조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

이 비디오 문서는 조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 해 부는 마우스에서 췌를 성공적으로 제거 하는 데 필요한 절차의 상세한 데모를 제공 합니다.

우리는 조사 하 고 췌 특정 전사 인자, 1a cre-recombinase; lox 그만 lox-순 영 쥐 육, aspartic 산 12 codon에 글리신 (Ptf1a^{cre / +}; LSL-Kras^{G12D / +}) 인간 췌장암의 모델로 스트레인 마우스. 우리의 현재 연구의 목표는 췌장암 진행의 소설 대사 생체 식별 하입니다. 우리는 소변, 대변, 혈액, 그리고 췌 장 조직 추출, 뿐만 아니라 암 진행을 췌 장의 조직학 분석의 대사 프로 파일링을 수행 했습니다. 마우스 췌 하지 인간, 같은 잘 정의 된 고체 기관 이지만 오히려 마우스 내부 해부학에 익숙하지 않은 개인 또는 개인 거의 또는 전혀 경험 수행에 의해 쉽게 식별 되지 않으면 만들어진다 분산된 부드러운 조직 마우스 장기 해입니다. 이 문서의 목적은 현명한 상세한 제공 하는 시각적 데모 해 부에 의해 마우스 췌 장의 제거에 초보자 가이드. 이 문서는 특히 학생과 새로운 조사 대사 프로 파일링 또는 조직학 분석에 대 한 해 부에 의해 마우스 췌의 수확 필요로 하는 연구에 귀중 한 해야 합니다.

마우스는 인간 췌장암^1,2의 중요 한 동물 모델로 떠오르고 있다. Ptf1a에서^{cre / +}; LSL Kra^{G12D / +} 마우스 모델, 쥐 육 (K-Ras) oncogene은 췌 장, 췌 장, 췌 장 intraepithelial 형성 (PanINs), 그 진행으로 알려져 있는 전 암 병 변의 결과에서 독점적으로 활성화 하는 순 영 췌 장 ductal adenocarcinomas로 일반적으로 불린다 PDACs³. 이 마우스 모델 시스템은 인간의 췌장암^4,5는 PanINs 삶과 자주 내 PDAC 진행의 첫 5 개월 이내 등장 추가 이용에 대 한 최상의 사용 가능한 동물 모델 중 하나는 반면 췌장암 가장 자주 발생 인 간에 있는 나이의 60-70 년 년^4,5, 단일.

Ptf1a에서 해 부에 의해 췌 장의 추출^{cre / +}; LSL Kra^{G12D / +} , 췌 장의 암 개발의 자세한 경도 조직학 시험에 대 한 다양 한 연령대에서 쥐 수 까지의 초기 PanIN 단계에서 진행 PDAC^{3,4 , 5}. 15 개월에 5에서 배열 하는 나가에 수확 하는 췌도 사용할 수 있습니다 준비 조직 질병 조직 ^{건강 한에서 전환 하는 동안 발생 하는 췌 장4 물질 대사에 글로벌 변화 특징을 추출 하 6,7}.

이 문서는 마우스 췌 장 추출 하는 데 필요한 단계의 완전 한 시각적 가이드를 제공 하 고 추가 분석을 위해 췌의 저장에 대 한 지침을 제공 합니다. 이 가이드는 개인 연구를 포함 한 다른 췌 장 질환에 유형 I 당뇨병, 그리고 학생과 새로운 사용 하 여 마우스 췌의 수확과 관련 된 연구 조사에 특히 유용 해야 한다 동등 하 게 가치가 있을 것입니다. 신진 대사 프로 파일링 또는 조직학 분석에 대 한 해 부입니다.

비디오에서 실행 하 고 아래에 설명 된 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 마이애미 대학에 의해 승인.

