著者は北京生物科学研究所に支援を求めています。この研究は、北京市自然科学財団（No Z17110200040000）の支援を受けました。

このプロトコールで使用される全ての手順は、北京生物科学研究所の実験動物のケアおよび使用のためのガイドラインの推奨に従って行われた。実験が実施されるまで、8週齢のCD-1雄マウスを特定病原体不使用（SPF）施設に収容した。手術は、完全に麻酔したマウスを使用して行った（ すなわち 、つま先のつまみの反応なし）。手術後、マウスは、十分な食物および淡水を有する温かく湿った室内に置かれた。マウスを、腹腔内注射により送達された過剰の麻酔薬を用いて犠牲にした。 1.マウスPNX手術<ol><li>腹腔内（IP）注射によりナトリウムフェノバルビタール（120mg / kg体重）およびブプレノルフィン（0.1mg / kg体重）でマウスを完全に麻酔する。マウスがつま先へのピンチに反応しなくなったときに手術を行います。 </li><li>ケミカルデポを用いてマウスの左胸部の毛を除去する（約3×3cm 2面積）の治療を必要とする。 </li><li>各マウスを腹側を操作者に向けて挿管台に固定する（ 図1A ）。 </li><li>マウスの舌を引き出し、カテーテル18 （ 図1A ）を案内するノッチを含む小さな動物の喉頭鏡で声帯を照らす。 </li><li>呼吸中に声帯の動きを観察して声帯を区別します。静かに20Gの静脈内挿管カニューレを前角19で気管に挿入する。 </li><li>マウスを右横臥位に置き、カニューレを機械的人工呼吸器（ 例えば、圧力制御; 表の表を参照）に接続する。マウスの胸部の呼吸運動を観察して、カニューレの気管への挿入を確認します（ 図1B ）。 </li><li>吸息圧力を設定する換気装置を12 cmH 2 Oに設定し、呼吸速度を毎分120回の呼吸に設定します （ 図1B ）。 </li><li>ベタジンと70％エタノールで外科領域の皮膚を汚染除去する。 </li><li> Noyes Spring Scissors（刃先14 mm、先端直径0.275 mm）（ 図2B 、C ）を用いて、皮膚と筋肉を切断して、5 番目の肋間腔の空間に2〜3 cmの後外側開胸切開を行う。開胸手術に使用される手術器具は、使用前に滅菌される。 </li><li> 第 5肋間腔で1.5cmの切開を行い、左肺を露出させる（ 図2D 、E ）。操作中は、出血を止めるために高温焼灼器を​​使用してください。 </li><li>左肺葉の3分の1を鈍い先端鉗子で胸から持ち上げ（ 図2F ）、次に綿棒を使用して左全体を引き出す肺（ 図2G ）。 </li><li>左肺葉の肺動脈および気管支を特定する（ 図2G ）。 </li><li> hilumの気管支と血管を絹の外科用縫合糸でしっかりと結紮し、結紮から3〜4mmで左肺葉を切り取る（ 図2H 、I ）。 注：気胸（ すなわち 、胸部の空洞内の空気またはガス）を引き起こす可能性のある左丘の縫合結び目を切断しないように注意してください。 </li><li> 1つの縫合糸で胸壁を閉め、筋層と皮膚層を5〜6本の中断縫合糸を用いて縫い合わせる。各縫合糸の間に3〜4 mmの隙間を残す（ 図2M 、2N ）。 注：外科用縫合針を心臓から離してください。不慮の心臓穿刺は即座に死に至る。 </li><li>ポビドンヨードで手術部位を消毒する。 </li><li>アフト外科手術で38℃のサーマルパッドにマウスを置き、自発呼吸の動きが始まるまでマウスを人工呼吸器に接続します（ 図2O ）。 </li></ol> 2.プロテーゼインプラント<ol><li> PNX処置のステップ1.1〜1.13を実行します（つまり、マウスの左肺葉を取り除いた時点まで）。 </li><li>鈍い鉗子（ 図2J ）を使用して、シリコンプロテーゼの中心（顧客が作成した、長さ12mm、厚さ3mm、幅7mm、0.2g、楕円形）を締め付けます。シリコーンプロテーゼを挿入する前に滅菌する。 </li><li>胸腔を露出させるために片手で鉗子でリブを保持し、もう一方の手で左の空の胸腔にプロテーゼを挿入します。 注：挿入角度は、プロテーゼの前面と胸郭面との間で約45度です（ 図2K 、L）。プロテーゼを挿入するときは非常に優しい。過度の力は胸膜破裂をもたらす。 </li><li>鈍い鉗子でプロテーゼの向きを調整して、プロテーゼが左の空の胸腔を占めるようにします。 </li><li>マウスPNX手順のステップ1.14-1.16を実行します。 </li></ol> 3.ILVの測定<ol><li>使い捨ての血清学的ピペット（10 mL）から取り出したプランジャー、針アダプター、流量制御バルブ、および18 G針を備えた長さ40 cmのフレキシブルチューブからなるカスタムデバイス（「膨張チューブ」）を準備します。組み立て後、テープでボードにピペットを固定します （ 図3A ）。ピペットの上部と実験台との間の距離は、少なくとも30cmでなければならない。 </li><li> 55℃の水浴中で予め加熱した1×リン酸緩衝生理食塩水（PBS）500mLにPFA 20gを溶解し、手動で振とうして新鮮な4％パラホルムアルデヒド（PFA）固定液を調製する溶液が透明になるまで10分おきに静置する。室温に冷却した後、溶液を0.45μmフィルターで濾過する。 注意：PFAを取り扱うときは、適切な個人用保護具（PPE）を着用してください。 </li><li>マウスを麻酔薬の過剰投与（0.8％のフェノバルビタールナトリウム、1,000U / mLヘパリン）で犠牲にする。 </li><li>ポリスチレン解剖プレートに各マウスを固定し、70％アルコールを噴霧する。 </li><li>注意深くマウスの胸を開き、はさみを使用して胸骨を切り開いて肺葉を完全に露出させます。 </li><li>はさみを使用して過剰な組織を除去し、気管を露出させる。食道から気管を離してください。 </li><li>腹部大動脈を切断し、心臓の右心室に25ゲージの針を挿入する。この挿入の前に針を20 mLシリンジに接続してください。肺が白くなるまで、ゆっくりと1x PBSを心臓に押し込み、血球を除去します。典型的には、5~10mLのPBSが肺血管を浄化するために必要とされる。 </li><li>あなたを埋める4％の新鮮なPFAを含むカスタムビルドのインフレーションチューブを取り出し、インフレーションチューブからすべての泡を除去します。 </li><li>インフレーションチューブの18ゲージの針を気管に挿入し、液体漏れを防ぐために気管クリップで気管をクリップする。 </li><li> 25cmで一定経肺圧力/ H 2 O 2、20℃で4％PFAで肺を膨らませます。完全に拡張した肺を達成するために、肺を室温で2時間インキュベートする。この「予備固定」工程は、肺の形態を維持するために重要である。 <ol><li>膨張チューブを監視することにより、最初の4％PFA量の値を記録し、最終量を記録する。内部肺容積は、初期4％PFA容積から最終4％PFA容積を差し引いた容積に等しい。 </li></ol></li><li>気管をLigateし、はさみを使用して、周囲の結合組織から肺を静かに（肺をそのままに）解剖する。肺の損傷を避けるために、非常に穏やかにしてください。 </li><li>インコ4％PFAを満たした50 mLコニカルチューブで、4℃で12時間、シェーカー（50 rpm）で穏やかに振とうしながら肺を栓をする。組織の処理と染色に進む（セクション4を参照）。 </li></ol>組織埋め込み、切片化、およびヘマトキシリン＆エオシン（H＆E）染色<ol><li>固定後、Noyes Spring Scissorsを使用して、肺から心臓や過剰な結合組織を整えます。肺葉を気管に接続する気管支を切断することによって、個々の肺葉を静かに分離する。 </li><li>オービタルシェーカー（50 rpm）で50 mL 1x PBS（30分/洗浄）で3〜4回肺葉を広範囲に洗浄します。 </li><li>最後の洗浄後、組織が50mLコニカルチューブ（約12時間）の底に沈むまで4℃で30％ショ糖溶液（1×PBS）に浸すことによって肺葉を凍結保護する。 </li><li>組織を包埋して凍結切除する前に、鉗子で肺葉試料を管から取り出し、アクセスを保持する約30分間、最適切断温度（OCT）化合物を含有するペトリ皿に試料を完全に浸漬する。 </li><li>クライオホルムを使用して液体窒素中でOCTに埋め込まれたアクセサリーローブサンプルを凍結させる。ローブの最大表面積をモールドの底面に平行にします。 </li><li>組織学的分析のために凍結切片作製中に、各試料について合計3つの厚さ10μmの切片を調製する。最初の1mmの組織を捨て、10μmの厚さの部分を1枚集め、0.5mmの組織を捨て、別の部分を集め、0.5mmの組織を捨て、第3の（最終）部分を集める。 </li><li> H＆E染色を行う前に、セクションを1時間風乾します。 </li><li> H＆E染色を行う <ol><li>水道水の3〜4回の切替えで切片を洗浄し、新鮮なヘマトキシリン中の切片を2分間染色する。;実行中の水道水の下でセクションをすすぎます。切片を1％HCl-70％エタノール溶液に2回浸して過剰のヘマトキシリンを除去する。 </li><li>新鮮なエオシンの切片を3分間染色する。 95％エタノール中で2回連続して30秒洗浄し、100％エタノールで2回30秒洗浄することにより切片を脱水する;キシレン中の切片を30秒間透明にし、清澄化工程を新鮮なキシレン中で1回繰り返す;カバーガラスを使用してスライドをマウント媒体でマウントします。 </li></ol></li></ol> MLIの定量化<ol><li>明視野顕微鏡を用いて、H＆Eで染色されたアクセサリーローブ切片（20倍の倍率）のデジタル画像を取得する。 </li><li> MLIを定量化するには、3つのセクションからなる適切な領域（動脈および静脈、大気道および肺胞管なし）から無作為に合計15個の非重複ビュー（1,000μmx1,000μm）を選択します。 </li><li> 10個の均等に配分された垂直線と定義されたlenの均等に分布した水平線10個でグリッドを配置する選択された領域にルーラーツールを使用してgth（1,000μm）を表示します。したがって、各ラインは100μm離れて配置されている（ 図4B ）。 </li><li> 1つの切片の値を、2つの隣接する肺胞上皮の間の線形長さとして定義する。各1,000μmの長さのラインに沿ったすべての切片の値を測定する。 </li><li>各グリッドについて、10本の水平な1,000μmの長さのラインと10本の垂直な1,000μmの長さのラインの間のすべての切片の値を定量化する。 注：MLIは、アクセサリーローブのそれぞれについて用意された3つのセクションの中から分析された合計15個のグリッドからの切片長の平均値である。 </li></ol> ISAの計算<ol><li> 式1を使ってISAを計算します（ はじめにを参照）。 ILVの測定についてはセクション3を参照し、MLIの定量化についてはセクション5を参照してください。 </li></ol>

