authors gratefully acknowledge funding support from the Molly Towell Perinatal Research Foundation, Canadian Institutes of Health Research (CIHR), and Fonds de Recherche du Qu&#233;bec &#8211; Sant&#233; (FRQS) (to MGF) and CIHR-Quebec Training Network in Perinatal Research (QTNPR) (to LDD).
The authors wish to thank Esther Simard, Marco Bosa, Carl Bernard and Carmen Movila for technical assistance.

동물 케어 동물 관리에 캐나다위원회 및 동물 관리에 몬트리올 대학교 협의회 (프로토콜 # 10 RECH-1560)의 승인의 지침을 따랐다. 사용 된 재료 및 방법에 대한 상세한 정보는 표 1에 제공된다. 1. 마취 <ol><li> 경정맥에 단일 루멘 카테터를 삽입합니다. </li><li> 침착 에웨어 사용 아세 프로 마진 (Atravet 10 ㎎ / ㎖) 2 ㎎을 정맥 내로 약 30 분 차례로 코르티솔의 수준을 감소시키는 절차와 관련된 스트레스를 감소시키기 위해 마취 유도에 앞서. </li><li> 다이아 제팜를 관리 (다이아 제팜 5 ㎎ / ㎖) 20 ㎎, 케타민 (Ketalar 100 ㎎ / ㎖) 4 ~ 5 ㎎ / ㎏과 프로포폴은 (포폴 10 ㎎ / ㎖) 0.5 mg을 1 / kg을 정맥 전신 마취를 유도합니다. </li><li> 위스콘신 형 블레이드 후두경을 사용하여기도에기도 교환 카테터를 삽입 삽관에 도움 (매우 긴 350mm 블레이드 왼손잡이). 기도 교환 카테터 오프 및 기관에 실리콘 기관 내 튜브 (9~12mm 내경)을 밀어 넣습니다. 이 기법은 삽관 처리를 용이하게한다. 기관지의 압력 - 유도 궤양을 방지하고 에웨어의 헤드 튜브를 흥분시키는 신중 기관 내 튜브의 커프를 팽창. </li><li> 마취 기계의 호흡 회로에 기관 내 튜브를 연결하고 즉시 기계 환기를 시작합니다. 35-45 mmHg로 정상 범위 내에서 P CO 2를 유지하기 위해 인공 호흡기 설정을 조정합니다. </li><li> (;에서 1.16 [0.9 X 25mm] [1.1 × 30mm] 1 22 G 20)과 직접 동맥 혈압을 모니터링하는 비 호환 튜브에 연결 귀의 동맥에 카테터를 삽입합니다. </li><li> 심전도, 직접 동맥 혈압, 산소 포화도 (SPO 2), 호 기말 이산화탄소 분압을 기록하는 다중 파라미터 생리 모니터를 사용하여 (P ET의 CO 2), 및 온도 5 분마다. 모든 산도로 이동중앙 생리적 데이터 수집 컴퓨터에 시리얼 케이블을 통해 ysiologic 데이터. 순환 담요를 사용하여 정상 체온을 유지한다. </li><li> 전신 마취의 첫 번째 시간 동안 10 ㎖ / ㎏에서 균형 잡힌 폴리 이온 성 솔루션을 관리하고 다음 5 ㎖ / ㎏ / 시간을 줄일 수 있습니다. </li><li> 바로 전에 예방 적 항생제로 피부 절개에 에웨어에 trimethoprim을-sulfadoxine 5 ㎎ / ㎏ 4를 관리. </li><li> 에웨어 및 태아의 모든 수술 조작과 표준 무균 기술을 사용합니다. </li><li> 배리어 간호사 항상 암양. 이것은 또한 비수술 인원을 포함한다. 이. 예를 들어, Coxiella burnetii에 대한 enzootic 가능성을 최소화 항상 장갑과 마스크 (N-95 형)를 사용합니다. </li></ol> 수술 2. 개요 <ol><li> 복부 근육 손상을 최소화하기 위해 원격 교육 알바를 통해 유방에 바로 두개골 하부 복부 벽을 통해 20cm의 중간 선 절개를합니다. <ol><li> R두개쪽으로 큰 대망을 etract과 자궁 뿔 수동으로 촉지된다. 태아 및 크기의 수를 알아 차리지 호온의 선단에 자궁의 몸체로부터 각 뿔을 촉진하다. 이상의 태아가 있다면, 수동으로 헤드 크기와 궤도 사이의 폭을 평가하여 태아를 더 선택한다. </li><li> 단단히 부분적으로 표면화 자궁을 통해 선택한 태아의 머리를 잡아. Metzenbaum 가위와 큰 곡률에 10cm의 hysterotomy을 수행합니다. 머리 바로이 손 것처럼 멸균 식염수로 채워진 비 라텍스 멸균 수술 장갑을 넣어. 또한, 촉촉한 태아의 머리를 유지하는 가습의 4x4s를 사용합니다. 복부 벽에 자궁을 고정합니다. <ol><li> 오른쪽과 왼쪽 흉부 사지를 외면 화하다하고 xyphoid 프로세스에 자궁까지 밖으로 부드럽게 태아를 잡아 당깁니다. </li></ol></li><li> 표준 컷 다운 기술을 사용하여 폴리 비닐 오른쪽과 왼쪽 상완 정맥 카테터 및 동맥을 삽입합니다. anoth 삽입태아의 흉골에 그 &#39;끝을 집착하여 양수 공동으로 어 폴리 비닐 카테터. <ol><li> 멸균 카테터 만 사용하십시오. 우리는 표준 시설에서 가스 멸균을 권장합니다. 나중에 혈액 샘플링 또는 압력 모니터링 할 수 있도록 이중 마개에 바늘 각 카테터와 바늘을 연결합니다. </li></ol></li><li> 흉골, 칼 모양의 공정과 심전도를 모니터링하기위한 숄더 (ECG)의 각 지점에 스테인레스 전극 봉합사. </li><li> 자궁에 태아를 돌려줍니다. 왼쪽 측면에있는 작은 자상 절개를 통해 모든 카테터 및 전극을 종료합니다. </li><li> 3 층 폐쇄를 사용하여 개복술 절개를 닫습니다. 간단한 연속 방식으로 합성 흡수성 모노 필라멘트 봉합사 USP 2 복벽을 봉합. 간단한 연속 방식으로 합성 흡수성 꼰 봉합 USP 0 피하 공간을 닫습니다. 피부 절개를 닫 수술 스테인레스 스틸 스테이플을 사용합니다. </li></ol></li><lI&gt; 수술의 자세한 설명 <ol><li> 4 % 클로르헥시딘 글루코 네이트, 3 분 동안 부드러운 브러시로 깨끗이 한 다음 블레이드 # 40 깨끗하고 각 측면에 측면의 배 유선과 함께 복부 복부를 xyphoid 과정을 도용하여 양모를 제거합니다. <ol><li> 클로르헥시딘 글루코 네이트 4 %가 복부의 중심에서 시작하여 3 분 동안 원심 방식으로 진행와 표준 살균 스크럽을 수행합니다. 살균제 비누를 제거하기 위해 복부에 멸균 생리 식염수를 붓는다. 수술 준비의 마지막 단계를 들어, 클로르헥시딘 글루코 네이트 용액 2 % 이소 프로필 알코올 70 %의 세 가지 다른 통로를 수행합니다. </li></ol></li><li> 마취의 깊이가 절개하기 전에 적절한 확인하십시오. 복부 근육 손상을 최소화하기 위해 원격 교육 알바를 통해 유방에 바로 뇌에 배꼽에서 표준 개복술 절개를합니다. </li><li> 왼쪽 복부 벽까지 함께 복부에 긴 스폰지 집게를 삽입paracostal 지역에서 카테터에 대한 계획 출구 사이트에 게시합니다. <ol><li> 그것을 찾아 해당 사이트를 확인할 수 있습니다 조수 때까지 벽에 집게의 끝을 밀어 넣습니다. 약간 (1cm)을 열고 집게의 턱과 조수가 2cm에게 전체 두께 자상 절개를 할 수 있습니다. </li><li> , 절개를 통해 포셉의 팁을 외면 화하다 다시 열고 부드럽게 마지막으로 복부 복부 절개를 통해 복부에서 철수하는 집게와 카테터를 파악. 참고로, 일부 그룹은 카테터를 이식 한 후 그들을 외면 화하다. 이것은 intrasurgical 태아 ECG 모니터링은 불가능하다는 단점이있다. </li></ol></li><li> 태아의 위치와 수를 결정하기 위해 자궁을 만져. 간 청각 거리를 사용하여 최대의 태아를 결정합니다. 자엽을 피하고, 헤드의 배부 위에 큰 곡률에 자궁벽 절개. <ol><li> 오전를 얻기 위해 태반 막을 통해 무딘 종단 캐뉼라를 삽입출혈이없는 niotic 유체 샘플. 가위를 사용하여 태반 막을 절개. </li></ol></li><li> 이 절개를 통해 태아의 두개골 절반을 외면 화하다. 정상 체온을 유지하는 데 도움이 태아의 머리에 37 ° C에서 멸균 식염수로 채워진 멸균 비 라텍스 수술 장갑을 놓습니다. <ol><li> 자궁에서의 태아 상체의 제거시, 조수 양수의 손실을 방지하기 위해 최대의 뱁콕을 길게 가지고있다. 그리고, 다시 브콕 겸자를 사용하여, 양수와 복부 오염을 방지하기 위해 피부에 막 태아 및 자궁 벽 클램프. </li><li> 계측 및 자궁 내부 나머지 부분을 각각 유지하거나, (37 ° C) 촉촉한 따뜻한 멸균 천에 의해 커버 될 필요가 태아의 몸체 부분을 노출. </li></ol></li><li> 상완 동맥에 노출을 촉진하고 양자 정맥 양쪽 흉부 사지를 납치. antebrachium 및 관리 모두의 내측면을 따라 절개완전히 상완 동맥과 정맥 주위 해부. </li><li> 오른쪽과 왼쪽 상완 동맥과 표준 컷 다운 기술을 사용하여 정맥 왼쪽 상완에 폴리 비닐 카테터를 삽입합니다. <ol><li> 용기를 해제하는 1cm 이상 인접 조직에서 카테터합니다. 