Name: preparation and evaluation of 99mtc-labeled tridentate chelates for pre-targeting using bioorthogonal chemistry
Uploaded: 2017-02-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 54 s
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This work supported by research grant funding from the Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) of Canada, the Ontario Institute for Cancer Research (OICR, #P.SI.015.8), and the Canadian Cancer Society (CCS, #703857). The authors acknowledge the contributions of Dr. Denis Snider who provided assistance in preparing the manuscript.

動物実験は、動物ケアに関するカナダ評議会（CCAC）のガイドラインに従ってマクマスター大学の動物研究倫理委員会によって承認されました。 99m Tc でとTZ-三座配位子の1放射性標識警告：以下の手順は、放射性化合物の使用を必要とします。仕事は、安全性と廃棄規制の遵守とライセンス実験室で行われるべきです。マイクロ波反応は、特に、化学合成のために設計されたマイクロ波中で行うべきです。 <ol><li> 合成[99m Tc で （CO）3（H 2 O）3] + 19、20 <ol><li>マイクロ波バイアルに、結合8mgのK 2 [BH 3 CO 2] 15mgののNa 2 CO 3、20ミリグラムのNa 2 B 4 O 7・10H 2 O、及び25mgのKOCO [CH（OH）]2 COONa・4H 2 Oをパージアルゴンガスで10分間バイアル。 </li><li>バイアルに0.9％生理食塩水で（〜1100 MBqで、〜30 MCI） - 99メートルのTcO 4の4 mLを加え。 </li><li>試薬の十分な混合を確実にするために攪拌し、10秒後、110℃で3.5分間マイクロ波中の反応を加熱します。 </li><li> 〜400μLの1 M HClを用いて3.5から4に、溶液のpHを調整します。 pH試験紙を使用して確認してください。 </li></ol></li><li> テトラジンの放射性標識は、1-5のリガンド <ol><li> 250μLのMeOH 21内の各リガンドの2mgの（化合物1-5）を溶解します。 </li><li>各ソリューションに[99m Tc で （CO）3（H 2 O）3] +（〜74 MBqで、〜2 MCI）の250μLを追加します。 </li><li> 60℃で20分間マイクロ波を用いて反応混合物を加熱します。 注：この手順は、すべての5テトラジンため同一でした。 </li><li>化合物2-5の場合は、溶媒および再dissolを蒸発させます1（v / v）のDCM：TFA 1の1mLに得られる生成物をまし。 </li><li> 6分（2-4）または10分（5）マイクロ波で60℃で溶解させた反応生成物（2-5）を加熱します。 </li><li>室温に冷却した後、エバポレーター（36℃、8ミリバール、3分、6,000 rpm）を用いて溶媒を蒸発させ、1で乾燥させ、化合物溶解：1 ACN：H 2 Oまたは1：1のMeOH：H 2 OをHPLC精製の前に。 </li><li> HPLC（C 18逆相）を用いて、未標識テトラジンリガンドで標識された生成物を分離するなどの99m Tc で標識した化合物（1-5）を 、精製します。 H 2 O 20を超える分（18分）、C 18分析4.6×100 mmカラム：40:60 ACNにH 2 O（0.1％TFAとの両方）：通常、30:70 ACNの溶出勾配を使用します。 UV（254 nm）で、ガンマ検出の両方を使用してください。 <ol><li>各標識生成物の少量のサンプルを取り、共同INJのそれにそのHPLC保持時間を比較します（20％メタノール-H 2 O中の0.125 mg）をected、非放射性、Re標識標準。 Re標識標準は、UV HPLCトレースで識別され、γ-HPLCトレース中の99m Tc で標識化合物と同時に溶出します。この共注射は99m Tc で標識された化合物の正体を確認し、同程度の保持時間でピークを示しています。 </li></ol></li><li>蒸発器（36℃、8ミリバール、3分、6,000 rpm）を用いたHPLC画分から溶媒を蒸発させます。 </li><li> 0.5％BSAおよび0.01％のTween-80を含む、7.4 kBq / PBS中μLの濃度で精製された化合物を策定します。 </li><li>標識された化合物が安定であることを確認するために、in vitroでの安定性試験を行います。安定性を評価するために、各時点でのHPLCに混合物の少量（3.7 MBqの）を注入し、1、4、6時間37℃で製剤化化合物をインキュベートします。 </li></ol></li></ol> 2.事前標的バイオ分布研究<ol><l動物の i&gt;の準備 <ol><li> 7-9週齢の雌のBALB / cマウスを用いて（n = 3）を、尾静脈注射を介して、TCO-BPは、生理食塩水（20ミリグラム/キログラム）（5μgの/μL）中に処方管理。 </li><li>物理的な拘束装置にマウスを置き、尾の側面に位置する静脈を識別し、アルコール綿棒で拭いてください。尾の先端から約2cmで、静脈に浅い角度、並列で30ゲージの針を挿入します。ゆっくりと、注射針を削除し、出血が止まるまでのわずかな圧力で、注射部位で清潔なガーゼスポンジを適用するプランジャーを押し下げます。 </li><li> TCO-BPの1時間後の注射では、尾静脈注射を介して、PBS中の0.5％BSAの100μLで処方さ99m Tc でテトラジンの〜0.74 MBqの（20マイクロCi）、0.01％のTween-80を投与します。 </li></ol></li><li> 生体分布研究 <ol><li>所望の時点（T = 6時間）、3％イソフルラン2％酸素の混合ガスを使用してマウスanaesthetize。に実証eは、麻酔の外科的平面の下であることを確認するために麻酔をかけたマウスの撤退をつまみます。 </li><li>シリンジヘパリンで前処理を使用して、心臓穿刺により血液（1ミリリットル）を収集します。継続的な麻酔のためのノーズコーンで鼻との背中の上に置いてマウスや動物に剣状突起の位置を確認します。 <ol><li> 20°の角度で、少し剣状突起下の動物の正中線の左に、25 G針を挿入します。完全に針を挿入し、ゆっくりと心を穿刺した場合、針ハブに血を見るために、プランジャーに引き戻します。必要に応じて、心臓を穿刺し、プランジャーを保持しながら、わずかに針を再調整。ゆっくりとシリンジに血液を描画します。 </li></ol></li><li>麻酔下ながら、頸椎脱臼により動物を安楽死させます。 </li><li>ビニール袋に各動物を置き、全身の活動レベルを測定するために、投与量キャリブレータ（99m Tc で設定）を使用します。 </li><li>前計量で、次の組織および体液を収集（内容を）（内容の）血液、骨（膝と肩）、胆嚢、腎臓、肝臓、胃、（内容で）小腸、大腸と盲腸、甲状腺および気管、尿と膀胱：チューブをカウント編、および尾。 </li><li>適切な計数管に組織を置く前に血液を除去し、乾燥ブロットをPBS中（血液、胆嚢、および膀胱を除く）は、適切な組織をすすいでください。 </li><li>ビニール袋に動物の死体を置き、投与量キャリブレータを使用して残留全身活性を測定。 </li><li>組織サンプルを含む各チューブを秤量します。チューブの減算初期重量は、組織の塊を得ました。 </li><li>各マウスについての注射の時に試験サンプル（100μL）で活性の量を測定するために、投与量キャリブレータ（99m Tc で設定）を使用します。 注：この試験サンプルは、したがって、注射時に活動カウントを与え、注入量に等しいです。 </li><li>組織の測定時に、A以前に使用した試験サンプルのliquot 5μL。マルチ検出器ガンマカウンター（99m Tc で設定）を使用し、5μLの試験サンプル毎分のカウント（CPM）を得ることがカウントされます。 </li><li>換算係数（CPMマイクロCi -1）を得るために、式1を使用して活動し、CPMの関係を計算するために、2.2.9と2.2.10で得られた2つの値を使用してください。 （1） <img alt="式（1）" src="/files/ftp_upload/55188/55188eq1.jpg" /></li><li>各組織または液体サンプル中の放射能の量を測定するために、ガンマカウンターを使用してください。 </li><li>総注射量の測定の相対的な時に各組織または体液中の活動量を算出するための式1を使用してください。この値は、臓器重量によって正規化し、組織のグラム当たりのパーセント注射用量（ すなわち、％のID / g）と報告されています。 </li><li>手順に従ってくださいabsenにおける99m Tc で標識テトラジンリガンドを使用して、負の対照実験を行うために2.2.13に2.1.2TCO-BPのCE。犠牲マウス（n = 3）0.5、1、4及び6時間後の注射で、上述したように、組織または流体を得ました。 </li></ol></li></ol>

