저자 인정 비용 작업 CM1406 (Epigenetic 화학 생물학). 이 간행물에 보고 된 연구 피에르 메 르 시 재단에 의해 지원 되었다.

1. 세포 배양
참고: 다음 단계는 표준 조직 문화 후드에서 수행 됩니다. 메 마른 기술 친숙으로 예상 된다.
<ol>
	<li>헬러 세포 10% 태아 둔감 한 혈 청, 페니실린 G 보충 MEM에 T75 셀 문화 플라스 크에서 80 %confluency 문화 (100 U/mL), 고 스 (100mg/mL). 참고: 셀 문화, 치료, 그리고 세포 단계 층 류, 5% CO2 메 마른 조건 하에서 습도 분위기에서 수행 하는 37 ° C에서 셀 인큐베이션 단계에서 수행 됩니다.</li>
	<li>DPBS의 5 mL로 두 번 셀을 세척 하 고 발음 DPBS, 세포 분리 시 약의 1 mL을 추가. 셀을 분리 하려면 5 분 동안 37 ° C에서 품 어.</li>
	<li>MEM 문화 매체의 9 mL를 추가, 철저 하 게 셀 서 스 펜 션, resuspend 하 고는 hemocytometer를 사용 하 여 셀.</li>
	<li>6 x 104 셀/ml MEM에 세포 현 탁 액의 밀도 조정 합니다.</li>
	<li>100 µ L 셀 서 스 펜 션의 컨트롤을 추가 하 고 (그림 1A) 살 균, 평면-바닥, 조직 문화 취급 96 잘 접시의 우물을 테스트.</li>
	<li>96 잘 접시 (그림 1A)의 빈 우물에 MEM 문화 매체의 100 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>24 h 동안 37 ° C에 96 잘 접시를 품 어. 참고: 24 시간 보육 생 HDAC 활동 HeLa 세포에 대 한 테스트에 적합 한 시간 이다. 알 수 없는 HDAC 활동으로 다른 세포 유형 제어 셀 timecourse 평가 할 수 있습니다.</li>
</ol>
2. 세포 치료 테스트와 HDAC 기판
<ol>
	<li>96 잘 접시의 우물에서 매체 발음</li>
	<li>추가 테스트 화합물 x 2의 25 µ L (예를 들어, trichostatin, MS275, 및 tubastatin A) 웰 스를 테스트 하려면 메모리에. 제어 및 빈 우물에 MEM의 25 µ L를 추가 합니다. 참고: 테스트 화합물의 농도 이상 5 최종 테스트 농도 (1 농도 잘 당)의 범위를 제공 하기 위해 조정 될 것입니다. 복합 테스트에서 DMSO 최종 농도 0.5%를 넘지 말아야 한다 고에 공백 및 컨트롤을 포함 하 여 각 잘 동일 해야 합니다. 최종 부 화 볼륨 잘 당 50 µ L입니다. Trichostatin A 500에서 1.95에 이르기까지 5 농도에서 테스트 nM (희석 1:4). MS275 및 tubastatin A 8000에서 6.17에 이르기까지 5 농도에서 테스트 nM (1:6 희석). 원하는 최종 테스트 농도 복합 각 테스트에 대 한 복용량 응답 곡선을 작성 하 여 각 개별 사용자에 의해 결정 되어야 합니다.</li>
	<li>제어 및 테스트 웰을 기판 혼합물 (말, MOCPAC의 42 µ M 및 MEM에 BATCP의 42 µ M의 42 µ M)의 25 µ L를 추가 합니다. 빈 우물에 MEM의 25 µ L를 추가 합니다. 참고: 각 기판의 최종 농도 21 µ M. MOCPAC와 BATCP 각각 HDAC1와 HDAC6 활동 사이 구별 (그림 1B). 활동이 그 기판으로 관찰은, 말의 사용 다른 HDAC isoform에 대 한 활동의 식별 잠재적으로 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>습도 5%에서 8 h 동안 37 ° C에 96 잘 접시를 품 어 CO2 배양 기. 참고:이 보육 시간 HeLa 세포에 적합 이며 생 HDAC 합성 기질 상호 작용을 수 있습니다. 다른 셀 라인 보육 시간 및 기질 농도 조정 필요할 수 있습니다.</li>
</ol>
3. 세포 세포의 용 해 및 UHPLC-ESI-MS/MS에 대 한 샘플 준비
주의: 샘플 준비 단계 높은 가연성 및 독성 섭취 또는 흡입에 의해 유기 화학 물질을 사용 합니다. 적절 한 개인 보호 장갑, 보호 안경 등을 착용 합니다.
<ol>
	<li>6 x RIPA 버퍼 (10 x RIPA 버퍼에서 희석) 96 잘 접시의 각 음에 protease 억제제와 보충의 10 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>각 우물에 감기 이기의 160 µ L을 추가 하 여 반응을 중지 하 고 아래로 pipetting으로 혼합. 참고:이 단계 전에-20 ° C에는 이기 유지.</li>
	<li>10 분-80 ° C 냉장고에 접시를 놓습니다.</li>
	<li>접시를 냉장고에서 제거 하 고-살 균 원뿔 바닥 (V-아래) 96 잘 접시에 220 µ L의 각 콘텐츠를 전송. 5000 x g와 10 분 동안 4 ° C에서 격판덮개 원심 참고:이 단계는 단백질과 염 분 제거에서 목표로 합니다. 필요한 경우 솔루션은 원심 분리 전에 개별 원뿔 원심 분리기 튜브로 전송 하거나 96-글쎄, 0.65 μ m PVDF 필터 플레이트의 집합을 통해 필터링 수 있습니다. 침전의 성공적인 제거는 UHPLC 분석 전에 필요 합니다.</li>
	<li>UHPLC 시스템 호환 96 잘 접시에 상쾌한 (또는 여과 액)의 200 µ L를 전송 하 고 peelable, heat-sealing 호 일 접시 마감재를 사용 하 여 그것을 봉인. 참고: 제거는 supernatants 때 펠 릿 pipetting 하지 마십시오. UHPLC 분석 즉시 수행할 수 없는 경우는 플레이트 분석까지 24 h의 최대 4 ° C에 저장할 수 있습니다.</li>
</ol>
4. UHPLC/MS-MS 분석
<ol>
	<li>모바일 단계 시스템 (95% A:5 %B)으로 작성 하 여 UHPLC 시스템을 준비: A: H2O, HPLC 급 포함 된 0.1% 개미 산 (준비 1 L) B: 이기, HPLC 급, 0.1% 개미 산을 포함 (1 L 준비). 주의: 모바일 단계 높은 가연성 및 독성 섭취 또는 흡입에 의해 유기 화학 물질을 포함 합니다. 적절 한 개인 보호 장갑, 보호 안경 등을 착용 합니다.</li>
	<li>플레이트 홀더를 포함 하는 샘플 관리자에 96 잘 접시를 놓습니다. 표 1에 제공 된 UHPLC-ESI-MS/MS 조건에 따라 샘플을 실행 합니다. 참고: 모든 열 분석 96 잘 접시의 있어야 컨트롤 잘 한 빈 잘 (같이 접시 체계 그림 1A의). 컨트롤은 테스트 셀 라인에서 100% 효소 활동의 대표 공백 MS 소스 일관 된 백그라운드를 제공 하 고 있는지 여부를 확인 하는 동안. 주어진된 빈에서 발견 하는 특이 한 MS 봉우리 MS 감도 변화를 방지 하기 위해 조사 한다.</li>
</ol>
5. 데이터 분석
<ol>
	<li>적절 한 UHPLC 통합 소프트웨어와 각 기판 및 그것의 deacetylated 제품의 최대 영역을 통합 합니다. 참고: 자동 통합 매개 변수를 사용 하 여 다듬기 방법 (평균, 창 크기 3, 및 2, 예를 들면 매끄러운 수). 표 1에 제공 된 컬럼에 조건 사용 하 여, 차입 순서는 dMAL (5.8 분), dBATCP (6.0 분), dMOCPAC (6.2 분), 말 (7.6 분), MOCPAC (8.9 분), 그리고 BATCP (9.8 분), 그림 1C에서 같이.</li>
	<li>각 기질에 대 한 (deacetylated/acetylated) 각 크로마 (테스트 및 컨트롤 샘플)에서 피크 지역 비율을 계산 합니다.</li>
	<li>각 테스트 샘플의 백분율 HDAC 저해를 계산. 
	<img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/55878/55878eq1.jpg"> 참고: HDAC1 저해 dMOCPAC/MOCPAC;의 피크 면적 비를 사용 하 여 계산 HDAC6 억제는 dBATCP/BATCP으로 계산 됩니다. 일반 HDAC 저해 표현 하 비율 dMAL/말을 사용할 수 있습니다.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

