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설치류 식별 II

Overview

출처: 케이 스튜어트, RVT, RLATG, CMAR; 발레리 A. 슈뢰더, RVT, RLATG. 노틀담 대학교, IN

데이터 수집이 올바른지 확인하기 위해 동물 기록을 정확하게 유지해야 합니다. 기록은 케이지 카드에 대한 정보 유지에서 각 동물에 대한 모든 관련 정보가 있는 자세한 데이터베이스를 보유하는 것까지 다양합니다. 기록 보관의 주요 구성 요소는 연구 동물의 개별 식별입니다. 마우스와 쥐를 식별하는 데 적합한 다양한 방법이 있습니다. 이 비디오는 문신, 마이크로칩 배치 및 임시 식별 방법에 대한 절차 적 기술을 설명하고 각각의 이점을 탐구합니다.

Principles

꼬리 문신의 사용은 많은 연구 프로토콜에 도움이 됩니다. 꼬리 문신은 MRI 기계에서 이미지될 동물또는 궤양성 피부염에 유전적으로 걸리기 쉬운 동물에게 이상적입니다. 케이지에서 동물을 빠르게 식별하기 위해, 그것을 억제 할 필요없이, 꼬리 문신은 쉽게 시각화됩니다. 그러나 이 기술은 기술, 연습 및 꾸준한 손이 필요합니다. 특수 장비도 필요합니다. 1

실험 프로토콜은 신생아의 지평을 일찍 부터 필요로 할 수 있습니다. 그 결과, 이러한 새끼를 영구적으로 식별하는 것이 필수적입니다. 이 어린 나이에 귀 피네는 귀 태그를 삽입할 만큼 충분히 개발되지 않으며 귀 펀치를 아직 사용할 수 없습니다. 과거에는 연구원이 발가락 제거 코드를 사용하여 신생아를 식별하는 것이 일반적이었습니다. 그러나 이것은 어린 동물과 댐 모두에게 스트레스가 되어 비인도적인 것으로 간주되었습니다. 2 발가락 문신을 사용하면 귀 태깅이나 귀 펀칭이 충분히 클 때까지 동물을 영구적으로 식별 할 수 있습니다. 3

마이크로 칩의 이식 과정은 상대적으로 쉽지만, 마우스에서 식별에 대한 유용성을 제한하는 몇 가지 요인이 있습니다. 멸균 마이크로칩은 큰 쌀 알갱이의 크기이며, 전달을 위해 10~12게이지 바늘이 필요합니다. 따라서, 그들은 마우스에 대 한 매우 큰. 마우스의 수명이 짧고 동물의 수가 일반적으로 광범위하기 때문에 마이크로 칩과 판독 장치의 비용도 금지 될 수 있습니다. MRI 기계에서 이미지화 될 운명의 동물은 임플란트를 가질 수 없습니다. 그러나 영구적으로 식별되어야 하는 귀중한 동물 그룹이 있는 경우 마이크로칩을 사용할 수 있습니다. 4

동물을 몇 시간 또는 며칠 동안 식별해야 하는 급성 연구는 영구적인 식별의 사용을 필요로 하지 않습니다. 무독성 마커는 동물의 모피를 색칠하기 위해 특별히 만들어졌으며 여러 가지 색상으로 제공됩니다. 이러한 마커 염료는 몇 주 동안 볼 수 있습니다. 마커는 또한 다른 방법과 함께 그룹으로 특정 동물을 쉽게 발견하는 데 사용할 수 있습니다.

Procedure

1. 꼬리 문신

꼬리 문신은 동물을 다룰 필요없이 쉽게 읽을 수 있습니다.