1. 준비 및 자극 테스트

1. 구축 두 가지 영역. 모든 재료와 필요한 기구 두 영역을 무대. 배기 후드
   1. 무대 운영 테이블. 절차의 지속적이 고 한 시 빨리 벗어나게 성능을 하는 방식으로 장비와 테이블 정렬.
   2. 같은 방에 있는 작업의 주요 테이블 근처 수술 후 테이블을 설정합니다. 절차를 통해 메 마른 환경으로 두 테이블을 유지.
2. 장소 다음 운영 테이블에 공급: 한 유리 항아리 뚜껑, 한 15 mL 튜브, 수술가 위, 70% 에탄올, 두 거품 보드, 두 집게, 두 개의 1 mL 21 게이지 주사기, 두 50 mL 튜브, 1 개의 원심 분리기 튜브의 한 짜기 병의 한 쌍 하나의 극저온 유리병, 4 외과 패드, 10 핀, 살 균 물티슈, 디스펜서 및 sharps 컨테이너.
3. 후 작업 테이블에는 다음 공급 장소: 액체 질소, 얕은 넓은의 4 L dewar dewar, 부동 microtube 랙, 수술가 위 한 쌍, 두 집게, 4 극저온 튜브, 및의 디스펜서 입 하나 하나 분석 균형 살 균 물티슈.
4. 하나 50 mL 및 75% 볼륨 한 15 mL 튜브 포 르 말린에 채울.
5. 한 외과 패드 절 개 보드로 봉사 하는 대략 30 cm x 30 cm 폼 보드 부착 각 모서리에는 핀을 사용 하 여. 나머지 4 개의 핀을 사용 하 여 작업 하는 동안. 수술 패드 장기 수술 테이블에 전송 하는 작은 폼 보드 준비.
   주의: Isoflurane (99.9%)는 독성 화학, 그리고 폐기물 마 취 가스 ⁸의 청소에서 안전의 최대 수준을 보장 하기 위해 환기 후드에서 사용 해야 합니다. 테일러와 묵 ⁸ 기사에 연구자 isoflurane를 사용 하 여 오픈-드롭 방법의 사용과 관련 된 위험에 대 한 추가 정보를 찾을 수 있습니다.
6. 유리 항아리에 담가 isoflurane (99.9%)의 몇 방울과 한 외과 패드를 배치 하 고 마우스는 isoflurane와의 직접 접촉을 방지 하기 위해 정상 종이 타월 장소. 마찬가지로, 외과 패드를 사용 하 여 나머지 튜브 라인 및 isoflurane의 몇 방울으로 적시고 마우스와는 isoflurane 간의 직접 접촉을 방지 하기 위해 정상 추가 패드를 배치 하.
7. Dewar 최대 입력 라인까지 도달 얕은 넓은 입으로 액체 질소를 부 어.
8. 장소 마 취로 해 부에 대 한 선택 마우스 챔버, 즉 몇 가지 젖은 패드와 유리 항아리 방울 isoflurane (99.9%) ~ 1 분에 대 한 뚜껑으로 덮여
   참고:이 시간은 마우스 마우스에서 다릅니다. 일단 마우스를 의식이 없는 상공에서 제거 하 고 운영 위원회에 그것을 배치.
9. 고 과학자에서 지적 하는 그것의 머리와 복 부 측 거짓말 그것 있도록 마우스를 방향을 정합니다. 외과 패드 isoflurane (99.9%)의 몇 방울과 젖 줄지어 튜브 안에 머리 놓고 마우스 자극에 응답 하지 않는 되도록 발 핀치에 의해 자극 테스트를 수행 합니다.
   1. 이 테스트가 실패 하는 경우 마우스 응답 발 핀치 테스트 하 반복 단계 1.8.