꼰 합성 흡수성 봉합 USP 2-0과 용기의 선단부를 결찰. 선박의 근위 측면에서 합자를 Preplace하지만 비구 속성을 유지합니다. <ol><li> Castroviejo 가위를 사용하여, 직경의 약 30 %에 횡 방향으로 배를 잘라. 부분적으로 근위 봉합 당겨 혈액의 흐름을 중지합니다. 근위 방향으로 카테터를 삽입합니다. </li></ol></li><li> 8cm 근위 또는 저항이 감지 된 후 약간 철수 할 때까지의 폴리 비닐 카테터 최대를 삽입합니다. 시간적 혈관 클램프를 사용하여 카테터의 근위 측면을 고정. 근위 및 카테터의 말단 측면 모두 주위에 또 다른 봉합사를 놓습니다. 조수는 지속적으로 ASP입니다irating과 카테터의 개방성을 보장하기 위해 카테터를 플러싱. </li><li> 연속 봉합 패턴, USP 2-0 꼰 합성 흡수성 봉합사를 사용하여 태아의 피부를 닫습니다. </li></ol></li><li> 좌우의 어깨, 흉골 및 xyphoid 처리로, 태아의 ECG 모니터링을 용이하게하기 위해 절연 스테인리스 전극을 흥분시키는. </li><li> 흉골에 양수 압력 및 샘플링 카테터를 봉합. 이 카테터의 말단에 유창합니다. </li><li> USP 2-0 꼰 합성 흡수성 봉합사를 이용하여 태아의 등쪽에 모든 카테터를 고정. </li><li> 다시 자궁에 태아의 교체 이전에, 저혈압을 방지하고 자궁 휴식을 체험 할 수 있도록 천천히 15 분 클렌 부 테롤 30 μg의 4를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 연속 패턴 USP 4-0 꼰 합성 흡수성 봉합사를 사용하여 봉합 태아 막. 클로 한 번에 하나의 카테터 또는 전극을 통합URE는 꽉 폐쇄를 보장합니다. USP 0 꼰 합성 흡수성 봉합사를 이용하여 자궁 근육층을 닫 Halsted 원리를 존중 이중층 쿠싱 패턴을 사용한다. 신중하게 수술 매듭을 묻어. </li><li> 그들은 좌측 paracostal 절개를 종료로 지갑 문자열 봉합 패턴을 사용하여, 모든 카테터 및 ECG 케이블을 고정. </li><li> USP 2 단 섬유 합성 흡수성 봉합사를 사용하여 연속 패턴 LINEA 알바 확보. USP 2-0 연속 패턴으로 합성 흡수성 봉합사 꼰 사용하여 피하 조직을 닫습니다. 수술 스테이플 스킨 층을 고정합니다. </li><li> 양수 공동으로 양수 카테터를 통해 정맥으로 다시 암피실린 250 mg의 관리합니다. 따뜻한 식염수 손실 양수 유체를 교체합니다. </li><li> 불임을 유지하기 위해 장소 가방에 모든 표면화 카테터 및 심전도 전극을 배치합니다. 모든 카테터를 고정 에웨어의 몸통 주위 메리야스 배치에웨어의 몸에 D 전극. </li><li> 전신 마취를 중지하고 후두 반사가 정상으로 돌아온 후에 에웨어을 extubate. </li><li> 그녀는 전신 마취 다음 안정되면 신진 대사 케이지에 에웨어를 돌려줍니다. 웨어 실험 기간 동안 신진 대사 케이지에있는 것입니다. 웨어, 서 누워와 어머니를 진정 작용하지 않고 비 마취 태아를 모니터링하면서 무제한 광고 식사를 할 수 있어야한다. </li><li> 다음과 같은 세 가지 일 동안, 예방 에웨어 (트리 메소 프림의 sulfadoxine 5 ㎎ / ㎏) 및 태아 (양수 카테터를 통해 정맥으로 다시 암피실린 250 mg)를에 항생제를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 에웨어 및 태아가 모두 혈액 가스 분석을 이용하는 대사 상태를 평가한다. </li><li> 가능한 헤파린 식염수의 최소 볼륨 모든 카테터를 플래시합니다. 주의 - 태아에 허용 헤파린과 유체의 일일 복용량을 초과하지 마십시오. 유체가 태아 과부하로이 가능합니다. 세척 천천히 한 번예방 적 항생제 후 한 줄에 하루 ~ 5 ㎖의 염화나트륨. </li></ol></li><li> 데이터 기록 및 분석 <ol><li> 수술하는 동안, 임의로 모체와 태아 ECG 및 심장 속도뿐만 아니라, 모체 동맥압 및기도 압 (발) 연속적으로 (도 1)를 기록한다. 심전도를 제외한 모든 어머니의 데이터를 수집하기 위해 생명 창 모니터를 사용합니다. 태아와 산모의 ECG 신호와 함께 아날로그 - 디지털 컨버터에 이러한 데이터 피드; 1901 프리 앰프에 처음으로 산모와 태아의 심전도를 전달합니다. 기록은 제조업체의 소프트웨어에있는 모든 데이터를 표시합니다. </li><li> (바로 첫 번째 동맥 카테터를 삽입 한 후)와 자궁을 닫은 후 태아 수술의 시작에서 동맥혈 가스 분석, 젖산, 포도당 에웨어 및 태아에서 동시에 1 ML의 동맥 샘플을 가지고 (플라즈마)를 초과하는 결정을 기반으로 . </li><li> 수술 후 회복 동안, IL-6 및 TNF-α의 inflamm를 측정하는 3 ㎖ 태아 혈액 샘플을 채취atory 프로필. 원심 분리기 4 ° C에서 플라즈마 (4 분, 4,000 XG), 가만히 따르다 이후 ELISA 테스트를 위해 -80 ° C에서 플라즈마를 저장합니다. 주 : 대표적인 결과보고의 목적을 위해 엿새 수술 후 동물을 20 mL의 나트륨 펜토 바르 비탈의 정맥 내 주사를 사용하여 희생시켰다. 태아의 성장은 몸, 뇌, 간, 산모의 무게에 의해 평가 하였다. 실험 기간의 기간은 분명 특정 연구 문제에 대해 선택된 디자인에 따라 달라집니다 및 ~ 6 주에 도달 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 사이토 카인 분석 (선택 단계) <ol><li> 특정 양의 샌드위치 ELISA를 사용하여 혈장 중의 사이토 카인 농도 (IL-6, TNF-α)를 결정한다. 농도 전 코트 마우스 항 양의 단일 클론 항체 (포획 항체가 IL-6) 또는 마우스 항 - 소 모노클로 날 항체 (TNF-α) O / N 4 ℃에서 ELISA 플레이트에 4 μg의은 / ㎖, 3 회 후 세척 버퍼 (PBS에서 0.05 % 트윈 20, PBST)로 씻는다. </li><li>PBST에서 1 % BSA 1 시간 동안 판을 차단합니다. 세척 버퍼로 3 회 접시를 씻으십시오. </li><li> 직렬 희석 표준 7 31.25의 PG / ㎖ 표준 1 2,000 ng를 / ㎖ 범위 준비, ELISA 표준으로 재조합 양의 단백질 (IL-6, TNF-α)를 사용합니다. </li><li> 로드 (50) 시리얼 희석 단백질 표준과 잘 당 샘플의 μL하고, 실온에서 2 시간 동안 배양 접시 3 회 반복한다. 중복의 모든 표준 및 샘플을 실행합니다. </li><li> 하나의 희석 된 토끼 항 - 양 폴리 클로 날 항체 50 μL (검출 항체가 IL-6) 또는 토끼 항 소 클론 항체 (TNF-α)를 적용 웰 (250) 및 RT에서 30 분 동안 배양한다. 세척 완충액으로 5 회 접시를 씻으십시오. </li><li> 30 분 : IgG를-HRP가 결합 된 염소 항 - 토끼 (5,000 희석 1)의 50 μl를 추가합니다. </li><li> 웰 당 TMB 기질 용액 50 μL와 함께 배양한다. </li><li> 2 N 황산 25 ㎕를 원하는 시간으로 발색 반응을 정지. </li><li> PL 읽기570 nm 파장 보정 450 nm에서 ELISA 플레이트 리더에 ATES. 주 : 우리의 분석에서, IL-6 ELISA의 민감도는 16 pg / ml이다의 감도이었다 TNF-α ELISA 각각 13.9 pg / ml이다이었다. 모든 분석을 위해, 분산의 인트라 분석 및 분석 간 계수는 각각 &lt;5 % &lt;10 %이었다. </li></ol></li><li> 통계 분석 참고 : 정확한 통계 방법은 연구 문제에 따라 달라집니다. 여기서 우리는 표 2에보고 된 혈액 가스에 현저한 차이를 검사하는 데 사용되는 방법을보고한다. <ol><li> 적절한 다중 비교에 대한 조정과 파라 메트릭 또는 비 파라 메트릭 테스트 다음 콜 모고 로프 - 스 미르 노프 테스트를 사용하여 일반적인 데이터 분포를 테스트합니다. </li><li> 를 사용하여 각각의 PO 2, O 2 토 값을 자발적으로 저산소했다 코호트에서 태아를 확인하고 결정하기 위해 클러스터 분석을 K는-의미 (PO 2 &lt;20 mmHg로 고려 또는 죽은 태아와 같은 O 2 (토) &lt;55 %L 저산소증). 44-48 </li><li> 분석을 위해 이러한 SPSS로 통계 소프트웨어를 사용합니다. </li><li> 유의 수준 P &lt;0.05에서 통계적 차이 평균 ± 표준 편차로 현재 데이터. </li></ol></li></ol>