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The authors declare they have no competing financial interests.

変化する極性のテトラジン結合三座キレートのコレクションを調製し、in vivoでの TCO誘導体とIEDDA反応におけるそれらの99m Tc での複合体の有用性を評価しました。効果的かつ再現性の99m Tc で標識法は、リガンド濃度はラベリング工程（化合物2-5） のt-ブチル基の脱保護を行った10 -3 Mであった。5テトラジンキレート、のために開発されました。リガンドの高濃度放射化学的収率を改善し、テトラジン21の劣化を最小限に抑え、反応時間を減少させるために使用しました。製品はすべて持つ&gt; 99％放射化学的純度及び〜1.48 MBqで/μgの高比活性を有する、31から83までパーセントの範囲の放射化学的収率で得られた、非標識リガンドおよびHPLCによる任意の放射化学不純物から分離し、分離しました。すべての化合物は、0を含むPBS中で安定であることが示されました。最大6時間、5％BSA及び0.01％Tween80を（ 図3）。 TCO-BPのようなビスフォスフォネート化合物は、マウスにおいて、膝と肩関節を含む積極的な骨代謝または傷害の部位に局在します。 TCO-BPは、したがって、in vivoでの同位体を提供するために新たな放射性標識されたテトラジンの有効性を評価するための簡単な手段を提供します。すべての5つの99m Tc で -テトラジンの生体内分布の評価が成功したin vivoで骨にプレターゲティング（ 図4）を実証し、膝や肩の関節で6時間後に注射を取り込みを示しました。以前の研究では、（2）は、単独で与えられた99m Tc でテトラジン構築物は（ 図5）しないのに対し、放射性標識TCO-BPは、骨18に蓄積することが確認されました。これは、1つは、骨吸収がIEDDA反応によるものであったと結論することができます。 より親油性の構築物1および2 </強い&gt;膝の高い取り込みを含む同様の分布データを有していた（9.1±1.9（1）7.6±2.7（2））とショルダー（4.6±1.4（1）4.8±1.9（2））。高い放射能濃度もTCO-BP（ 図5）の非存在下における親油性99m Tc でテトラジン化合物2の分布と一致している胆嚢、肝臓や腸、中に見られました。このような骨格筋および脾臓のような他の非標的組織および器官は、任意の有意な取り込みを示さなかった（&lt;1％）の生体分布研究は、TCO-BPの非存在下での99m Tc で 、テトラジンで行った（ 図5）そのため、これらの器官は、プレターゲティング実験のために取られていませんでした。また、単独の99m Tc で 、テトラジンと生体分布実験は、6時間後に注射で非標的組織からの良好なクリアランスを示しました。その結果、THI同位体の半減期以内である時点を、異なる放射性標識テトラジンリガンドを比較する時点として選択しました。 PEG 5リンカーを保有するより極性の99m Tc でテトラジン化合物3は、非常に高い膝と肩の取り込み（それぞれ16.2±4.8および20.7±4.9）を示しました。肝臓と腸で観察された低い活性もありました。対応するPEG 10誘導体はまた、化合物1および2の最も極性のデリバティブ5に比べて肝臓における骨や取り込みの減少への結合を示した、その迅速なクリアランスに起因する可能性が高い他のすべての構築物よりも結合下の骨を示しました。 高い骨吸収と骨：血液比（ 表1）は、特に化合物3および4は、プレターゲッティングとIEDDA反応がLOCに使用することができることを実証していますin vivoでの 99m Tc で標識化合物をアリゼ。ここで報告された方法のTC（I）-tetrazineリガンドの次世代を含む任意の放射性標識テトラジンを評価するために使用することができます。本研究に使用したリガンドのクラスに、構造が容易に著しくリガンド合成方法21を変更することなく、金属錯体とテトラジン間のドナー基およびリンカーの性質を変えることによって変えることができることに留意すべきです。リード分子が同定されたら、可能性固相精製方法を含むインスタントキット法は、臨床的な翻訳を支援するために開発することができます。 ここで報告のTc（I）錯体は異なるTCO由来の抗体を含む分子を標的の広い配列を使用して、新しい99m Tc での放射性医薬品を製造するための機会を作成します。抗体、typicないでしょう、テクネチウム標識されたテトラジンの作成に先立って、その優れたターゲティング特性にもかかわらず、味方ためにはるかに長い同位体の半減期（〜6時間）よりも、それらの遅いクリアランス（日）の99m Tc で一緒に使用することができます。化学の追加アプリケーションは、ここで報告されたリガンドの同じクラスは、ベータ放出放射性核種186 Reおよび188のReを用いて調製することができるということです。 TCO-BPの特性を求めて腫瘍と組み合わせるのTc（I）の薬剤の同形のRe（I）の類似体は、骨転移を治療するために使用することができます。