HDAC 저해 약물 발견, 암 치료21HDAC6-선택적 억제제에 현재 초점에서 뜨거운 주제입니다. HDAC 선택도 일반적으로 개별 HDAC isoforms21으로 억제 효능을 결정 하는 높은 처리량, 셀 무료 분석 실험의 시리즈에 의해 평가 됩니다. 그러나, 억제제의 선택도 확인 되어야 합니다 또한 살아있는 세포에서 히스톤과 같은 내 생 단백질 기판의 acetylation 상태를 평가 하 여 (에 대 한 클래스 I HDACs) 및 tubulin (HDAC6)에 대 한. 따라서, 세포 항 체 인식 (예를 들어, immunostaining, 서쪽 오 점, cytometry, 고 애 란)를 포함 분석 실험은 일반적으로 필요한 isoform의 양적 또는 반 양적 평가 달성 하기 위해 생활에 주어진된 화합물의 힘21세포. 그것은 드문 셀 무료 효소 분석 결과에서 선택적 되었다 화합물 비-선택적 세포 또는 조직17,22, 그리고 반대19부 것으로 밝혀졌습니다. 이 비 표준화 된 효소 소스 및 공동 요인의 부재에 차이 또는 생 화 확 적인 분석 실험21단백질 파트너에 의해 설명 될 수 있다.
여기에 설명 된 방법은 I (HDAC1) 및 클래스 IIb (HDAC6)는 생활에서 억제 효능 클래스의 직접 측정 하기 위한 수 있도록 신속, 항 체 없는 대체 세포 환경17입니다. 방법의 또 다른 장점은 쉽게 neuroblasts23, 소형화 및 다른 세포 기반 분석24에 대 한 이전 설명으로 자동화에 대 한 가능성 등 다른 세포 라인에 적응 될 수 있습니다. 질량 분석에 의해 특정 기판의 검출 비교 양적 결과 제공 하는 deacetylated 제품의 정확한 측정에 기여 한다. 이것은 살아있는 세포에서 특정 HDAC isoforms로 IC50 값을 결정 하는 데 사용할 수 있는 첫 번째 방법입니다. 비교의 문제로, HDAC 억제제 서쪽 오 점에 비 양적 선택적 프로필 선택 프로 파일 방법으로 얻은 라인을 여기에 설명 된17증명 있다. 이 방법은 새로운 클래스 선택적 HDAC 저 해제의 발견에 대 한 개발 되었습니다 경우에 질병의 과정을 통해 셀 모델 내에서 HDAC 활동 측정에 적용 수 있습니다. 이 관련 질병에 epigenetic 및 분자 메커니즘의 해명에 기여할 수 있는 고 약물 후보를 식별 수 잠재적으로. 이 메서드 HDAC1 및 HDAC6 HDAC isoforms로 추정, 보기 새로운 선택적 HDAC 기판의 개발은 좋습니다. 또한, MOCPAC 및 BATCP의 기질 특이성 단일 isoforms를 대상으로 하는 점에서 완전히 특징 되어야 한다. 실제로, 동안 MOCPAC는 HDAC1 전용 기판으로 분류 (클래스 I 클래스 II에), 그것 일반적인 클래스 I 이전 시연25(를 포함 하 여 HDAC3 isoform), 기판은 더 높습니다. 따라서, BATCP는 유명한 HDAC6 선택적 기판 (클래스 II 이상 종류 I HDACs), 다른 클래스 II HDACs, HDAC4, 등 쪽으로 그것의 구체적 특성화25더 가치가 있지만.
효소 활동 셀 라인에 따라 다릅니다, 그리고 번호, confluency, 및 부 화 시간을 셀 수 있습니다. 셀 라인 분석 결과에서 처음으로 사용 하는 경우 그것은 다른 시간 지점 UHPLC-MS (예를 들어, Michaelis-Menten 작의를 통해)에 의해 효소 활동을 분석 하에서 제어 셀에 기질 농도의 범위를 테스트 하는 것이 중요. 이 연구원은 가장 적합 한 보육 시간 및 기질 농도 선택할 수 있습니다. 두 가지 주요 매개 변수 의존이 선택: 1) 효소 반응 속도 론 및 2)은 기판 및 그들의 deacetylated 제품 검색. 효소 반응 속도 론 분석 때 초기 속도 값 (즉, 제품 대형 선형 범위 안에 있을 때) 평가 필수적 이다 효소 활동을 확립. 활동에 따르면 Km 아래 기판 농도 억제, 경쟁 및 무 경쟁 억제 물26의 경우 특히의 정확한 비율을 제공 하기 위해 선택 되어야 한다. 다른 한편으로, 선택한 기질 농도 기판 및 deacetylated 제품 (신호 대 잡음 비율 ≥20)17에 대 한 감지 하 고 정량 MS 신호를 제공 해야 합니다. 사용할 때 여러 개의 기판, 크로마 방법을 분석할 모든 봉우리의 분리를 확인 해야 합니다. 대체 크로마 시스템 분리 그라데이션 및 열 유형에서 변경 해야 합니다.