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만성 계측 비 마취 태아 양 : 마취 및 수술 절차는 태아의 생리 및 병태 생리 연구를위한 동물 모델을 확립 필요가되게됩니다. 프로토콜 내에서 네 가지 중요한 단계가 강조되어야한다. 우선, 모체 플랭크를 통해 카테터 및 전극을 통과 : 이것이 내부 장기 손상을 방지하기 위해 한 번 수행하는 것이 중요하다. 둘째, 태아 exteriorizing 이전 uterotomy 운영 사이트 고정이 방지하거나 양수 및 자궁 폐쇄하기 전 양막의 후속 봉합의 손실을 최소화하기 위해 중요하다. 셋째, 동맥 카테터 : 태아 양 동맥은 약 1-2 mm 직경과 경험이 풍부한 외과 의사에 대한 카테 테르를 꽂다하기 때문에 어렵지 않다; 두 외과 의사의 팀은 프로 시저의 전체 길이를 최소화하기 위해 시간을 절약하는 데 도움이 작업에서 최고의 빠른 수행한다. 넷째,주의 초uring 전에 양막에 태아를 반환하고 자궁을 폐쇄에 양수 공동의 모든 카테터 및 전극의 조직이 실수로 카테터의 잡아 당기거나 때문에 수술 후 산모 또는 태아의 움직임에 심전도 전극의 찢어지지 않도록하는 데 도움이됩니다. 대신에 여기에 제시된 방법의 상완 혈관, 경동맥을 카테 테르를 꽂다하거나 대퇴 용기가 또한 사용될 수있다. 선택은 다시 연구 설계에 의해 결정됩니다 전체 계측 방법에 따라 달라집니다. 우리는 태아가 자궁 밖에 소요 시간을 최소화하고, 태아가 자궁 밖에서 계측 할 필요가 남아있는 정도를 최소화하도록 권장한다. 이러한 고려 사항은 제시된 &quot;최소한의 접근 방식&quot;에서 계측 된 혈관의 선택되었다. 우리는 t에 걸쳐 상호 간섭없이 동맥 혈압 모니터링 및 동맥혈 샘플링 있도록 양측 동맥 catheterizing 권장그는 실험. 추가 장점이 방법이 소개 페일 세이프 (fail-safe) 중복입니다 경우에 한 동맥은 실험 기간 동안 차단됩니까, 샘플링 및 압력 모니터링은 혈액 샘플링이 완료되면 모니터링을 중단의 단점과 같은 용기에서 가능하다. 이러한 동물 모델의 넓은 적응 배제 세 한계가있다. 이러한 제한은 아래 제시 몇몇 변형에 의해 해결 될 수있다. 첫째, 생물 안전도 일부 지역에서 2 confinements에 대한 요구 사항입니다. 이 약해진 면역 체계와 인간의 임신 양에서 Coxiella burnetii 감염의 위험 때문이다. 49,50 예방 접종은 51, 52 및 PCR 검사가 더 있는지 확인하지 위해 할 수있는 이러한 위험을 감소시키기 위해 동물과 노출 된 인간이 사용할 수 있습니다 양 동물 농장에서 연구 시설에 전달됩니다. 솔루션은 다중 PCR 검사와 동물의 예방 접종을 결합 할 수 있습니다이전의 번식을 수행 질 면봉에서 농장에서의 수술 중 양수에서 배달 전에 다음 다시 시작합니다. 그것은 다른 사람에 같은주의 사항으로, 일부 지역의 연구에서 양의 사용은 제한되지 않는다. 둘째, 동물 당 비용, 하위 4 자릿수 범위 일부 녹아웃 생쥐 균주에 필적한다. 이 수집 될 수있는 데이터의 방대한 양에 관한 염두에두고 있지만, 각각의 태아 양 실험에서 정보 이득은 비 - 인간 영장류에만 비교 인간 인해 요청 될 수 질문 및 번역의 전위 양의 장기의 발달의 타이밍. 셋째, 만 년에서 특정 시간 동안 번식과 동물의 가용성의 문제가 있습니다. 심지어 호르몬 치료 등 임신 속도와 양 (태아)의 활력 같은 양의 재생의 결과는 자연 번식 계절 주위 만족스러운 몇 개월입니다. (53) 따라서, 실험알 스케줄링은 가을과 봄 계절로 나누어 년과 신중한 계획이 필요합니다. 용액에 11 월 9 월과 4 월에 6 월 실험 &#39;양의 계절&#39;을 수립 할 수있다. 각 실험 시간 시즌 동안 수집 많은 데이터를 분석하는 것은 허용하는 방법이 문제는 또한 장점이다. 기존 방법에 대하여 중요도에 기여 요인이있다. 제시된 형태 학적, 심혈관 및 혈액 가스 데이터 54, 55 종에 대한 범위 내에 있었고, 인간 종 (56)의 것과, 이러한 동물 모델의 주요 이점을 닮은. 한 가지 예외는 있지만. 인간의 자매 결연에 비해 57이 여러 임신의 높은 비율입니다 중요한 생물 의학 작업을 태아의 발달에 자매 결연의 효과입니다 공부로, 또한 모델의 미덕입니다. 게시물의 55,58,59 매우 낮은 수준 IL-6 및 TNF-α를 ELISA를 측정하여 염증 -operative산 - 염기 상태의 회복과 함께 태아 수술 장비가 잘 용납하고, 72 시간의 수술 후 회복 기간 전에 실험을 시작하기에 태아 양의 안정적인 기본 조건을 보장하기에 적절하다 나타냅니다. 단기적 태아 양의 자발적인 중간 만성 저산소증의 높은 비율은 예를 들어, IUGR 및 염증 등의 산기 모욕, 그리고 태아의 주 산기 개발에 대한 인간의 산전 저산소증과 염증의 만성 효과를 공부 그들에게 흥미있는 모델을 렌더링 급성 질식. 60,61,62 여러 IUGR 양 모델은 예를 들어, 몇몇 일부는 태반 색전술하여 유도 자발 저산소증에 의존하고, 사용된다. 16,63-66 한편이 심한 저산소증 전에 월 실험 시작 또한 여기에 만성적 인 저산소증의 반응이 태아, 예를 들면은, 심혈관 또는 중추 신경 시스템이 연구되어야하는 경우 제외 기준이 될다시 정상 산소 자들 다르게 공지. (60)의 또 다른 중요한 응용은 산후 태아 발달에 태아 모체 스트레스에 미치는 영향에 관한 연구이다. 5,67를 마지막으로,이 모델 수많은 인용 된 공보에 볼 수있는 바와 같이, 태아 계측 할 태아 개발의 단기 연구 - DGA 중순 임신에 해당하는 70-135 어디서나 ~에서 재태 연령의 넓은 범위에 걸쳐 이루어질 수. 전진 주수, 적 복잡성을 증가시키는 계기가 가능하지만, 수술 용 인스트루먼트의 필요 시간의 고려 같은 태아에서 다변량 녹화 번호를 획득 할 필요성 비교 검토한다. 제시된 기술의 매우 유망한 미래 응용 프로그램의 수는 양 - 특정 분자 생물학 시약 및 최근 양 게놈 시퀀싱의 계속 성장하는 번호에서 파생됩니다. 이러한 최근의 발전은 더이 애니 승격L 모델은 통합 생리학 (EPI) 게놈에서 조직의 다양한 규모에 건강하고 병적 인 인간 태아의 발달을 이해하는 데 매우 유망하고 강력한 방법이 될 수 있습니다. (68) 69-74

