The authors acknowledge the following funding sources, Whittier Foundation, Harrington Foundation, National Institutes of Health and Research to Prevent Blindness.

모든 탈핵 눈은 도살장에서 얻은하고 모든 실험은 기관 바이오 안전성 법에 따라 수행되었다. <ol><li> 표면에 세포핵이 제거 된 눈을 고정합니다. 눈 주위에 여분의 조직을 통해 조직의 핀을 배치하고 스티로폼 보드로를 확보하여이 작업을 수행합니다. </li><li> 해부 및 눈에서 perilimbal 결막을 분리합니다. <ol><li> 윤부에서 결막을 절개하고 퉁명스럽게 공막 떨어져 그것을 해부 미세 집게 (0.3 집게) 및 microscissors (웨스트 코트 위)를 사용합니다. 무딘 절개가 더 해부 할 수 있도록 진행으로 윤부 따라 결막을 잘라. </li><li> 가능한 한 많은 공막을 노출 끝까지 눈 (360도)의 주위에 결막을 제거합니다. 참고 :이 절차의 나머지 부분 동안 수술 핀이나 집게로 눈에 집착 용이하게하기 위해 결막의 작은 금액을 떠나 도움이됩니다. </li></ol></li><li> 하나 따라 전체 두께 공막 편 만들기눈 (메스 블레이드 69)의 측면. <ol><li> 부드럽게 어둡게 착색 된 맥락막까지 메스 (메스 블레이드 11)과 공막으로 절단하여 윤부에 윤부 및 3mm 후방에 ~ 5mm 공막 절개 평행을 볼 수 있습니다. 맥락막 자체를 절개하지 않도록주의하십시오. </li><li> 이 부드럽게 안쪽으로 맥​​락막을 눌러이 조직 사이의 잠재적 인 공간을 확대 할 수있을 때까지 조심스럽게, (무딘 절개를 사용하여) 가위 또는 메스 중, 공막과 맥락막 사이의 평면을 따라 해부. </li><li> T 자형 절개를 작성, 날카로운 microscissors와 최초의 공막 절개에 수직 다른 공막 절개를합니다. </li><li> 그리고 퉁명스럽게 기본 맥락막에서 공막 조직을 제거하고 부드럽게 위에서 언급 한 바와 같이 공막에서 멀리 맥락막을 밀어 원주 방식으로 해부하는 것을 계속한다. </li><li> 필요에 따라 공막 편을 크게한다. <ol><li> 부드럽게 떨어져 공막에서 맥락막을 해부 무딘과정 전반에 걸쳐. </li><li> 윤부 수직 만들어진 절개 시신경 도달 절개 윤부 평행이 눈 둘레 (45)의 적어도 1/3까지 이루어 플랩을 크게한다. </li><li> 무딘 해부하는 동안 눈을 조작하기위한 지렛대의 소스로 공막 편을 사용합니다. 플랩에 반대 견인은 무딘 절개보다 쉽게​​ 만든다. </li></ol></li><li> 다른 공막 편에 이전 단계를 반복합니다. </li></ol></li><li> 맥락막의 큰 영역을 노출하는 공막 플랩을 버려야. </li><li> 눈의 둘레 (360도)의 주위에 3 단계에서 만든 절개를 계속합니다. </li><li> 나머지 맥락막 - 망막 조직을 제거합니다. <ol><li> 노출 된 지역 내에서 조심스럽게 남아있는 맥락막 - 망막 조직을 브러시면 팁을 사용합니다. 또한, 부드럽게 집게로 조직을 잡고 기본 유리체 오프를 껍질. </li><li> 필요하다면 맥락막 성으로 절개를시신경에서 arting. 그런 다음, 망막 및 유리체 피질을 노출 부드럽게 맥락막을 벗겨. </li></ol></li><li> 멀리 공막에서 맥락막을 해부 무딘 계속하고 전체 그대로 유리체를 얻기 위해 맥락막을 벗겨. </li><li> 원하는 위치에서 전체 유리체의 위치를​​ 각막에 부착 된 공막 림을 사용합니다. 이 시점에서, 유리체는 전방 및 공막 렌즈에 부착된다. </li><li> 모든 공막을 제거, 렌즈 주위 공막의 내부로부터 해부 무딘 유리체. </li><li> 필요가있을 경우 멀리 유리체에서 렌즈를 특종 무딘 도구를 사용합니다. 다양한 vitreodynamic 실험 샘플을 사용합니다. <ol><li> 공기에 노출 알려진 표면적 유리 비커에 샘플을 놓습니다. 샘플의 가장자리에 산소에 민감한 프로브를 놓습니다. 샘플로 알려진 거리 (R)에 프로브를 이동하는 마이크로 매니퓰레이터를 사용합니다. </li><li> 이론적 확산 방정식을 얻기 위해 확산의 픽의 법칙을 사용합니다. 다 함께TA는 단계 10.1에 수집 등 실험적 확산 계수 / 반응 조건을 구하는 </li></ol></li></ol>

