This work supported by research grant funding from the Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) of Canada, the Ontario Institute for Cancer Research (OICR, #P.SI.015.8), and the Canadian Cancer Society (CCS, #703857). The authors acknowledge the contributions of Dr. Denis Snider who provided assistance in preparing the manuscript.

تمت الموافقة على الدراسات الحيوانية البحوث مجلس الحيوان الأخلاق في جامعة ماكماستر وفقا للمجلس الكندي للرعاية الحيوان (CCAC) المبادئ التوجيهية. 1. Radiolabeling من الليجندات TZ-ثلاثي الشعب مع 99m ح تنبيه: تتطلب الإجراءات التالية استخدام المركبات المشعة. وينبغي أن يتم العمل إلا في مختبر مرخص مع الالتزام بأنظمة السلامة والتخلص منها. يجب أن يتم تنفيذ ردود الفعل الميكروويف في الميكروويف مصممة خصيصا لتركيب الكيميائي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليف [99m ح (CO) 3 (H 2 O) 3] + 19، 20 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في قارورة الميكروويف، والجمع بين 8 ملغ K 2 [BH 3 CO 2]، 15 ملغ نا 2 CO 3، 20 ملغ نا 2 B 4 O 7 · 10H 2 O، و 25 ملغ KOCO [CH (OH)]2 COONa · 4H 2 O. تطهير القارورة لمدة 10 دقيقة مع غاز الأرجون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 4 مل من 99m TCO 4 - (~ 1100 من MBq، ~ 30 MCI) في المياه المالحة 0.9٪ إلى القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حرارة التفاعل في الميكروويف لمدة 3.5 دقيقة في 110 درجة مئوية بعد 10 ثانية من التحريك لضمان خلط دقيق من الكواشف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط درجة الحموضة من الحل إلى 3.5-4 باستخدام ~ 400 ميكرولتر من 1 M حمض الهيدروكلوريك. تحقق من استخدام ورقة الرقم الهيدروجيني. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Radiolabeling من Tetrazine بروابط 1-5 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 2 ملغ من كل يجند (مركبات 1-5) في 250 ميكرولتر MeOH 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 250 ميكرولتر من [99m ح (CO) 3 (H 2 O) 3] + (~ 74 من MBq، ~ 2 MCI) إلى كل حل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين خليط التفاعل باستخدام الميكروويف لمدة 20 دقيقة عند 60 درجة مئوية. ملاحظة: هذه خطوة مماثلة لجميع tetrazines 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بالنسبة لمركبات 2- 5، تتبخر المذيبات وإعادة dissolلقد المنتجات الناشئة في 1 مل 1: 1 ت / ت DCM: TFA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين منتجات التفاعل المنحل (2-5) في 60 درجة مئوية في الميكروويف لمدة 6 دقائق (2-4) أو 10 دقيقة (5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التبريد لدرجة حرارة الغرفة، تتبخر المذيب باستخدام المبخر (36 ° C، 8 مللي بار، 3 دقائق، 6000 دورة في الدقيقة) وحل مجمع المجففة في 1: 1 إيه سي: H 2 O أو 1: 1 MeOH: H 2 O، قبل تنقية HPLC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنقية 99m ح المسمى المركبات (1-5)، بما في ذلك فصل المنتج المسمى من يجند tetrazine الخالي من الملصقات، وذلك باستخدام HPLC (C 18 عكس المرحلة). عادة، استخدام التدرج شطف من 30:70 إيه سي: H 2 O (على حد سواء مع 0.1٪ TFA) ل40:60 إيه سي: H 2 O أكثر من 20 دقيقة (18 دقيقة) وC 18 التحليلي عمود 4.6 × 100 مم. استخدام كل من الأشعة فوق البنفسجية (254 نانومتر) والكشف عن أشعة غاما. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ عينة صغيرة من كل منتج وصفت ومقارنة الوقت الاحتفاظ HPLC لأن من شارك في ينجECTED، غير المشعة، ومعيار إعادة المسمى (0.125 ملغ في 20٪ الميثانول-H 2 O). يتم التعرف على المعايير وصفت رد في تتبع الأشعة فوق البنفسجية HPLC، وسوف أزل في نفس الوقت على 99m مجمع المسمى ح-في تتبع γ-HPLC. ويظهر هذا التعاون حقن قمم في أوقات الاحتفاظ مماثلة، الأمر الذي يؤكد هوية 99m مجمع ح المسمى. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتبخر المذيب من الكسور HPLC باستخدام المبخر (36 ° C، 8 مللي بار، 3 دقائق، 6000 دورة في الدقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صياغة مجمع تنقية بتركيز 7.4 كيلو بيكيريل / ميكرولتر في برنامج تلفزيوني، التي تحتوي على 0.5٪ BSA و 0.01٪ توين-80. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لضمان مركبات المسمى مستقرة، إجراء دراسة في المختبر الاستقرار. احتضان مركب وضعت في 37 درجة مئوية لمدة 1 و 4 و 6 ساعات، حقن كمية صغيرة (3.7 من MBq) من الخليط على HPLC في كل نقطة من الوقت لتقييم الاستقرار. </li></ol></li></ol> 2. الدراسات الحيوية التوزيع المستهدف قبل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><lط&gt; التحضير للحيوانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 7-9 الاسبوع القديمة، إناث الفئران BALB / ج (ن = 3)، إدارة TCO-BP وضعت في المياه المالحة (20 ملغ / كلغ) (5 ميكروغرام / ميكرولتر)، عن طريق حقن الوريد الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في جهاز ضبط النفس الجسدي، والتعرف على الأوردة الموجودة على السطوح الجانبية للذيل والقضاء مع مسحة الكحول. وفي حوالي 2 سم من نهاية الذيل، اضافة الى وجود إبرة عيار 30 في زاوية الضحلة، بالتوازي مع الوريد. خفض ببطء الغطاس لحقن، وإزالة الإبرة وتطبيق الاسفنج الشاش النظيف في موقع الحقن مع الضغط الخفيف حتى يتوقف النزيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 1 ساعة بعد الحقن من TCO-BP، إدارة ~ 0.74 من MBq (20 μCi) من 99m ح-tetrazine وضعت في 100 ميكرولتر من 0.5٪ BSA، 0.01٪ توين-80 في برنامج تلفزيوني، عن طريق حقن الوريد الذيل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدراسات البيولوجية توزيع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند نقطة زمنية محددة (ر = 6 ساعات)، تخدير الفئران باستخدام 3٪ الأيزوفلورين و 2٪ خليط غاز الأكسجين. إظهار له قرصة الانسحاب على الماوس تخدير للتأكد من أنها تحت الطائرة من التخدير الجراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الدم (1 مل) من خلال ثقب في القلب باستخدام حقنة قبل تعامل مع الهيبارين. مكان الماوس على ظهرها مع الأنف في مخروط الأنف لاستمرار التخدير وتحديد عملية الخنجري على الحيوان. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضافة الى وجود إبرة G 25، قليلا إلى اليسار من خط الوسط الحيوان في إطار عملية الخنجري، في زاوية 20 درجة. إدراج تماما الإبرة، وسحب ببطء مرة أخرى على المكبس لرؤية الدم في محور إبرة إذا كان ثقب القلب. قليلا تعدل الإبرة في حين الضغط على المكبس إذا لزم الأمر، لثقب القلب. ببطء سحب الدم إلى المحقنة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الحيوانية خلع عنق الرحم، في حين تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كل حيوان في كيس من البلاستيك واستخدام المعاير الجرعة (99m وضع ح) لقياس مستوى النشاط الجسم كله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الأنسجة والسوائل التالية في مرحلة ما قبل تزنإد عد أنابيب: الدم والعظام (الركبة والكتف)، المرارة والكلى والكبد والمعدة (مع المحتويات)، الأمعاء الدقيقة (مع المحتويات)، الأمعاء الغليظة والمصران الأعور (مع المحتويات)، والغدة الدرقية والقصبة الهوائية، المثانة البولية مع البول ، والذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف الأنسجة المناسبة (باستثناء الدم والمرارة والمثانة البولية) في برنامج تلفزيوني لإزالة الدم وصمة عار الجافة قبل وضع الأنسجة في أنابيب العد المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الذبيحة في كيس من البلاستيك وقياس المتبقي نشاط الجسم كله باستخدام تدريج الجرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن كل أنبوب يحتوي على عينة الأنسجة. طرح الوزن الأولي من أنبوب للحصول على كتلة من الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام جرعة تدريج (99m وضع ح) لقياس كمية من النشاط في عينة الاختبار (100 ميكرولتر) في وقت لحقن كل فأر. ملاحظة: هذه عينة اختبار تساوي حجم الحقن، مما يعطي العد النشاط في وقت الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في وقت القياس الأنسجة، لliquot 5 ميكرولتر من