99m Tc では、世界的に年1、2、3ごとに行わ億50以上の撮像法で、核医学診断に使用される支配的な放射性同位元素のまま。臨床的に使用される99m Tc での薬剤の大部分は、灌流型放射性医薬品です。 99m Tc では、ターゲティング構築物への連結を介して、特定のバイオマーカーを結合するのに向いている積極的に標的とする化合物の数は限られています。対象と99m Tc での放射性医薬品の作成は、多くの場合、目的のバイオマーカー、または同位元素の半減期と結合するターゲッティング分子の能力に99m Tc で -リガンド複合体の影響により阻害される高分子量の生体分子と共に使用するための十分な長さではありません抗体など。後者は、典型的には、画像が非標的TISSからクリアする生体分子のためのために取得されるまでに数日を要します<html> UE。プレターゲッティングは、これらの課題を克服するための代替的なアプローチを提供しています。 バイオ直交化学と組み合わせたプレターゲッティングの両方蛍光および放射性イメージング4、5、6、7、8のための新たな分子イメージングプローブを開発するための有効な方法であることが示されています。 1,2,4,5-テトラジン（Tzの）およびトランス -cyclooctene（TCO）誘導体の間の逆電子需要ディールス-アルダー（IEDDA）反応、 図1に示すように、6特に有効であることが示されました。これらのコンポーネントとのIEDDA反応は、高選択性、in vivoでプレターゲッティングアプリケーション9、10にも最適です（2≈6000 M -1 s -1のk）をPBSに速い反応速度を示すことができます。 e_content 11 C、18 Fに基づく&quot;&gt;使用される最も一般的なアプローチは、TCO由来ベクターを標的にし、十分な遅延期間の後、放射性標識されたテトラジンが投与さを投与することを含む。放射性標識テトラジン、64のCu、89 Zrおよび111 Inがされています11、12、13、14、15に報告された。対照的に、in vivoでの結合タンパク質および分解を防止するために、共リガンドの使用を必要とHYNIC系配位子を用いて調製したの99mのみ報告Tc標識Tzのは、あります16。別の方法として、ここでは99m Tc で （I）の合成を報告し、[99m Tc で （CO）3] +コアで安定した三座複合体を形成するリガンドのファミリーを使用して、テトラジンを標識しました。 図1：テトラジンとトランス -cyclooctene間のバイオ直交IEDDA反応。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55188/55188fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 準備リガンドのファミリーは、極性および金属結合領域とTzを（ 図2）との間のリンカー基の性質に変化する三座キレートを含んでいます。目標は、結合していないときに効果的に高い標的対非標的比を得るために、局在化およびin vivoでの TCO標識部位と反応し、速やかにクリアできた99m Tc でテトラジン構築物を同定することでした。リガンドをテストするには、ビスホスホネートのTCO-誘導体（TCO-BP）が17を使用しました。私たちは、TCO-BPは、アクティブな骨代謝の領域に局在することが以前に示されているとと反応することができます生体内 18 で放射性標識されたテトラジン。それは、単一の工程で調製することができ、実験は局在が主に関節（膝、および肩）で発生する通常のマウスで行うことができるので、新たなテトラジンをテストするための便利な試薬です。

