이 작품은 열 대 AgriSciences의 학부의 내부 부여 기관에 의해 지원 되었다 (프로젝트 번호: 20175013)와 둘 다 생명 과학의 체코 대학에서 부여 CIGA 20182023.

1. 고기 준비
<ol><li>로컬 도살에서 쇠고기 (신선한 쇠고기 팔 뚝 femoris)의 짧은 허리를 얻을 하 고 실험실에 전송. 참고:이 좋습니다 주위 온도 (20-25 ° C)에서 쇠고기의 허리를 수송 하지 연금술 봉인된 봉투에 20 분 이상에 대 한.</li>
	<li>10 70% (v/v) 에탄올을 분사 하 여 근육 층 류 안전 캐비닛, 쇠고기 근육의 외부 표면 소독 세척 s 500 mL의 짜기 병을 사용 하 여. 근육 표면 1 c m2 당 에탄올의 0.025 g을 적용 합니다.</li>
	<li>Aseptically 근육 내부에 남아 있는 에탄올을 피하기 위해 칼으로 고기의 외부 표면을 제거 합니다. 근육의 표면 균일도 유지 하는 근육 내부 약 3 m m를 제거 합니다.</li>
	<li>패키지 봉인된 된 비닐 봉투에 근육 하 고 냉동 실에 그것을 전송.</li>
	<li>1 일-18 ° C에서 근육을 저장 합니다. 다음, 6 h 4 ° C에서 냉동된 근육 녹여. 참고: 녹고, 그것 것이 좋습니다 냉장고에 냉동 실에서 근육을 이동.</li>
	<li>층 류 안전 캐비닛, 각 근육 고기 커터 0.5 cm 두꺼운 조각으로 슬라이스. 다음, 칼으로 잘라 작은 5 × 2.5 c m로2 직사각형 샘플.</li>
	<li>비닐 봉지에 사각형 고기 샘플을 패키지 하 고 나중에 사용에 대 한-18 ° C에서 냉동 실에 보관.</li>
</ol>2. 표준화 된 Inoculum 및 층 류 안전 캐비닛에 접종 절차 준비
<ol><li>표준화 된 inoculum (1.5 × 108 CFU/mL)의 대장균 ATCC 25922 접종 고기 샘플을 준비 합니다.<ol>
<li>재고 inoculum의 준비를 위해 먼저 10 mL의 멸 균된 버퍼링 뮬러 힌 튼 국물 (BMHB)으로 pre-filled 15 mL 소독된 튜브에 동결 건조 된 세균성 문화 (공급 업체에 의해 제공) 분배. 37 ° c.에 24 h에 대 한이 정지를 육성<ol>
<li>다음과 같이 세균 재고 솔루션을 준비: 걸릴 약 0.1-0.2 mL 세균 현 탁 액 및 20 mL 유리병에 희석 폐쇄 고무 마 개와 함께 사전 멸 균된 BMHB의 15 mL 가득 알루미늄 캡. 37 ° c.에 24 h에 대 한이 정지를 육성</li>
			<li>냉장고 내부에 표준화 된 inoculum의 준비를 위한 4 ° C에서 저장 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>재고 솔루션 (2.1.1 단계 참조) 전자 대장균 의 약 0.1-0.2 mL 세균 현 탁 액 및 15 mL 플라스틱에 희석 소독 튜브 미리 10 mL의 멸 균된 버퍼링 뮬러 힌 튼 국물 (BMHB)으로 가득. 24 h에 대 한 37 ° C에서 튜브를 품 어.</li>
		<li>표준화 inoculum (1.5 × 108 CFU/mL)의 준비를 위해 미리 멸 균된 BMHB의 10 mL 가득 15 mL 소독된 튜브에이 서 스 펜이 션의 작은 금액을 추가 합니다.</li>
		<li>철저 하 게 소용돌이 혼합물 및 측정 광학 밀도 (OD) 600에 의해 농도계32nm.</li>
		<li>단계 2.1.3-2.1.4 맥 팔 랜드 값 0.5 깨끗 한 BMHB의 가치에 비해 증가 표현 OD까지를 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>접종 절차에 대 한 두 개의 다른 알루미늄 포 일 (20 cm x 30 cm), 컨트롤 샘플 및 접종된 고기 샘플에 대 한 두 번째에서에서 사각형 고기 샘플을 놓습니다.<ol>
<li>두 번째 알루미늄 호 일 동안 표면에 inoculum을 균등 하 게 배포 하 여 원시 사각형 고기 샘플 (이 1.2 × 108 CFU 고기 샘플 당에 해당) 선택한 긴장의 박테리아 정지의 800 µ L 접종.<ol>
<li>400 µ L 샘플의 1 개의 측에 플라스틱 하 고 부드럽게 표면에 살 균 셀 스프레더를 사용 하 여 확산. 샘플의 10 분 반복 반대편에 서 스 펜 션의 나머지 부분에 대 한 동일한 절차 동안 건조 하자.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 건조와 테오 응용 프로그램
<ol><li>건조 기를 층 류 안전 캐비닛에서 사각형 고기 샘플 포함 모두 알루미늄 포 일 전송: 각각의 알루미늄 호 일을 커버 하 고 다음 장소 건조 기 내부 샘플.</li>
	<li>표준 실험실 건조 기에 건조를 실시 합니다. 참고: 먼저, 55 ° c 오븐을 예 열 이 절차는 20 분 동안 지난 수 있습니다.<ol>
<li>건조 공기 상대 습도 값은 30-45%와 55 ℃에서 6 h에 대 한 제어 샘플을 건조. 참고: 건조 공기 상대 습도 값에 고기에서 액체의 증발 속도 따라 다릅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>적용, 테오의 볼륨을 계산 하 고 드라이어 볼륨 (mL/L 공기) 당 테오의 볼륨으로 에센셜 오일의 농도 표현. 예를 들어 53 L (건조 기의 볼륨)에 테오의 1.5 mL의 복용량 0.028 mL/L의 농도에서 발생합니다. 대장균에 대 한 테오의 마이크를 결정, 1.5 mL (0.028 mL/L 공기), 1 mL (0.019 mL/L 공기), 0.75 mL (0.014 mL/L 공기)의 복용량을 사용 합니다.</li>
	<li>건조 하 고, 전에 테오의 응용 프로그램 (주요 복합 79%로 티)와 증기 담가 테오와 장소의 1.5 mL 복용량 필터 종이 (12 cm x 20 cm) 팬 앞 건조 기에.</li>
	<li>컨트롤 샘플 (3.1, 3.2 단계)에 대해서 동일한 절차를 사용 하 여 처리 하는 테오 고기 샘플을 건조. 참고: 건조 과정 끝과 샘플 제거 후 80 ° C에서 3 h 동안 오븐에 전환 하 고 오븐에서 에센셜 오일 잔류물을 청소 하기 위하여 100% 공기 환기에 공기 밸브 표시를 설정 합니다.</li>
</ol>4. 미생물 분석
<ol><li>박테리아와 고기 접종 하기 전에 어떤 혼합물에 대 한 고기 샘플을 검사 합니다. 점액의 모양과 어떤 강하고 매운 냄새의 탐지는 고기 부패의 지표. 텍스처는 칙칙한 느낌이 든다면, 박테리아는 고기 표면에 증식 하기 시작 했습니다 수 있습니다.</li>
	<li>접종 효율성 평가, 대장균 ATCC 25922의 존재에 대 한 원시 접종된 샘플을 테스트 하 고 건조 절차 전에 비 주사 제어 샘플 들을 비교 합니다. 이 위해:<ol>
<li>각 고기 샘플 (2 제어 샘플 및 2 접종된 샘플)을 씻어. 7-7.3에서 pH 범위 (w/v)를 1시 10분의 비율로 버퍼링된 펩 물 (8.5 g의 NaCl, 펩의 1 g, 인산 염 버퍼 식 염 수의 5 정제와 물 1 L에 폴 80의 1 g)로 소독된 플라스 크에 각 고기 샘플을 일시 중단 합니다. 실 온에서 10 분 동안 140 rpm에서 통을 사용 하 여 흔들. 참고: 즉시 접종 절차 후 세척입니다.</li>
		<li>조정 6 × 6 드롭 프로시저가 접시 첸, Nace, 어윈33 판 수 한 천 (PCA)와 MacConkey 한 천 (MCA)에 의해 요약 된 박테리아의 수를 평가 합니다. 참고: 6 × 6 드롭 메서드를 사용 하 여 국물 마이크로 희석 방법 10 직렬 희석 집중 하 고 더 경제적인 종래의 방법33, 에 비해 더 적은 노동은 멀티 채널 피 펫과 조사 샘플의 준비 34.</li>
		<li>대장균의 평가 대 한 6 × 6 드롭 판 절차에 의해 10 직렬 샘플 희석을 육성. 참고: 특히 대 한 방울-재배 사용 6 5 µ L, 6 × 6 드롭 메서드를 6 선택 멀티 채널 피 펫과 조사 샘플의 희석. 적절 하 게 건조 배양 접시에 방울은 agar에 신속 하 게 흡수 하 고 매우 편리 하 고 관리34는이 방법으로 설치 합니다.</li>
		<li>24 h에 대 한 37 ° C에서 배양 접시를 품 어. 섹션 5에에서 설명 된 대로 재배 기간 후 대장균 의 배양 접시 (CFU g-1 의 말린된 고기)에 식민지의 수를 평가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>건조, 후 두 접종된 말린된 샘플 고 그들 두 말린된 비 주사 제어 샘플을 비교 가능한 대장균, 각각. 이러한 4 개의 s더의 대장균 의 존재 여부를 확인 하려면 다음과 같이 각 고기 샘플의 사전 농축 과정을 수행:<ol>
<li>버퍼링 된 펩 물 소독된 플라스 크에 고기 샘플 각 중단 (참조 단계 4.2.1) 140 rpm에서 통을 사용 하 여 실 온에서 10 분 동안 흔들어. 다음 사전 농축 6 h 동안 37 ° C에서 각 플라스 크를 품 어.</li>
		<li>평가 및 박테리아의 경작, 4.2.4 4.2.2-단계에서 설명한 대로 동일한 절차를 따릅니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 결과 검토
<ol><li>부 화 완료 후 인큐베이터에서 배양 접시를 제거 하 고 다음과 같은 결과 검토:<ol>
<li>식민지의 총 수를 평가 하려면 PCA (흰 반점) 및 일반 대장균 mesophilic 호 기성 박테리아의 존재에 대 한 번호판을 검사 MCA에 식민지 (어두운 분홍색 빨간색). 병원 체 결 석 인 경우 두 agars 성장이 제시.</li>
		<li>식민지를 계산 하 고 대장균 (CFU/g-1 의 말린된 고기) 존재의 양을 결정 합니다. 참고: 드롭 (그림 1) 당 30 이하의 식민지를 포함 하는 두 개의 연속 희석에 식민지 (N)의 수를 계산 합니다. 말린 고기 CFU/g-1 의 수 N 다음과35 로 결정 됩니다. <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57054/57054eq1.jpg"> 어디, C 는 계산 하는 모든 상품에 식민지의 합계, v 는 드롭 (여기, 0.05 mL) 당 사용 하는 샘플 희석의 볼륨, n1 은 첫 번째 희석에서 사용 하는 상품의 수, n2 방울의 수는 두 번째 희석에서 사용 하 고 d 는 첫 번째 카운트 캡처된 희석을 나타냅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>생물학적 데이터를 분석 하려면 CFU g-1 를 기록 하 고 치료36의 주요 효과 대 한 그들을 분산 분석 (ANOVA)을 주제로 식민지의 수를 변환 합니다.<ol>
<li>여러 의미 비교36 Tukey 정직한 상당한 차이가 테스트 (Tukey HSD)를 수행 하 고 치료의 중요 한 차이점을 확인.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Eklund, M. W., Peterson, M. E., Poysky, F. T., Paranjpye, R. N., Pelroy, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+bacterial+pathogens+during+processing+of+cold-smoked+and+dried+salmon+strips.">Control of bacterial pathogens during processing of cold-smoked and dried salmon strips.</a> J. Food Prot. 67 (2), 347-351 (2004).</li><li>Mahmoud, B. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservative+effect+of+combined+treatment+with+electrolyzed+NaCl+solutions+and+essential+oil+compounds+on+carp+fillets+during+convectional+air-drying.">Preservative effect of combined treatment with electrolyzed NaCl solutions and essential oil compounds on carp fillets during convectional air-drying.</a> Int. J. Food Microbiol. 106 (3), 331-337 (2006).</li><li>Rahman, M. S., Guizani, N., Al-Ruzeiki, M. H., Al Khalasi, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microflora+Changes+in+Tuna+Mince+During+Convection+Air+Drying.">Microflora Changes in Tuna Mince During Convection Air Drying.</a> Dry. Technol. 18 (10), 2369-2379 (2000).</li><li>Faith, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viability+of+Escherichia+coli+O157:+H7+in+ground+and+formed+beef+jerky+prepared+at+levels+of+5+and+20%+fat+and+dried+at+52,+57,+63,+or+68+C+in+a+home-style+dehydrator.">Viability of Escherichia coli O157: H7 in ground and formed beef jerky prepared at levels of 5 and 20% fat and dried at 52, 57, 63, or 68 C in a home-style dehydrator.</a> Int. J. Food Microbiol. 41 (3), 213-221 (1998).</li><li>Hierro, E., De La Hoz, L., Ord&#243;&#241;ez, J. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+outbreak+of+Escherichia+coli+O157:H7+infections+traced+to+jerky+made+from+deer+meat.">An outbreak of Escherichia coli O157:H7 infections traced to jerky made from deer meat.</a> JAMA. 277 (15), 1229-1231 (1997).</li><li>Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+viable+but+nonculturable+state+in+bacteria.">The viable but nonculturable state in bacteria.</a> J. Microbiol. 43, 93-100 (2005).</li><li>Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+findings+on+the+viable+but+nonculturable+state+in+pathogenic+bacteria.">Recent findings on the viable but nonculturable state in pathogenic bacteria.</a> FEMS Microbiol. Rev. 34 (4), 415-425 (2010).</li><li>Khamisse, E., Firmesse, O., Christieans, S., Chassaing, D., Carpentier, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+cleaning+and+disinfection+on+the+non-culturable+and+culturable+bacterial+loads+of+food-contact+surfaces+at+a+beef+processing+plant.">Impact of cleaning and disinfection on the non-culturable and culturable bacterial loads of food-contact surfaces at a beef processing plant.</a> Int. J. Food Microbiol. 158 (2), 163-168 (2012).</li><li>Li, L., Mendis, N., Trigui, H., Oliver, J. D., Faucher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+the+viable+but+non-culturable+state+in+human+bacterial+pathogens.">The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens.</a> Front. 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Preserv. , (2016).