HDACs 효소 chromatin 구조 내에서 히스톤 deacetylate 수의 가족에 속한다. 그들은 또한 다른 단백질 기판은 cytosol에서 있고 다양 한 셀 구획에 있습니다. 18 HDAC isoforms의 총 세포 신호 뿐만 아니라 녹음 방송 요인 유전자 발현의 규칙을 포함 하 여 몇 가지 셀 메커니즘에 관련 된 고1,2,3,,45,,67수송 지금까지 확인 된. HDAC 촉매 억제제는 암 치료에 대 한 잠재적인 치료 약물으로 떠오르고 있다. 현재 FDA에 의해 승인 대부분 HDAC 억제제 T-세포 림프 종 및 다 발성의 치료에 대 한 되며 vorinostat (사), belinostat, panobinostat,89등 일반적인 HDAC 저 해제. 그러나, 부작용의 시리즈 팬-억제제, 연관 된 고 isoform 특정 작은 분자에 대 한 검색의 약 화학과 약물 발견에 뜨거운 주제입니다. 따라서, 클래스 I (HDAC1-3와 HDAC8) 선택적 억제제 romidepsin는 이미 승인 된 약10, HDAC6 특정 억제제는 현재 임상 시험, 다중 골 수 종11,12,13,,1415에 증가 치료 잠재력.
HDAC 특성 분석 실험 심사 억제제 (단일 isoform, 핵 추출 물, 또는 세포 lysate) 효소 소스와 HDAC 기판의 외피에 근거한 다. 기판은 일반적으로 N-(4-methyl-7-aminocoumarinyl)-Nα-(t-butoxycarbonyl)-Nω-acetyllysineamide (말)16등 쪼갤 fluorophore (예: coumarin), 결합 틸 리 진 잔류물을 포함 하는 작은 펩 티 드 순서. Isoform 특정 활동을 구분 하기 위해 각 isoform를 포함 하는 별도 셀 무료 분석 필요 하 고 살아있는 세포에서 진짜 isoform 활동을 반영 하지 않을 수도 있습니다. Isoform 특정 기판 벤 질 등 상업적으로 사용할 수 있습니다 (S)-[1-(4-methyl-2-oxo-2H-chromen-7-ylcarbamoyl)-5-propionylaminopentyl]carbamate (MOCPAC, HDAC1 특정 기판)와 (S)-[5-acetylamino-1-(2-oxo-4-trifluoromethyl-2H-chromen-7-ylcarbamoyl)pentyl]carbamic 산 tert-부 틸 에스테 르 (BATCP, HDAC6 특정 기판) (그림 1B). 그러나, 말을 포함 하는 다중 기판 혼합물, MOCPAC, 및 BATCP 살아있는 세포에 게 주어진 것입니다 허용 하지 개별 deacetylated 제품의 탐지 fluorometric 측정에 의해 그들은 동일한 쪼갤 fluorophore를 품는.
여기 설명 하는 방법을 검색 및 각 기판 및 UHPLC-ESI-MS/MS 분석17다음 멀티 기판 분석 결과 사용 하 여 헬러 세포에 그것의 deacetylated 제품의 상대적 정량화 할 수 있습니다. HDAC 분석 결과 HDAC 억제 활동의 및 내 인 성 HDACs에 시험 화합물의 특이성의 직접 식별 수 있도록 HeLa 세포에 실시 됩니다. 동시에 평가 되는 HDAC1 및 HDAC6에 초점이 이다. 위해 단일 외피 분석 결과에서 이러한 효소 측정, 비 및 특정 HDAC 기판의 혼합물 96 잘 접시에 도금 처리와 치료 HeLa 세포에 추가 됩니다. 인큐베이션 단계 세포는 기질 및 그들의 각각 반응 제품을 구분 되 고 UHPLC MS 메서드 (그림 1C)을 사용 하 여 검출 하 lysed 됩니다. 말, MOCPAC, 및 BATCP 기판의 deacetylated 제품 이다 deacetylated 말 (dMAL), deacetylated MOCPAC (dMOCPAC), 그리고 deacetylated BATCP (dBATCP), 각각. 복용량 응답 곡선 활성 화합물으로 만들 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55878/55878fig1.jpg"> 
그림 1: 여러 기판의 UHPLC MS 분석에 의해 HDAC1 및 HDAC6 관련 억제제를 식별 하기 위해 셀 기반 HDAC 분석 결과 대 한 일반적인 구성표. 전형적인 96 잘 접시 포함 하는 치료 (시험 화합물)의 (A) 체계 및 치료 (제어) 헬러 세포 뿐 아니라 셀 무료 공백. (B) 기판 내 생 HDACs에 의해 deacetylated 혼합 (21 µ M 각)으로 추가의 화학 구조. (C) 추가 기판 (말, MOCPAC, 및 BATCP) 및 그들의 deacetylated 제품의 봉우리를 보여주는 전형적인 UHPLC-MS 크로마 (dMAL, dMOCPAC, 그리고 dBACTP, 각각). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55878/55878fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="887">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">BATCP</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">B4061</td>
			<td style="width:273px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MAL</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>SCP0168</td>
			<td>Synonym: BOC-Ac-Lys-AMC&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">MOCPAC</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">MS275</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">EPS002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Trichostatin A</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">T8552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Tubastatin A</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">SML0044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Acetonitrile, HPLC grade</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">10660131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Formic acid, LC/MS grade</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">10596814</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:271px;">H2O, HPLC grade</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td>distilled H2O filtered through a Milli-Q purification system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">HeLa cells</td>
			<td style="width:191px;">ATCC</td>
			<td style="width:152px;">ATCC CRM-CCL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell dissociation reagent TrypLE Express</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">12604013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">DMSO, cell culture grade</td>
			<td style="width:191px;">Applichem</td>
			<td style="width:152px;">146463</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">DPBS</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Biowest</td>
			<td>S1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">MEM</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>22561021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:191px;">Bioconcept</td>
			<td>4-01F00-H&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X RIPA buffer</td>
			<td style="width:191px;">Abcam</td>
			<td style="width:152px;">ab156034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">SigmaFast protease inhibitor tablets</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">S8820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">96-well plates, sterile, flat-bottom, tissue culture treated Corning</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td style="width:152px;">29442-058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">96-well plates, non-sterile, V-bottom Corning</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td style="width:152px;">29442-404</td>
			<td>used in the centrifugation step</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">96-well plate, conical bottom, Nunc</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">249944</td>
			<td>compatible with the Acquity UHPLC system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">T75&#160; cell culture flasks Corning</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:152px;">CLS430641&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Peelable heat sealing foil&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Waters</td>
			<td style="width:152px;">186002789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Acquity UPLC system</td>
			<td style="width:191px;">Waters</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Eppendorf Centrifuge 5810 R</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:152px;">05-413-323</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Integration software: MassLynx V4.1</td>
			<td style="width:191px;">Waters</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td>Catalog number not available</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Combi thermo-sealer SP-0669/240</td>
			<td style="width:191px;">Waters</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td>Catalog number not available</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:271px;">Quattro micro API Tandem Quadrupole System</td>
			<td style="width:191px;">Waters</td>
			<td style="width:152px;"></td>
			<td>Catalog number not available</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous measurement of hdac1 and hdac6 activity in hela cells using uhplc-ms