2. 초기 절 개, 심장 펑크, 및 안락사

1. 외과 폼 보드를 마우스의 사지를 고정 하 고 젖은 70% 에탄올과 마우스의 복 부 측.
2. 집게와 요도 개통 근처 모피/피부를 꼬 집 고 약간 위쪽으로 당겨. 절 개 통해 복 부 구멍 요도 개방은 중간에서 시작 하 고 턱 끝 수술가 위 확인 합니다.
   1. 초기 절 개의 시작 지점 근처는 집게와 모피/피부의 한쪽을 잡아 하 고 만들고 다른 절 개는가 위 아래로 대각선 쪽으로 다시 발.
   2. 반대편에 같은 방식으로이 반복.
      참고: 모피/피부 만들 넓은 개방을 고정 수 있습니다 하지만 필요 하지 않습니다.
3. 마음 찾아서 주사기 바늘의 막힘을 방지 하기 위해 심장 주위 sac는 심 낭을 제거.
4. 는 집게와 심 낭을 파악 하 고는 위로 잘라. 신중 하 게 뛰는 심장에 주사기 바늘을 삽입 하 여 심장 펑크를 수행 하 고 철회 플런저를 천천히 시작.
   1. 최적의 혈액 컬렉션 사용 하 여 바늘의 플런저 심장의 펌핑 작업을 모방 하 고 너무 빨리 그리기 방지.
      참고: 일반적으로 약 1 mL의 혈액 수집 될 수 있습니다.
   2. 원심 분리기 튜브 및 sharps 용기에 주사기의 dispose에 혈액 혈액 컬렉션을 마친 후 불식.
   3. 심장 찔린 수행 된 후 마음을 연결 하는 첨부 파일을 제거 하 여 안락사를 실시.
      참고: 헤 파 린, 항 응고 제는 혈 청이 특정 연구에 컬렉션에 대 한 응고 혈액을 있도록 심장 찔린 전에이 절차에서 주사기에 추가 되지 않았습니다. 그러나, 경우 연구원 플라즈마를 수집 혈액 응고를 방지 하 고 싶 었, 헤 파 린에 추가할 수 있는 심장 찔린 이전 주사기.
5. 연구는 마우스의 유전형을 포함 하는 경우는 위는 귀 부분을 싹 둑 하 고 유전자 확인에 대 한 원심 분리기 튜브.

3. 췌 장 추출

1. 찾기 마우스의 왼쪽에 위. 시작은 부드럽게 (피하기 찢 어) 두 개의 집게를 사용 하 여 위장 및 십이지 장 췌 분리.
   참고: 위 및 내장에서 췌를 분리 하는 경우 매우 중요 하다는 집게 장기에서 췌 장 조직 안내 하 고 하지 분쇄는 집게와 췌 눈물 부드럽게 사용 됩니다.
   1. 소장 공장 및 회장 섹션에서 췌 구분 하 고 마지막으로 장 caecum에서.
2. Caecum에 집게를 재배치 하 고 계속 항문 쪽으로 나머지 결 따라 췌의 분리.
   참고:이 시점에서 그것은 편리 잘라내어 콜론 항문 바로 앞의 지역에서 위 부분을 제거.
3. 췌 찾아서 비장을 첨부 합니다. 마우스의 오른쪽을 향해 췌를 밉니다. 췌 장 및 인접된 비장 완전히 분리 집게 췌와 흉 강 사이 나머지 연결 구분.
4. 췌를 제거 하 고 시험을 위해 그것을 밖으로 확산. 식별 용 췌에 연결 된 비장을 둡니다.
   1. 제거 모든 결합 조직, 지방과 mesenteric 조직에서 췌 장.
      참고:이 조직의 색깔에 하얀 이며 따라서 컬러로 pinker는 췌 장 조직에서 쉽게 구분할 수 있습니다. 이것은 췌 장 전체를 제거 해야 하는 경우에 특히 중요 하다입니다. 예를 들어, 췌 장의 무게와 몸 무게에 또는 동물의 그룹 사이 비교 하는 경우. Ptf1a에서 ^{cre / +}; LSL Kra ^{G12D / +} 마우스 모델 이전 달에서 특히 하드 섬유 췌 장 조직 있을 수 있습니다. 이 경우에, 장내 종양 조직에 인터레이스 수로 췌의 주의 제거를 실시 해야 합니다. 고급의 경우에서 비정상적인 비장 및 간 조직 또한 존재할 수 있습니다.
5. 원하는 경우이 시점에서 다른 장기를 제거.