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著者は何も開示することはない。

このプロトコールでは、マウス左肺PNXおよび人工器官移植後の肺パラメータの測定についての詳細な説明を提供する。 ISAは現在、多くの肺疾患および傷害誘発性肺胞再生における呼吸機能の評価のための重要なメトリックであると考えられている。しかし、肺研究の共同体はISAの有用性について有用な指標として合意されているが、ISAを計算するために使用されるILVとMLIの測定の標準化についてはほとんど考慮されていない。明らかに、測定と同様に、偏りのないデータを取得することが重要です。現在の研究努力の中心的な目標は、マウス肺研究共同体による使用のための標準化されたプロトコルを確立することである。 私たちは、このプロトコルを開発したときに、さまざまな方法で測定バイアスの原因を減らそうとしました。我々は、ILV測定値の変化が赤色であり得ることを見出した気管に挿入された針の寸法が寸法的に一致していることを保証することによって流体の漏れを防止することによって（18ゲージ針がマウス気管に密接に適合していることがわかった）また、PFAの膨張前にマウスの胸壁を完全に除去する必要があることも判明しました。これは、胸壁がILV測定に与える影響を最小限に抑えるためです。 MLI値は、肺胞形態に大きく依存する。したがって、年齢が一致した性マッチングしたマウスを使用することの重要性に加えて、肺固定処置中の肺胞形態の適切な維持が極めて重要である。肺組織を完全に拡張するために、新たに調製した4％PFAを用いて25cmH 2 Oの経肺圧で肺を膨らませた。私たちの経験では、圧迫の程度が低くなると、組織の収縮、異常な肺胞形態につながり、最終的にはMLI値が低くなります。 の観察私たちの以前の研究は、PNX再生の後、残りの肺の副葉が他の3つの肺葉と比較して最大容積膨張を示すことを示した。残りの肺のアクセサリーローブも形態学的パラメータの値の最大の増加（ 例えば 、MLI）21、22、23、24を示します。したがって、異なる肺葉からの変化を避けるために、付属葉の切片のみを分析した。 MLIの定量化に使用される様々なセクション間のばらつきを軽減するために、埋め込み時のローブの向きを制御しました。ローブの最大表面をクライオドールドの底面に平行に配置しました。我々はまた、切片の厚さ、切片サンプリングの順序、および切片化中の切断位置を注意深く制御した。サンプル処理に加えて、標準化の側面は、すべての動脈および静脈、胸膜、大気道、および肺胞管を、MLIの定量化の間に評価される組織領域から除外する必要があることである。動脈、静脈、および肺胞管はすべて肺胞よりも（4〜10倍）大きいため、これらの大きな構造物を除外することは信頼できる傍受測定を得る上で重要です。各群について、5匹のマウスが定量に適している。各マウスについて、副葉の3つの切片の適切な領域（動脈および静脈、主要な気道および肺胞管なし）から無作為に合計15個の重複しない視野（1,000μm×1,000μm）を選択した。サンプル包埋法およびMLI測定は、パラフィン処理した肺組織にも適用することができる。 他のものは、MLIを、総ライン長を横切った肺胞壁25のインターセプト数で割ったものとして定義したが、ここでは線形長さとして線形切片を使用したMLI計算における2つの隣接する肺胞上皮壁の間で、MLIデータから間葉の厚さを無視する。したがって、我々はILVを用いてISAを計算したが、総肺容積は計算しなかった。 PNXおよびプロテーゼ移植手順の場合、PNXを受けたマウスの生存率は85％〜90％の範囲であった。プロテーゼ移植を受けたマウスの生存率は約80％であった。すべての外科手術の間に、マウスの生存を改善するためにいくつかのステップを取る必要があります。 1）気管内へのカテーテルの適切な挿入は、PNX手術の成功の前提条件である。喉頭鏡のガイダンスでは、気管挿管を安全かつ効果的に行うために、気管を容易に観察することができる。 2）手術中に肺や心臓を穿刺しないでください。 5番目の左肋間腔の胸郭が広く開けられていること、および左葉の肺門が肺葉切除の前に明確に確認されていることを確認します。左肺葉再発を行う場合肺出血および/または肺葉破裂を避けるために、鈍い鉗子を使用して左葉が損なわれていないことを確認します。創傷閉鎖時には、手術針の先端を心臓や肺から離してください。 3）余分な力が胸膜の破裂を引き起こす可能性があるので、空の胸腔にプロテーゼを挿入するときは穏やかにしてください。 4）術後低体温がマウスの罹患率を増加させることが知られているので、マウスを38℃のサーマルパッドに置き、感覚が回復するまでモニターする。 左肺葉の除去後、肺呼吸器ユニットおよび肺内ガス交換領域の両方が有意に減少した。手術後14日目に、残りの肺組織中のILV、MLI、およびISAは、PNX処置群のマウスが義肢移植群よりも有意に大きく、補綴物の挿入がPNX誘発肺胞の閉塞を強く示唆した再生。したがって、PNXおよび人工器官移植マウスモード機械的な力によって引き起こされた再肺胞化の間に起こる細胞および分子事象の調査のための強力なツールとして使用することができる。さらに、 Yap AT2ヌル肺のISA値は、PNX後14 日目の対照肺のISA値よりも有意に小さく、このプロトコールは遺伝的突然変異マウスの再生障害の検出にも適していることが示された。この研究で提示された厳密で標準化された定量法は、発達研究における肺パラメータおよびISA、ならびに慢性閉塞性肺疾患の肺気腫、肺損傷後の肺胞再生および肺発生を含む、複数の疾患の遺伝的に改変された動物モデル欠陥。