동물 모델의 다양한 실험실 설치류, 비 - 인간 영장류 및 국내 반추 포함한 정상 임신 손상 모두의 연구를 위해 존재한다. 1,2,3,4,5 만성적 계측 양 임신 50 년 등을 위해 광범위하게 사용되어왔다 이러한 리포 폴리 사카 라이드 등의 병태 생리 학적 자극 (LPS)에 인간 태아의 개발 및 응답의 모델. 6-10 LPS 노출을 다음과 같은 병변으로 인해 두 종의 유사한 성숙 프로필입니다 뇌실 주위 백질 연화증,와 미숙아에서 볼을 정확히 모방. 11 12 기타 임신 합병증은 또한 산전 글루코 코르티코이드는 폐 개발 13-15 태아 (16, 17)에 자궁 내 성장 제한 (IUGR)의 영향을 이해를 증진하는 발견으로 아주 자세하게 연구되어왔다. 태아 양 모델의 광범위한 사용은 UNIQ에 기인반복적 채혈, 생체 전기 활동의 기록, 전기 자극 및 생체 뇌 영상에 적용 가능 수술 배치 및 카테터 및 전극의 유지에 비 마취 태아 양 UE 가공성. 자주 사용되지만 (18)의 원격 측정도 가능 아직 더 세련로 인해 초기 및 유지 보수 비용뿐만 아니라 설정합니다. (19) 장비의 많은 변형이 관심에 따라 측정 가능 더욱이, 태아 양 모델은 매우 다재다능하다. 예를 들어, 주 일 동안 기록 할 수있다 이러한 태아 호흡 운동, 전기 뇌 활동, 심혈관 반응, 심전도, 장기의 범위 지역 혈류 흐름 프로브 또는 마이크로 스피어 등에 감사하여 실시간으로 다변량 신호 이 다양성은 연구가 광범위 CARDI의 개발을 포함하여 진행되고있다ovascular 시스템 (20, 21), 시상 하부 - 뇌하수체 - 부신 (HPA) 축 (22), 특히 24 두뇌 발달 (23) 수면 상태 개발, 저산소증의 효과 / 질식 (25), 치료 적 저체온 (26), 염증 6-11, 모두 27의 조합, 글루코 코르티코이드 28, 29, 항우울제 (30), 기관지 폐 이형성증 (BPD) 31, 32, 이전과 노동 동안 이름 만에 태아 프로그래밍 33,34,35,36,37,38,39 또는 소설 태아 모니터링 양식의 개발 조사의 몇 지역. 40,41,42,43 제시된 방법의 전체 목표는이 다용도 모델의 기본 구현을 보여주기위한 것이다. 그것은 셀룰러 통합, 기관, 및 분자 수준에서 태아의 생리학 및 병리학 연구 급성 및 만성 실험 프로토콜의 다양한 설정을 허용한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ACE Light source</td>
			<td>Schott-Fostec</td>
			<td>A20500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060 - 11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled dissecting scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15006 - 09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003 - 12</td>
			<td>alternating dissecting tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scalpel blades #12</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10012 - 00</td>
			<td>alternating dissecting tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16044 - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S &#38; T suture tying forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00272 - 13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont SS forceps - angled</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11203 - 25&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided silk suture size 6-0</td>
			<td>Teleflex Medical</td>
			<td>07 - 30&#160; - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Tape</td>
			<td>transpore</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride 100 mg/ml</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409 - 2051 - 05</td>
			<td>Final Does is 80 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tranqui Ved Injection (xylazine 100 mg/ml)</td>
			<td>Vecdo</td>
			<td>NDC 50989 - 234 - 11</td>
			<td>Final Does is 10 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive orange 14</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>R - 8254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Solution Components</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Solution is gas equilibrated with 95% O2 and 5% Co2, final pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Final Concentration: 118 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217 - 3</td>
			<td>Final Concentration: 4.7 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79 - 500</td>
			<td>Final Concentration: 2.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P -285</td>
			<td>Final Concentration: 1.2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>Jan-00</td>
			<td>Final Concentration: 0.57 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid (HEPES)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 310 - 500</td>
			<td>Final Concentration: 5.95 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>Final Concentration: 5.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LifeWindow</td>
			<td>Digicare Biomedical Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CED bioamplifier and ADC units</td>
			<td>Cambridge Electronic Design Limited, 
			Unit 4, Science Park, 
			Milton Road, 
			Cambridge CB4 0FE 
			ENGLAND.</td>
			<td>Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Data acquisition software: Spike 2, V7.13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurolog analog signal bioamplifier</td>
			<td>Digitimer Ltd 
			37 Hydeway 
			Welwyn Garden City 
			Hertfordshire, AL7 3BE, England</td>
			<td>NL108A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABL800Flex</td>
			<td>Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5804R</td>
			<td>Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 
			Mississauga, Ontario, L5N 8L2</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arrow Jugular Catheterization Set</td>
			<td>Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atravet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazepam</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Ketalar</td>
			<td></td>
			<td>100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SurgiVeT</td>
			<td>Endotracheal Tubes; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cook Airway Exchange Catheter with RAPI-FIT Adapters</td>
			<td>Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispomed Ventilator</td>
			<td>Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W</td>
			<td>Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 USA</td>
			<td></td>
			<td>22 to 20 G; 1 in [0.9 x 25 mm] to 1.16 in [1.1 x 30 mm]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Edwards Lifesciences Ref: PX272 Pressure monitoring kit with TruWave Disposable Pressure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LifeWindow LW6000</td>
			<td>Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Babcock</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinyl catheters</td>
			<td>SCI (Scientific Commodities Inc.)</td>
			<td></td>
			<td>2 meters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Vicryl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrocardiogram (ECG)</td>
			<td>LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>four copper electrodes in single sheath, 2 meters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-O Vicryl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 Vicryl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II USP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethoprim sulfadoxine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopcock</td>
			<td>Argon Medical, Cat&#160;041220001A</td>
			<td></td>
			<td>Double 4-way Stopcock with male luer lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>Tyco Healthcare 8881202389</td>
			<td></td>
			<td>Monoject aluminum hub blunt needles, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: for fetal arterial and venous catheters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>Tyco Healthcare 8881202322</td>
			<td></td>
			<td>Monoject aluminum hub blunt needles, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: for amniotic catheters</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