4. 데이터 수집 및 저장

1. 장기의 적 출, 후 보존을 위한 수술 후 영역에 샘플 이동.
2. 각 장기의 무게 및 그들의 각각 극저온 유리병에 넣어.
   참고: 따라 위트h 질량 각 샘플의 부정은 나중에 참조할에 기록 되어야 합니다.
3. 장기 무게는 일단 스냅 동결에 액체 질소에 그들을 배치.
4. 스냅 동결 후 장기 저장을 위한-80 ° C에서 장기 저장.
5. 벤치 위에 하룻밤 말린 저장 샘플을 배치 하 고 다음날 아침 그들의 솔루션 포 르 말린에서 70% 에탄올으로 변경.
   참고: 이러한 샘플은 장기 저장을 위한 4 ° C에 저장 되어야 합니다.
6. 장기 저장용 고정-80 ° c.에 혈액과 귀 펀치. 혈액에서 혈 청 수집, 30 분 동안 응고 후 그것을 원심 혈액을 수 있습니다. 피 펫을 사용 하 여 혈 청 부분을 제거 하 고 다음-80에 저장 ° c.

5. Clean Up

1. Sanitize 모든 해 부 도구 살 균 물티슈. 모자는 isoflurane 늘어서 튜브 수술 패드를 젖 었. 신선한 외과 패드에 폼 보드에 외과 패드를 바꿉니다. 처분 시설 당 하지 수집 된 마우스의 부분 ' s 동물 처리 정책.

그림 2 는 게시물 작업 영역 및 그림 1 운영 환경 영역에 대 한 개요를 보여준다. 이 설정은 최소한의 장비를 제공 하는 동안 준비, 개인에 가장 개인적인 필요에 맞게이 변경 하도록 선택할 수 있습니다. 프로토콜은 실험의 특정 요구에 따라 최적화 되어야 합니다. 이 절차는 필요 적절 한 euthanization⁹, 마우스의 생활을 종료 하는 방식으로 실시 됩니다. 연구원은 준비, 마우스 isoflurane 젖은 패드 (그림 3)와 함께 마 취 챔버에 배치 됩니다.

마우스 의식이 일단 마우스를 제거 하 고 보드에 등 쪽을 놓습니다. 발가락-핀치 절차 마우스 통증 (그림 4)에 응답 하지 않는 것을 보장 하기 위해 수행 되어야 한다. 70% 에탄올 소독 초기 절 개 지역에 적용 됩니다. 터미널 혈액 무승부 췌 제거 적절 한 혈액 검색 되도록 전에 먼저 실시 해야 합니다. 혈액 제거 전에 심 낭 여 21 G 바늘의 막힘을 방지 하기 위해 제거 되어야 한다. 터미널 피를 완료 한 후, 심장 안락사의 보조 방법으로 분리 되 그리고 췌 다음 제거 됩니다.

찾기 위, 췌 장 제거 (그림 5)에 대 한 좋은 출발점을 제공 하 여 시작 합니다. 참고: 극단주의 섬세 하 고 연약한 조직 인 췌의 제거 동안에 행사 해야 하 고 부드러운 힘으로 모든 작업을 수행 합니다 따라서. 위장에서 췌를 부드럽게 시작 하 여 해 부를 시작 하 고 위장 (GI)로 위장에서 십이지 장, 공장 및 회장 ( 작업의 외부 안 대기에서 췌 장 조직 분리를 계속 집게를 사용 하 여, 그림 6). caecum에 도달 하면 췌 장의 쉽게 제거 한 집게는 caecum 잡고 다른 집게 췌 장 (그림 7)에서 분리 하는 데 사용 됩니다 있도록는 집게를 재배치 하 여 이루어집니다. 큰 창 자에서 제거 후 췌 마우스의 오른쪽에 배치 되 고 나머지 첨부 파일은 절단된(그림 8).

췌 장 검사를 위해 밖으로 부채질 해야 하 고 어떤 이상이 되어야 합니다 (그림 9)를 기록 했다. Ptf1a에서^{cre / +}; LSL Kra^{G12D / +} 스트레인, 마우스 췌 경화 종양 (그림 10) 포함 될 수 있습니다. 다른 장기도 잠재적 전이 대 한 시험 한다. 췌 장의 제거 되었습니다 일단 무게 해야 하 고 무게 기록. 췌 장의 일부 스냅인-미래의 대사 프로 파일링 분석을 위한 액체 질소에서 냉동 또는 다른 테스트와 췌 장의 일부 미래 조직학 분석을 위해 포 르 말린에 배치 되어야 합니다. 그림 11 나중에 분석에 사용 하기 위해 절 개에서 수집 된 다양 한 기관의 초기 저장소를 보여 줍니다. 기관 절 개에 의해 수집 및 진학에 대 한 저장 된 개별 연구원의 목표에 따라 달라 집니다.