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The authors have nothing to disclose.

조심스럽게 유리체 박리 동안 수행해야 두 가지 중요한 단계가 있습니다. 전체 두께 공막 편을 만드는 단계 3, 전체 박리에 결정적이다. 케어는 전체 두께 공막 편을 만들 때 맥락막으로 절단하지 않도록주의해야한다. 다른 중요한 단계는 맥락막에서 공막을 멀리 해부한다. 이 단계는주의 깊게 유리체가 밖으로 유출 할 수있는 맥락막에 여러 개의 구멍을 만드는 방지하기 위해 수행해야합니다. 프로토콜을 수정하고 그대로 전체 유리체 유머를 해부하는 방법이있다. 유리체 조직이 원하는 위치에 위치 된 후에 단계 8. 맥락막은 단부에서 제거 될 때까지 6 단계가 지연 될 수있다. 이 절차의 제한은 해부 동안 그대로 유리체 절제술의 성공 및 정확도를 제시하기 만 시각적 큐가 존재한다는 것이다. 유리체 코어와 피질은 육안으로 투명하고 구별하기 어려운 모두이기 때문에,이도전이 될 수 있습니다. 유리체 망막 상에의 접착 성을 몰래까지 그것은 유리체 피질의 성공적인 박리가 발생했는지 여부를 결정하는 것이 가능하다. 그렇지 않으면, 그러한 Kenalog 같은 약리학 적 물질, 유리체 (15)의 가시화를 향상시키기 위해 이용 될 수 있지만, 용이 한 유리체 피질 및 유리질 코어 사이를 구별 할 수 없다. 이 방법의 또 다른 한계는 겔의 유리체 절제술 가장 효과적이라는 것이다. 인간 유리체 겔 나이 액화 겪는 비 - 재생성 조직이다. 이 액화 완전히 눈에서 전체 그대로 유리체를 해부에서 우리를 방지 할 수 있습니다. 따라서, 우리의 기술은 그러한 소, 돼지 또는 토끼, 또는 액화 상당한 양의가없는 젊은 사람의 눈과 같은 동물의 유리체로 확장합니다. 이들 동물에서 유리체가 겔 상태에서 완전하게되는 경향이있다. 그러나, 현재, DESC왔다 확립 방법은 없다시체의 눈에서 그대로 유리체를 전체 해부에 대한 상세 ribed. 현재, 잘 선발 된 만 유리체 박리 기술은 유리체 (7)의 고유하지만 별도의 영역을 해부하거나 유리체 코어 6의 절개를 포함한다. 해부 그대로 유리체 유머 응용 프로그램을 주시면 감사에서 과소 사용된다. 유리체와 수술 경험뿐만 아니라, 임상 병리 조직 학적 및 생화학 적 연구는 유리체의 화학적 및 구조적 특성은 크게 16, 17을 변화 할 수 있음을 시사한다. 따라서, 안구는 생리 해부학 유리체의 기능을 연구하기 위해 전체 유리체의 구조를 유지하는 것이 필요하다. 본래 유리체는 실험 기간 동안 더 나은 시각화를위한 투명 글로브에 외식 할 수 있습니다. 그리고 나서 물리 / 역학적 소품의 측정을 향상시키기 위해 기계적 / 화학적 다양한 테스트에 사용될 수있는유리체 유머 erties. 예를 들어, 우리는 유리체 그대로 해부 전체가 인용 된 리올 로지 실험 6,18 식염수 점성 대체품 또는 유리질 코어 대신에 사용될 수 있음을 시사한다.