새로운 히스톤 deacetylase (HDAC) 억제제에 대 한 검색 증가 약물 발견에 대 한 관심입니다. Isoform 선택 romidepsin, 클래스의 승인부터 스포트 라이트에서 되었습니다 내가 HDAC 억제제 암 치료, 그리고 여러 발성에 대 한 HDAC6 전용 억제제의 임상 조사에 대 한. 현재 메서드는 HDAC1 및 HDAC6 셀에 테스트의 금지 활동을 결정 하는 데 사용 됩니다. Isoform 활동 초 고성능 액체 크로마토그래피-질량 분석 (MS UHPLC) 분석의 특정 기판 처리와 치료 HeLa 세포와 알을 품을 사용 하 여 측정 됩니다. 메서드는 환경 내에서 셀 셀 무료 생 화 확 적인 분석 실험 격리 isoforms에 달리 생 HDAC 활동 반영의 이점이 있다. 또한, 합성 기판의 정량화에 기반 하기 때문에 메서드는 생 acetylated 단백질의 항 체 인식이 필요 하지 않습니다. 그것은 쉽게 여러 셀 라인 및 자동화 된 프로세스에 적응입니다. 메서드는 이미 neuroblasts에서 HDAC6-선택적 화합물을 찾는 유용한 증명 했다. 대표 결과 표준 HDAC 억제제 trichostatin는 (일반적인), MS275 이전으로 여기에 표시 됩니다 (HDAC1 전용), 및 tubastatin (HDAC6-특정) 헬러 세포를 사용 하 여.