肺の基本的機能は、血管と大気との間の酸素と二酸化炭素の交換である。気管支肺胞形成異常（BPD）、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、急性呼吸器感染症などの肺疾患は、ISA 2の減少をもたらす。肺疾患を研究研究者はMLI、ILV、ガス交換ユニットの数、ISA、および肺組織のコンプライアンス2、3などの肺の形態学的変化を評価するためにいくつかの定量的な方法を開発しました。 Weibel らによる先駆的研究4およびDuguid ら 5一緒にISAは、ヒト肺における肺のガス交換能力の直接の尺度として使用することができ、肺気腫の重症度を決定するための基準として使用することができることを確立しました。過去5年間に発表された多くの研究では、肺の形態学的パラメーター（ 例えば、 </e開発6中や傷害PNX 1、7から回復中のマウスの肺の形態学的および機能的変化を評価するために、M&gt; ISAとMLI）。 ISAは、 式（1）8,9用いて計算されます。 <img alt="式" src="/files/ftp_upload/56114/56114eq1.jpg" />ここで、ILVは、内部肺容積であり、MLIは、肺周辺空隙サイズ10を表す中間パラメータである。 PNX、一つ以上の肺葉の外科的切除は、広く人間11、マウス1、犬12、ラット13、およびウサギ14、15を含め、多くの種で、肺胞の再生を誘導することが報告されています。スタッドPNX後14日目にマウスの肺のyは、既存の肺胞の拡大と肺胞の新形成の両方が、残りの肺組織におけるISA、ILV、および肺胞の数の回復に寄与することを示した1 。我々と他の人は、スポンジ、ワックス、カスタム形状のプロテーゼなどの材料を空の胸腔にPNX（ すなわち人工器官の植え込み）後に挿入すると、肺胞の再生が損なわれることを示しています。今ではしっかりと肺胞の再生1、16、17を開始するための最も重要な要因の一つとして、その機械的な力の機能を確立しています。そのような研究は、肺胞再生を定量的に評価する基準として、PNX処置および人工器官埋め込み肺からのISA値を使用する有効性を強調している。 観察者バイアスは、測定されたvaに有意に影響を及ぼすことが知られている肺の形態学的パラメーター（ 例えば 、MILおよびILV）についてのルーツ。 ISAの計算に使用される2つのパラメータであるILVとMLIの両方を決定する際に、標準化されたプロトコルを使用してこのバイアスを回避することができます。ここでは、これらの肺パラメータを測定するための非常に詳細な、標準化されたプロトコルを提供します。重要なことに、ISAを正確に定量する能力は、損傷誘発性の肺胞再生モデルにおける肺機能の研究の信頼性および再現性を改善することを約束し、複数の肺疾患における機械的発見を促進するはずである。

<table width="881">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:411px;height:21px;">Low cost cautery kit</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:136px;">18010-00</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Noyes scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15012-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Standard pattern forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Castroviejo Micro Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12060-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vessel clips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18374-44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">I. V. Cannula-20 gauge</td>
			<td>Jinhuan Medical Product Co., LTD.</td>
			<td>29P0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical suture</td>
			<td>Jinhuan Medical Product Co., LTD.</td>
			<td>F602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse intubation platform</td>
			<td>Penn-Century, Inc</td>
			<td>Model MIP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Small Animal Laryngoscope</td>
			<td>Penn-Century, Inc</td>
			<td>Model LS-2-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TOPO Small Animal Ventilator</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>RSP1006-05L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermal pad</td>
			<td>Stuart equipment</td>
			<td>SBH130D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital sodium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heparin sodium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxylin Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>GHS132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin Y solution, alcoholic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT110116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 ml Pipette</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>170356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">O.C.T Compound</td>
			<td>Tissue-Tek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">cryosection machine</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable Base Molds</td>
			<td>Fisher HealthCare</td>
			<td>22-363-553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18 gauge needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone iodine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19-027132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70% ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP82011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Infusion sets for single use</td>
			<td>Weigao</td>
			<td>SFDA 2012 3661704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td align="right">10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tapes</td>
			<td>3M Scotch</td>
			<td style="width:136px;">8915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cotton pad</td>
			<td>Vinda</td>
			<td>Dr.P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicone prosthesis</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Brightfield microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>VS120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ruler tool</td>
			<td>Adobe Photoshop</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a standardized method for measuring internal lung surface area via mouse pneumonectomy and prosthesis implantation

Pulmonary morphology, physiology, and respiratory functions change in both physiological and pathological conditions. Internal lung surface area (ISA), representing the gas-exchange capacity of the lung, is a critical criterion to assess respiratory function. However, observer bias can significantly influence measured values for lung morphological parameters. The protocol that we describe here minimizes variations during measurements of two morphological parameters used for ISA calculation: internal lung volume (ILV) and mean linear intercept (MLI). Using ISA as a morphometric and functional parameter to determine the outcome of alveolar regeneration in both pneumonectomy (PNX) and prosthesis implantation mouse models, we found that the increased ISA following PNX treatment was significantly blocked by implantation of a prosthesis into the thoracic cavity1. The ability to accurately quantify ISA is not only expected to improve the reliability and reproducibility of lung function studies in injured-induced alveolar regeneration models, but also to promote mechanistic discoveries of multiple pulmonary diseases.