</li><li>Garc&#237;a-D&#237;ez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Impact+of+Essential+Oils+on+Consumer+Acceptance+of+Chouri&#231;o+de+vinho+-+A+Dry-Cured+Sausage+Made+from+Wine-Marinated+Meat+-+Assessed+by+the+Hedonic+Scale,+JAR+Intensity+Scale+and+Consumers'+&amp;#34;Will+to+Consume+and+Purchase.&amp;#34.">The Impact of Essential Oils on Consumer Acceptance of Chouri&#231;o de vinho - A Dry-Cured Sausage Made from Wine-Marinated Meat - Assessed by the Hedonic Scale, JAR Intensity Scale and Consumers' &amp;#34;Will to Consume and Purchase.&amp;#34.</a> J. Food Process. Preserv. 41 (4), (2017).</li><li>Govaris, A., Solomakos, N., Pexara, A., Chatzopoulou, P. 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A., Patel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+shelf-life+and+safety+of+perishable+foods+by+plant+essential+oils+and+smoke+antimicrobials.">Improvement in shelf-life and safety of perishable foods by plant essential oils and smoke antimicrobials.</a> Food Microbiol. 22 (4), 273-292 (2005).</li><li>Petrou, S., Tsiraki, M., Giatrakou, V., Savvaidis, I. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitosan+dipping+or+oregano+oil+treatments,+singly+or+combined+on+modified+atmosphere+packaged+chicken+breast+meat.">Chitosan dipping or oregano oil treatments, singly or combined on modified atmosphere packaged chicken breast meat.</a> Int. J. Food Microbiol. 156 (3), 264-271 (2012).</li><li>Ballester-costa, C., Sendra, E., Viuda-martos, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Antioxidant+and+Antibacterial+Properties+on+Meat+Homogenates+of+Essential+Oils+Obtained+from+Four+Thymus+Species+Achieved+from+Organic+Growth.">Assessment of Antioxidant and Antibacterial Properties on Meat Homogenates of Essential Oils Obtained from Four Thymus Species Achieved from Organic Growth.</a> Foods. 6 (8), 59 (2017).</li><li>Hern&#225;ndez, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+oregano+essential+oil+on+microbial+load+and+sensory+attributes+of+dried+meat.">The effect of oregano essential oil on microbial load and sensory attributes of dried meat.</a> J. Sci. Food Agric. 97 (1), 82-87 (2017).</li><li>Garc&#237;a-D&#237;ez, J., Alheiro, J., Falco, V., Fraqueza, M. J., Patarata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+characterization+and+antimicrobial+properties+of+herbs+and+spices+essential+oils+against+pathogens+and+spoilage+bacteria+associated+to+dry-cured+meat+products.">Chemical characterization and antimicrobial properties of herbs and spices essential oils against pathogens and spoilage bacteria associated to dry-cured meat products.</a> J. Essent. Oil Res. 29 (2), 117-125 (2017).</li><li>Cavanagh, H. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+Activity+of+the+Volatile+Phase+of+Essential+Oils:+A+Brief+Review.">Antifungal Activity of the Volatile Phase of Essential Oils: A Brief Review.</a> Nat. Prod. Commun. 2 (12), 1297-1302 (2007).</li><li>Tajkarimi, M. M., Ibrahim, S. A., Cliver, D. 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J. Food Microbiol. 94 (3), 223-253 (2004).</li><li>Ramanathan, L., Das, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+control+of+lipid+oxidation+in+ground+fish+by+some+polyphenolic+natural+products.">Studies on the control of lipid oxidation in ground fish by some polyphenolic natural products.</a> J. Agric. Food Chem. 40 (1), 17-21 (1992).</li><li>Yamazaki, K., Yamamoto, T., Kawai, Y., Inoue, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+antilisterial+activity+of+essential+oil+constituents+by+nisin+and+diglycerol+fatty+acid+ester.">Enhancement of antilisterial activity of essential oil constituents by nisin and diglycerol fatty acid ester.</a> Food Microbiol. 21 (3), 283-289 (2004).</li><li>Garc&#237;a-D&#237;ez, J., Alheiro, J., Falco, V., Fraqueza, M. J., Patarata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+activity+of+essential+oils+from+herbs+and+spices+used+on+meat+products+against+food+borne+pathogens.">Synergistic activity of essential oils from herbs and spices used on meat products against food borne pathogens.</a> Nat. Prod. Commun. 12 (2), 281-286 (2017).</li><li>Hussein Hamdy Roby, M., Atef Sarhan, M., Abdel-Hamed Selim, K., Ibrahim Khalel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+antioxidant+activity,+total+phenols+and+phenolic+compounds+in+thyme+(Thymus+vulgaris+L.),+sage+(Salvia+officinalis+L.),+and+marjoram+(Origanum+majorana+L.)+extracts.">Evaluation of antioxidant activity, total phenols and phenolic compounds in thyme (Thymus vulgaris L.), sage (Salvia officinalis L.), and marjoram (Origanum majorana L.) extracts.</a> Ind. Crops Prod. 43, 827-831 (2013).</li><li>Gouveia, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Antimicrobial+Effect+of+Essential+Oils+Against+Listeria+monocytogenes+in+Sous+vide+Cook-Chill+Beef+during+Storage.">The Antimicrobial Effect of Essential Oils Against Listeria monocytogenes in Sous vide Cook-Chill Beef during Storage.</a> J. Food Process. Preserv. 41 (4), (2017).</li><li>Chen, C., Nace, G., Irwin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+6+x+6+drop+plate+method+for+simultaneous+colony+counting+and+MPN+enumeration+of+Campylobacter+jejuni,+Listeria+monocytogenes,+and+Escherichia+coli.">A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli.</a> J. Microbiol. Methods. 55 (2), 475-479 (2003).</li><li>Herigstad, B., Hamilton, M., Heersink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+optimize+the+drop+plate+method+for+enumerating+bacteria.">How to optimize the drop plate method for enumerating bacteria.</a> J. Microbiol. Methods. 44 (2), 121-129 (2001).</li><li>. Practical food microbiology Available from: <a target="_blank" href="https://drive.google.com/file/d/0BzyVOLllJ0B1YmlEemZ5M1RZekU/view?ts=590d8019">https://drive.google.com/file/d/0BzyVOLllJ0B1YmlEemZ5M1RZekU/view?ts=590d8019</a> (2003)</li><li>Smith-Palmer, A., Stewart, J., Fyfe, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+plant+essential+oils+and+essences+against+five+important+food-borne+pathogens.">Antimicrobial properties of plant essential oils and essences against five important food-borne pathogens.</a> Lett. Appl. Microbiol. 26 (2), 118-122 (1998).</li><li>Burt, S. a., Reinders, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+selected+plant+essential+oils+against+Escherichia+coli+O157:H7.">Antibacterial activity of selected plant essential oils against Escherichia coli O157:H7.</a> Lett. Appl. Microbiol. 36 (3), 162-167 (2003).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이전 연구는 음식 관련 질병을 일으키는 미생물 건조10생존을 보이고 있다. 그것은 따라서 식품 안전을 보장 하기 위해서 건조 하기 전에 방부 제를 적용 하는 데 필요한입니다. 이 연구에서 우리는 테오를 사용 하 여에 집중 한다. 이유는 두 가지 이다: 먼저, 개선 식품 품질16; 대체 첨가물으로 천연 제품을 사용 하는 소비자에서 수요는 둘째, 이전 연구 OEO 고기 건조 과정22동안 사용한 후 긍정적인 결과 증명. 따라서, OEO 고기 건조 하는 동안 응용 프로그램에 의해 방법 미생물 부하 제어를 다른 에센셜 오일의 사용에 확장 되었다.
이전 연구에서는 식품 안전을 개선 하 고 말린된 고기 값을 증가 OEO 테스트 했습니다. 우리의 이전 결과 대장균 OEO 고기 건조, 대장균 가능한 카운트 6 h OEO22의 1.5 mL (0.028 mL/L 공기)와 55 ° C에서 건조 후 크게 감소 하기 때문에 사용 하 여 성공적으로 저해 했다 보여주었다. 현재 연구를 위해 우리는 테오와 메서드 구현. 그것은이 방법을 사용 하 여 그것은 검색, 열거, 말린된 고기 샘플에서 VBNC 대장균 감소 하는 것을 시연 했다. 그러나, 테오의 사용 때문에 맛, 냄새, 그리고 말린된 고기 제품의 질감에 영향을 미치는 organoleptic 특성으로 인해 제한에 있다. 이러한 이유 때문에 대장균 성장을, 특히 식중독 감염 시키는 병원 성 박테리아를 방지 하는 데 필요한 마이크를 설정 하는 중요 한 했다.
두 경우 모두, 대장균 1.5 mL 복용량 OEO 테오 치료에서 감소 되었다. 두 연구 결과로 OEO와 테오의 0.028 mL/L 공기의 농도가 각각, 표시 했다 대장균 에 대 한 마이크로 VBNC 대장균 의 상당한 감소 때문 (p < 0.05) 6 h 55 ° c.에 건조 후 표 1 에 결과 표시 샘플 테오의 1.5 mL로 치료에서 대장균 제거 되었습니다. 이와 관련, 테오의 3 mL (0.057 mL/L 공기)의 복용량을 테스트 하는 데 필요한 했다. 게다가, 이전 연구는 박테리아 OEO 3 mL의 복용량으로 치료 에센셜 오일 치료22후 검색 되지 않습니다 증명. 따라서, 테오의 더 낮은 복용량은 현재 프로토콜에서 사용 되었다. E. 콜라 이 제거 테오 복합 미생물 활동에 대 한 매우 효과적인 에센셜 오일은 아메리카, 포함 된 연결 됩니다. 특히, 그것은 한 주된 대장균37,38의 변종에 대 한 주로 인정된 화합물.
이 프로토콜은 주로 VBNC E. 콜라이 긴장 (이 필요 없기 때문에 건조를 마친 후 culturable 박테리아 없음)의 계산을 허용 하도록 6 h에 대 한 말린된 고기 샘플의 사전 농축을 사용 하 여 화면을 표준화 되어 있습니다. 이 프로토콜 잠재적으로 살 모 넬 라 enteritidis , 말린된 고기 제품, Listeria monocytogenes 등 다른 foodborne 병원 체를 검출 하기 위하여 적응 시킬 수 있다 하지만이 지역에 더 많은 연구가 필요 하다.
Foodborne 병원 체를 다루는 조사는 매우 동적 이며 포함 하는 다단계 프로세스를 특정 상황 및 지역 환경 조건에 따라 다를 수 있습니다. 이러한 조사는 그들은 다른 음식 보존 기술에 천연 첨가물의 사용을 촉진 하기 때문에 중요 하다. 우리가 알고 있는,이 연구는 먼저 고기 건조, 건조 챔버에 직접 증기 형태로 구체적으로 그들을 사용 하 여 동안 에센셜 오일의 응용 프로그램에 의해 새로운 방법을 공개 하다. 긍정적인 결과는이 메서드는 합성 첨가물을 현저 하 게 효과적인 선택이 고 그것은 크게 말린된 고기 미생물 성장을 감소 보여 줍니다. 미래 연구에 대 한 다른 에센셜 오일 및 다른 보존 방법 함께 응용 프로그램의 복용량 최적화 그 시너지 효과의 항균 효과 평가 하기는 것이 좋습니다.