이 방법의 목적은 구체적으로 vitreodynamic 분석의 목적을 위해, 사체로부터 눈, 유리질 코어 및 피질 손상으로, 전체 그대로 유리체를 분리하는 기술이다. 유리체 생리학 분야는 유체 역학 연구원 등, 다양한 분야 연구자, 성장함에 따라, 유리체 1의 물리적, 역학적 특성을 조사하고 있습니다. 이를 위해, 그것은 세부 사항에 다양한 분야의 연구자를 지원하기 위해 전체 그대로 유리체를 분리하는 기술이 필수적이다. Sebag 등. 2 등 (3) 인간의 시체 눈에 우아한 전체 유리체 해부를 수행하고 그 결과의 그림을 보여 주었다. 그러나, 사용되는 기술은 독립적으로 복제하는 방법을 할 수 없을 것이다 디테일 비전문가에 설명되지 않았다. 다른 연구는 이러한 포부 또는 부분 절개와 같은 간단한 방법을 사용하여 시체의 눈에서 유리체 수확 한그 중 둘은 전체 그대로 유리체가 발생하지 않습니다. Gisladottis 등. 4, 쑤 외. (5)는 시체의 눈에서 수확 유리체 유머의 투과성을 조사합니다. 유리체 추출 할 수있는 방법을 설명하지 않았다 때문에, 그것은 그들이 주사기 유리체를 흡입하는 것으로 가정 하였다. 와트 등. 6은 수술 기법과 토끼 유리체 유머를 분리하는 방법을 설명함으로써 한 단계 더 갔다. 그러나,이 방법은 유리질 코어의 단리없는 유리체 피질 초래한다. Skeie 등. (7)는 고유 한 후에 4 개의 영역으로 편성 유리체 우아 분석을 위해 각각의 부분을 절개하는 방법을 설명했다. 그러나이 기술은, 전체로서 유리체 그대로 발생하지 않는다. 현재의 기술은 현재 사체의 눈을 수행하는 생물 물리학 적 실험을 용이하게하기 위해 개발되었다. 이전 방법으로 설명보브는, 1) 없음이 완전히 전체 유리체를 분리하지 않기 때문에 제한됩니다, 2) 수확 유리체 코어 피질 3) 유리체 해부학 적 구조가 유지되지 않습니다, 균질화, 또는 4) 해부 기술은 적절하게 다른 분야의 연구자들에 의해 복제에 대해 자세히 설명하지 않습니다 . 또한 공막과 맥락막, 유리체의 가시화에 의한 불투명도가 그대로 안구 제한된다. 이것은 전체 눈 안에 이루어질 수 측정의 정밀도 및 가능성을 제한한다. 또한, 유리체 주변 해부학 적 구조는 유리질의 생화학 적 및 물리적 특성의 연구를 혼동 할 수있다. 최근 몇 년 동안, 유리체 과학의 몸은 엄청나게 성장하고 전체 유리체는 개별 부품과는 다른 특성을 가지고 있다고 생각하는 이유가있다. vitreodynamics의 researc의 유리체의 물리적, 역학적, 화학적 특성을 조사에 관심이 증가하고있다이러한 약물 전달, 체내 산소 (8)과 유리체 절제술 임상 의학에서 응용 프로그램이 시간. 유리체를 조작 약리학 제제를 사용 약리 vitreodynamics는, 유리체 결과 9을 향상 시키는데 사용될 수있다. 생체 역학적 특성은 유리 체내 약물 전달 기술 10-12을 개선하는데 사용될 수있다 유리질 유체의 흐름을 모델링하는 데 사용된다. 유리체의 다양한 세그먼트의 물리적 특성은 vitreo - 망막 산소 수송 (13)을 이해하는 데 매우 중요하다. 제안 된 유리체 박리 기술은 그대로 유리체 유머의 다양한 속성을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 벤치 탑 실험이 더 나은 시각화 전체 그대로 유리체 기관에서 수행 할 수 있습니다. 요약하면, 유리체의 연구를위한 현재의 방법은 어느 적절히 설명을 생략하거나, 불완전한 절연 및 유리질 코어 피질 초래한다. 따라서, 예를 수행 할 필요가있다투명한 눈 모델 xperiments은 시체의 눈에 존재하는 유리체의 해부학을 유지하면서.