HDAC1에 대 한 비 선택 및 선택적 억제제를 식별 하는 방법의 응용 프로그램을 (종류 I)와 HDAC6 (클래스 IIb), HeLa 세포는 알려진된 표준 화합물으로 치료 했다: trichostatin A (비-선택적 HDAC1와 HDAC6 사이)18, MS275 (HDAC1-선택적 억제제)19및 tubastatin (HDAC6-선택적 억제제)20. 현재 방법 (그림 1)를 사용 하 여 IC50 값 수 수 직접 정한 살아있는 세포에 (봐서 MOCPAC deacetylation) HDAC1 및 HDAC6 (BATCP deacetylation 보고) (그림 2). Trichostatin A HDAC1와 HDAC6 강력한 하지만 비 선택적 억제제를 했다. Tubastatin A는 HDAC6에 대 한 명확 하 게 선택 하는 동안 다른 한편으로, MS275 HDAC1에 대 한 선택적 이었다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55878/55878fig2.jpg"> 
그림 2: IC50 복용량 응답 곡선 동시에 얻은 HDAC1 및 HDAC6의 3 개의 표준 HDAC 저 해제: 비 선택적인 trichostatin A, HDAC1 선택 MS275 및 HDAC6 선택 tubastatin A. 인접 한 테이블에서 제시 하는 IC50 값은 3 개의 독립적인 측정의 평균 ± SD. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55878/55878fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>사출 볼륨</td>
			<td>5 Μ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>열</td>
			<td>C18 (2.6 μ m, 100 m m x 3 m m 아이디)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>열 온도</td>
			<td>40 ° C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>차입 유량</td>
			<td>0.8 mL/min (전형적인 압력 범위: 400-600 바)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>차입 그라데이션</td>
			<td>10 분에 5-45% B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>2 분에서 45-98% B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>세척 단계</td>
			<td>2 분 98% B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>평형 단계</td>
			<td>4 분 5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ESI-MS/MS</td>
			<td>콘 전압 30 V; 모 세관 소스 전압, 3.0 k v; 모 세관 온도, 350 ° C; 원천의 온도, 120 ° C; 칼 집 가스-질소 (600 L/h); 충돌 가스 압력, 아르곤 3 x 10-3 mbar 설정</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>충돌 변수와 반응 채널 0.1의 드웰 타임으로 최적화 된 s, 0.01 interscan 지연 및 충돌 에너지의 s 20 eV에서 설정.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>질량을 가진 말 탐지 446 → 346 (말) 그리고 404 → 304 (dMAL)을 전환합니다.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>질량을 가진 MOCPAC 탐지 494 → 449 (MOCPAC)과 439 → 394 (dMOCPAC)을 전환합니다.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>질량을 가진 BATCP 탐지 500 → 400 (BATCP) 그리고 476 → 376 (dBATCP)을 전환합니다.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: UHPLC-ESI-MS/MS 조건.

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Simultaneous Measurement of HDAC1 and HDAC6 Activity in HeLa Cells Using UHPLC-MS

현재 메서드 여러 기판의 UHPLC MS 분석에 의해 HeLa 세포에서 히스톤 deacetylases (HDAC)의 isoform 특정 억제제를 식별 하는 역할. 이것은 생활에서 HDAC1 및 HDAC6 활동을 반영 하기 위해 개발 된 항 체 없는 메서드를 단일 isoform 셀 무료 분석 달리 셀 환경.

헬러의 HDAC1 및 HDAC6의 동시 측정 셀 사용 하 여 UHPLC MS

The search for new histone deacetylase (HDAC) inhibitors is of increasing interest in drug discovery. Isoform selectivity has been in the spotlight since ...

simultaneous-measurement-hdac1-hdac6-activity-hela-cells-using-uhplc

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Chemistry

8.4K 조회수.  Universités des Geneva–Lausanne (EPGL). 현재 메서드 여러 기판의 UHPLC MS 분석에 의해 HeLa 세포에서 히스톤 deacetylases (HDAC)의 isoform 특정 억제제를 식별 하는 역할. 이것은 생활에서 HDAC1 및 HDAC6 활동을 반영 하기 위해 개발 된 항 체 없는 메서드를 단일 isoform 셀 무료 분석 달리 셀 환경.