건조 식품을 보존 하기 위해 전통적인 방법으로는 고 대부터 사용 되었습니다. 요즘, 식품 보존1,2,3에 대 한 효과적인 방법으로 건조에 관심이 있다. 다양 한 특수 처리 된 고기를 만들기 위해 사용 됩니다. 가장 잘 알려진 중 하나입니다 육 포입니다.
경화 및 낮은 물 활동에 건조를 기반으로 하는 육 포, 고기 보존에 대 한 가장 오래 된 방법 중 하나 및 그러므로 그것의 수명을4확장 하. 요즘, 보존된 치유 고기는 여전히 매우 인기 있는 육 포, 어디 식품 안전, 맛, 질감은 필수품입니다. 육 포 준비 고기, 쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 또는 게임5를 포함 하 여 거의 모든 종류에 사용할 수 있습니다 그리고 마른 스트립에 고기를도 마와 건조 필요 합니다. 일반적으로, 치료 솔루션 또는 흡연에 고기 marinating 사용 됩니다 건조 함께 주고 육 포의 특징적인 맛6.
진정으로 보존 식품을 건조의 광대 한 관심에도 불구 하 고 제대로 말린된 고기에서 대장균 , 식중독 발생의 위험이 중요 하 고 제어할 수 필요 합니다. 일부 연구 대장균 O157:H7, 부적절 한 열 처리 집 건조 하는 동안에와 특히 식중독 위장염 발발을 보고 있다. 비슷한 경우에도 상업적으로 육 포7,,89준비 생겼다. 레빈 외. 10 식중독 미생물 적당 한 건조 조건 (약 60 ° C) 상업 육 포 생산자에 의해 사용을 살아남을 수 있다고 제안 했다. E. 콜라이 O157:H7는 1990 년대의 한가운데에 음식 관련 질병의 발생 지상 말린 고기 제품6,11에 기인 했다. 흥미롭게도, 모든 이전 경우에서 주요 위험 비 culturable (VBNC)만 가능한 것으로 인식 하는 세균성 병원 체에 의해 발생 합니다. 온도 변화 또는 기아 등 다양 한 스트레스에서 대장균 세포 VBNC 상태12,13로 알려진 특정 상태를 입력할 수 있습니다. VBNC 셀 다음 적당 한 조건에 노출에 의해 culturable 셀에 다시 회복 될 수 있습니다 그리고 식중독 오염14,15인해 인간의 건강을 위협 하는 존재. 즉, 고기 제품을 건조 후 즉시 사용 하는 경우 안전 하다. 그러나, 증가 습도 등 부적 절 한 스토리지의 경우 병원 균 및 미생물 성장의 재 활성화의 높은 위험이 있다.
건조와 마리 네 이드 방법 외 첨가물 대신 천연 제품을 사용 하 여 식품 품질16,17개선에 소비자 로부터 높은 수요가 있다. 고전적인 합성 방부 제18,19,,2021대신 고기에 대 한 자연 식품 첨가제의 응용 프로그램에 특별 한 관심이 되었습니다. 비록 고기를 건조 할 때 에센셜 오일의 사용에 충분 한 실험적 증거의 부족이 있다,이 분야의 초기 연구는 이미 긍정적인 결과22,23보여 줍니다.
중세 시대부터 사람들이 그들의 항균, 살 충 용, 그리고 날짜인 chracteristics24,,2526에 대 한 에센셜 오일 화합물 (EOCs) 인식 했다. 오늘, EOCs 천연 생리 활성 화합물의 가장 중요 한 그룹 중 하나의 일부입니다. 다른 EOCs 중 티는 가장 잘 알려진 중 하나입니다. 그것은 테오23의 85% 이상 구성 됩니다. 이 페 놀은 음식에 추가 될 때 미생물 및 화학 저하를 방지 합니다. 또한 항균 속성 다른 천연 방부 제2,,2728,29,30와 함께에서 향상 될 수 있습니다. 요즘, 백 리 향 (Thymus vulgaris), 꿀풀과 가족에 속하는 허브 매우 효과적 고기 방부 제31뿐만 아니라 맛 내기 요원으로 인정을 받고 있다. 가르시아-Díez 외에의해 연구. 육류 제품에 30 테오 다른 에센셜 오일에 비해 foodborne 병원 체에 대 한 광범위 한 금지 패턴 표시 발견. 따라서, 말린된 고기 값을 증가 하 고 건조 과정에서 에센셜 오일을 적용 하 여 음식 관련 질병의 위험을 줄일 수 있는 기회가입니다.
이 프로토콜에서 우리 고기 건조 동안 테오 적용의 새로운 방법을 제시, 챔버는 건조에 직접 증기 형태로 구체적으로 그것을 사용 하 여. 평가, 우리는 원시 사람에 비해 치료 샘플에서 병원 성 박테리아의 부재를 확인 하려면 마이크를 사용 합니다. 예비 결과이 방법은 합성 방부 제에 대 한 매우 효과적인 대안 그리고 그것은 크게 말린된 고기 미생물 부하 감소를 보여준다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Meat cutter</td>
			<td>Kalorik</td>
			<td>KP 3530</td>
			<td>from Miami Gardens, FL, USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar safety cabinet</td>
			<td>Faster s.r.l</td>
			<td></td>
			<td>from Italy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Squeeze bottle of 500 mL</td>
			<td>Merci</td>
			<td>632 524 325 025</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard laboratory drier UFE 400</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>DE 66812464</td>
			<td>from Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>BT 120</td>
			<td>N/A</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator and Freezer</td>
			<td>Bosch</td>
			<td>KGN34VW20G</td>
			<td>from DE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Densitometer</td>
			<td>Biosan</td>
			<td>220 000 050 122</td>
			<td>Latvia; supplier Merci, CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli ATCC 25922</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>CL7050</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Chromservis</td>
			<td>22008013</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilized plastic tubes 15 mL</td>
			<td>Gama</td>
			<td>331 000 020 115</td>
			<td>from CZ, supplier Merci</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL injection vial</td>
			<td>Healthy vial</td>
			<td>hvft169</td>
			<td>from China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mm sterile butyl rubber stopper</td>
			<td>Merci</td>
			<td>22008013</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mm aluminum cap</td>
			<td>Healthy vial</td>
			<td>N/A</td>
			<td>from China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyme essential oil</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W306509</td>
			<td>from St Louis, MO, USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mueller Hinton Broth</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>CM0337</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Penta</td>
			<td>16610-31000</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0034</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate 80 (Tween 80)</td>
			<td>Roth</td>
			<td>T 13502</td>
			<td>from DE, supplier P-lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker SHO-1D</td>
			<td>Verkon</td>
			<td>DH.WSR04020</td>
			<td>from CZ,&#160; 10 - 300 rpm. 350 x 350 mm with a platform for flasks</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Bioferm</td>
			<td>N/A</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MacConkey Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>CM007</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Count Agar</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>CM0325</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Merci</td>
			<td>480 622 080 040</td>
			<td>from CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks 250 mL</td>
			<td>Simax</td>
			<td>610 002 122 636</td>
			<td>from CZ; supplier Merci CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel pipette</td>
			<td>Socorex</td>
			<td>S852820</td>
			<td>from Switzerland; supplier P lab, CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtiter plate</td>
			<td>Gamma</td>
			<td>V400916</td>
			<td>CZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlitre pipette 100-1000 &#956;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>333 120 000 062</td>
			<td>from Germany; supplier Merci, CZ</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the effect of the application of thyme essential oil on microbial load during meat drying