عينة الاختبار المستخدمة سابقا. استخدام أشعة غاما مضادة متعددة للكشف عن (99m وضع ح) والاعتماد للحصول على العد في الدقيقة (CPM) لاختبار عينة 5 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام اثنين من القيم التي تم الحصول عليها في 2.2.9 و2.2.10 لحساب النشاط والعلاقة CPM باستخدام المعادلة 1 للحصول على عامل التحويل (CPM μCi -1). (1) <img alt="المعادلة 1" src="/files/ftp_upload/55188/55188eq1.jpg" /></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام العداد جاما لقياس كمية الإشعاع في كل الأنسجة أو عينة السائل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المعادلة 1 لحساب كمية النشاط في كل الأنسجة أو السوائل في وقت قياس نسبة إلى مجموع حقن الجرعة. ثم يتم تطبيع هذه القيمة من حيث الوزن الجهاز وذكرت كنسبة مئوية حقن جرعة غرام الواحد (أي٪ ID / ز) من الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الخطوات 2.1.2 إلى 2.2.13 لإجراء تجربة السيطرة السلبية باستخدام 99m ح المسمى بروابط tetrazine في أبسينم من TCO-BP. الفئران التضحية (ن = 3) في 0.5 و 1 و 4 و 6 ساعة بعد الحقن والحصول على الأنسجة أو السوائل كما هو موضح أعلاه. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Jurisson, S. S., Lydon, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+Technetium+Small+Molecule+Radiopharmaceuticals.">Potential Technetium Small Molecule Radiopharmaceuticals.</a> Chem. Rev. 99 (9), 2205-2218 (1999).</li><li>Kluba, C. A., Mindt, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Click-to-chelate:+Development+of+Technetium+and+Rhenium-Tricarbonyl+Labeled+Radiopharmaceuticals.">Click-to-chelate: Development of Technetium and Rhenium-Tricarbonyl Labeled Radiopharmaceuticals.</a> Molecules. 18, 3206-3226 (2013).</li><li>Amato, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+Medicines+Conundrum.">Nuclear Medicines Conundrum.</a> Chem. Eng. News. 87 (36), 58-70 (2009).</li><li>Hnatowich, D. J., Virzi, F., Rusckowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+of+Avidin+and+Biotin+for+Imaging+Applications.">Investigations of Avidin and Biotin for Imaging Applications.</a> J. Nucl. Med. 28 (8), 1294-1302 (1987).</li><li>Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrazine+Ligation:+Fast+Bioconjugation+Based+on+Inverse-Electron-Demand+Diels-Alder+Reactivity.">Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity.</a> J. Am. Chem. Soc. 130 (41), 13518-13519 (2008).</li><li>Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrazine-Based+Cycloadditions:+Application+to+Pretargeted+Live+Cell+Imaging.">Tetrazine-Based Cycloadditions: Application to Pretargeted Live Cell Imaging.</a> Bioconjugate Chem. 19 (12), 2297-2299 (2008).</li><li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Chemistry+for+Pretargeted+Tumor+Imaging+in+Live+Mice.">In Vivo Chemistry for Pretargeted Tumor Imaging in Live Mice.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 49 (19), 3375-3378 (2010).</li><li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+Pretargeted+Strategy+for+the+PET+Imaging+of+Colorectal+Carcinoma+via+the+Modulation+of+Radioligand+Pharmacokinetics.">Optimization of a Pretargeted Strategy for the PET Imaging of Colorectal Carcinoma via the Modulation of Radioligand Pharmacokinetics.</a> Mol. Pharmaceutics. 12 (10), 3575-3587 (2015).</li><li>Rossin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Reactive+trans-Cyclooctene+Tags+with+Improved+Stability+for+Diels-Alder+Chemistry+in+Living+Systems.">Highly Reactive trans-Cyclooctene Tags with Improved Stability for Diels-Alder Chemistry in Living Systems.</a> Bioconjugate Chem. 24 (7), 1210-1217 (2013).