<table><tbody><tr><td>Argon gas</td><td>Alphagaz</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;CO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>EMD Millipore</td><td>106395</td><td>---</td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;B&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;7&lt;/sub&gt;&amp;#183;10H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Anachemia</td><td>S9640</td><td>---</td></tr><tr><td>KNaC&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;H&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;6&lt;/sub&gt;&amp;#183;4H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Anachemia</td><td>217255</td><td>---</td></tr><tr><td>Technelite &lt;sup&gt;99m&lt;/sup&gt;Tc generator</td><td>Lantheus medical imaging</td><td>---</td><td>Source of &lt;sup&gt;99m&lt;/sup&gt;TcO&lt;sup&gt;4-&lt;/sup&gt;</td></tr><tr><td>0.9% Saline</td><td>Lantheus medical imaging</td><td>---</td><td>To elute generator</td></tr><tr><td>1 M HCl</td><td>Lab Chem</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>MeOH</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>ACN</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>HPLC grade</td></tr><tr><td>Millipore H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Barnstead Nanopure</td><td>---</td></tr><tr><td>DCM</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>TFA</td><td>Caledon</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td>pH 7.4 1x</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>---</td></tr><tr><td>Tween80</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8047</td><td>---</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>CDMV</td><td>108737</td><td>Supplier: Fresenius Kabi Animal Health</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Waters</td><td>1525 Binary Pump, 2998 Photodiodde Array Detector, E-SAT/IN, Bioscan Flowcount PMT detector (item # 15590)</td><td>---</td></tr><tr><td>HPLC column for analysis and purification of compounds 2-4</td><td>Phenomenex</td><td>00G-4435-E0</td><td>Gemini&amp;reg; 5 &amp;micro;m C18 110&amp;nbsp;&amp;Aring;, LC Column 250 x 4.6 mm</td></tr><tr><td>HPLC column for analysis and purification of compounds 1 and 5</td><td>Waters&amp;nbsp;</td><td>186003115</td><td>XBridge BEH C18 Column, 130 &amp;Aring;, 5 &amp;micro;m, 4.6 mm x 100 mm</td></tr><tr><td>Microwave Reactor&amp;nbsp;</td><td>Biotage&amp;nbsp;</td><td>Initiator 8</td><td>---</td></tr><tr><td>Biotage V10 Evaporator</td><td>Biotage&amp;nbsp;</td><td>Serial # V1041</td><td>---</td></tr><tr><td>Dose calibrator</td><td>Capintec, Inc.&amp;nbsp;</td><td>CRC-25R</td><td>---</td></tr><tr><td>Gamma counter</td><td>Perkin Elmer</td><td>Wizard 1470 Automatic Gamma Counter</td><td>---</td></tr><tr><td>Animal room scale&amp;nbsp;</td><td>Mettler Toledo</td><td>XP105 Delta Range</td><td>---</td></tr><tr><td>Microwave vials&amp;nbsp;</td><td>Biotage&amp;nbsp;</td><td>355629</td><td>0.5-2 mL&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

preparation and evaluation of 99mtc-labeled tridentate chelates for pre-targeting using bioorthogonal chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

リガンドは、商業的に入手可能なテトラジン22、23製品のカップリング、続いて単純な還元的アミノ化戦略（ 図2）を介して、異なるリンカーおよびキレート剤を用いて合成しました。放射性標識は、全ての化合物のための同様の方法を使用して実行し、高度に再現可能でした。 83％（1）、45％（2）、31％：プロセスは99m Tc で放射性標識化合物は、そこでリガンド、反応時間および温度の量1~5を高い放射化学的収率に適度で得た、pH値を変化させることによって最適化しました（3）、42％（4）、および54％（5）。エバポレーターを用いて、未反応のリガンドおよび蒸発からHPLC精製後、化合物は、注射前に、0.5％BSA及び0.01％Tween80を含有PBS中で配合しました。 Pの比活性<html> urified 99m Tc で標識テトラジンは〜1.48 MBqで/μgでした。研究は、前のインビボ研究に99m Tc で標識テトラジンリガンドの安定性を評価するために行きました。一例として、化合物4は、 図3に見られるように、安定性は、6時間（R T = 14分）にわたって目に見える劣化が1、4及び6時間でHPLCによりモニターしました。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig2.jpg" /> 図2： 化合物（下）に示すように、1-5は異なるリンカー（Y）及びキレート剤（X）を用いて製造しました。すべての化合物は、 工程（II）を必要としない 1を除いて、[99m Tc で （CO）3（H 2 O）3]と同じ反応条件を用いて、+（上）で放射標識しました。 <img alt="&lt;/ htmlの">「図3」SRC = &quot;/ファイル/ ftp_upload / 55188 / 55188fig3.jpg&quot; /&gt; 図3：1、4、6 時間、37℃でPBS中でインキュベートし4の4γ-HPLCトレース化合物を用いた安定性試験の結果。 インビボ試験のために、健康なBalb / cマウスを使用しました。簡潔には、各化合物の、マウスの群（n = 3）の1時間後に99m Tc で標識された化合物の投与を行ったTCO-BP（100μL、20ミリグラム/キログラム）を注射しました。 99m Tc での複合体の6時間後注射で、動物を屠殺し、種々の組織および体液中の放射能濃度を測定しました。得られたデータは、グラム組織率（％ID / g）をあたりパーセント注射用量として報告されており、 図4に示されています。 5 99m Tc で標識Tzの化合物のそれぞれのための血液に対する骨（膝や肩）の代表的な比率は、 表1に示されています。これらのデータは、CLを示しています早期にその化合物3は、血液からのクリアランスと組み合わせ、およびオフターゲット組織局在性の点で99m Tc で標識された化合物の中でもかなりのばらつきがあったことをターゲットに最適を提供しました。マウスをTCO-BPの非存在下での99m Tc でテトラジンリガンドを注射したCD1マウスを用いた陰性対照試験（N = 3）を行いました。マウスを0.5、1で屠殺し、4及び6時間及び％ID / gの全組織および体液に対して決定しました。化合物2のデータは、図5に示されている試験した全ての化合物については、有意な取り込みは、骨または図4に示されていない他の組織（心臓、肺、脾臓、骨格筋）において見られませんでした。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig4.jpg" /> 99m Tc で標識テトラジン誘導体1-5 図4.バイオ配布結果（インディカバーテッド）。示したデータは、放射性標識誘導体の6時間後に注射を受け選択された組織および体液から得られた平均パーセント±SEMで組織または流体のグラム当たりの用量（％ID / g）を注入としての活性は、組織または体液量に対して正規化しました。骨標的は•で示されています。注：1％未満であった持っていた平均％のID / gに示されていない残りのすべての組織。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55188/55188fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig5.jpg" /> 図 TCO-BPの注射前にすることなく、99m Tc で標識テトラジン（2）を用いた制御研究のため5.バイオ配布結果。示されるデータは、0.5で3匹のマウスから採取した選択された組織および体液から得られた1,4、及び2の6時間後に注射しました。活動は、組織に標準化しましたかSEM±組織または体液のグラムあたりの平均パーセント注射用量（％ID / g）のような流体の重量、。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55188/55188fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td colspan="5">化合物</td></tr><tr><td>比</td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td></tr><tr><td>肩：ブラッド</td><td> 3.5：1 </td><td> 3.5：1 </td><td> 21：1 </td><td> 7.8：1 </td><td> 0.8：1 </td></tr><tr><td>膝：ブラッド</td><td> 6.9：1 </td><td> 5.6：1 </td><td> 26：1 </td><td> 12：1 </td><td> 1.3：1 </td></tr></tbody></table> 表1.骨組織：生体内分布の研究から決定した血液比。