고기는 보존과 안전은 중요 한 육 포, 음식 식사의 준비에 사용 되는 고 단백 식사입니다. 식품 안전 보장을 하 고기 및 육류 제품의 수명 연장, 합성 또는 천연 방부 제를 사용 하 여 컨트롤에 적용 된 고 식중독 박테리아를 제거. 고기에 대 한 자연 식품 첨가제의 응용 프로그램에 관심이 점점 증가 했다. 미생물, 대장균, 등 고기 및 육류 제품, foodborne 병을 일으키는 오염. 따라서, 그것은 고기 보존 프로세스를 개선 하는 데 필요한입니다. 그러나, 고기는 건조 되 고 때 에센셜 오일의 사용은 하지 깊이 연구 되었습니다. 이와 관련, 말린된 고기 값을 증가 하 고 건조 과정에서 에센셜 오일을 적용 하 여 음식 관련 질병의 위험을 줄일 수 있는 기회가입니다. 이 프로토콜에서 우리 고기 건조, 건조 챔버에 직접 증기 형태로 특히 동안 백 리 향 에센셜 오일을 (테오) 적용의 새로운 방법을 제시. 평가, 우리는 원시 샘플에 비해 치료 샘플에서 해로운 박테리아의 수를 검색 하기 위해 최소 억제 농도 (MIC)를 사용 합니다. 예비 결과이 방법은 합성 방부 제를 가능한 대체 옵션 그리고 그것은 크게 말린된 고기 미생물 부하 감소를 보여준다.