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Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first separated into polar and non-polar fractions by a liquid-liquid phase extraction, and partially purified to facilitate downstream analysis. Both aqueous (polar metabolites) and organic (non-polar metabolites) phases of the initial extraction are processed to survey a broad range of metabolites. Metabolites are separated by different liquid chromatography methods based upon their partition properties. In this method, we present microflow ultra-performance (UP)LC methods, but the protocol is scalable to higher flows and lower pressures. Introduction into the mass spectrometer can be through either general or compound optimized source conditions. Detection of a broad range of ions is carried out in full scan mode in both positive and negative mode over a broad m/z range using high resolution on a recently calibrated instrument. Label-free differential analysis is carried out on bioinformatics platforms. Applications of this approach include metabolic pathway screening, biomarker discovery, and drug development.

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Untargeted metabolomics provides a hypothesis generating snapshot of a metabolic profile. This protocol will demonstrate the extraction and analysis of metabolites from cells, serum, or tissue. A range of metabolites are surveyed using liquid-liquid phase extraction, microflow ultraperformance liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry (UPLC-HRMS) coupled to differential analysis software.

Ultraperformance 액체 크로마토 그래피 고해상도 질량 분석 (UPLC-HRMS)를 사용하여 생물 소스에서 타겟이 불분명 한 대사

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

연구

화학

Steady-state, Pre-steady-state, and Single-turnover Kinetic Measurement for DNA Glycosylase Activity

Human 8-oxoguanine DNA glycosylase (OGG1) excises the mutagenic oxidative DNA lesion 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxoG) from DNA. Kinetic characterization of OGG1 is undertaken to measure the rates of 8-oxoG excision and product release. When the OGG1 concentration is lower than substrate DNA, time courses of product formation are biphasic; a rapid exponential phase (i.e. burst) of product formation is followed by a linear steady-state phase. The initial burst of product formation corresponds to the concentration of enzyme properly engaged on the substrate, and the burst amplitude depends on the concentration of enzyme. The first-order rate constant of the burst corresponds to the intrinsic rate of 8-oxoG excision and the slower steady-state rate measures the rate of product release (product DNA dissociation rate constant, koff). Here, we describe steady-state, pre-steady-state, and single-turnover approaches to isolate and measure specific steps during OGG1 catalytic cycling. A fluorescent labeled lesion-containing oligonucleotide and purified OGG1 are used to facilitate precise kinetic measurements. Since low enzyme concentrations are used to make steady-state measurements, manual mixing of reagents and quenching of the reaction can be performed to ascertain the steady-state rate (koff). Additionally, extrapolation of the steady-state rate to a point on the ordinate at zero time indicates that a burst of product formation occurred during the first turnover (i.e. y-intercept is positive). The first-order rate constant of the exponential burst phase can be measured using a rapid mixing and quenching technique that examines the amount of product formed at short time intervals (&lt;1 sec) before the steady-state phase and corresponds to the rate of 8-oxoG excision (i.e. chemistry). The chemical step can also be measured using a single-turnover approach where catalytic cycling is prevented by saturating substrate DNA with enzyme (E&gt;S). These approaches can measure elementary rate constants that influence the efficiency of removal of a DNA lesion.

Time courses for the glycosylase activity of 8-oxoguanine DNA glycosylase are biphasic exhibiting a burst of product formation and a linear steady-state phase. Utilizing quench-flow techniques, the burst and the steady-state rates can be measured, which correspond to excision of 8-oxoguanine and release of the glycosylase from the product DNA, respectively.

DNA의 Glycosylase 활동에 대한 정상 상태, 전 정상 상태 및 단일 매출 운동 측정

Human 8-oxoguanine DNA glycosylase (OGG1) excises the mutagenic oxidative DNA lesion 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxoG) from DNA. Kinetic characterization ...

A Simple and Rapid Protocol for Measuring Neutral Lipids in Algal Cells Using Fluorescence

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal fermentation processes and screening for new oil-rich strains requires a fast and reliable protocol for determination of intracellular lipid content. Current practices rely largely on gravimetric methods to determine oil content, techniques developed decades ago that are time consuming and require large sample volumes. In this paper, Nile Red, a fluorescent dye that has been used to identify the presence of lipid bodies in numerous types of organisms, is incorporated into a simple, fast, and reliable protocol for measuring the neutral lipid content of Auxenochlorella protothecoides, a green alga. The method uses ethanol, a relatively mild solvent, to permeabilize the cell membrane before staining and a 96 well micro-plate to increase sample capacity during fluorescence intensity measurements. It has been designed with the specific application of monitoring bioprocess performance. Previously dried samples or live samples from a growing culture can be used in the assay.

A simple protocol to determine the neutral lipid content of algal cells using a Nile Red staining procedure is described. This time-saving technique offers an alternative to traditional gravimetric-based lipid quantification protocols. It has been designed for the specific application of monitoring bioprocess performance.

형광을 사용하여 조류 세포에서 중성 지질을 측정하기위한 간단하고 빠른 프로토콜

Algae are considered excellent candidates for renewable fuel sources due to their natural lipid storage capabilities. Robust monitoring of algal ...