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Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

の調製と評価<sup&gt; 99メートル</sup&gt; Tc標識三座キレートバイオ直交化学反応を用いて事前ターゲティングするため

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

8.1K ビュー.  McMaster University. Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry. 

ビデオ: Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Microfluidic On-chip Capture-cycloaddition Reaction to Reversibly Immobilize Small Molecules or Multi-component Structures for Biosensor Applications

Methods for rapid surface immobilization of bioactive small molecules with control over orientation and immobilization density are highly desirable for biosensor and microarray applications. In this Study, we use a highly efficient covalent bioorthogonal [4+2] cycloaddition reaction between trans-cyclooctene (TCO) and 1,2,4,5-tetrazine (Tz) to enable the microfluidic immobilization of TCO/Tz-derivatized molecules. We monitor the process in real-time under continuous flow conditions using surface plasmon resonance (SPR). To enable reversible immobilization and extend the experimental range of the sensor surface, we combine a non-covalent antigen-antibody capture component with the cycloaddition reaction. By alternately presenting TCO or Tz moieties to the sensor surface, multiple capture-cycloaddition processes are now possible on one sensor surface for on-chip assembly and interaction studies of a variety of multi-component structures. We illustrate this method with two different immobilization experiments on a biosensor chip; a small molecule, AP1497 that binds FK506-binding protein 12 (FKBP12); and the same small molecule as part of an immobilized and in situ-functionalized nanoparticle.

We present a method for rapid, reversible immobilization of small molecules and functionalized nanoparticle assemblies for Surface Plasmon Resonance (SPR) studies, using sequential on-chip bioorthogonal cycloaddition chemistry and antibody-antigen capture.

可逆小分子またはバイオセンサー応用のためのマルチコンポーネント構造を固定化するために、マイクロ流体オンチップキャプチャ - 環化反応

Methods  for rapid surface immobilization of bioactive small molecules with control over  orientation and immobilization density are highly desirable for ...

化学

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET radiopharmaceuticals. Due to their multi-day biological half-life, antibodies must be labeled with positron-emitting radionuclides with relatively long physical decay half-lives. Traditionally, the positron-emitting isotopes 124I (t1/2 = 4.18 d), 86Y (t1/2 = 14.7 hr), and 64Cu (t1/2 = 12.7 hr) have been used to label antibodies for PET imaging. More recently, however, the field has witnessed a dramatic increase in the use of the positron-emitting radiometal 89Zr in antibody-based PET imaging agents. 89Zr is a nearly ideal radioisotope for PET imaging with immunoconjugates, as it possesses a physical half-life (t1/2 = 78.4 hr) that is compatible with the in vivo pharmacokinetics of antibodies and emits a relatively low energy positron that produces high resolution images. Furthermore, antibodies can be straightforwardly labeled with 89Zr using the siderophore-derived chelator desferrioxamine (DFO). In this protocol, the prostate-specific membrane antigen targeting antibody J591 will be used as a model system to illustrate (1) the bioconjugation of the bifunctional chelator DFO-isothiocyanate to an antibody, (2) the radiosynthesis and purification of a 89Zr-DFO-mAb radioimmunoconjugate, and (3) in vivo PET imaging with an 89Zr-DFO-mAb radioimmunoconjugate in a murine model of cancer.

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

Due to its multi-day radioactive half-life and favorable decay properties, the positron-emitting radiometal 89Zr is extremely well-suited for use in antibody-based radiopharmaceuticals for PET imaging. In this protocol, the bioconjugation, radiosynthesis, and preclinical application of 89Zr-labeled antibodies will be described.