Figure 1
그림 1. 성인 마우스에 꼬리 문신

  1. 제조업체의 지시에 따라 문신 장비를 준비하십시오. 소량의 잉크가 필요합니다. 검은 염료는 알비노 마우스 또는 쥐, 그리고 색소 마우스 또는 쥐에 대 한 녹색 염료에 사용 해야 합니다.
  2. 동물을 준비하여 식별합니다.
    참고: 우려나 고통을 최소화하기 위해 꼬리 문신은 동물 주택 지역이 아닌 절차실에서 수행해야 합니다.
    1. 움직임이 최소화되도록 적절하게 문신을 위해 동물을 억제합니다.
    2. 젖을 짜는 쥐는 문신 플랫폼의 볼트 아래에 컵의 입술을 고정하고 꼬리가 노치를 통해 연장되는 플라스틱 노치 컵을 사용하여 억제됩니다.
    3. 성인 마우스는 컵 억제제에 의해 억제 될 수 있으며, 꼬리는 플랫폼 이나 다른 장치를 통해 제자리에 개최되는 컵의 개구부및 플랜지에서 팽팽한 당겨진다.
    4. 면에 기울어진 면봉으로 소량의 희석 티슈 클리너로 꼬리를 청소하십시오. 성인 쥐는 일반적으로 문신을 적용하기 전에 청소해야하는 꼬리에 규모와 파편이 축적되어 있습니다. 꼬리의 비누와 물 스크럽은 먼지와 파편의 대부분을 제거합니다. 진행하기 전에 꼬리를 잘 말리십시오.
    5. 문신 직전에 면에 기울어진 면봉으로 피부에 티슈 오일을 발라주세요. 티슈 오일은 피부를 부드럽게 하고 문신 바늘을 윤활하여 조직 손상을 최소화하는 데 필요합니다. 또한, 오일은 세척 공정에 의해 제거되지 않은 먼지를 용해하고 문신이 없는 피부의 잉크 염색을 방지합니다.
  3. 문신을 적용합니다.
    1. 바늘 끝을 안료에 담그고 기계를 꺼내세요.
    2. 발 페달에 의해 활성화 된 총으로 문신 사이트에 바늘의 끝을 가져옵니다.
    3. 한 방향으로 도저히 짧게 스트로크할 수 있습니다. 숫자와 문자는 최소한의 각도와 곡선 (가능한 경우)세그먼트로 구성되도록 같은 방식으로 문신해야합니다.
    4. 영구적 인 안료 증착을위해 바늘로 진피에 깊이 침투하십시오. 활성화 된 바늘의 소리의 변화는 깊이를 분별하는 데 도움이 될 수 있습니다.
    5. 안료의 적절한 증착을 위해 90o 각도로 바늘로 피부에 접근하십시오.
  4. 문신 후 정리 및 관리
    1. 블롯 (닦지 마십시오) 종이 타월과 여분의 안료의 완성 된 문신.
    2. 문신이나 종이 타월에 피가 묻어 있다는 것은 문신이 너무 깊게 만들어졌기 때문에 영구적일 가능성은 낮습니다.
    3. 추가 안료로 문신 캐릭터의 얇은 영역을 강화합니다. 캐릭터는 이미 증착된 안료에 평행하게 증착된 안료로 보강되어 있습니다.
    4. 추가 안료를 추가하려면 바늘 끝을 염료 저장소에 찍어 쥐의 경우 2자마다, 쥐의 경우 한 문자하나씩 담급니다.
    5. 문신을 퇴색하는 이유는 안료의 부적절한 양을 포함, 문신이 너무 얕게 만든, 문신이 너무 깊게 만든, 피부에 바늘의 부적절한 각도, 무딘 또는 후크 바늘이 사용되거나, 문신이 너무 빨리 만들어지는.
    6. 제조 업체의 지시에 따라 각 사용 후 문신 장비를 철저히 청소하십시오.

2. 신생아의 발가락 문신

실험 프로토콜은 신생아의 지평을 일찍 부터 필요로 할 수 있으므로 이러한 새끼를 영구적으로 식별하는 것이 필수적입니다. 발가락 문신의 사용은 귀 태깅 또는 귀 펀칭에 충분히 큰 때까지 동물을 식별 할 수 있습니다.

Figure 2
그림 2. 신생아 마우스를 문신하기위한 적절한 구속 기술. 랜싯에는 팁에 녹색 염료가 있습니다.