우리 먼저 이전 개발 했다이 방법은 식품 안전을 강화 하 고 말린된 고기 값을 증가에 오 레가 노 에센셜 오일 (OEO)를 사용 하 여. 일반적으로, 이전 실험 E. 콜라이 생존 전략으로 서 건조 하는 동안 VBNC 상태로는 보였다. 이 끝나면 건조22culturable 박테리아 없음 이었다고 하는 사실에 의해 증명 됩니다. 따라서, 6 h에 대 한 사전 농축 과정은 긴장의 계산을 허용 하는 데 필요한. 짧은 기간에 성장 하 고 있는 셀의 숫자 아직도 매우 낮은 했다. 따라서, 결과 사전 농축 과정 후 제시 하 고 접종 효율의 컨트롤을 표시 하는 예제 주사 원시 제외 ( 표 1참조). 전반적으로, 우리의 이전 연구22 부터 3 mL (0.057 mL/L 공기)의 테오 복용량을 테스트 하는 대장균 OEO 치료 후 찾지 못했습니다 하 고 그것으로 너무 강한 맛에 대 한 소비자에 의해 평가 되었다이 필요 했다. 따라서, 테오의 낮은 농도 대장균에 대 한 마이크를 정의 하기 위해 테스트 되었습니다.
표 1 쇠고기 샘플 6 h 55 ° C에서 건조와 PCA와 MCA에 대 한 사전 농축 과정에 복종에서 대장균 의 동작을 제공 합니다. PCA 모나 스 종 및 대장균같은 호 기성 박테리아 mesophilic의 증가 보여줍니다. MCA는 대장균의 존재를 식별합니다. 접종된 원시 샘플 접종 (접종 효율성에 대 한 제어)에 도달한 후 평균 박테리아의 5.31 로그 CFU g-1 의 인구 PCA와 MCA, 프로시저의 시작 부분에서 고기 샘플에 아무 오염 했다 의미. 건조, 중요 한 차이 후 (p <0.05) 치료 비 샘플 (NoEO) 및 0.75 mL, 1 mL, 및 1.5 mL 테오 취급 샘플 두 agars 사이 각각 관찰 했다. 이 결과 테오 치료, 에센셜 오일 복용량을 증가 하는 동안 대장균 수를 감소의 성공적인 성과를 밝혔다. 뿐만 아니라, 그 후에 사전 농축 샘플 선물 대장균 및 비 오염 다른 박테리아와 제안 모두 agars에 카운트는 매우 비슷합니다. 크게, 대장균 1.5 mL 복용량 테오 치료에서 탈락 했다. 결과적으로, 공기의 0.028 mL/L의 테오 농도 VBNC 대장균 에서 상당한 감소 때문 대장균 에 대 한 적절 한 마이크로 계시 되었다 (p < 0.05) 6 h 55 ° c.에 건조 후 테오의 복용량 사이 여러 의미 비교를 수행할 때 통계 차이가 관찰 했다 유형과 샘플 PCA와 MCA (참조 표 1; Tukey HSD, p < 0.05).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57054/57054fig1.jpg"> 그림 1: 드롭 당 30 이하의 식민지를 포함 하는 두 개의 연속 희석에 식민지 (N)의 수를 계산의 데모. 이 예제에서는 결과 후 PCA Petri의 인큐베이션 24 h에 대 한 37 ° C에서 요리. 활용 하 여 재배에 대 한 6 × 6 드롭 방법, 6 5 µ L-드랍 스는, 멀티 채널 피 펫과 조사 샘플의 6 선택 된 희석에서 설치 했다. 이 경우 PCA, 적절 하 게 건조 배양 접시에 성장된 식민지 (흰 반점) 두 개의 연속 희석 (10-4 , 10-5) 드롭 당 30 이하의 식민지를 포함 하는에서 열거 됩니다. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57054/57054fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="4">샘플 유형</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="2">처리 샘플</td>
			<td colspan="2">치료 샘플</td>
		</tr>
<tr>
<td>테오의 복용량</td>
			<td>PE 6H_PCA</td>
			<td>PE 6H_MCA</td>
			<td>Raw_PCA</td>
			<td>Raw_MCA</td>
		</tr>
<tr>
<td>NoEO</td>
			<td>3.929 (0.44)d
</td>
			<td>3.833 (0.40)d
</td>
			<td>5.474 (0.12)는
</td>
			<td>5.516 (0.05)를
</td>
		</tr>
<tr>
<td>0.75 mL</td>
			<td>2.493 (0.11)c
</td>
			<td>2.516 (0.22)c
</td>
			<td>5.370 (0.03)는
</td>
			<td>5.452 (0.24)는
</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 mL</td>
			<td>1.574 (1.05)b
</td>
			<td>1.579 (1.06)b
</td>
			<td>5.129 (0.35)는
</td>
			<td>5.123 (0.40)는
</td>
		</tr>
<tr>
<td>1.5 mL</td>
			<td>ND는는
</td>
			<td>ND는는
</td>
			<td>5.298 (0.09)는
</td>
			<td>5.166 (0.33)는
</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 기존 건조 기에 6 h 55 ° C에서 건조 쇠고기 샘플에서 대장균 ATCC 25922 (로그 CFU g-1)의 행동의 의미 (표준 편차) 두 접시 6 h 및 접종 효율 (RAW)의 제어에 대 한 사전 농축 (PE)를 받게 수 한 천 (PCA)와 MacConkey 한 천 (MCA). 다른 문자 ("a", "b", "c',"d") 같은 열에 카테고리의 통계 그룹을 대표 하 고 상당한 차이 나타내는 (p < 0.05). 테오, 백 리 향 에센셜 오일;의 복용량의 복용량 NoEO, 아무 에센셜 오일; ND, 인식 되지 않음 P 값 보고 여러 의미 비교 테오의 복용량 사이에서 및 PCA와 MCA에 대 한 샘플 형식 (Tukey HSD, p < 0.05 통계 중요성을 나타냅니다).