<table><tbody><tr><td>0.3 forceps</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E1793</td><td></td></tr><tr><td>Westcott Tenotomy Scissors Curved Right</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E3320 R</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Handle No. 3</td><td>VWR</td><td>25607-947</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Blade, #11, for #3 Handle</td><td>VWR</td><td>470174-844</td><td></td></tr></tbody></table>

whole vitreous humor dissection for vitreodynamic analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

프로토콜을 따르는 것은 그대로 코어와 피질 (그림 3) 성공적인 유리체 박리로 이어질 것입니다. 이 유리체 피질에 부착 망막의 잔여 부분으로부터 명백하다. 본래 전체 유리체 특정 vitreodynamic 실험을위한 여러 가지 방법으로 사용될 수있다. 우리의 경우에는, 확산 유리체 그대로 산소의 속도와 그 대응하는 시간 상수 (도 2)의 조사 하였다. 우리의 방법을 사용하여 (코어 및 Cortex) 해부 하였다 유리체는 공지 된 노출 표면적을 갖는 유리 비이커에 넣었다. 이것은 단지 유리체 코어 6를 분리 이전에 발행 된 방법을 사용하여 수확 유리체에 비교 하였다. 다른 모든 요소는 실험 및 제어 그룹에서 일관성 유지했다. 유리질 표면은 공지 된 산소 장력 (~ 160 mmHg로)이 공기에 노출시켰다. 유리체 내의 산소 장력이 낮은 (&lt;10 mmHg로)이었다. vitr의 비율을 바탕으로겔 상태의 유리체에 대한 의해 풍수 등. (14) 결정 eous 산소 소비, 우리는 (정상 또는 비정상 상태의 형태) 1 차원 산소 수송 방정식을 사용할 수 있습니다. 산소 텐션 유리질 표면 내의 알려진 거리를 측정함으로써, 우리는 실험적으로 확산 계수의 유효성을 검사 할 수있다. 산소 장력 등 옥스포드 같은 산소 프로브로 기록하고, 에러율이 ± 10 %이었다. 샘플은 매 30 초를 수집 하였다. 유리체 피질의 존재는 중간 유리체 내로 산소의 확산 속도에 영향을 미친다. 유리체 피질의 존재하에 산소의 확산이 더 긴 시간 간격 동안 발생한다. 유리질 코어 및 피질의 물성 건강과 질환에 영향을 미친다. 예를 들어, 국소, 안구 내 보충 산소는 망막 허혈 8 치료제로서 제안되었다. 유리체 피질을 통해 산소에 대한 서로 다른 확산 계수를 이해코어는 망막에 산소 전달의 실제 비율을 예측하는 연구를 가능하게 할 것이다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52759/52759fig1.jpg" /> 그림 1 :. 관련 해부학 적 구조를 표시하는 눈의 단면도 (국립 안과 연구소, 국립 보건원에서 수정) 각막은 대부분 눈의 부분을 전방을 형성하고 눈의 광학의 상당 부분을 제공하는 투명한 조직이다 힘. 윤부는 각막, 결막 및 공막의 교차점이다. 공막은 시신경을 충족 눈의 후방 측면에 가장 윤부로부터 연장된다. 결막은 그 라인의 눈의 외부 매우 얇은 상피이고 외부 환경과 공막 사이의 경계를 형성한다. 눈의 내부 구성 요소는 전방, 렌즈, 홍채, 모양체, 후방 실, 후방 캐비티, 망막 및 맥락막으로 구성되어 있습니다. vitreouS 코어는 눈의 후방 캐비티 내 유리체의 중앙 영역을 포함한다. 유리체 피질은 유리체의 주위에 위치하며, 시신경 유두와 망막의 황반, 유리체 망막 혈관을 포함하여 여러 지점에서 망막에 부착된다. 유리체베이스는 오라 세라에 3mm의 후방에 오라 세라 2 ~에서 밀리 전방를 확장하는 세 가지 차원의 영역입니다. 맥락막은 망막과 공막 사이에 위치하며 외측 망막에 혈액을 공급하는 혈관 조직 층이다. 망막은 눈의 광 송신 용량 subserves 눈의 감각 신경 층이다. 공막은 안구 벽에 구조 지원의 대부분을 제공하는 흰색 불투명 한 층이다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52759/52759fig2.jpg" /> 그림 2 :. 그대로 전체 V에 비해 유리체 코어 (녹색 선)에서 산소 긴장의 시간에 대한 유리체 유머 산소 장력의 플롯 플롯itreous (파란 선). 산소 검출 프로브는 시료의 중앙에 위치시키고, 샘플을 160 mmHg로의 산소 장력이 공기에 노출시켰다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52759/52759fig3.jpg" /> 그림 3 : 절연 전체 유리체의 예. 위쪽 그림은 여전히​​ 공막 림에 부착 유리체 그대로 전체의 일례이다. 중간 그림은 공막하지 않고 있지만, 일부 남아있는 망막 조직과 전체 그대로 유리체의 예입니다. 아래는 전체 그대로 유리체의 예입니다.