조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 조직 및 혈액 샘플을 사용할 수 있습니다. 췌 장 조직의 조직학 분석의 예는 그림 12에 표시 됩니다. 신진 대사 프로 파일링 스냅 냉동 조직 샘플 및 혈액 샘플에 지휘 될 수 있다. 췌 장 조직 추출의 친수성 및 소수 성 구성 요소의 대표적인 핵 자기 공명 분광학 (NMR) 스펙트럼 그림 13A , 13B, 각각 표시 됩니다. 터미널 혈액 무승부 절차의 시간에서 수집 된 혈액에서 준비 하는 혈 청 샘플 수집 대표 NMR 스펙트럼은 그림 14에 표시 됩니다.

그림 1 : 지역 운영의 준비. 올바른 도구와 해 부에 대 한 작동 조건의 일반적인 레이아웃. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 2 : 후 작업 영역의 준비. 올바른 도구와 수술 후 절차에 대 한 작동 조건의 일반적인 레이아웃. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 3 : 마 취 실. 통해 isoflurane 마 취에 대 한 적절 한 환경입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 4 : 자극 시험. 어떤 통증이 나 불편을 되도록 초기 절 개 전에 마우스에는 자극 시험을 견 뎌가 되 고. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 5 : 췌 장의 제거 시작. 췌 장 위치는 집게로 표시의 초기 추출 나타내는 마우스의 방향. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 6 : 창 자에 따라 췌 장 추출. 위장에서 췌 분리의 과정. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 7 : 췌 장 제거는 Caecum에. 한 번는 집게의 위치는 caecum 도달 된다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 8 : 췌 제거. 췌 마우스의 오른쪽에 놓습니다. 나머지 첨부 파일 췌를 완전히 제거 하려면 잘라 되어야 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 9 : 췌 장 검사. 연결 된 비장 마우스에서 제거 후 검사를 받고 함께 췌. 비장 수직 화살표에 의해 표시 되 고 췌 가로 화살표로 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 10 : 췌 장 검사. 연결 된 비장 췌 장 종양 마우스에서 제거 후 검사를 받고 표시와 췌 장. 비장 수직 화살표에 의해 표시 되 고 췌 가로 화살표로 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 11 : 저장 기관의 제거. 보관 기관 및 샘플의 수집, 장기 저장 및 미래 분석에 대 한 준비. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 12 : 췌 장 조직의 조직학 분석. 되며 고 오신 스테인드 췌 장 조직에서 이미지. Ptf1a에서 A) 정상적인 췌 장 조직^{cre /-}; LSL Kra^{G12D /-} 제어 마우스. Ptf1a의 췌 장에서 B) PanIN 조직^{cre / +}; LSL Kra^{G12D / +} 연구 마우스. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 13 : 프로 파일링 분석 대사. 췌 장 조직 추출 다음 조직 균질 하 고 클로 프롬/메탄올 추출 대상의 구성 요소 A) 친수성 및 B) 소수 단계 1 차원 양성자 핵 자기 공명 분광학 (NMR) 스펙트럼. NMR 스펙트럼 850 MHz에서 인수 했다 되며 신진 대사 프로 파일링 분석에 사용 하기 적합 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 14 : 혈 청의 대표 NMR 스펙트럼. 터미널 혈액 추첨 절차에 의해 수집 된 혈액 대사 프로 파일링 분석을 위해 사용할 수 있습니다. 이 스펙트럼 표시는 전형적인 1 차원 양성자 850 MHz NMR 스펙트럼 터미널 혈액 그리기 샘플에서 얻은 혈 청에 대 한 수집. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

기존의 방법에 관하여 의미
마우스 해의 다른 비공식적인 동영상 존재 하는 동안이 비디오 문서에서는 첫 번째 전문 품질, 피어 검토, 자세한 단계를 추출에 필요한 해^{10 부에 의해 마우스 췌의 수확의 모든 시각적 데모} . 신진 대사 활동 및 인슐린에 대 한 주요 기관 되 고 췌와 생산, 해 부와 췌의 수확 생리 특성¹¹의 보존에 대 한 수 있습니다. 췌, 분리 하 여 미래의 분석 샘플에 실시 수 있습니다. 이 절차는 비교와 같은 시간 프레임 내에 동일한 유기 체 내의 다른 조직에서 상호 작용의 연구에 대 한 수 있습니다.