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The Effect of the Application of Thyme Essential Oil on Microbial Load During Meat Drying

고기 건조 하는 동안 미생물 부하에 백 리 향 에센셜 오일의 응용 프로그램의 효과

육류 제품을 오염 하는 대장균 등 미생물 발생 foodborne 병. 고기 건조 과정에서 에센셜 오일의 사용 깊이 공부 하지 했다. 여기, 우리는 고기에 말린 고기에서 미생물 부하를 줄이기 위해 건조 하는 동안 하는 백 리 향 에센셜 오일 적용의 새로운 방법을 제시.

Meat is a high protein meal that is used in the preparation of jerky, a popular food snack, where preservation and safety are important. To assure food ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

9.2K 조회수.  Czech University of Life Sciences Prague. 육류 제품을 오염 하는 대장균 등 미생물 발생 foodborne 병. 고기 건조 과정에서 에센셜 오일의 사용 깊이 공부 하지 했다. 여기, 우리는 고기에 말린 고기에서 미생물 부하를 줄이기 위해 건조 하는 동안 하는 백 리 향 에센셜 오일 적용의 새로운 방법을 제시.

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Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

Much of the nutrient cycling and carbon processing in natural environments occurs through the activity of extracellular enzymes released by microorganisms. Thus, measurement of the activity of these extracellular enzymes can give insights into the rates of ecosystem level processes, such as organic matter decomposition or nitrogen and phosphorus mineralization. Assays of extracellular enzyme activity in environmental samples typically involve exposing the samples to artificial colorimetric or fluorometric substrates and tracking the rate of substrate hydrolysis. Here we describe microplate based methods for these procedures that allow the analysis of large numbers of samples within a short time frame. Samples are allowed to react with artificial substrates within 96-well microplates or deep well microplate blocks, and enzyme activity is subsequently determined by absorption or fluorescence of the resulting end product using a typical microplate reader or fluorometer. Such high throughput procedures not only facilitate comparisons between spatially separate sites or ecosystems, but also substantially reduce the cost of such assays by reducing overall reagent volumes needed per sample.

Microplate based procedures are described for the colorimetric or fluorometric analysis of extracellular enzyme activity. These procedures allow for the rapid assay of such activity in large numbers of environmental samples within a manageable time frame.