<html>ここでは、PNX治療群と人工器官埋め込み（義肢植込み）群の実験を行った。これらのグループ分けは、研究グループ14の以前に発表された研究で使用されたグループ分けと同じです。 マウスPNXおよびプロテーゼ移植手順を図2に示す。 8週齢のCD-1雄マウスを手術および定量のために使用する。 PNX処置群とプロテーゼ注入群では、左肺は、両方が（ - 2I 図2A）を切除したローブ。左肺葉は（ - 2L 図2J）を除去した後のプロテーゼ注入群、左肺葉の大きさと形状を模倣プロテーゼに胸部に挿入しました。 手術後14日目に、カスタムメイドのインフレーションチューブを使用して、残りの右肺のILVを決定した（ 図3A ）。残りの右のILVの平均ILVは、 5PNX処置マウスの肺は約1.4mLであり、5人の義足移植マウスの右肺の1.05mL ILV値より有意に高かった（ 図3B 、表1 ）。 MLI測定のために、各マウスから調製した3つの切片の中から合計15個の視野を分析した。 図4Aは、MLIの定量化に使用される、選択された領域（ 例えば、ビュー1〜3）または選択されていない領域（ 例えば、ビュー4〜5）に対するアクセサリーローブセクションおよび形態学的基準からの併合画像を示す。ここでは、PNX処置群の付属肺葉切片からの視野3を、MLIの測定（ 図4B ）。図3の拡大図もまた例示のために表示されている（ 図5A ）。ライン3は、例として示されている：両頭の矢印線によって示される、傍受された肺胞空間の長さ。我々の分析は、PNX処置マウスの残りの右肺におけるMLI値が、義肢移植マウスの残りの右肺のMLI値よりも有意に大きいことを示した（ 図5B 、表1 ）。全てのデータは、平均±SEM （ 図5B ）。 式1を用いてISAを計算した。 表1は、すべての肺のILV値、MLI値、およびISAを示す。補綴移植されたマウスのISAは、PNX処置マウスのISAよりも有意に小さかった。これは、挿入プロテーゼのnがPNX誘導性再生を損なう。 <img alt="図1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56114/56114fig1.jpg" /> 図1：マウス気管内挿管および機械的換気。 （ A ）喉頭鏡検査による20Gの静脈内挿管カニューレによる気管内挿管。 （ B ）手術前に、完全に麻酔したマウスを圧力制御の機械的人工呼吸器に接続する。 <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56114/56114fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。</a> <img alt="図2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56114/56114fig2.jpg" /> 図2：マウス肺炎摘出（PNX）と義歯移植 （ A - C ）皮膚と筋層を切断します。ストップb外科手術中に高温焼灼器を​​用いて穿孔する。 （ D - E ）5 番目の肋間腔に1.5cmの切開を作る。 （ F - H ）鈍い鉗子で左肺葉を引き出し、肺動脈および気管支を同定し、肺門に結紮する。矢印は、左肺葉の肺動脈および気管支を表す。 （ I ）結紮から3〜4mmで左肺葉を切除した。 （ J - L ）左胸腔にプロテーゼを挿入します。 （ M、N ）胸部、筋肉層、皮膚層を縫合します。 （ O ）自発呼吸の動きが始まるまでマウスを監視する。 <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56114/56114fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。</a> 図3：残りの右肺の内部肺容積（ILV）の測定。 （ A ）内部肺容量を測定するためのカスタムデバイス（「膨張チューブ」）。 （ B ）PNX処置群および補綴物移植群の残りの右肺のILV（平均±SEM）を、PNXの14日後に測定した。 **、 p &lt;0.01、スチューデントt検定 。 <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56114/56114fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。</a> <img alt="図4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56114/56114fig4.jpg" /> 図4：残りの右肺におけるアクセサリーローブの平均線形迎え（MLI）の定量化。 （ A ）マージされたイムアクセサリーローブセクションの年齢が示されています。 MLIの定量化に使用される選択された領域（ 例：ビュー1〜3）と非選択領域（ 例：ビュー4〜5）の例 （ B ）所定の長さ（1000μm）の10本の等間隔の垂直線および10本の等間隔の水平線を、選択された領域に配置した。スケールバー= 1mm。 <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56114/56114fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。</a> <img alt="図5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56114/56114fig5.jpg" /> 図5：PNX処置肺および義肢移植肺におけるMLIの定量。 （ A ） 図4Bの拡大図3を示す。二重矢印のある赤色の線は、1つの線形切片の長さを表します。 （ B ）MLI値（平均±SEPNX処置マウスおよび義肢移植マウスの副葉のPNX（P。M.）を、PNXの14日後に測定した。 *、 p &lt;0.05、スチューデントt検定 。スケールバー：100μm。 <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56114/56114fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 手術14日後 </td><td> 内部肺容積（ml） </td><td> 平均線形切片（mm） </td><td> 内肺表面積= 4ILV / MLI（cm 2 ） </td></tr><tr><td rowspan="5"> PNX処理 </td><td> 1.5 </td><td> 57.8 </td><td> 1038.06 </td></tr><tr><td> 1.35 </td><td> 49.6 </td><td> 1088.71 </td></tr><tr><td> 1.42 </td><td> 48.5 </td><td> 1171.13 </td></tr><tr><td> 1.4 </td><td> 51.5 </td&gt; <td> 1087.38 </td></tr><tr><td> 1.4 </td><td> 54.6 </td><td> 1025.64 </td></tr><tr><td rowspan="5"> 人工補綴物 </td><td> 1.1 </td><td> 49.6 </td><td> 887.10 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 50.5 </td><td> 792.08 </td></tr><tr><td> 1.1 </td><td> 47.3 </td><td> 930.23 </td></tr><tr><td> 1.15 </td><td> 44.8 </td><td> 1026.79 </td></tr><tr><td> 0.86 </td><td> 46.3 </td><td> 742.98 </td></tr></tbody></table> 表1：PNX処置マウスおよび義肢移植マウスのISA値の計算。 PNXの14日後のアクセサリーローブのILV、MLI、およびISAの値。