HPLC Measurement of the DNA Oxidation Biomarker, 8-oxo-7,8-dihydro-2&#8217;-deoxyguanosine, in Cultured Cells and Animal Tissues

Oxidative stress is associated with many physiological and pathological processes, as well as xenobiotic metabolism, leading to the oxidation of biomacromolecules, including DNA. Therefore, efficient detection of DNA oxidation is important for a variety of research disciplines, including medicine and toxicology. A common biomarker of oxidatively damaged DNA is 8-oxo-7,8-dihydro-2&#39;-deoxyguanosine (8-oxo-dGuo; often erroneously referred to as 8-hydroxy-2&#39;-deoxyguanosine (8-OH-dGuo or 8-oxo-dG)). Several protocols for 8-oxo-dGuo measurement by high pressure liquid chromatography with electrochemical detection (HPLC-ED) have been described. However, these were mainly applied to purified DNA treated with pro-oxidants. In addition, due to methodological differences between laboratories, mainly due to differences in analytical equipment, the adoption of published methods for detection of 8-oxo-dGuo by HPLC-ED requires careful optimization by each laboratory. A comprehensive protocol, describing such an optimization process, is lacking. Here, a detailed protocol is described for the detection of 8-oxo-dGuo by HPLC-ED, in DNA from cultured cells or animal tissues. It illustrates how DNA sample preparation can be easily and rapidly optimized to minimize undesirable DNA oxidation that can occur during sample preparation. This protocol shows how to detect 8-oxo-dGuo in cultured human alveolar adenocarcinoma cells (i.e., A549 cells) treated with the oxidizing agent KBrO3, and from the spleen of mice exposed to the polycyclic aromatic hydrocarbon dibenzo(def,p)chrysene (DBC, formerly known as dibenzo(a,l)pyrene, DalP). Overall, this work illustrates how an HPLC-ED methodology can be readily optimized for the detection of 8-oxo-dGuo in biological samples.

The goal of this protocol is the detection of the DNA oxidation marker, 8-oxo-7,8-dihydro-2&#39;-deoxyguanosine (8-oxo-dGuo) by HPLC-ED, in DNA from cultured cells or animal tissues.

산화 DNA 바이오 마커의 HPLC 측​​정, -8- 옥소 -7,8- 디 하이드로 -2&#39;- 데 옥시 구아노 신, 배양 세포와 동물 조직

Oxidative stress is associated with many physiological and pathological processes, as well as xenobiotic metabolism, leading to the oxidation of ...

Dynamic Electrochemical Measurement of Chloride Ions

This protocol describes the dynamic measurement of chloride ions using the transition time of a silver silver chloride (Ag/AgCl) electrode. Silver silver chloride electrode is used extensively for potentiometric measurement of chloride ions concentration in electrolyte. In this measurement, long-term and continuous monitoring is limited due to the inherent drift and the requirement of a stable reference electrode. We utilized the chronopotentiometric approach to minimize drift and avoid the use of a conventional reference electrode. A galvanostatic pulse is applied to an Ag/AgCl electrode which initiates a faradic reaction depleting the Cl&#713; ions near the electrode surface. The transition time, which is the time to completely deplete the ions near the electrode surface, is a function of the ion concentration, given by the Nernst equation. The square root of the transition time is in linear relation to the chloride ion concentration. Drift of the response over two weeks is negligible (59 &#181;M/day) when measuring 1 mM [Cl&#713;]using a current pulse of 10 Am-2. This is a dynamic measurement where the moment of transition time determines the response and thus is independent of the absolute potential. Any metal wire can be used as a pseudo-reference electrode, making this approach feasible for long-term measurement inside concrete structures.

Dynamic measurement of chloride ions is presented. Transition time of an Ag/AgCl electrode, during a chronopotentiometric technique, can give the concentration of chloride ions in electrolyte. This method does not require a stable conventional reference electrode.

This protocol describes the dynamic measurement of chloride ions using the transition time of a silver silver chloride (Ag/AgCl) electrode. Silver silver ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of heteroxylans. De-starched wheat endosperm cell walls were isolated as an alcohol-insoluble residue (AIR)1 and sequentially extracted with water (W-sol Fr) and 1 M KOH containing 1% NaBH4 (KOH-sol Fr) as described by Ratnayake et al. (2014)2. Two different approaches (see summary in Figure 1) are adopted. In the first, intact W-sol AXs are treated with 2AB to tag the original RE backbone chain sugar residue and then treated with an endoxylanase to generate a mixture of 2AB-labelled RE and internal region reducing oligosaccharides, respectively. In a second approach, the KOH-sol Fr is hydrolyzed with endoxylanase to first generate a mixture of oligosaccharides which are subsequently labelled with 2AB. The enzymically released ((un)tagged) oligosaccharides from both W- and KOH-sol Frs are then methylated and the detailed structural analysis of both the native and methylated oligosaccharides is performed using a combination of MALDI-TOF-MS, RP-HPLC-ESI-QTOF-MS and ESI-MSn. Endoxylanase digested KOH-sol AXs are also characterized by nuclear magnetic resonance (NMR) that also provides information on the anomeric configuration. These techniques can be applied to other classes of polysaccharides using the appropriate endo-hydrolases.

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

This protocol describes the specific techniques used for the structural characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of heteroxylans by tagging the RE with 2 aminobenzamide prior to enzymatic (endoxylanase) hydrolysis and then analysis of the resultant oligosaccharides using mass spectrometry (MS) and nuclear magnetic resonance (NMR).

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

Fabrication and Testing of Photonic Thermometers

In recent years, a push for developing novel silicon photonic devices for telecommunications has generated a vast knowledge base that is now being leveraged for developing sophisticated photonic sensors. Silicon photonic sensors seek to exploit the strong confinement of light in nano-waveguides to transduce changes in physical state to changes in resonance frequency. In the case of thermometry, the thermo-optic coefficient, i.e., changes in refractive index due to temperature, causes the resonant frequency of the photonic device such as a Bragg grating to drift with temperature. We are developing a suite of photonic devices that leverage recent advances in telecom compatible light sources to fabricate cost-effective photonic temperature sensors, which can be deployed in a wide variety of settings ranging from controlled laboratory conditions, to the noisy environment of a factory floor or a residence. In this manuscript, we detail our protocol for the fabrication and testing of photonic thermometers.