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Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.4K 조회수.  University of Southern California. The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

비디오: Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions between vitreous substructures and the retina underlie several vitreoretinal diseases, including retinal tear and detachment, macular pucker, macular hole, age-related macular degeneration, vitreomacular traction, proliferative vitreoretinopathy, proliferative diabetic retinopathy, and inherited vitreoretinopathies. 1,2 The molecular composition of the vitreous substructures is not known. Since the vitreous body is transparent with limited surgical access, it has been difficult to study its substructures at the molecular level. We developed a method to separate and preserve these tissues for proteomic and biochemical analysis. The dissection technique in this experimental video shows how to isolate vitreous base, anterior hyaloid, vitreous core, and vitreous cortex from postmortem human eyes. One-dimensional SDS-PAGE analyses of each vitreous component showed that our dissection technique resulted in four unique protein profiles corresponding to each substructure of the human vitreous body. Identification of differentially compartmentalized proteins will reveal candidate molecules underlying various vitreoretinal diseases.

This video shows an effective technique for differentiating and dissecting the various semi-transparent structures of the human vitreous body in post mortem eyes.

Proteomic 분석을위한 인적 유리 바디 요소의 해부

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

연구

의학

cell-free DNA를 이용한 유리체 망막 림프종 진단

Cell-Free DNA Extraction of Vitreous and Aqueous Humor Specimens for Diagnosis and Monitoring of Vitreoretinal Lymphoma

Vitreoretinal lymphoma (VRL) represents an aggressive lymphoma, often categorized as primary central nervous system diffuse large B-cell lymphoma. To diagnose VRL, specimens such as vitreous humor and, more recently, aqueous humor are collected. Diagnostic testing for VRL on these specimens includes cytology, flow cytometry, and molecular testing. However, both cytopathology and flow cytometry, along with molecular testing using cellular DNA, necessitate intact whole cells. The challenge lies in the fact that vitreous and aqueous humor typically have low cellularity, and many cells get destroyed during collection, storage, and processing. Moreover, these specimens pose additional difficulties for molecular testing due to the high viscosity of vitreous humor and the low volume of both vitreous and aqueous humor. This study proposes a method for extracting cell-free DNA from vitreous and aqueous specimens. This approach complements the extraction of cellular DNA or allows the cellular component of these specimens to be utilized for other diagnostic methods, including cytology and flow cytometry.

저자 스포트라이트: 유리체액에서 Cell-Free DNA 추출을 사용한 VRL 진단 발전 

A procedure to extract cell-free DNA from vitreous and aqueous humor to perform molecular studies for diagnosing vitreoretinal lymphoma is established here. The method offers the ability to concurrently extract DNA from the cellular component of the sample or to reserve it for ancillary testing.

유리체 망막 림프종의 진단 및 모니터링을 위한 유리체 및 수성 체액 검체의 Cell-Free DNA 추출

Vitreoretinal lymphoma (VRL) represents an aggressive lymphoma, often categorized as primary central nervous system diffuse large B-cell lymphoma. To ...