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A Standardized Method for Measuring Internal Lung Surface Area via Mouse Pneumonectomy and Prosthesis Implantation

内臓の肺表面積（ISA）は、肺疾患および傷害誘発性肺胞再生における肺の形態学および生理学を評価するための決定的な基準である。ここでは、肺の肺切除術とプロテーゼ移植マウスモデルの両方でISAの測定バイアスを最小限に抑える標準化された方法について説明します。

マウス肺切除術および義歯移植による内臓肺表面積の標準化法

Pulmonary morphology, physiology, and respiratory functions change in both physiological and pathological conditions. Internal lung surface area (ISA), ...

a-standardized-method-for-measuring-internal-lung-surface-area-via

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

13.1K ビュー.  Peking University. 内臓の肺表面積（ISA）は、肺疾患および傷害誘発性肺胞再生における肺の形態学および生理学を評価するための決定的な基準である。ここでは、肺の肺切除術とプロテーゼ移植マウスモデルの両方でISAの測定バイアスを最小限に抑える標準化された方法について説明します。 

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Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic conservation, as well as similarities in cellular, molecular, and physiological processes, with other vertebrates including humans. During early ontogeny, zebrafish embryos are optically transparent, allowing researchers to visualize the dynamics of organogenesis using a simple stereomicroscope. Microbead implantation is a method that enables tissue manipulation through the alteration of factors in local environments. This allows researchers to assay the effects of any number of signaling molecules of interest, such as secreted peptides, at specific spatial and temporal points within the developing embryo. Here, we detail a protocol for how to manipulate and implant beads during early zebrafish development.

The zebrafish is an excellent model system for genetic and developmental studies. Bead implantation is a valuable tissue manipulation technique that can be used to interrogate developmental mechanisms by introducing alterations in local cellular environments. This protocol describes how to perform microbead implantation in the zebrafish embryo.

ゼブラフィッシュ胚におけるマイクロビーズの移植

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

発生生物学

Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that adheres to form the midline epithelial seam (MES). The theories suggest that MES cells follow an epithelial to mesenchymal transition (EMT), apoptosis and migration, making a fused palate 1. Complete disintegration of the MES is the final essential phase of palatal confluence with surrounding mesenchymal cells. We provide a method for palate organ culture. The developed in vitro protocol allows the study of the biological and molecular processes during fusion. The applications of this technique are numerous, including evaluating responses to exogenous chemical agents, effects of regulatory and growth factors and specific proteins. Palatal organ culture has a number of advantages including manipulation at different stages of development that is not possible using in vivo studies.

Studies of palate development are motivated by the incidence of cleft palate, a birth defect that imposes a tremendous health burden and can leave lasting disfigurement. We demonstrate here a technique to culture palatal shelves that can be used to study different signaling pathways involved in palatal development and fusion.

静的器官培養を使用して口蓋の融合を研究の方法

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that ...

Production and Administration of Therapeutic Mesenchymal Stem/Stromal Cell (MSC) Spheroids Primed in 3-D Cultures Under Xeno-free Conditions

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) hold great promise in bioengineering and regenerative medicine. MSCs can be isolated from multiple adult tissues via their strong adherence to tissue culture plastic and then further expanded in vitro, most commonly using fetal bovine serum (FBS). Since FBS can cause MSCs to become immunogenic, its presence in MSC cultures limits both clinical and experimental applications of the cells. Therefore, studies employing chemically defined xeno-free (XF) media for MSC cultures are extremely valuable. Many beneficial effects of MSCs have been attributed to their ability to regulate inflammation and immunity, mainly through secretion of immunomodulatory factors such as tumor necrosis factor-stimulated gene 6 (TSG6) and prostaglandin E2 (PGE2). However, MSCs require activation to produce these factors and since the effect of MSCs is often transient, great interest has emerged to discover ways of pre-activating the cells prior to their use, thus eliminating the lag time for activation in vivo. Here we present protocols to efficiently activate or prime MSCs in three-dimensional (3D) cultures under chemically defined XF conditions and to administer these pre-activated MSCs in vivo. Specifically, we first describe methods to generate spherical MSC micro-tissues or &#39;spheroids&#39; in hanging drops using XF medium and demonstrate how the spheres and conditioned medium (CM) can be harvested for various applications. Second, we describe gene expression screens and in vitro functional assays to rapidly assess the level of MSC activation in spheroids, emphasizing the anti-inflammatory and anti-cancer potential of the cells. Third, we describe a novel method to inject intact MSC spheroids into the mouse peritoneal cavity for in vivo efficacy testing. Overall, the protocols herein overcome major challenges of obtaining pre-activated MSCs under chemically defined XF conditions and provide a flexible system to administer MSC spheroids for therapies.

Production and Administration of Therapeutic Mesenchymal Stem/Stromal Cell MSC Spheroids Primed in 3-D Cultures Under Xeno-free Conditions

The therapeutic potential of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) is well-documented, however the best method of preparing the cells for patients remains controversial. Herein, we communicate protocols to efficiently generate and administer therapeutic spherical aggregates or 'spheroids' of MSCs primed under xeno-free conditions for experimental and clinical applications.