기술의 한계
이 절차의 가장 큰 한계의 마우스의 생활, 경도 컬렉션 방지 및 동일한 마우스에서 여러 조직 샘플의 샘플링입니다. 나이, 성별, 또는 다른 수량자에 관련 된 트렌드를 분석 하기 위하여 횡단면 인구 구현 되어야 합니다, 우리가 췌장암의 대사 마커의 우리의 연구에 대 한 다. 이 프로토콜의 또 다른 한계는 절차를 일시 중지 하는 무 능력 이다. Euthanization 시작 되 면 절차 전체에 실시 해야 합니다.

프로토콜 내에서 중요 한 단계
마우스의 뒷 발을 곤란 하 게 하 여 자극 테스트의 실행이 마우스 자비 롭 처리를 받는 것을 보장 하기 위해 중요 합니다. 마우스가이 자극에 반응 하지 않는 경우 다음 절차 수 있습니다 실시 계획 대로. 그러나, 마우스 자극 테스트 결과로 고민된 응답 표시 마우스 반환 되어야 합니다 마 취 실로 시간과 자극 테스트에 대 한 반응¹²관찰 하지 때까지 반복 테스트의 추가 기간에 대 한.

마찬가지로, 터미널 심장 찔린 뒤에 연결의 제거는 마음에 마우스의 인간적 인 희생을 보장 하는 안락사의 보조 방법으로 터미널 혈액 샘플 수집 후에 즉시 합니다. 효과적인 혈액 무승부를 보장 하기 위해, 과학자 주사기는 마우스의 하트와 비슷한 분석을 위한 혈액의 최대 컬렉션에 대 한 허용 펌핑 동작을 사용 해야 합니다.

수정 및 문제 해결
70% 에탄올 솔루션 포 르 말린에서 장기 전환 조직학 분석에 필요한 포함 프로세스에 대 한 장기를 준비 합니다. 다른 저장소 솔루션 필요한 과학자 장기와 다른 실험을 수행 하도록 선택할 수 있습니다. 분석, 전에 어떤 잠재적인 녹고 오르간의 무결성을 유지 하기 위해-80 ° C 냉동 고에 저장 하는 장기의 제한 하는 것이 중요 하다.

Ptf1a의 사용^{cre / +}; LSL Kra^{G12D / +} 마우스 모델 비 췌 기본 종양 및 질환¹³의 발생을 최소화. 따라서, 부정 해 부와 분석에 대 한 조직 샘플의 수집 하는 동안 명백한 췌 장 또는 다른 장기에는 주의 하는 것이 중요 하다.

미래의 응용 프로그램
마우스 췌 장 해 부에 의해 수확 여러 유형의 분석 같은 샘플에 실시 될 수 있습니다. 이 중 가장 인기 있는 포함 하지만, 형광 현미경 검사 법, hematoxylin 및 오신 조직학, immunohistochemistry, 질량 분석, 및 핵 자기 공명 분광학^6,7, 에 국한 되지 않습니다. ^{14 , 15}. 당뇨병, 췌 장 염, 췌 장 암 같은 질병¹⁶위에서 언급 한 기술을 사용 하 여 공부 될 수 있다.

저자는 공개 없다.

MAK 인정 건강의 국가 학회에서이 작품에 대 한 지원 / 국립 암 연구소 번호-1R15CA152985-01A1를 부여. 이 프로젝트는 또한 마이애미 대학 학부 연구 보너스 프로그램, 마이애미 대학 박사 학위-학부 기회 장학금 프로그램 및 마이애미 대학 여름 학자 프로그램에 의해 지원 되었습니다.