암 연구학

Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is a highly aqueous extracellular matrix overlying the retina where intraocular as well as extraocular proteins accumulate during disease.1-3 Abnormal interactions between vitreous and retina underlie several diseases such as retinal detachment, proliferative diabetic retinopathy, uveitis, and proliferative vitreoretinopathy.1,4 The relative mouse vitreous volume is significantly smaller than the human vitreous (Figure 1), since the mouse lens occupies nearly 75% of its eye.5 This has made biochemical studies of mouse vitreous challenging. In this video article, we present a technique to dissect and isolate the mouse vitreous from the retina, which will allow use of transgenic mouse models to more clearly define the role of this extracellular matrix in the development of vitreoretinal diseases.

The dissection technique illustrates evisceration of the vitreous, retina, and lens from the mouse eye, separation by centrifugation, and characterization with protein assays.

Proteomic 분석을위한 마우스 유리체 및 망막의 내장 적출

While the mouse retina has emerged as an important genetic model for inherited retinal disease, the mouse vitreous remains to be explored. The vitreous is ...

생물학

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

토끼의 망막 수술에 대한 단계 프로토콜에 의해 단계

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Microsurgical Dissection and Tissue Clearing for High Resolution Intact Whole Retina and Vitreous Imaging

Neuronal and vascular structures of the retina in physiologic and pathologic conditions can be better visualized and characterized by using intact whole retina imaging techniques compared to conventional retinal flat mount preparations and sections. However, immunofluorescent imaging of intact whole retina is hindered by the opaque coatings of the eyeball, i.e., sclera, choroid, and retinal pigment epithelium (RPE) and the light scattering properties of retinal layers that prevent full thickness high resolution optical imaging. Chemical bleaching of the pigmented layers and tissue clearing protocols have been described to address these obstacles; however, currently described methods are not suitable for imaging endogenous fluorescent molecules such as green fluorescent protein (GFP) in intact whole retina. Other approaches bypassed this limitation by surgical removal of pigmented layers and the anterior segment of the eyeball allowing intact eye imaging, though the peripheral retina and hyaloid structures were disrupted. Presented here is an intact whole retina and vitreous immunofluorescent imaging protocol that combines surgical dissection of the sclera/choroid/retina pigment epithelium (RPE) layers with a modified tissue clearing method and light sheet fluorescent microscopy (LSFM). The new approach offers an unprecedented view of&#160;unperturbed vascular and neuronal elements of the retina as well as the vitreous and hyaloid vascular system in pathologic conditions.

<meta charset="utf8"></head><body>고해상도의 온전한 전체 망막 및 유리체 이미징을 위한 Microsurgical Dissection and Tissue Clearing

Presented here is a protocol for intact whole retina imaging in which the outer opaque/pigmented layers of the eyeball are surgically removed, and optical clearing is applied to render retina transparent enabling the visualization of the peripheral retina and hyaloid vasculature in intact retina using light sheet fluorescent microscopy.

고해상도의 온전한 전체 망막 및 유리체 이미징을 위한 Microsurgical Dissection and Tissue Clearing

Neuronal and vascular structures of the retina in physiologic and pathologic conditions can be better visualized and characterized by using intact whole ...

신경과학

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic nerve and retinal ganglion cell (RGC) degeneration, resulting in visual dysfunction by interrupting the transmission of visual information from the eye to the brain. Elevated intraocular pressure is the most important risk factor; thus, several models of ocular hypertension have been developed in rodents by either genetic or experimental approaches to investigate the causes and effects of the disease. Among those, some limitations have been reported such as surgical invasiveness, inadequate functional assessment, requirement of extensive training, and highly variable extension of retinal damage. The present work characterizes a simple, low-cost, and efficient method to induce ocular hypertension in rodents, based on low-temperature, full-circle cauterization of the limbal vascular plexus, a major component of aqueous humor drainage. The new model provides a technically easy, noninvasive, and reproducible subacute ocular hypertension, associated with progressive RGC and optic nerve degeneration, and a unique post-operative clinical recovery rate that allows in vivo functional studies by both electrophysiological and behavioral methods.

The goal of this protocol is to characterize a novel model of glaucomatous neurodegeneration based on 360&#176; thermic cauterization of limbal vascular plexus, inducing subacute ocular hypertension.

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

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유리체 망막 림프종의 진단 및 모니터링을 위한 유리체 및 수성 체액 검체의 Cell-Free DNA 추출

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고해상도의 온전한 전체 망막 및 유리체 이미징을 위한 Microsurgical Dissection and Tissue Clearing

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