We describe the process of fabrication and testing of photonic thermometers.

제조 및 광 온도계의 테스트

In recent years, a push for developing novel silicon photonic devices for telecommunications has generated a vast knowledge base that is now being ...

Disentangling High Strength Copolymer Aramid Fibers to Enable the Determination of Their Mechanical Properties

Traditionally, soft body armor has been made from poly(p-phenylene terephthalamide) (PPTA) and ultra-high molecular weight polyethylene. However, to diversify the fiber choices in the United States body armor market, copolymer fibers based on the combination of 5-amino-2-(p-aminophenyl) benzimidazole (PBIA) and the more conventional PPTA were introduced. Little is known regarding the long-term stability of these fibers, but as condensation polymers, they are expected to have potential sensitivity to moisture and humidity. Therefore, characterizing the strength of the materials and understanding their vulnerability to environmental conditions is important for evaluating their use lifetime in safety applications. Ballistic resistance and other critical structural properties of these fibers are predicated on their strength. To accurately determine the strength of the individual fibers, it is necessary to disentangle them from the yarn without introducing any damage. Three aramid-based copolymer fibers were selected for the study. The fibers were washed with acetone followed by methanol to remove an organic coating that held the individual fibers in each yarn bundle together. This coating makes it difficult to separate single fibers from the yarn bundle for mechanical testing without damaging the fibers and affecting their strength. After washing, fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy was performed on both washed and unwashed samples and the results were compared. This experiment has shown that there are no significant variations in the spectra of poly(p-phenylene-benzimidazole-terephthalamide-co-p-phenylene terephthalamide) (PBIA-co-PPTA1) and PBIA-co-PPTA3 after washing, and only a small variation in intensity for PBIA. This indicates that the acetone and methanol rinses are not adversely affecting the fibers and causing chemical degradation. Additionally, single fiber tensile testing was performed on the washed fibers to characterize their initial tensile strength and strain to failure, and compare those to other reported values. Iterative procedural development was necessary to find a successful method for performing tensile testing on these fibers.

The primary goal of the study is to develop a protocol to prepare consistent specimens for accurate mechanical testing of high strength copolymer aramid fibers, by removing a coating and disentangling the individual fiber strands without introducing significant chemical or physical degradation.

그들의 기계적 특성의 결정 수 있도록 고 강도 공중 합체 Aramid 섬유 disentangling

Traditionally, soft body armor has been made from poly(p-phenylene terephthalamide) (PPTA) and ultra-high molecular weight polyethylene. However, to ...

High Resolution Physical Characterization of Single Metallic Nanoparticles

Individual molecules can be detected and characterized by measuring the degree by which they reduce the ionic current flowing through a single nanometer-scale pore. The signal is characteristic of the molecule&#39;s physicochemical properties and its interactions with the pore. We demonstrate that the nanopore formed by the bacterial protein exotoxin Staphylococcus aureus alpha hemolysin (&#945;HL) can detect polyoxometalates (POMs, anionic metal oxygen clusters), at the single molecule limit. Moreover, multiple degradation products of 12-phosphotungstic acid POM (PTA, H3PW12O40) in solution are simultaneously measured. The single molecule sensitivity of the nanopore method allows for POMs to be characterized at significantly lower concentrations than required for nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. This technique could serve as a new tool for chemists to study the molecular properties of polyoxometalates or other metallic clusters, to better understand POM synthetic processes, and possibly improve their yield. Hypothetically, the location of a given atom, or the rotation of a fragment in the molecule, and the metal oxidation state could be investigated with this method. In addition, this new technique has the advantage of allowing the real-time monitoring of molecules in solution.&#160;

Here, we present a protocol to detect discrete metal oxygen clusters, polyoxometalates (POMs), at the single molecule limit using a biological nanopore-based electronic platform. The method provides a complementary approach to traditional analytical chemistry tools used in the study of these molecules.

단일 금속 나노 입자의 고분해능 물리적 특성화

Individual molecules can be detected and characterized by measuring the degree by which they reduce the ionic current flowing through a single ...

A New Straightforward Method for Lipophilicity (logP) Measurement using 19F NMR Spectroscopy

Fluorination has become an effective tool to optimize physicochemical properties of bioactive compounds. One of the applications of fluorine introduction is to modulate the lipophilicity of the compound. In our group, we are interested in the study of the impact of fluorination on lipophilicity of aliphatic fluorohydrins and fluorinated carbohydrates. These are not UV-active, resulting in a challenging lipophilicity determination. Here, we present a straightforward method for the measurement of lipophilicity of fluorinated compounds by 19F NMR spectroscopy. This method requires no UV-activity. Accurate solute mass, solvent and aliquot volume are also not required to be measured. Using this method, we measured the lipophilicities of a large number of fluorinated alkanols and carbohydrates.

A New Straightforward Method for Lipophilicity logP Measurement using 19F NMR Spectroscopy

A novel and straightforward variation of the shake-flask method was developed for accurate lipophilicity measurement of fluorinated compounds by 19F NMR spectroscopy.

19F NMR 분광학을 사용 하 여 Lipophilicity (로그P) 측정을 위한 새로운 간단 방법

Fluorination has become an effective tool to optimize physicochemical properties of bioactive compounds. One of the applications of fluorine introduction ...