrophobic biomaterial. The fabrication techniques of electrospinning or electrospraying provide the enhanced surface roughness and porosity on and within the fibers or the particles, respectively. The use of a low surface energy copolymer dopant that blends with the polyester and can be stably electrospun or electrosprayed affords these superhydrophobic materials. Important parameters such as fiber size, copolymer dopant composition and/or concentration, and their effects on wettability are discussed. This combination of polymer chemistry and process engineering affords a versatile approach to develop application-specific materials using scalable techniques, which are likely generalizable to a wider class of polymers for a variety of applications.

Two- and three-dimensional superhydrophobic polymeric materials are prepared by electrospinning or electrospraying biodegradable polymers blended with a lower surface energy polymer of similar composition.

바이오 메디컬 응용 프로그램에 대한 초 소수성 고분자 재료를 제조

Superhydrophobic materials, with surfaces possessing permanent or metastable non-wetted states, are of interest for a number of biomedical and industrial ...

Fabrication of Mechanically Tunable and Bioactive Metal Scaffolds for Biomedical Applications

Biometal systems have been widely used for biomedical applications, in particular, as load-bearing materials. However, major challenges are high stiffness and low bioactivity of metals. In this study, we have developed a new method towards fabricating a new type of bioactive and mechanically reliable porous metal scaffolds-densified porous Ti scaffolds. The method consists of two fabrication processes, 1) the fabrication of porous Ti scaffolds by dynamic freeze casting, and 2) coating and densification of the porous scaffolds. The dynamic freeze casting method to fabricate porous Ti scaffolds allowed the densification of porous scaffolds by minimizing the chemical contamination and structural defects. The densification process is distinctive for three reasons. First, the densification process is simple, because it requires a control of only one parameter (degree of densification). Second, it is effective, as it achieves mechanical enhancement and sustainable release of biomolecules from porous scaffolds. Third, it has broad applications, as it is also applicable to the fabrication of functionally graded porous scaffolds by spatially varied strain during densification.

Bioactive and mechanically reliable metal scaffolds have been fabricated through a method which consists of two processes, dynamic freeze casting for the fabrication of porous Ti, and coating and densification of the Ti scaffolds. The densification process is simple, effective and applicable to the fabrication of functionally graded scaffolds.

Biometal systems have been widely used for biomedical applications, in particular, as load-bearing materials. However, major challenges are high stiffness ...

The Synthesis of RGD-functionalized Hydrogels as a Tool for Therapeutic Applications

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and functionalize polymer chains with compounds that are able to improve biocompatibility, mechanical properties, or cell viability allows the design of novel materials to meet new challenges in the biomedical field. With the polymer functionalization strategies, click chemistry is a powerful tool to improve cell-compatibility and drug delivery properties of polymeric devices. Similarly, the fundamental need of biomedicine to use sterile tools to avoid potential adverse-side effects, such as toxicity or contamination of the biological environment, gives rise to increasing interest in the microwave-assisted strategy.
The combination of click chemistry and the microwave-assisted method is suitable to produce biocompatible hydrogels with desired functionalities and improved performances in biomedical applications. This work aims to synthesize RGD-functionalized hydrogels. RGD (arginylglycylaspartic acid) is a tripeptide that can mimic cell adhesion proteins and bind to cell-surface receptors, creating a hospitable microenvironment for cells within the 3D polymeric network of the hydrogels. RGD functionalization occurs through Huisgen 1,3-dipolar cycloaddition. Some PAA carboxyl groups are modified with an alkyne moiety, whereas RGD is functionalized with azido acid as the terminal residue of the peptide sequence. Finally, both products are used in a copper catalyzed click reaction to permanently link the peptide to PAA. This modified polymer is used with carbomer, agarose and polyethylene glycol (PEG) to synthesize a hydrogel matrix. The 3D structure is formed due to an esterification reaction involving carboxyl groups from PAA and carbomer and hydroxyl groups from agarose and PEG through microwave-assisted polycondensation. The efficiency of the gelation mechanism ensures a high degree of RGD functionalization. In addition, the procedure to load therapeutic compounds or biological tools within this functionalized network is very simple and reproducible.

We present a protocol for the synthesis of RGD-functionalized hydrogels as devices for cell and drug delivery. The procedure involves copper catalyzed alkyne-azide cycloaddition (CuAAC) between alkyne-modified polyacrylic acid (PAA) and a RGD-azide derivative. The hydrogels are formed using microwave-assisted polycondensation and their physicochemical properties are investigated.