バイオコンジュゲーションとのアルタン<sup&gt; 89</sup&gt;のZr-DFO標識抗体

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient radiolabeling of DBCO-group-functionalized gold nanoparticles using a copper-free click reaction. Radioiodination of the stannylated precursor (2) was carried out by using [125I]NaI and chloramine T as an oxidant at room temperature for 15 min. After HPLC purification of the crude product, the purified 125I-labeled azide (1) was obtained with high radiochemical yield (75 &plusmn; 10%, n = 8) and excellent radiochemical purity (&gt;99%). For the synthesis of radiolabeled 13-nm-sized gold nanoparticles, the DBCO-functionalized gold nanoparticles (3) were prepared by using a thiolated polyethylene glycol polymer. A copper-free click reaction between 1 and 3 gave the 125I-labeled gold nanoparticles (4) with more than 95% of radiochemical yield as determined by radio-thin-layer chromatography (radio-TLC). These results clearly indicate that the present radiolabeling method using a strain-promoted copper-free click reaction will be useful for the efficient and convenient radiolabeling of DBCO-group-containing nanomaterials.

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

A detailed procedure for the synthesis of a 125I-labeled azide and the radiolabeling of dibenzocyclooctyne (DBCO)-group-conjugated, 13-nm-sized gold nanoparticles using a copper-free click reaction is described.

使用した金ナノ粒子の効率的な放射性標識のために最適化されたプロトコル<sup&gt; 125</sup&gt; I標識アジド補綴グループ

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

Harnessing the Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloaddition for Pretargeted PET Imaging

Due to their exquisite affinity and specificity, antibodies have become extremely promising vectors for the delivery of radioisotopes to cancer cells for PET imaging. However, the necessity of labeling antibodies with radionuclides with long physical half-lives often results in high background radiation dose rates to non-target tissues. In order to circumvent this issue, we have employed a pretargeted PET imaging strategy based on the inverse electron demand Diels-Alder cycloaddition reaction. The methodology decouples the antibody from the radioactivity and thus exploits the positive characteristics of antibodies, while eschewing their pharmacokinetic drawbacks. The system is composed of four steps: (1) the injection of a mAb-trans-cyclooctene (TCO) conjugate; (2) a localization time period during which the antibody accumulates in the tumor and clears from the blood; (3) the injection of the radiolabeled tetrazine; and (4) the in vivo click ligation of the components followed by the clearance of excess radioligand. In the example presented in the work at hand, a 64Cu-NOTA-labeled tetrazine radioligand and a trans-cyclooctene-conjugated humanized antibody (huA33) were successfully used to delineate SW1222 colorectal cancer tumors with high tumor-to-background contrast. Further, the pretargeting methodology produces high quality images at only a fraction of the radiation dose to non-target tissue created by radioimmunoconjugates directly labeled with 64Cu or 89Zr. Ultimately, the modularity of this protocol is one of its greatest assets, as the trans-cyclooctene moiety can be appended to any non-internalizing antibody, and the tetrazine can be attached to a wide variety of radioisotopes.

The bioorthogonal inverse electron demand Diels-Alder cycloaddition has been harnessed to create an effective and modular pretargeted PET imaging strategy for cancer. In this protocol, the steps of this methodology are described in the context of a model system employing the colorectal cancer targeted antibody huA33 and a 64Cu-labeled radioligand.

プレターゲッティングPETイメージング用バイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を活用

Due to their exquisite affinity and specificity, antibodies have become extremely promising vectors for the delivery of radioisotopes to cancer cells for ...

生物工学

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tumor extracellular matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers for cancer molecular imaging. In this work, we demonstrated effective MR cancer molecular imaging with a small molecular peptide targeted Gd-DOTA monoamide complex as a targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma. We performed the experiment of evaluating the effectiveness of the agent for non-invasive detection of prostate tumor with MRI in a mouse orthotopic PC-3 prostate cancer model. The targeted contrast agent was effective to produce significant tumor contrast enhancement at a low dose of 0.03 mmol Gd/kg. The peptide targeted MRI contrast agent is promising for MR molecular imaging of prostate tumor.

To demonstrate MR cancer molecular imaging with a small peptide targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma in a mouse prostate cancer model.

低分子CLT1ペプチド標的造影剤を用いて前立腺がんの分子イメージングのMR

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

医学

Pretargeted Radioimmunotherapy Based on the Inverse Electron Demand Diels-Alder Reaction

While radioimmunotherapy (RIT) is a promising approach for the treatment of cancer, the long pharmacokinetic half-life of radiolabeled antibodies can result in high radiation doses to healthy tissues. Perhaps not surprisingly, several different strategies have been developed to circumvent this troubling limitation. One of the most promising of these approaches is pretargeted radioimmunotherapy (PRIT). PRIT is predicated on decoupling the radionuclide from the immunoglobulin, injecting them separately, and then allowing them to combine in vivo at the target tissue. This approach harnesses the exceptional tumor-targeting properties of antibodies while skirting their pharmacokinetic drawbacks, thereby lowering radiation doses to non-target tissues and facilitating the use of radionuclides with half-lives that are considered too short for use in traditional radioimmunoconjugates. Over the last five years, our laboratory and others have developed an approach to in vivo pretargeting based on the inverse electron-demand Diels-Alder (IEDDA) reaction between trans-cyclooctene (TCO) and tetrazine (Tz). This strategy has been successfully applied to pretargeted positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) imaging with a variety of antibody-antigen systems. In a pair of recent publications, we have demonstrated the efficacy of IEDDA-based PRIT in murine models of pancreatic ductal adenocarcinoma and colorectal carcinoma. In this protocol, we describe protocols for PRIT using a 177Lu-DOTA-labeled tetrazine radioligand ([177Lu]Lu-DOTA-PEG7-Tz) and a TCO-modified variant of the colorectal cancer targeting huA33 antibody (huA33-TCO). More specifically, we will describe the construction of huA33-TCO, the synthesis and radiolabeling of [177Lu]Lu-DOTA-PEG7-Tz, and the performance of in vivo biodistribution and longitudinal therapy studies in murine models of colorectal carcinoma.