높은 처리량 마이크로 분석 실험을 사용하여 워터스, 토양 및 퇴적물에있는 미생물 세포 외 효소 활성의 결정

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

연구

환경과학

Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high quality paper. Black liquor is a pulping waste generated by the kraft process that has potential for downstream bioconversion. However, the recalcitrant nature of the lignocellulose resources, its chemical derivatives that constitute the majority of available organic carbon within black liquor, and its basic pH present challenges to microbial biodegradation of this waste material. Methods for the collection and modification of black liquor for microbial growth are aimed at utilization of this pulp waste to convert the lignin, organic acids, and polysaccharide degradation byproducts into valuable chemicals. The lignocellulose extraction techniques presented provide a reproducible method for preparation of lignocellulose growth substrates for understanding metabolic capacities of cultured microorganisms. Use of gas chromatography-mass spectrometry enables the identification and quantification of the fermentation products resulting from the growth of microorganisms on pulping waste. These methods when used together can facilitate the determination of the metabolic activity of microorganisms with potential to produce fermentation products that would provide greater value to the pulping system and reduce effluent waste, thereby increasing potential paper milling profits and offering additional uses for black liquor.

Industrial wastes can be collected and modified to analyze microbial growth. Lignocellulose extraction techniques provide components to analyze specific biodegradation ability. Gas chromatography-mass spectrometry identifies fermentation products of microorganisms grown on pulping waste. These methods determine the metabolic capacity of microorganisms to degrade pulping waste.

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with more than 150 of economic value. It is a major pest of greenhouse crops, especially in Solanaceae and Cucurbitaceae (e.g., tomatoes, eggplants, peppers, cucumbers, zucchini) and greenhouse ornamentals (e.g., roses, chrysanthemum, carnations), annual field crops (such as maize, cotton, soybean, and sugar beet), and in perennial cultures (alfalfa, strawberries, grapes, citruses, and plums)1,2. In addition to the extreme polyphagy that makes it an important agricultural pest, T. urticae has a tendency to develop resistance to a wide array of insecticides and acaricides that are used for its control3-7.
T. urticae is an excellent experimental organism, as it has a rapid life cycle (7 days at 27 &#176;C) and can be easily maintained at high density in the laboratory. Methods to assay gene expression (including in situ hybridization and antibody staining) and to inactivate expression of spider mite endogenous genes using RNA interference have been developed8-10. Recently, the whole genome sequence of T. urticae has been reported, creating an opportunity to develop this pest herbivore as a model organism with equivalent genomic resources that already exist in some of its host plants (Arabidopsis thaliana and the&#160;tomato Solanum lycopersicum)11. Together, these&#160;model organisms could provide insights into molecular bases of plant-pest interactions.
Here, an efficient method for quick and easy collection of a large number of adult female mites, their application on an experimental plant host, and the assessment of the plant damage due to spider mite feeding are described. The presented protocol enables fast and efficient collection of hundreds of individuals at any developmental stage (eggs, larvae, nymphs, adult males, and females) that can be used for subsequent experimental application.

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Protocols for efficient preparation of homogenous samples of spider mites, infestation of experimental plants, and assessment of plant damage, as required for studies of plant-pest interaction were developed.

두 발견 거미 진드기의 적용<em&gt; 점박이 응애</em&gt; 식물 해충의 상호 작용 연구

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of electrical transmission between distant cells in an organism requires in vivo, artifact-free recordings of cells embedded within their native environment. The transmission of electrical signals from wounded to unwounded areas in a plant has since long piqued the interest of botanists. The phloem, the living part of the plant vasculature that is spread throughout the plant, has been postulated as a major tissue in electrical transmission in plants. The lack of suitable electrophysiological methods poses many challenges for the study of the electrical properties of the phloem cells in vivo. Here we present a novel approach for intracellular electrophysiology of sieve elements (SEs) that uses living aphids, or other phloem-feeding hemipteran insects, integrated in the electrical penetration graph (EPG) circuit. The versatility, robustness, and accuracy of this method made it possible to record and study in detail the wound-induced electrical signals in SEs of central veins of the model plant Arabidopsis thaliana1. Here we show that EPG-electrodes can be easily implemented for intracellular electrophysiological recordings of SEs in marginal veins, as well as to study the capacity of SEs to respond with electrical signals to several external stimuli. The EPG approach applied to intracellular electrophysiology of SEs can be implemented to a wide variety of plant species, in a large number of plant/insect combinations, and for many research aims.

A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrical Penetration Graph (EPG) is a well-established technique for studying the feeding behavior of stylet-bearing insects. Here we show a new application of EPG as a non-invasive tool for the acquisition of intracellular electrophysiology recordings of sieve elements (SEs), the cells that form the phloem vasculature in plants.

체관부 체 요소에 전기 신호를 획득 및 측정을위한 전기 침투 그래프 (EPG)의 새로운 응용 프로그램

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

Measurement of H2S in Crude Oil and Crude Oil Headspace Using Multidimensional Gas Chromatography, Deans Switching and Sulfur-selective Detection

A method for the analysis of dissolved hydrogen sulfide in crude oil samples is demonstrated using gas chromatography. In order to effectively eliminate interferences, a two dimensional column configuration is used, with a Deans switch employed to transfer hydrogen sulfide from the first to the second column (heart-cutting). Liquid crude samples are first separated on a dimethylpolysiloxane column, and light gases are heart-cut and further separated on a bonded porous layer open tubular (PLOT) column that is able to separate hydrogen sulfide from other light sulfur species. Hydrogen sulfide is then detected with a sulfur chemiluminescence detector, adding an additional layer of selectivity. Following separation and detection of hydrogen sulfide, the system is backflushed to remove the high-boiling hydrocarbons present in the crude samples and to preserve chromatographic integrity. Dissolved hydrogen sulfide has been quantified in liquid samples from 1.1 to 500 ppm, demonstrating wide applicability to a range of samples. The method has also been successfully applied for the analysis of gas samples from crude oil headspace and process gas bags, with measurement from 0.7 to 9,700 ppm hydrogen sulfide.

Measurement of H2S in Crude Oil and Crude Oil Headspace Using Multidimensional Gas Chromatography, Deans Switching and Sulfur-selective Detection

A multidimensional gas chromatography method for the analysis of dissolved hydrogen sulfide in liquid crude oil samples is presented. A Deans switch is used to heart-cut light sulfur gases for separation on a secondary column and detection on a sulfur chemiluminescence detector.

H의 측정<sub&gt; 2</sub&gt; 원유 및 다차원 가스 크로마토 그래피를 이용하여 원유 헤드 스페이스에서 S는 학장은 전환과 황 선택적 검출

A method for the analysis of dissolved hydrogen sulfide in crude oil samples is demonstrated using gas chromatography. In order to effectively eliminate ...

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be brought back to the beehive after the bees have foraged on flowers that have been sprayed with pesticides. Pesticide contaminated food can be exchanged between workers which then feed larvae and therefore can potentially affect the development of honey bees. Thus, residual pesticides in the environment can become a chronic damaging factor to honey bee populations and gradually lead to colony collapse. In the presented protocol, honey bee feeding methods are described and applied to either an individual honey bee or to a colony. Here, the insect growth regulator (IGR) pyriproxyfen (PPN), which is widely used to control pest insects and is harmful to the development of honey bee larvae and pupae, is used as the pesticide. The presenting procedure can be applied to other potentially harmful chemicals or honeybee pathogens for further studies.