치료 응용 프로그램을위한 도구로 RGD-작용 히드로 겔의 합성

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and ...

Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In particular, light-mediated click reactions, such as photoinitiated thiol&#8722;ene and thiol&#8722;yne reactions, afford spatiotemporal control over material properties and allow the design of systems with a high degree of user-directed property control. Fabrication and modification of hydrogel-based biomaterials using the precision afforded by light and the versatility offered by these thiol&#8722;X photoclick chemistries are of growing interest, particularly for the culture of cells within well-defined, biomimetic microenvironments. Here, we describe methods for the photoencapsulation of cells and subsequent photopatterning of biochemical cues within hydrogel matrices using versatile and modular building blocks polymerized by a thiol&#8722;ene photoclick reaction. Specifically, an approach is presented for constructing hydrogels from allyloxycarbonyl (Alloc)-functionalized peptide crosslinks and pendant peptide moieties and thiol-functionalized poly(ethylene glycol) (PEG) that rapidly polymerize in the presence of lithium acylphosphinate photoinitiator and cytocompatible doses of long wavelength ultraviolet (UV) light. Facile techniques to visualize photopatterning and quantify the concentration of peptides added are described. Additionally, methods are established for encapsulating cells, specifically human mesenchymal stem cells, and determining their viability and activity. While the formation and initial patterning of thiol-alloc hydrogels are shown here, these techniques broadly may be applied to a number of other light and radical-initiated material systems (e.g., thiol-norbornene, thiol-acrylate) to generate patterned substrates.

We describe a sequential process for light-mediated formation and subsequent biochemical patterning of synthetic hydrogel matrices for three-dimensional cell culture applications. The construction and modification of hydrogels with cytocompatible photoclick chemistry is demonstrated. Additionally, facile techniques to quantify and observe patterns and determine cell viability within these hydrogels are presented.

세포 배양 응용 프로그램에 대한 히드로 겔의 빛 매개 형성 및 패터닝

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In ...

Extraction of Plant-based Capsules for Microencapsulation Applications

Microcapsules derived from plant-based spores or pollen provide a robust platform for a diverse range of microencapsulation applications. Sporopollenin exine capsules (SECs) are obtained when spores or pollen are processed so as to remove the internal sporoplasmic contents. The resulting hollow microcapsules exhibit a high degree of micromeritic uniformity and retain intricate microstructural features related to the particular plant species. Herein, we demonstrate a streamlined process for the production of SECs from Lycopodium clavatum spores and for the loading of hydrophilic compounds into these SECs. The current SEC isolation procedure has been recently optimized to significantly reduce the processing requirements which are conventionally used in SEC isolation, and to ensure the production of intact microcapsules. Natural L. clavatum spores are defatted with acetone, treated with phosphoric acid, and extensively washed to remove sporoplasmic contents. After acetone defatting, a single processing step using 85% phosphoric acid has been shown to remove all sporoplasmic contents. By limiting the acid processing time to 30 hr, it is possible to isolate clean SECs and avoid SEC fracturing, which has been shown to occur with prolonged processing time. Extensive washing with water, dilute acids, dilute bases, and solvents ensures that all sporoplasmic material and chemical residues are adequately removed. The vacuum loading technique is utilized to load a model protein (Bovine Serum Albumin) as a representative hydrophilic compound. Vacuum loading provides a simple technique to load various compounds without the need for harsh solvents or undesirable chemicals which are often required in other microencapsulation protocols. Based on these isolation and loading protocols, SECs provide a promising material for use in a diverse range of microencapsulation applications, such as, therapeutics, foods, cosmetics, and personal care products.

This protocol/manuscript describes a streamlined process for the production of sporopollenin exine capsules (SECs) from Lycopodium clavatum spores and for the loading of hydrophilic compounds into these SECs.

마이크로 캡슐화 애플리케이션을위한 추출 공장 기반 캡슐

Microcapsules derived from plant-based spores or pollen provide a robust platform for a diverse range of microencapsulation applications. Sporopollenin ...