  1. 미리 거한 새끼를 제지하십시오.
    1. 거즈 패드에 손에 신네이트를 컵. 엄지 손가락과 검지 손가락의 도둑놈 사이에 발을 배치하여 선택한 발가락 또는 발가락을 문신으로 노출시하십시오.
    2. 발가락뒤에 단단한 표면이 있도록 발가락에 발을 가까이 두어 구부러지지 않도록 합니다.
    3. 발을 배치 할 때 다리를 뒤집지 마십시오. 구속된 새끼는 흔들릴 수 있지만 발성은 반드시 들리지 않습니다.
  2. 장비를 준비합니다.
    1. 4.5mm 골든로드 동물 랜싯을 선택합니다.
    2. 비다공성 표면에 녹색 문신 페이스트의 작은 자리를 배치; 알루미늄 호일은 잘 작동합니다.
    3. 문신 페이스트에 랜싯의 끝만 찍어.
    4. 소량의 페이스트만 사용하십시오.
  3. 문신을 적용합니다.
    1. 식별 코드에 따라 골든로드 랜싯으로 원하는 발가락을 찌르세요.
    2. 피부에 구멍을 뚫고 페이스트를 피부에 주입하고 마크를 남깁니다.
    3. 적절한 침투를 보장하기 위해 같은 지점을 세 번 찌르십시오.
    4. 발가락이 피를 흘리도록 깊이 찌르는 것을 피하십시오. 이것은 희미한 문신을 초래할 수 있습니다.
  4. 문신 후 정리 및 관리
    1. 흡수성 와이프/수건으로 그 자리를 부드럽게 얼룩서 여분의 페이스트를 제거합니다.
    2. 발이나 몸에서 여분의 페이스트를 청소하려고 시도하지 마십시오.
    3. 동물을 케이지로 돌려놓습니다.
    4. 수유 새끼가 문신을 할 때 댐을 문신하는 것이 좋습니다. 이것은 문신의 과도한 손질으로 이어질 수있는 새끼의 페이스트에 과반응하는 것을 막을 수 있습니다.
    5. 각 쓰레기에 새 랜싯을 사용하십시오.
    6. 문신은 절차 다음 날에 확인해야합니다. 점이 희미하거나 보이지 않는 경우 문신을 다시 수행합니다. 문신 다음날 점이 보이는 경우 동물의 수명 동안 여전히 볼 수 있어야 합니다.

3. 성인 쥐와 쥐의 발가락 문신

신생아 의 쓰레기가 문신이될 때, 그것은 그녀의 새끼에 붙여 넣기가 그녀에게 외국이 되지 않도록 어머니도 문신을 하는 것이 좋습니다.

  1. 동물의 구속.
    1. 플라스틱 콘또는 뒷발에 접근할 수 있는 플렉시글라스 제지제기를 사용하여 동물을 억제합니다.
    2. 구속 장치에서 발을 확장합니다.
    3. 엄지 손가락과 검지 손가락의 도둑 놈 사이에 발을 배치하여 선택한 발가락 또는 발가락을 노출하여 문신을했습니다.
    4. 발가락뒤에 단단한 표면이 있도록 발가락에 발을 가까이 두어 발가락이 구부러지는 것을 방지합니다.
    5. 발을 배치 할 때 다리를 뒤집지 마십시오. 절제된 성인은 발을 철회하려고 할 수 있습니다.
  2. 장비를 준비합니다.
    1. 5mm 골든로드 동물 랜싯을 선택합니다.
    2. 비다공성 표면에 녹색 문신 페이스트의 작은 자리를 배치; 알루미늄 호일은 잘 작동합니다.
    3. 문신 페이스트에 랜싯의 끝만 찍어.
    4. 소량의 페이스트만 사용하십시오.
  3. 문신을 적용합니다.
    1. 식별 코드에 따라 골든로드 랜싯으로 원하는 발가락을 찌르세요.
    2. 피부에 구멍을 뚫고 페이스트를 피부에 주입하고 마크를 남깁니다.
    3. 적절한 침투를 보장하기 위해 같은 지점을 세 번 찌르십시오.
    4. 발가락이 피를 흘리도록 깊이 찌르는 것을 피하십시오. 이것은 희미한 문신을 초래할 수 있습니다.
  4. 문신 후 정리 및 관리
    1. 흡수성 와이프/수건에 부드럽게 그 자리를 비우고 여분의 페이스트를 제거합니다.
    2. 발이나 몸에서 여분의 페이스트를 청소하려고 시도하지 마십시오.
    3. 동물을 케이지로 돌려놓습니다.
    4. 각 동물에 대한 새로운 랜싯을 사용합니다.
    5. 문신은 절차 다음 날에 확인해야합니다. 점이 희미하거나 보이지 않는 경우 문신을 다시 수행합니다. 문신 다음날 점이 보이는 경우 동물의 수명 동안 여전히 볼 수 있어야 합니다.

