この方法は、根と根圏科学の分野で、根が栄養素の局所的なパッチにどのように反応するかなど、主要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、土壌中の単一の根系の反復、非侵襲的な測定を可能にするが、それは特殊な機器を必要とせず、比較的安価である。アセンブリ用の Rhizobox の部品を集めます。
これらは、61センチメートルで約40センチメートルの透明なアクリルで作られたフロントとバックパネルが含まれています。この時点で、背面パネルの上に側面と底のスペーサーがあります。スペーサーは、パネルに以前にドリルされた穴に揃えられます。
リゾボックスの底に沿って行くためにポリエステルパディングの長さをカットします。裏面パネルの下のスペーサーの真上にパディングを置き、漏れを防ぎます。スペースの上のパネルを配置し、パディングを所定の位置に保持します。
今、Rhizoboxを組み立てるためにハードウェアを取得します。ドリル穴のそれぞれにネジ、2つのワッシャー、16進数ナットを使用します。フロントパネルにワッシャーを置き、ネジを裏面に締めます。
もう一つの洗濯機と六重ナット。土壌の損失を避けるために、すべてのネジが非常にタイトであることを確認してください。また、2人のスペーサーを作成して、治療とコントロールパッチを形成します。
高密度ポリエチレンシートでそれらを作り、部分的な挿入のみを可能にするために上部のネジを固定します。光の欠乏と減熱のために、箱を囲むことができる保護ケースを準備する。最後に、バックパネルに対して成長する根を奨励するフレームを構築します。
このPVCフレームは、約55度の角度でボックスを保持します。フィールド土壌と砂の均質化混合物を準備しています。各Rhizoboxの基質混合物を含む大きな袋から始めます。
処理とコントロールパッチ用に、1箱あたり2つの小さなジップトップバッグにラベルを付けます。スケールを使用し、土壌砂基板の30グラムを重量を量る。基板をコントロールバッグに移します。
同様に、処理袋に30グラムの基質を加える。その後、窒素15標識窒素源の1グラムを秤量し、処理袋に加えます。基材と窒素源を十分に混ぜます。
1つのRhizoboxで作業すると、パッチスペーサーです。ネジがそれ以上動かなくなるまで、2人のスペーサーを Rhizobox に挿入します。Rhizobox の側面にあるスペーサーの下端の深さをマークします。
次の手順でスペーサーを削除します。漏斗を使用して、基板の大きな袋からマークされた深さにRhizoboxを充填します。漏斗をゆっくりと均等に前後に動かして、Rhizoboxを均一に埋めます。
基板が印の深さにある場合は、スペーサーをボックスに入れます。彼らは箱の左右から5センチメートルでなければなりません。基板が箱の上から約5センチメートルになるまで箱を充填し続けます。
次に、滴りエミッタまたは手で150ミリリットルの水で箱の中の基板の遅い灌漑を手配します。水が拡散し、各スペーサーの周りの領域が完全に濡れているように、数時間または一晩休ませます。この時点で、スペーサーを取り外して、パッチの空のキャビティを残します。
さて、テープの透明フィルムを箱の外側に。透明度を使用して、1 つのパッチを処理としてラベル付けし、もう一方のパッチをコントロールとしてラベル付けします。次に、漏斗と準備されたコントロール基板を使用して、制御パッチを充填します。
これは、塗りつぶされた後のラベル付きコントロール パッチです。上に移動して、準備した処理用基板を同様に処理用のパッチに充填します。完了したら、パーマネントマーカーを使用して、透明フィルム上の各パッチの境界をトレースします。
次に、大きな袋から残った基板でRhizoboxを均等に充填します。透明に基板の上部をトレースして終了します。箱の準備ができたら、発芽種子を移植する。
まず、狭いヘラを使用して、Rhizoboxの中央に穴を掘ります。穴は2.5センチメートルの深さでなければなりません。発芽した種子を内側に置き、ラジカルが直接下向きであることを確認します。
ボックスにアタッチされている透過性にシードの位置をトレースします。種子を覆い、最大50ミリリットルの脱イオン水で水をまきます。次に、光が成長中に根と相互作用するのを防ぐために、その場合にボックスを囲みます。
準備したフレームに箱を持って行きなさい。フレームにリゾボックスを置き、バックフレームに向かって成長を促します。植物の成長の3〜4日ごとに箱を取得します。
ケースを取り除いた状態で、毎回異なるカラーペンを使用して植物の可視根をトレースします。この例のように、このステップに対して一貫性があり、体系的に実行してください。覆われたボックスをスタンドに戻し、元の向きであることを確認します。
ここでは、24 Rhizobox の背面にあるトレースされたルートのルートの合計長は、スキャナーとコンピュータ ソフトウェアを使用して測定されたルート長に対してプロットされます。ボックスの前面にあるトレースされたルートパターンの同様のプロットは、根が箱の裏に対して優先的に成長したのを示しています。成長の日の関数として全ルート長の対数のこのプロットの一貫した斜面は、成長率が異なるボックス間で類似していたことを示唆しています。
ここでは、1つのトウモロコシ遺伝子型のルート長密度のデータを示します。制御パッチの密度は窒素処理パッチの密度よりも小さい。実験では、6つの別々のトウモロコシ遺伝子型のルート長密度を比較した。
いずれの場合も、窒素15標識処理パッチと対照パッチの場合は、根長密度が大きかった。このプロトコルは、酵素活性または微生物の容量分布を可視化するために、sphygmographyや蛍光のハイブリダイゼーションなどの他の方法と組み合わせることができます。