Herein we present a method to feed pesticide contaminated food to both an individual honey bee and a beehive colony. The procedure evaluates the pesticide effect on individual honey bees by in vivo feeding of basic larval diet and also on the natural condition of beehive colony.

식민지 수준에 개인에서 꿀 꿀벌 개발에 대한 환경 화학 물질의 효과를 평가

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Measurement of the Rheology of Crude Oil in Equilibrium with CO2 at Reservoir Conditions

A rheometer system to measure the rheology of crude oil in equilibrium with carbon dioxide (CO2) at high temperatures and pressures is described. The system comprises a high-pressure rheometer which is connected to a circulation loop. The rheometer has a rotational flow-through measurement cell with two alternative geometries: coaxial cylinder and double gap. The circulation loop contains a mixer, to bring the crude oil sample into equilibrium with CO2, and a gear pump that transports the mixture from the mixer to the rheometer and recycles it back to the mixer. The CO2 and crude oil are brought to equilibrium by stirring and circulation and the rheology of the saturated mixture is measured by the rheometer. The system is used to measure the rheological properties of Zuata crude oil (and its toluene dilution) in equilibrium with CO2 at elevated pressures up to 220 bar and a temperature of 50 &#176;C. The results show that CO2 addition changes the oil rheology significantly, initially reducing the viscosity as the CO2 pressure is increased and then increasing the viscosity above a threshold pressure. The non-Newtonian response of the crude is also seen to change with the addition of CO2.

Measurement of the Rheology of Crude Oil in Equilibrium with CO2 at Reservoir Conditions

A method for measuring the rheology of crude oil in equilibrium with carbon dioxide at reservoir conditions is presented.

CO와 평형 상태에있는 원유의 레올로 지의 측정<sub&gt; 2</sub&gt; 저수지 조건

A rheometer system to measure the rheology of crude oil in equilibrium with carbon dioxide (CO2) at high temperatures and pressures is described. The ...

Lab-Scale Model to Evaluate Odor and Gas Concentrations Emitted by Deep Bedded Pack Manure

A lab-scaled simulated bedded pack model was developed to study air quality and nutrient composition of deep-bedded packs used in cattle mono-slope facilities. This protocol has been used to effectively evaluate many different bedding materials, environmental variables (temperature, humidity), and potential mitigation treatments that can improve air quality in commercial deep-bedded mono-slope facilities. The model is dynamic and allows researchers to easily collect many chemical and physical measurements from the bedded pack. Weekly measurements, collected over the course of six to seven weeks, allows sufficient time to see changes in air quality measurements over time as the bedded pack matures. The data collected from the simulated bedded packs is within the range of concentrations previously measured in commercial deep-bedded mono-slope facilities. Past studies have demonstrated that 8 - 10 experimental units per treatment are sufficient to detect statistical differences among the simulated bedded packs. The bedded packs are easy to maintain, requiring less than 10 minutes of labor per bedded packs per week to add urine, feces, and bedding. Sample collection using the gas sampling system requires 20 - 30 minutes per bedded pack, depending on the measurements that are being collected. The use of lab-scaled bedded packs allows the researcher to control variables such as temperature, humidity, and bedding source that are difficult or impossible to control in a research or commercial facility. While not a perfect simulation of &#34;real-world&#34; conditions, the simulated bedded packs serve as a good model for researchers to use to examine treatment differences among bedded packs. Several lab-scale studies can be conducted to eliminate possible treatments before trying them in a research or commercial-sized facility.

A protocol has been developed to measure gases, odors, and nutrient composition in lab-scaled bedded manure packs, which can be used to study ways to improve air quality in commercial cattle facilities using deep-bedded manure packs.

냄새 및 가스 농도 깊은 방출 실험실 스케일 모델 침대 팩 비료

A lab-scaled simulated bedded pack model was developed to study air quality and nutrient composition of deep-bedded packs used in cattle mono-slope ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current measures to combat such pathogens have proved too conservative and, thus, not sufficiently effective, and they can potentially pose environmental risks. Therefore, it is extremely necessary to identify host-resistance factors to assist in controlling plant diseases naturally through the identification of resistant germplasm, the isolation and characterization of resistance genes, and the molecular breeding of resistant cultivars. In this regard, there is need to establish an accurate, rapid, and large-scale inoculation method to breed and develop plant resistance genes. The rice blast fungal pathogen Magnaporthe grisea causes severe disease symptoms and yield losses. Recently, M. grisea has emerged as a model organism for studying the mechanisms of plant-fungal pathogen interactions. Hence, we report the development of a plant virulence test method that is specific for M. grisea. This method provides for both spray inoculation with a conidial suspension and wounding inoculation with mycelium cubes or droplets of conidial suspension. The key step of the wounding inoculation method for detached rice leaves is to make wounds on plant leaves, which avoids any interference caused by host penetration resistance. This spray/wounding protocol contributes to the rapid, accurate, and large-scale screening of the pathotypes of M. grisea isolates. This integrated and systematic plant infection method will serve as an excellent starting point for gaining a broad perspective of issues in plant pathology.

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Here, we present a protocol to test plant virulence with the plant pathogen Magnaporthe grisea. This report will contribute to the large-scale screening of the pathotypes of fungi isolates and serve as an excellent starting point for understanding the resistant mechanisms of plants during molecular breeding.

식물 감염 테스트: 스프레이 식물 병원 체 Magnaporthe Grisea 와 상처-중재 접종

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Experimental Study of the Relationship Between Particle Size and Methane Sorption Capacity in Shale

The amount of adsorbed shale gas is a key parameter used in shale gas resource evaluation and target area selection, and it is also an important standard for evaluating the mining value of shale gas. Currently, studies on the correlation between particle size and methane adsorption are controversial. In this study, an isothermal adsorption apparatus, the gravimetric sorption analyzer, is used to test the adsorption capacity of different particle sizes in shale to determine the relationship between the particle size and the adsorption capacity of shale. Thegravimetric method requires fewer parameters and produces better results in terms of accuracy and consistency than methods like the volumetric method. Gravimetric measurements are performed in four steps: a blank measurement, preprocessing, a buoyancy measurement, and adsorption and desorption measurements. Gravimetric measurement is presently considered to be a more scientific and accurate method of measuring the amount of adsorption; however, it is time-consuming and requires a strict measuring technique. A Magnetic Suspension Balance (MSB) is the key to verify the accuracy and consistency of this method. Our results show that adsorption capacity and particle size are correlated, but not a linear correlation, and the adsorptions in particles sieved into 40 - 60 and 60 - 80 meshes tend to be larger. We propose that the maximum adsorption corresponding to the particle size is approximately 250 &#181;m (60 mesh) in the shale gas fracturing.

We use an isothermal adsorption apparatus, the gravimetric sorption analyzer, to test the adsorption capacity of different particle sizes of shale, in order to find out the relationship between particle size and the adsorption capacity of shale.

입자 크기와 셰 일에서 메탄 수 착 용량 사이의 관계의 실험적 연구

The amount of adsorbed shale gas is a key parameter used in shale gas resource evaluation and target area selection, and it is also an important standard ...