This protocol describes the synthesis and characterization of a trans-cyclooctene (TCO)-modified antibody and a 177Lu-labeled tetrazine (Tz) radioligand for pretargeted radioimmunotherapy (PRIT). In addition, it details the use of these two constructs for in vivo biodistribution and longitudinal therapy studies in a murine model of colorectal cancer.

逆電子需要ディールス ・ アルダー反応に基づく pretargeted 放射免疫療法

While radioimmunotherapy (RIT) is a promising approach for the treatment of cancer, the long pharmacokinetic half-life of radiolabeled antibodies can ...

Synthesis and Bioconjugation of Thiol-Reactive Reagents for the Creation of Site-Selectively Modified Immunoconjugates

Maleimide-bearing bifunctional probes have been employed for decades for the site-selective modification of thiols in biomolecules, especially antibodies. Yet maleimide-based conjugates display limited stability in vivo because the succinimidyl thioether linkage can undergo a retro-Michael reaction. This, of course, can lead to the release of the radioactive payload or its exchange with thiol-bearing biomolecules in circulation. Both of these processes can produce elevated activity concentrations in healthy organs as well as decreased activity concentrations in target tissues, resulting in reduced imaging contrast and lower therapeutic ratios. In 2018, we reported the creation of a modular, stable, and easily accessible phenyloxadiazolyl methyl sulfone reagent &#8212; dubbed &#8216;PODS&#8217; &#8212; as a platform for thiol-based bioconjugations. We have clearly demonstrated that PODS-based site-selective bioconjugations reproducibly and robustly create homogenous, well-defined, highly immunoreactive, and highly stable radioimmunoconjugates. Furthermore, preclinical experiments in murine models of colorectal cancer have shown that these site-selectively labeled radioimmunoconjugates exhibit far superior in vivo performance compared to radiolabeled antibodies synthesized via maleimide-based conjugations. In this protocol, we will describe the four-step synthesis of PODS, the creation of a bifunctional PODS-bearing variant of the ubiquitous chelator DOTA (PODS-DOTA), and the conjugation of PODS-DOTA to the HER2-targeting antibody trastuzumab.

In this protocol, we will describe the synthesis of PODS, a phenyoxadiazolyl methyl sulfone-based reagent for the site-selective attachment of cargos to the thiols of biomolecules, particularly antibodies. In addition, we will describe the synthesis and characterization of a PODS-bearing bifunctional chelator and its conjugation to a model antibody.

合成と化反応のサイト選択的に作成するためのチオール反応性の試薬の変更 Immunoconjugates

Maleimide-bearing bifunctional probes have been employed for decades for the site-selective modification of thiols in biomolecules, especially antibodies. ...

Positron Emission Tomography Imaging of Cell Trafficking: A Method of Cell Radiolabeling

Stem cell and chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapies are emerging as promising therapeutics for organ regeneration and as immunotherapy for various cancers. Despite significant progress having been made in these areas, there is still more to be learned to better understand the pharmacokinetics and pharmacodynamics of the administered therapeutic cells in the living system. For noninvasive, in vivo tracking of cells with positron emission tomography (PET), a novel [89Zr]Zr-p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine ([89Zr]Zr-DBN)-mediated cell radiolabeling method has been developed utilizing 89Zr (t1/2 78.4 h). The present protocol describes a [89Zr]Zr-DBN-mediated, ready-to-use, radiolabeling synthon for direct radiolabeling of variety of cells, including mesenchymal stem cells, lineage-guided cardiopoietic stem cells, liver regenerating hepatocytes, white blood cells, melanoma cells, and dendritic cells. The developed methodology enables noninvasive PET imaging of cell trafficking for up to 7 days post-administration without affecting the nature or the function of the radiolabeled cells. Additionally, this protocol describes a stepwise method for the radiosynthesis of [89Zr]Zr-DBN, biocompatible formulation of [89Zr]Zr-DBN, preparation of cells for radiolabeling, and finally the radiolabeling of cells with [89Zr]Zr-DBN, including all the intricate details needed for the successful radiolabeling of cells.

Presented here is a protocol to radiolabel cells with a positron emission tomography (PET) radioisotope, 89Zr (t1/2 78.4 h), using a ready-to-use radiolabeling synthon, [89Zr]Zr-p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine ([89Zr]Zr-DBN). Radiolabeling cells with [89Zr]Zr-DBN allows noninvasive tracking and imaging of administered radiolabeled cells in the body with PET for up to 7 days post-administration.

細胞輸送の陽電子放出断層撮影イメージング:細胞放射性標識法

Stem cell and chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapies are emerging as promising therapeutics for organ regeneration and as immunotherapy for ...