異種非含有条件下での3次元培養における治療間葉系幹/間質細胞の生産と管理（MSC）スフェロイドプライム

Mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) hold great promise in bioengineering and regenerative medicine. MSCs can be isolated from multiple adult tissues via ...

Isolation and Enrichment of Liver Progenitor Subsets Identified by a Novel Surface Marker Combination

During chronic liver injuries, progenitor cells expand in a process called ductular reaction, which also entails the appearance of inflammatory cellular infiltrate and epithelial cell activation. The progenitor cell population during such inflammatory reactions has mostly been investigated using single surface markers, either by histological analysis or by flow cytometry-based techniques. However, novel surface markers identified various functionally distinct subsets within the liver progenitor/stem cell compartment. The method presented here describes the isolation and detailed flow cytometry analysis of progenitor subsets using novel surface marker combinations. Moreover, it demonstrates how the various progenitor cell subsets can be isolated with high purity using automated magnetic and FACS sorting-based methods. Importantly, novel and simplified enzymatic dissociation of the liver allows for the isolation of these rare cell populations with a high viability that is superior in comparison to other existing methods. This is especially relevant for further studying progenitor cells in vitro or for isolating high-quality RNA to analyze the gene expression profile.

Liver injuries are accompanied by progenitor cell expansion that represents a heterogeneous cell population. Novel classification of this cellular compartment allows for the distinguishing of multiple subsets. The method described here illustrates the flow cytometry analysis and high purity isolation of various subsets that can be used for further assays.

新規の表面マーカーの組み合わせで識別離および肝前駆サブセットの濃縮

During chronic liver injuries, progenitor cells expand in a process called ductular reaction, which also entails the appearance of inflammatory cellular ...

Assessing Cardiomyocyte Subtypes Following Transcription Factor-mediated Reprogramming of Mouse Embryonic Fibroblasts

Direct reprogramming of one cell type into another has recently emerged as a powerful paradigm for regenerative medicine, disease modeling, and lineage specification. In particular, the conversion of fibroblasts into induced cardiomyocyte-like myocytes (iCLMs) by Gata4, Hand2, Mef2c, and Tbx5 (GHMT) represents an important avenue for generating de novo cardiac myocytes in vitro and in vivo. Recent evidence suggests that GHMT generates a greater diversity of cardiac subtypes than previously appreciated, thus underscoring the need for a systematic approach to conducting additional studies. Before direct reprogramming can be used as a therapeutic strategy, however, the mechanistic underpinnings of lineage conversion must be understood in detail to generate specific cardiac subtypes. Here we present a detailed protocol for generating iCLMs by GHMT-mediated reprogramming of mouse embryonic fibroblasts (MEFs). 
We outline methods for MEF isolation, retroviral production, and MEF infection to accomplish efficient reprogramming. To determine the subtype identity of reprogrammed cells, we detail a step-by-step approach for performing immunocytochemistry on iCLMs using a defined set of compatible antibodies. Methods for confocal microscopy, identification, and quantification of iCLMs and individual atrial (iAM), ventricular (iVM), and pacemaker (iPM) subtypes are also presented. Finally, we discuss representative results of prototypical direct reprogramming experiments and highlight important technical aspects of our protocol to ensure efficient lineage conversion. Taken together, our optimized protocol should provide a stepwise approach for investigators to conduct meaningful cardiac reprogramming experiments that require identification of individual CM subtypes.

This manuscript describes a step-by-step protocol for the generation and quantification of diverse reprogrammed cardiac subtypes using a retrovirus-mediated delivery of Gata4, Hand2, Mef2c, and Tbx5.

マウス胚線維芽細胞の転写因子媒介リプログラミングに続いて心筋細胞のサブタイプを評価します

Direct reprogramming of one cell type into another has recently emerged as a powerful paradigm for regenerative medicine, disease modeling, and lineage ...

A Standardized Approach for Multispecies Purification of Mammalian Male Germ Cells by Mechanical Tissue Dissociation and Flow Cytometry

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) has been one of the methods of choice to isolate enriched populations of mammalian testicular germ cells. Currently, it allows the discrimination of up to 9 murine germ cell populations with high yield and purity. This high-resolution in discrimination and purification is possible due to unique changes in chromatin structure and quantity throughout spermatogenesis. These patterns can be captured by flow cytometry of male germ cells stained with fluorescent DNA-binding dyes such as Hoechst-33342 (Hoechst). Herein is a detailed description of a recently developed protocol to isolate mammalian testicular germ cells. Briefly, single cell suspensions are generated from testicular tissue by mechanical dissociation, double stained with Hoechst and propidium iodide (PI) and processed by flow cytometry. A serial gating strategy, including the selection of live cells (PI negative) with different DNA content (Hoechst intensity), is used during FACS sorting to discriminate up to 5 germ cell types. These include, with corresponding average purities (determined by microscopy evaluation): spermatogonia (66%), primary (71%) and secondary (85%) spermatocytes, and spermatids (90%), further separated into round (93%) and elongating (87%) subpopulations. Execution of the entire workflow is straightforward, allows the isolation of 4 cell types simultaneously with the appropriate FACS machine, and can be performed in less than 2 h. As reduced processing time is crucial to preserve the physiology of ex vivo cells, this method is ideal for downstream high-throughput studies of male germ cell biology. Moreover, a standardized protocol for multispecies purification of mammalian germ cells eliminates methodological sources of variables and allows a single set of reagents to be used for different animal models.

This work describes the standardization of a method to obtain purified germ cell populations from testicular tissue of different mammalian species. It is a straightforward protocol that combines mechanical testis dissociation, staining with Hoechst-33342 and propidium iodide, and FACS sorting, with wide applications in comparative studies of male reproductive biology.