instrumentation of near-term fetal sheep for multivariate chronic non-anesthetized recordings

The chronically instrumented pregnant sheep has been used as a model of human fetal development and responses to pathophysiologic stimuli such as endotoxins, bacteria, umbilical cord occlusions, hypoxia and various pharmacological treatments. The life-saving clinical practices of glucocorticoid treatment in fetuses at risk of premature birth and the therapeutic hypothermia have been developed in this model. This is due to the unique amenability of the non-anesthetized fetal sheep to the surgical placement and maintenance of catheters and electrodes, allowing repetitive blood sampling, substance injection, recording of bioelectrical activity, application of electric stimulation and in vivo organ imaging. Here we describe the surgical instrumentation procedure required to achieve a stable chronically instrumented non-anesthetized fetal sheep model including characterization of the post-operative recovery from blood gas, metabolic and inflammation standpoints.

38 임신 한 시간 일자 ​​암양은 임신 128 ± 2 일째 계측 하였다 (DGA, ~ 0.88 임신, 용어 145 DGA) 동맥, 정맥 및 양수 카테터 및 심전도 (ECG) 멸균 전신 마취하에 기술 (에웨어 모두와 태아와 전극 ). 트윈 임신의 경우 태아가 큰과 palpating intertemporal 직경 추정에 기초하여 선택되었다; 대안 적으로, 계측되는 태아 어떤 전위 바이어스를 피하기 위해 무작위로 선택 될 수 있거나 또는 두 태아는 기능화 될 수있다. 절차의 총 지속 기간은 124 ± 27 분이었다. 계측되는 태아 상체 부 92 ± 19 분 동안 자궁 밖에 남아 있었다. 계측 암양의 대부분은 F2 동물이었다. 그들의 댐은 F1 (국경 레스터 * 로마노프)이고 폐하는 햄프셔 램이었다; - 국경 레스터 (25 %) - 로마노프 (25 %) = HABLRV 햄프셔 (50 %)을 다음과 같이 그들은 교차했다. 대표 산모와 태아의 생리수술 및 계측시 특성은 그림 1과 마취 중에 태아와 모성 행동의 임신 주수에 대한 생리 학적 규범 내에서 있었다됩니다. 산모 가중치 (1.6 ± 0.5의 속도로, IE) 75 ± 11kg 38 수행 쌍둥이 중 21 평균. 쌍둥이 &#39;무게가 3,300 ± 740g (P = 0.003)에서 낮은 동안 부검의 시간 (134 ± 3 DGA)에서 계측 된 태아의 싱글 중 4,090 ± 800g의 무게. 3,300 ± 670g에 uninstrumented 쌍둥이의 무게는 계측 쌍둥이 (P = 0.78)의 무게와 유사했다. 계측 된 태아 (18)는 여성이었고, (20)는 남성이었다. 수술과 수술 후 회복 기간 동안 태아의 동맥 혈액 가스, 포도당과 산 - 염기 상태의 역학 우리는 태아의 산 - 염기 상태의 점진적 회복과 G의 작은 변화와 산소의 완만 한 저하를 관찰 표 1에보고수술 후 일에서 lucose과 전해질 1 3. 특히, 수술 후 3 일에, 태아의 42 %는 동맥 PO 2 11 mmHg로 28 %의 O 2 (토)에 자발적으로 저산소 것으로 밝혀졌다. 정상 산소 클러스터의 태아 PO 2 22 mmHg의 중심과 O 2 (토) 56 %였다. 쌍둥이 태아는 싱글 태아 (P = 0.26)보다 더 저산소했다. 태아 동맥 IL-6 ELISA는 수술 후 회복 기간 동안 16 pg / ml이다의 감도 임계 값 이하의 값을 렌더링. 마찬가지로, TNF-α 수준은 또한 불변 및 29 pg / ml이다 매우 낮게 유지 ~도 수술 후 회복 기간 동안 13.9 pg / ml이다의 감도 임계 값 이하의 값을 나타내는 동물의 30 %. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52581/52581fig1.jpg" /> 그림 1. Intrasurgical 산모와 태아 감시. FHR, 태아의 심장 박동 전N은 분 (BPM) 당 친다; fECG 태아 심전도 (V); PAW, 산모의 긍정적 인기도 압력 (mmHg로); MABP, 임산부 동맥 혈압 (mmHg로); MHR, 산모의 심장 박동 (BPM) mECG, 산모의 심전도 (V). X 축은 HH의 시간 스케일 : MM :. SS <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52581/52581fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52581/52581fig2.jpg" /> 그림 2. 자발적인 태아 저산소증과 체중. 수술 후 3 일에서 태아의 체중과 동맥 PO 2 사이의 관계는 (스피어 R = 0.326, P = 0.161) 검출되었다. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52581/52581fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오 .</a> <table><tbody><tr><td> ACE 광원 </td><td> 쇼트 - Fostec </td><td&gt; A20500 </td><td></td></tr><tr><td> 가위를 해부 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 14060-11 </td><td></td></tr><tr><td> 각도 해부 가위 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 15006-09 </td><td></td></tr><tr><td> 메스 핸들 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 10003-12 </td><td> 대안 해부 도구 </td></tr><tr><td> 곡선 메스 블레이드 # 12 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 10012-00 </td><td> 대안 해부 도구 </td></tr><tr><td> 뼈 가위 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> S &amp; T 봉합 묶는 집게 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 00272-13 </td><td></td></tr><tr><td> 뒤몽 SS 집게 - 각도 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 11203-25 </td><td></td></tr><tr><td> 꼰 실크 봉합사 크기 6-0 </td><td> TELEFLEX 의료 </td><td> 07 -30-10 </td><td></td></tr><tr><td> 의료 테이프 </td><td> transpore </td><td> 3M </td><td></td></tr><tr><td> 케타민 히드로 클로라이드 100 ㎎ / ㎖ </td><td> 호 스피라 </td><td> NDC 0409 - 2051-05 </td><td> 최종합니까 80 ㎎ / ㎏이다 </td></tr><tr><td> Tranqui VED 주입 (자일 라진 100 ㎎ / ㎖) </td><td> Vecdo </td><td> NDC 50989 - 234-11 </td><td> 최종합니까 10 ㎎ / ㎏이다 </td></tr><tr><td> 반응성 오렌지 (14) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> R - 8254 </td><td></td></tr><tr><td> 링거 솔루션 구성 요소 </td><td></td><td></td><td> 용액을 가스는 95 % O2 및 5 % CO2, 최종 pH 7.4으로 평형화되고 </td></tr><tr><td> 염화나트륨 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S7653 </td><td> 최종 농도 118 mM의 </td></tr><tr><td> 염화칼륨 </td><td> 피셔 과학 </td><td> P217 - 3 </td><td> 최종 농도 4.7 mM의 </td></tr><tr><td> 염화칼슘 Dihydrate </td><td> 피셔 과학 </td><td> C79 - 500 </td><td> 최종 농도 2.5 mM의 </td></tr><tr><td> 1 인산 칼륨 </td><td> 피셔 과학 </td><td> P의 -285 </td><td> 최종 농도 1.2 mM의 </td></tr><tr><td> 황산 마그네슘 </td><td> JT 베이커 </td><td> 1 월 00 </td><td> 최종 농도 0.57 mM의 </td></tr><tr><td> 4- (2- 히드 록시 에틸) 피페 라진 -1- 에탄 설 폰산 (HEPES) </td><td> 피셔 과학 </td><td> BP 310-500 </td><td> 최종 농도 : 5.95 G / L </td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> G8270 </td><td> 최종 농도 5.5 mM의 </td></tr><tr><td> LifeWindow </td><td> Digicare 생명 기술 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> CED의 bioamplifier 및 ADC 단위 </td><td> 캠브리지 전자 디자인 제한, (4), 과학 공원, 밀튼 도로, 캠브리지 CB4 0FE 영국입니다. </td> &lt;TD&gt; Bioamp : 1902; ADC : micro1401; 데이터 수집 소프트웨어 : 스파이크 2, V7.13 </td><td></td></tr><tr><td> Neurolog 아날로그 신호 bioamplifier </td><td> Digitimer (주) 37 Hydeway 웰윈 가든 시티 하트 퍼 드셔, AL7 3BE, 잉글랜드 </td><td> NL108A </td><td></td></tr><tr><td> ABL800Flex </td><td> 복사계 캐나다; 200 N5V 4N2 ON 애버딘 박사, 런던, </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 에펜 도르프 5804R </td><td> 에펜 도르프 캐나다; 2810 Argentia 도로, # 2 미시 소거, 온타리오, L5N 8L2 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 경정맥 도관 세트 화살표 </td><td> 화살표 인터내셔널 2400 Bernville 도로, 독서, PA 19605 미국 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Atravet </td><td></td><td></td><td> 10 ㎎ / ㎖ </td></tr><tr><td> 다이아 제팜 </td><td></td><td></td><td> 5 ㎎ / ㎖ </td></tr><tr><td> 케타민 </td><td> Ketalar </td><td></td> &lt;TD&gt; 100 ㎎ / ㎖ </td></tr><tr><td> 프로포폴 </td><td></td><td></td><td> 10 ㎎ / ㎖ </td></tr><tr><td> SurgiVeT </td><td> 기관 내 튜브; 스미스 의료 ASD, Inc.의 세인트 폴, 미네소타 55112, 미국 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> RAPI-FIT 어댑터와 쿡기도 교환 카테터 </td><td> 쿡 중환자 750, 블루밍턴 47402-0489 미국 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dispomed 인공 호흡기 </td><td> Dispomed (주), (745) 제르 - 라우 린지, Joliette, 퀘벡 J6E 0L6 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BD Insyte-W </td><td> 벡톤 디킨슨 (Becton Dickinson), 주입 치료 시스템즈, 9450 S 주 세인트 샌디 유타 84070 미국 </td><td></td><td> 22 G 20; 에서 1.16 [0.9 X 25mm] 1 [1.1 × 30mm] </td></tr><tr><td> 에드워즈 Lifesciences 참조 : TruWave 처분 할 수있는 압력과 PX272 압력 모니터링 키트 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> LifeWindow LW6000 </td><td> Digicare Biomedical 기술 (107) 상업 도로, 보 인턴 비치, 플로리다 33426-9365 미국 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gaymar </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 밥콕 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 폴리 카테터 </td><td> SCI (과학 상품 주식 회사) </td><td></td><td> 2m </td></tr><tr><td> 2-0 Vicryl </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Castroviejo 가위 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 심전도 (ECG) </td><td> LIFYY, Metrofunk KABEL 연합, 베를린, 독일 </td><td></td><td> 단일 시스 네 구리 전극, 2m </td></tr><tr><td> 2-O Vicryl </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3-0 Vicryl </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> PDS II의 USP </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> trimethoprim을 sulfadoxine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 암피실린 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 마개 </td><td> 아르곤 의료, 고양이 041220001A </td><td></td><td> 남성 루어 잠금 이중 4 방향 스톱 콕 </td></tr><tr><td> 바늘 </td><td> 타이코 헬스 케어 8881202389 </td><td></td><td> Monoject 알루미늄 허브 무딘 바늘, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm : 태아의 동맥과 정맥 카테터에 대한 </td></tr><tr><td> 바늘 </td><td> 타이코 헬스 케어 8881202322 </td><td></td><td> Monoject 알루미늄 허브 무딘 바늘, 16Gx, 1.6mmx38.1mm : 양수 카테터에 대한 </td></tr></tbody></table> 표 1. 특정 시약 / 장비. <img alt="표 2" src="/files/ftp_upload/52581/52581table2.jpg" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52581/52581table2large.png" target="_blank">그는를 클릭하세요</a>이 그림의 더 큰 버전을 보려면 다시. 수술과 수술 후 회복 기간 동안 태아의 혈액 가스, 대사 및 전해질의 표 2. 전체 개요. 태아 동맥혈의 pH, PCO 2 (mmHg로), PO 2 (mmHg로), 산소 포화도 (O 2 토 %), 포도당 (mg의 / dL 이상), 젖산 (밀리몰 / L)과 계측 및 회복 기간의 다양한 시점에서베이스 초과 (밀리몰 / L) : 태아 수술의 시작 바로 첫 번째 태아의 동맥 카테터 (자궁 오픈)을 설치 한 후, 태아 수술의 끝 (자궁 ) 폐쇄 수술 후 1 ~ 3 일에 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52581/52581tablelarge.png" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Instrumentation of Near-term Fetal Sheep for Multivariate Chronic Non-anesthetized Recordings

이 수술 배치 및 카테터 및 전극, 반복적 인 채혈, 약물 주입, 생체 전기 활동의 기록의 유지 보수 및 생체 내 이미징을 허용하기 때문에 만성적으로 계측 비 마취 태아 양 모델은 건강과 질병에 인간 태아의 발달을 연구하는 데 사용됩니다. 우리는이 모델을 수립하는 데 필요한 절차에 대해 설명합니다.

다변량 만성 비 마취 녹음을위한 단기적 태아 양의 계측

The chronically instrumented pregnant sheep has been used as a model of human fetal development and responses to pathophysiologic stimuli such as ...

instrumentation-near-term-fetal-sheep-for-multivariate-chronic-non

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

9.4K 조회수.  CHUV, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC.  이 수술 배치 및 카테터 및 전극, 반복적 인 채혈, 약물 주입, 생체 전기 활동의 기록의 유지 보수 및 생체 내 이미징을 허용하기 때문에 만성적으로 계측 비 마취 태아 양 모델은 건강과 질병에 인간 태아의 발달을 연구하는 데 사용됩니다. 우리는이 모델을 수립하는 데 필요한 절차에 대해 설명합니다. 