がん研究

Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used in cancer treatment and imaging due to increased cellular accumulation over current ACs. During early AC in vitro development, fluorescence techniques and radioimmunoassays are sufficient for determining intracellular localization, accumulation efficiency, and target cell specificity. Currently, there is no consensus on standardized methods for preparing cells for evaluating AC intracellular accumulation and localization. The initial testing of ACs modified with virus-derived peptides is critical especially if several candidates have been constructed. Determining intracellular accumulation by fluorescence can be affected by background signal from ACs at the cell surface and complicate the interpretation of accumulation. For radioimmunoassays, typically treated cells are fractionated and the radioactivity in different cell compartments measured. However, cell lysis varies from cell to cell and often nuclear and cytoplasmic compartments are not adequately isolated. This can produce misleading data on payload delivery properties. The intravenous injection of radiolabeled virus-derived peptide-modified ACs in tumor bearing mice followed by radionuclide imaging is a powerful method for determining tumor targeting and payload delivery properties at the in vivo phase of development. However, this is a relatively recent advancement and few groups have evaluated virus-derived peptide-modified ACs in this manner. We describe the processing of treated cells to more accurately evaluate virus-derived peptide-modified AC accumulation when using confocal microscopy and radioimmunoassays. Specifically, a method for trypsinizing cells to remove cell surface bound ACs. We also provide a method for improving cellular fractionation. Lastly, this protocol provides an in vivo method using positron emission tomography (PET) for evaluating initial tumor targeting properties in tumor-bearing mice. We use the radioisotope 64Cu (t1/2 = 12.7 h) as an example payload in this protocol.

Viral-derived peptides coupled to antibody-conjugates (ACs) is an approach gaining momentum due to the potential of delivering molecular payloads with increased tumor cell accumulation. Utilizing common methods to evaluate peptide conjugation, AC and payload intracellular accumulation, and tumor targeting, this protocol helps researchers during the key initial development phases.

細胞集積量の増加と腫瘍標的化の改善のためウイルス由来ペプチド修飾抗体複合体の初期評価

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte cell culture and 64Cu-antibody receptor targeting of the cells. In vitro evaluation of the radiolabel and non-invasive in vivo cell tracking in an animal model of an airway delayed-type hypersensitivity reaction (DTHR) by PET/CT are described.
In detail, the conjugation of a mAb with the chelator 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid (DOTA) is shown. Following the production of radioactive 64Cu, radiolabeling of the DOTA-conjugated mAb is described. Next, the expansion of chicken ovalbumin (cOVA)-specific CD4+ interferon (IFN)-&#947;-producing T helper cells (cOVA-TH1) and the subsequent radiolabeling of the cOVA-TH1 cells are depicted. Various in vitro techniques are presented to evaluate the effects of 64Cu-radiolabeling on the cells, such as the determination of cell viability by trypan blue exclusion, the staining for apoptosis with Annexin V for flow cytometry, and the assessment of functionality by IFN-&#947; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Furthermore, the determination of the radioactive uptake into the cells and the labeling stability are described in detail. This protocol further describes how to perform cell tracking studies in an animal model for an airway DTHR and, therefore, the induction of cOVA-induced acute airway DHTR in BALB/c mice is included. Finally, a robust PET/CT workflow including image acquisition, reconstruction, and analysis is presented.
The 64Cu-antibody receptor targeting approach with subsequent receptor internalization provides high specificity and stability, reduced cellular toxicity, and low efflux rates compared to common PET-tracers for cell labeling, e.g.64Cu-pyruvaldehyde bis(N4-methylthiosemicarbazone) (64Cu-PTSM). Finally, our approach enables non-invasive in vivo cell tracking by PET/CT with an optimal signal-to-background ratio for 48 h. This experimental approach can be transferred to different animal models and cell types with membrane-bound receptors that are internalized.

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Following the preparation of a 64Cu-modified monoclonal antibody binding to a transgenic murine T cell receptor, T cells are radiolabeled in vivo, analyzed for viability, functionality, labeling stability and apoptosis, and adoptively transferred into mice with an airway delayed-type hypersensitivity reaction for non-invasive imaging by positron emission tomography/computed tomography (PET/CT).

マウスリンパ球標識による<sup&gt; 64</sup以下のためのターゲット設定&gt;のCu-抗体の受容体<em&gt;インビボ</em&gt; PET / CTによる細胞輸送

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

の調製と評価

要約

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可逆小分子またはバイオセンサー応用のためのマルチコンポーネント構造を固定化するために、マイクロ流体オンチップキャプチャ - 環化反応

バイオコンジュゲーションとのアルタン

使用した金ナノ粒子の効率的な放射性標識のために最適化されたプロトコル

プレターゲッティングPETイメージング用バイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を活用

低分子CLT1ペプチド標的造影剤を用いて前立腺がんの分子イメージングのMR

逆電子需要ディールス・アルダー反応に基づく pretargeted 放射免疫療法

合成と化反応のサイト選択的に作成するためのチオール反応性の試薬の変更 Immunoconjugates

細胞輸送の陽電子放出断層撮影イメージング:細胞放射性標識法

細胞集積量の増加と腫瘍標的化の改善のためウイルス由来ペプチド修飾抗体複合体の初期評価

マウスリンパ球標識による

の調製と評価

要約

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可逆小分子またはバイオセンサー応用のためのマルチコンポーネント構造を固定化するために、マイクロ流体オンチップキャプチャ - 環化反応

バイオコンジュゲーションとのアルタン

使用した金ナノ粒子の効率的な放射性標識のために最適化されたプロトコル

プレターゲッティングPETイメージング用バイオ直交逆電子需要ディールスアルダー環化を活用

低分子CLT1ペプチド標的造影剤を用いて前立腺がんの分子イメージングのMR

逆電子需要ディールス ・ アルダー反応に基づく pretargeted 放射免疫療法

合成と化反応のサイト選択的に作成するためのチオール反応性の試薬の変更 Immunoconjugates

細胞輸送の陽電子放出断層撮影イメージング:細胞放射性標識法

細胞集積量の増加と腫瘍標的化の改善のためウイルス由来ペプチド修飾抗体複合体の初期評価

マウスリンパ球標識による

逆電子需要ディールス・アルダー反応に基づく pretargeted 放射免疫療法