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional Poly(&#949;-caprolactone) Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

This tutorial reflects on the fundamental principles and guidelines for electrospinning writing with polymer melts, an additive manufacturing technology with great potential for biomedical applications. The technique facilitates the direct deposition of biocompatible polymer fibers to fabricate well-ordered scaffolds in the sub-micron to micro scale range. The establishment of a stable, viscoelastic, polymer jet between a spinneret and a collector is achieved using an applied voltage and can be direct-written. A significant benefit of a typical porous scaffold is a high surface-to-volume ratio which provides increased effective adhesion sites for cell attachment and growth. Controlling the printing process by fine-tuning the system parameters enables high reproducibility in the quality of the printed scaffolds. It also provides a flexible manufacturing platform for users to tailor the morphological structures of the scaffolds to their specific requirements. For this purpose, we present a protocol to obtain different fiber diameters using melt electrospinning writing (MEW) with a guided amendment of the parameters, including flow rate, voltage and collection speed. Furthermore, we demonstrate how to optimize the jet, discuss often experienced technical challenges, explain troubleshooting techniques and showcase a wide range of printable scaffold architectures.

This protocol serves as a comprehensive guideline to fabricate scaffolds via electrospinning with polymer melts in a direct writing mode. We systematically outline the process and define the appropriate parameter settings for achieving targeted scaffold architectures.

조직 공학 응용 프로그램에 대 한 제어 형태학과 3 차원 Poly(ε-caprolactone) 장비의 전기 글 녹아

This tutorial reflects on the fundamental principles and guidelines for electrospinning writing with polymer melts, an additive manufacturing technology ...

Three-dimensional Printing of Thermoplastic Materials to Create Automated Syringe Pumps with Feedback Control for Microfluidic Applications

Microfluidics has become a critical tool in research across the biological, chemical, and physical sciences. One important component of microfluidic experimentation is a stable fluid handling system capable of accurately providing an inlet flow rate or inlet pressure. Here, we have developed a syringe pump system capable of controlling and regulating the inlet fluid pressure delivered to a microfluidic device. This system was designed using low-cost materials and additive manufacturing principles, leveraging three-dimensional (3D) printing of thermoplastic materials and off-the-shelf components whenever possible. This system is composed of three main components: a syringe pump, a pressure transducer, and a programmable microcontroller. Within this paper, we detail a set of protocols for fabricating, assembling, and programming this syringe pump system. Furthermore, we have included representative results that demonstrate high-fidelity, feedback control of inlet pressure using this system. We expect this protocol will allow researchers to fabricate low-cost syringe pump systems, lowering the entry barrier for the use of microfluidics in biomedical, chemical, and materials research.

Here we present a protocol to construct a pressure-controlled syringe pump to be used in microfluidic applications. This syringe pump is made from an&#160;additively manufactured body, off-the-shelf hardware, and open-source electronics. The resulting system is low-cost, straightforward to build, and delivers well-regulated fluid flow to enable rapid microfluidic research.

인쇄를 만드는 열가 소성 재료의 3 차원 미세 응용 프로그램에 대 한 피드백 제어와 주사기 펌프를 자동

Microfluidics has become a critical tool in research across the biological, chemical, and physical sciences. One important component of microfluidic ...

Magnetic-, Acoustic-, and Optical-Triple-Responsive Microbubbles for Magnetic Hyperthermia and Pothotothermal Combination Cancer Therapy

The precision delivery of anti-cancer agents which aim for targeted and deep-penetrated delivery as well as a controlled release at the tumor site has been challenged. Here, we fabricate iron oxide nanoparticle shelled microbubbles (NSMs) through self-assembly, synergizing magnetic, acoustic, and optical responsiveness in one nanotherapeutic platform. Iron oxide nanoparticles serve as both magnetic and photothermal agents. Once intravenously injected, NSMs can be magnetically guided to the tumor site. Ultrasound triggers the release of iron oxide nanoparticles, facilitating the penetration of nanoparticles deep into the tumor due to the cavitation effect of microbubbles. Thereafter, magnetic hyperthermia and photothermal therapy can be performed on the tumor for combinational cancer therapy, a solution for cancer resistance due to the tumor heterogeneity. In this protocol, the synthesis and characterization of NSMs including structural, chemical, magnetic and acoustic properties were performed. In addition, the anti-cancer efficacy by thermal therapy was investigated using in vitro cell cultures. The proposed delivery strategy and combination therapy holds great promise in cancer treatment to improve both delivery and anticancer efficacies.

Presented here is a protocol for the fabrication of iron oxide nanoparticle-shelled microbubbles (NSMs) through self-assembly, synergizing magnetic, acoustic, and optical responsiveness in one nanotherapeutic platform for magnetic hyperthermia and photothermal combination cancer therapy.

자기 고열증 및 포토열 조합 암 치료를 위한 자기, 음향 및 광학 삼중 반응 마이크로 버블

The precision delivery of anti-cancer agents which aim for targeted and deep-penetrated delivery as well as a controlled release at the tumor site has ...