비디오: Instrumentation of Near-term Fetal Sheep for Multivariate Chronic Non-anesthetized Recordings

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting occurs. Loss of muscle mass and function is associated with muscle fiber type atrophy, fiber type switching, defective muscle regeneration associated with dysfunction of satellite cells, muscle stem cells, and other pathophysiological processes. These changes are associated with changes in intracellular as well as local and systemic niches. In addition to most commonly used rodent models of muscle ageing, there is a need to study muscle homeostasis and wasting using human models, which due to ethical implications, consist predominantly of in vitro cultures. Despite the wide use of human Myogenic Progenitor Cells (MPCs) and primary myoblasts in myogenesis, there is limited data on using human primary myoblast and myotube cultures to study molecular mechanisms regulating different aspects of age-associated muscle wasting, aiding in the validation of mechanisms of ageing proposed in rodent muscle. The use of human MPCs, primary myoblasts and myotubes isolated from adult and aged people, provides a physiologically relevant model of molecular mechanisms of processes associated with muscle growth, atrophy and regeneration. Here we describe in detail a robust, inexpensive, reproducible and efficient protocol for the isolation and maintenance of human MPCs&#160;and their progeny&#160;&#8212; myoblasts and myotubes from human muscle samples using enzymatic digestion. Furthermore, we have determined the passage number at which primary myoblasts from adult and aged people undergo senescence in an in vitro culture. Finally, we show the ability to transfect these myoblasts and the ability to characterize their proliferative and differentiation capacity and propose their suitability for performing functional studies of molecular mechanisms of myogenesis and muscle wasting in vitro.

This protocol describes a robust, reproducible and simple method of isolation and culture of myoblast progenitor cells from the skeletal muscle of adult and aged people. The muscles used here include foot and leg muscles. This approach enables the isolation of an enriched population of primary myoblasts for functional studies.

성인 및 노인 인간의 골격 근육에서 근육 조직 전구체 세포 / 차 근육 아세포의 준비 및 문화

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

연구

발생학

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly gained attention because they do not pose any ethical or moral concerns. Current methods to isolate MSCs from UC yield low amounts of cells with variable proliferation potentials. Since UC is an anatomically-complex organ, differences in MSC properties may be due to the differences in the anatomical regions of their isolation. In this study, we first dissected the cord/placenta samples into three discrete anatomical regions: UC, cord-placenta junction (CPJ), and fetal placenta (FP). Second, two distinct zones, cord lining (CL) and Wharton&#39;s jelly (WJ), were separated. The explant culture technique was then used to isolate cells from the four sources. The time required for the primary culture of cells from the explants varied depending on the source of the tissue. Outgrowth of the cells occurred within 3 - 4 days of the CPJ explants, whereas growth was observed after 7 - 10 days and 11 - 14 days from CL/WJ and FP explants, respectively. The isolated cells were adherent to plastic and displayed fibroblastoid morphology and surface markers, such as CD29, CD44, CD73, CD90, and CD105, similarly to bone marrow (BM)-derived MSCs. However, the colony-forming efficiency of the cells varied, with CPJ-MSCs and WJ-MSCs showing higher efficiency than BM-MSCs. MSCs from all four sources differentiated into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic lineages, indicating that they were multipotent. CPJ-MSCs differentiated more efficiently in comparison to other MSC sources. These results suggest that the CPJ is the most potent anatomical region and yields a higher number of cells, with greater proliferation and self-renewal capacities in vitro. In conclusion, the comparative analysis of the MSCs from the four sources indicated that CPJ is a more promising source of MSCs for cell therapy, regenerative medicine, and tissue engineering.

Here, we present a protocol for the dissection of human umbilical cord (UC) and fetal placenta sample into cord lining (CL), Wharton&#39;s jelly (WJ), cord-placenta junction (CPJ), and fetal placenta (FP) for the isolation and characterization of mesenchymal stromal cells (MSCs) using the explant culture technique.

인간 제대혈 및 태아 태반에서 중간 엽 기질 세포의 분리 및 특성

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types that are distinct not only in molecular and morphological features but also in physiological properties. These differences reflect their diverse functions, which together establish the necessary microenvironment for the post-testicular sperm development in the epididymal lumen. The understanding of the biophysical properties of the epididymal epithelial cells is critical for revealing their functions in sperm and reproductive health, under both physiological and pathophysiological conditions. While their functional properties have yet to be fully elucidated, the epididymal epithelial cells can be studied using the patch-clamp technique, a tool for measuring the cellular events and the membrane properties of single cells. Here, we describe the methods of cell isolation and whole-cell patch-clamp recording to measure the electrical properties of primary dissociated epithelial cells from the rat cauda epididymides.

We present a protocol that combines cell isolation and whole-cell patch-clamp recording to measure the electrical properties of the primary dissociated epithelial cells from the rat cauda epididymides. This protocol allows for investigation of the functional properties of primary epididymal epithelial cells to further elucidate the physiological role of the epididymis.

부고환에서 분리 된 1 차 상피 세포의 전체 세포 패치 - 클램프 기록

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Zika Virus Infection of Cultured Human Fetal Brain Neural Stem Cells for Immunocytochemical Analysis

Human fetal brain neural stem cells are a unique non-genetically modified model system to study the impact of various stimuli on human developmental neurobiology. Rather than use an animal model or genetically modified induced pluripotent cells, human neural stem cells provide an effective in vitro system to examine the effects of treatments, screen drugs, or examine individual differences. Here, we provide the detailed protocols for methods used to expand human fetal brain neural stem cells in culture with serum-free media, to differentiate them into various neuronal subtypes and astrocytes via different priming procedures, and to freeze and recover these cells. Furthermore, we describe a procedure of using human fetal brain neural stem cells to study Zika virus infection.

This article details the methods that are used to expand human fetal brain neural stem cells in culture, as well as how to differentiate them into various neuronal subtypes and astrocytes, with an emphasis on the use of neural stem cells to study Zika virus infection.

Immunocytochemical 분석에 대 한 교양된 인간 태아 뇌 신경 줄기 세포의 Zika 바이러스 감염

Human fetal brain neural stem cells are a unique non-genetically modified model system to study the impact of various stimuli on human developmental ...

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

In utero transplantation (IUT) is a unique and versatile mode of therapy that can be used to introduce stem cells, viral vectors, or any other substances early in the gestation. The rationale behind IUT for therapeutic purposes is based on the small size of the fetus, the fetal immunologic immaturity, the accessibility and proliferative nature of the fetal stem or progenitor cells, and the potential to treat a disease or the onset of symptoms prior to birth. Taking advantage of these normal developmental properties of the fetus, the delivery of hematopoietic stem cells (HSC) via an IUT has the potential to treat congenital hematologic disorders such as sickle cell disease, without the required myeloablative or immunosuppressive conditioning required for postnatal HSC transplants. Similarly, the accessibility of progenitor cells in multiple organs during development potentially allows for a more efficient targeting of stem/progenitor cells following an IUT of viral vectors for gene therapy or genome editing. Additionally, IUT can be used to study normal developmental processes including, but not limited to, the development of immunologic tolerance. The murine model provides a valuable and affordable means to understanding the potential and limitations of IUT prior to pre-clinical large animal studies and an eventual clinical application. Here, we describe a protocol for performing an IUT in the murine fetus through intravenous and intra-amniotic routes. This protocol has been used successfully to elucidate the necessary conditions and mechanisms behind in utero hematopoietic stem cell transplantation, tolerance induction, and in utero gene therapy.

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

We describe a protocol for performing an in utero transplantation (IUT) through intravenous and intra-amniotic routes of injection in the murine model. This protocol can be used to introduce cells, viral vectors, and other substances into the unique immune-tolerant fetal environment.