機械的組織解離およびフローサイトメトリーによる哺乳動物雄胚細胞のマルチシード精製のための標準的アプローチ

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) has been one of the methods of choice to isolate enriched populations of mammalian testicular germ cells. ...

A Method for Characterizing Embryogenesis in Arabidopsis

Given the highly predictable nature of their development, Arabidopsis embryos have been used as a model for studies of morphogenesis in plants. However, early stage plant embryos are small and contain few cells, making them difficult to observe and analyze. A method is described here for characterizing pattern formation in plant embryos under a microscope using the model organism Arabidopsis. Following the clearance of fresh ovules using Hoyer's solution, the cell number in and morphology of embryos could be observed, and their developmental stage could be determined by differential interference contrast microscopy using a 100X oil immersion lens. In addition, the expression of specific marker proteins tagged with Green Fluorescent Protein (GFP) was monitored to annotate cell identity specification during embryo patterning by confocal laser scanning microscopy. Thus, this method can be used to observe pattern formation in wild-type plant embryos at the cellular and molecular levels, and to characterize the role of specific genes in embryo patterning by comparing pattern formation in embryos from wild-type plants and embryo-lethal mutants. Therefore, the method can be used to characterize embryogenesis in Arabidopsis.

A Method for Characterizing Embryogenesis in Arabidopsis

This protocol outlines a method for observing embryogenesis in Arabidopsis via ovule clearance followed by the inspection of embryo pattern formation under a microscope.

シロイヌナズナの胚発生の特性評価法

Given the highly predictable nature of their development, Arabidopsis embryos have been used as a model for studies of morphogenesis in plants. However, ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is routinely used as an in vivo model to study embryo implantation and pregnancy progression. Unfortunately, such murine studies require pregnancy interruption to enable follow-up phenotypic analysis. To address this issue, we used three-dimensional (3-D) reconstruction of HFUS imaging data for early detection and characterization of murine embryo implantation sites and their individual developmental progression in utero. Combining HFUS imaging with 3-D reconstruction and modeling, we were able to accurately quantify embryo implantation site number as well as monitor developmental progression in pregnant C57BL6J/129S mice from 5.5 days post coitus (d.p.c.) through to 9.5 d.p.c. with the use of a transducer. Measurements included: number, location, and volume of implantation sites as well as inter-implantation site spacing; embryo viability was assessed by cardiac activity monitoring. In the immediate post-implantation period (5.5 to 8.5 d.p.c.), 3-D reconstruction of the gravid uterus in both mesh and solid overlay format enabled visual representation of the developing pregnancies within each uterine horn. As genetically engineered mice continue to be used to characterize female reproductive phenotypes derived from uterine dysfunction, this method offers a new approach to detect, quantify, and characterize early implantation events in vivo. This novel use of 3-D HFUS imaging demonstrates the ability to successfully detect, visualize, and characterize embryo-implantation sites during early murine pregnancy in a non-invasive manner. The technology offers a significant improvement over current methods, which rely on the interruption of pregnancies for gross tissue and histopathologic characterization. Here we use a video and text format to describe how to successfully perform ultrasounds of early murine pregnancy to generate reliable and reproducible data with reconstruction of the uterine form in mesh and solid 3-D images.

Mice are widely used to study gestational biology. However, pregnancy termination is required for such studies which precludes longitudinal investigations and necessitates the use of large numbers of animals. Therefore, we describe a non-invasive technique of high-frequency ultrasonography for early detection and monitoring of post-implantation events in the pregnant mouse.

マウスの早い妊娠の特性の三次元の高周波超音波の新規な使用

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To investigate the underlying mechanisms that bring about various muscle adaptations, a number of exercise protocols such as treadmill, wheel running, and swimming exercise have been used in the animal studies. However, these exercise models require a long period of time to achieve muscle adaptations, which may be also regulated by humoral or neurological factors, thus limiting their applications in studying the muscle-specific contraction-induced adaptations. Indirect low frequency stimulation (10 Hz) to induce chronic contractile activity (CCA) has been used as an alternative model for exercise training, as it can successfully lead to muscle mitochondrial adaptations within 7 days, independent of systemic factors. This paper details the surgical techniques required to apply the treatment of CCA to the skeletal muscle of rats, for widespread application in future studies.

This protocol describes the use of the chronic contractile activity model of exercise to observe stimulation-induced skeletal muscle adaptations in the rat hindlimb.

慢性的な刺激の収縮活動に伴うラット骨格筋の表現型適応を研究への応用

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult liver regeneration after 70% partial hepatectomy results in hepatocyte hypertrophy with some replication in remaining lobes with restoration of metabolic activity, but with permanent loss of the injured lobe&#39;s morphology and architecture. Here, we detail a new surgical method in the neonate that leaves a physiologic environment conducive to regeneration. This model involves amputation of the left lobe apex and a subsequent conservative management regimen, and lacks the necessity for ligation of major liver vessels or chemical injury, leaving a physiologic environment where regeneration may occur. We extend this protocol to amputations on juvenile (P7-14) mice, during which the injured liver transitions from organ regeneration to compensatory growth by hypertrophy. The presented, brief 30 min protocol provides a framework to study the mechanisms of regeneration, its age-associated decline in mammals, and the characterization of putative hepatic stem or progenitors.

Here, we present a new method for partial resection of the left hepatic lobe in neonatal (day 0) mice. This new protocol is suitable for studying acute liver injury and injury response in the neonatal setting.

肺葉切除: 形態学的肝再生手術モデル

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...