4. 마이크로 칩핑

RFID 칩의 이식은 동물을 식별하는 데 일반적으로 사용되는 방법입니다.

  1. 마이크로칩을 applier에 로드하거나 미리 로드된 주사기를 선택합니다.
  2. 어깨 위에 피부를 잡을 수 있도록 플렉시 유리 구속 튜브를 사용하여 동물을 억제합니다.
  3. 피부를 텐트로 만들고 주머니를 만듭니다.
  4. 바늘을 피부에 놓고, 등뼈와 평행하게 하고, 꼬리쪽으로 향합니다.
  5. 마이크로칩을 피하로 배출합니다.
  6. 바늘을 철회하고 주사 지점에서 닫은 피부를 꼬집습니다. 이것은 마이크로 칩이 피부에서 바늘을 따르는 것을 방지합니다. 모든 피부 출혈에 대한 hemostasis를 제공하기 위해 압력을 계속 적용합니다.
  7. 구속 장치에서 동물을 제거하고 칩을 스캔하여 식별 코드를 확인합니다.

Figure 3
그림 3. 성인 쥐에 마이크로 칩 배치.

5. 마우스에 대한 임시 식별

무독성 염료 및 동물 마커는 마우스의 임시 식별에 사용할 수 있습니다.

  1. 모피의 표시에 견갑골 사이의 영역에 액세스할 수 있도록 마우스를 억제합니다.
  2. 이 부위의 모피에 마커, 스팟 또는 염료 줄무늬를 놓습니다. 이 지역은 동물이 손질하는 동안 마킹을 제거하는 것을 방지하는 데 사용됩니다.
  3. 며칠 이상 구두창 식별자로 사용하는 경우 주기적으로 마킹을 확인합니다.
  4. 꼬리는 짧은 기간 동안 사용할 수도 있습니다. 그러나, 동물은 손질 하는 동안 그것에서 마크를 제거할 수 있습니다.

6. 쥐에 대한 임시 식별

  1. 염료 또는 마커 응용 영역에 쉽게 접근할 수 있도록 쥐를 억제합니다. 경우에 따라 줄무늬나 점만 있으면 동물을 제지할 필요가 없지만 케이지에서 자유롭게 이동할 수 있습니다.
  2. 꼬리를 잡고 식별을 적용하는 동안 팽팽한 유지하여 수동 구속은 일반적으로 수행됩니다.
  3. 흡입제 마취제를 사용하여 일시적인 고정은 깨지기 쉬운 동물을 위해 행해질 수 있습니다.
  4. 이 메서드를 며칠 이상 구두창 식별자로 사용하는 경우 주기적으로 마킹을 확인합니다.

Application and Summary

적절한 식별 방법을 선택할 때는 여러 가지 요소를 고려해야 합니다. 각 기술은 실험적 요구와 관련하여 고려해야 할 장점과 단점이 있습니다. 비용은 다른 요인과 함께 무게를 달아야하지만, 기술의 용이성과 동물에 대한 불편의 수준은 주요 고려 사항이어야합니다. 4,5

References

  1. Robinson, V., Morton, D.B., Anderson, D., Carver, J.F.A., Francis, R.J., Hubrecht, R., Jenkins, E., Mathers, K.E., Raymond, R., Rosewell, I., Wallace, J., and Wells, D.J. 2003. Refinement and reduction in production of genetically modified mice. Laboratory Animals. 37:S1-S50.
  2. Schaefer, D.C., Asner, I.N., Seifert, B., Bürki, K., and Cinelli, P. 2010. Analysis of physiological and behavioural parameters in mice after toe clipping as newborns. Laboratory Animals. 44:7-13
  3. Castelhano-Carlos, M.J., Sousa, N., Ohl, F., and Baumans, V. 2010. Identification methods in newborn C57BL/6 mice: a developmental and behavioural evaluation. Laboratory Animals. 44: 88-103.
  4. Danneman, P.J., Suckow, M.A., and Brayton, C.F. 2013. The laboratory mouse. Second edition. New York, NY: CRC Press.
  5. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.

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Overview

1:06

Considerations for Identification Methods

3:40

Tail Tattooing in Adults

6:24

Toe Tattooing in Neonates and Adults

9:16

Microchip Placement

10:24

Method for Temporary Identification

11:21

Applications

13:00

Summary

이 컬렉션의 비디오:

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