정 맥 및 양수 내 Utero Murine 모델에 이식

In utero transplantation (IUT) is a unique and versatile mode of therapy that can be used to introduce stem cells, viral vectors, or any other substances ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and painless, and the application is easy, fast, and can be done anywhere, even with mobile devices. During pregnancy, ultrasound imaging is standardly used to closely monitor fetal development. The technique is important to assess intrauterine growth restriction (IUGR), a pregnancy complication with short- and long-term health consequences for both the mother and fetus. Understanding the process of IUGR is indispensable for developing effective therapeutic strategies. 
The ultrasound system used in this manuscript is an ultrasound device produced for the analysis of small animals and can be used in various research fields, including pregnancy research. Here we describe the usage of the system for in vivo analysis of fetuses from natural killer (NK) cell/mast cell (MC)-deficient mothers that give birth to growth-restricted pups. The protocol includes preparation of the system, handling of the mice before and during measurements, and the usage of the B-mode, color doppler mode, and pulse-wave doppler mode. Fetal size, placental size, and blood supply to the fetus were analyzed. We found reduced implantation sizes and smaller placentas in NK/MC-deficient mice from mid-gestation onwards. In addition, MC/NK-deficiency was associated with absent and reversed end diastolic flow in the fetal Arteria umbilicalis(UmA) and an elevated resistance index. The methods described in the protocol can easily be used for related and non-related research topics.

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Here we describe the technique of high frequency ultrasound for in vivo analysis of fetuses in mice. This method allows the follow-up of fetuses and the analysis of placental parameters as well as maternal and fetal blood flow throughout pregnancy.

비보에 태아 및 태 반 개발의 분석에 대 한 높은 주파수 초음파

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Culturing and Measuring Fetal and Newborn Murine Long Bones

Long bones are complex and dynamic structures, which arise from endochondral ossification via a cartilage intermediate. The limited access to healthy human bones makes particularly valuable the use of mammalian models, such as mouse and rat, to look into different aspects of bone growth and homeostasis. Additionally, the development of sophisticated genetic tools in mice allows more complex studies of long bone growth and asks for an expansion of techniques used to study bone growth. Here, we present a detailed protocol for ex vivo murine bone culture, which allows the study of bone and cartilage in a tightly controlled manner while recapitulating most of the in vivo process. The method described allows the culture of a range of bones, including tibia, femur, and metatarsal bones, but we have focused mainly on tibial culture here. Moreover, it can be used in combination with other techniques, such as time-lapse live imaging or drug treatment.

Here, we present a method for ex vivo culture of long murine bones at both fetal and newborn stages, suitable for analyzing bone and cartilage development and homeostasis in controlled conditions while recapitulating the in vivo process.

태아와 신생아 뮤 린 긴 뼈를 배양 하 고 측정

Long bones are complex and dynamic structures, which arise from endochondral ossification via a cartilage intermediate. The limited access to healthy ...

Recapitulating Suckling-to-Weaning Transition In Vitro using Fetal Intestinal Organoids

At the end of the suckling period, many mammalian species undergo major changes in the intestinal epithelium that are associated with the capability to digest solid food. This process is termed suckling-to-weaning transition and results in the replacement of neonatal epithelium with adult epithelium which goes hand in hand with metabolic and morphological adjustments. These complex developmental changes are the result of a genetic program that is intrinsic to the intestinal epithelial cells but can, to some extent, be modulated by extrinsic factors. Prolonged culture of mouse primary intestinal epithelial cells from late fetal period, recapitulates suckling-to-weaning transition in vitro. Here, we describe a detailed protocol for mouse fetal intestinal organoid culture best suited to model this process in vitro. We describe several useful assays designed to monitor the change of intestinal functions associated with suckling-to-weaning transition over time. Additionally, we include an example of an extrinsic factor that is capable to affect suckling-to-weaning transition in vivo, as a representation of modulating the timing of suckling-to-weaning transition in vitro. This in vitro approach can be used to study molecular mechanisms of the suckling-to-weaning transition as well as modulators of this process. Importantly, with respect to animal ethics in research, replacing in vivo models by this in vitro model contributes to refinement of animal experiments and possibly to a reduction in the use of animals to study gut maturation processes.

This protocol describes how to mimic suckling-to-weaning transition in vitro using mouse late fetal intestinal organoids cultured for 30 days.

태아 장 오르가노이드를 사용하여 시험관내 빨기-위닝 전환 반복

At the end of the suckling period, many mammalian species undergo major changes in the intestinal epithelium that are associated with the capability to ...

Transuterine Fetal Tracheal Occlusion Model in Mice

Fetal tracheal occlusion (TO), an established treatment modality, promotes fetal lung growth and survival in severe congenital diaphragmatic hernia (CDH). Following TO, retention of the secreted epithelial fluid increases luminal pressure and induces lung growth. Various animal models have been defined to understand the pathophysiology of CDH and TO. All have their own advantages and disadvantages such as the difficulty of the technique, the size of the animal, cost, high mortality rates, and the availability of genetic tools. Herein, a novel transuterine model of murine fetal TO is described. Pregnant mice were anesthetized, and the uterus exposed via a midline laparotomy. The trachea of selected fetuses were ligated with a single transuterine suture placed behind the trachea, one carotid artery, and one jugular vein. The dam was closed and allowed to recover. Fetuses were collected just before parturition. Lung to body weight ratio in TO fetuses was higher than that in control fetuses. This model provides researchers with a new tool to study the impact of both TO and increased luminal pressure on lung development.

Various animal models of congenital diaphragmatic hernia and fetal tracheal occlusion present advantages and disadvantages regarding ethical issues, cost, surgical difficulty, size, survival rates, and availability of genetic tools. This model provides a new tool to study the impact of both tracheal occlusion and increased luminal pressure on lung development.

쥐의 트랜스테린 태아 기관 폐색 모델

Fetal tracheal occlusion (TO), an established treatment modality, promotes fetal lung growth and survival in severe congenital diaphragmatic hernia (CDH). ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Turner Syndrome (45XO) Fetal Cells for Downstream Modelling of Neurological Deficits Associated with the Syndrome

Chromosomal aneuploidies cause severe congenital malformations including central nervous system malformations and fetal death. Prenatal genetic screening is purely diagnostic and does not elucidate disease mechanism. Although cells from aneuploid fetuses are valuable biological material bearing the chromosomal aneuploidy, these cells are short lived, limiting their use for downstream research experiments. Generation of induced pluripotent stem cell (iPSC) models is an effective method of cell preparation for perpetual conservation of aneuploid traits. They are self-renewing and differentiate into specialized cells reminiscent of embryonic development. Thus, iPSCs serve as excellent tools to study early developmental events. Turner syndrome (TS) is a rare condition associated with a completely or partially missing X chromosome. The syndrome is characterized by infertility, short stature, endocrine, metabolic, autoimmune and cardiovascular disorders and neurocognitive defects. The following protocol describes isolation and culturing of fibroblasts from TS (45XO) fetal tissue, generation of integration free TSiPSCs through delivery of episomal reprogramming plasmids by nucleofection followed by characterization. The reprogramming TSiPSCs were initially screened by live cell alkaline phosphatase staining followed by extensive probing for pluripotency biomarkers. Selected colonies were mechanically dissected, passaged several times and stable self-renewing cells were used for further experiments. The cells expressed pluripotency transcription factors OCT4, NANOG, SOX2, cell surface markers SSEA 4 and TRA1-81 typical of pluripotent stem cells. The original 45XO karyotype was retained post reprogramming. The TSiPSCs were able to form embryoid bodies and differentiate into cells of endoderm, mesoderm and ectoderm expressing lineage specific biomarkers ((SRY BOX17), (MYOSIN VENTRICULAR HEAVY CHAIN&#945;/&#946;), (&#946;III TUBULIN)). The exogenous episomal plasmids were lost spontaneously and not detected after passage 15 in cells. These TSiPSCs are a valuable cellular resource for modelling defective molecular and cellular neurodevelopment causing neurocognitive deficits associated with Turner syndrome.

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Turner Syndrome 45XO Fetal Cells for Downstream Modelling of Neurological Deficits Associated with the Syndrome

This protocol describes the generation of integration free iPSCs from fetal tissue fibroblasts through delivery of episomal plasmids by nucleofection followed by description of methods used for iPSC characterization and neuronal differentiation.

터너 증후군에서 유도 다능줄기 세포의 생성 (45XO) 증후군과 관련된 신경 적자의 다운 스트림 모델링을위한 태아 세포

Chromosomal aneuploidies cause severe congenital malformations including central nervous system malformations and fetal death. Prenatal genetic screening ...