</li><li>Rossin, R., Robillard, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretargeted+Imaging+Using+Bioorthogonal+Chemistry+in+Mice.">Pretargeted Imaging Using Bioorthogonal Chemistry in Mice.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 21, 161-169 (2014).</li><li>Denk, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+18F-Labeled+Tetrazine+with+Favorable+Pharmacokinetics+for+Bioorthogonal+PET+Imaging.">Development of a 18F-Labeled Tetrazine with Favorable Pharmacokinetics for Bioorthogonal PET Imaging.</a> Angew. Chem., Int. Ed. 53 (36), 9655-9659 (2014).</li><li>Herth, M. M., Andersen, V. L., Lehel, S., Madsen, J., Knudsen, G. M., Kristensen, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+11C-labeled+Tetrazine+for+Rapid+Tetrazine-Trans-Cyclooctene+Ligation.">Development of a 11C-labeled Tetrazine for Rapid Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation.</a> Chem. Commun. 49 (36), 3805-3807 (2013).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrazine-Trans-Cyclooctene+Ligation+for+the+Rapid+Construction+of+18F+Labeled+Probes.">Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation for the Rapid Construction of 18F Labeled Probes.</a> Chem. Commun. 46 (42), 8043 (2010).</li><li>Nichols, B., Qin, Z., Yang, J., Vera, D. R., Devaraj, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=68Ga+Chelating+Bioorthogonal+Tetrazine+Polymers+for+the+Multistep+Labeling+of+Cancer+Biomarkers.">68Ga Chelating Bioorthogonal Tetrazine Polymers for the Multistep Labeling of Cancer Biomarkers.</a> Chem. Commun. 50 (40), 5215-5217 (2014).</li><li>Zeglis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Pretargeted+PET+Imaging+Strategy+Based+on+Bioorthogonal+Diels-Alder+Click+Chemistry.">A Pretargeted PET Imaging Strategy Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry.</a> J. Nucl. Med. 54 (8), 1389-1396 (2013).</li><li>Garc&#237;a, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=99mTc-Bioorthogonal+Click+Chemistry+Reagent+for+In+Vivo+Pretargeted+Imaging.">99mTc-Bioorthogonal Click Chemistry Reagent for In Vivo Pretargeted Imaging.</a> Bioorg. Med. Chem. 24 (6), 1209-1215 (2016).</li><li>Russell, R. G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bisphosphonates:+The+First+40+Years.">Bisphosphonates: The First 40 Years.</a> Bone. 49 (1), 2-19 (2011).</li><li>Yazdani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Bone-Seeking+Trans-Cyclooctene+for+Pretargeting+and+Bioorthogonal+Chemistry:+A+Proof+of+Concept+Study+Using+99mTc+and+177Lu-Labeled+Tetrazines.">A Bone-Seeking Trans-Cyclooctene for Pretargeting and Bioorthogonal Chemistry: A Proof of Concept Study Using 99mTc and 177Lu-Labeled Tetrazines.</a> J. Med. Chem. , (2016).</li><li>Alberto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Organometallic+Aqua+Complex+of+Technetium+for+the+Labeling+of+Biomolecules:+Synthesis+of+[99mTc(OH2)3(CO)3]++from+[99mTcO4]-+in+Aqueous+Solution+and+its+Reaction+with+a+Bifunctional+Ligand.">A Novel Organometallic Aqua Complex of Technetium for the Labeling of Biomolecules: Synthesis of [99mTc(OH2)3(CO)3]+ from [99mTcO4]- in Aqueous Solution and its Reaction with a Bifunctional Ligand.</a> J. Am. Chem. Soc. 120 (31), 7987-7988 (1998).</li><li>Alberto, R., Ortner, K., Wheatley, N., Schibli, R., Schubiger, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+properties+of+boranocarbonate:+A+convenient+in+situ+CO+source+for+the+aqueous+preparation+of+[99mTc(OH2)3(CO)3.">Synthesis and properties of boranocarbonate: A convenient in situ CO source for the aqueous preparation of [99mTc(OH2)3(CO)3.</a> J. Am. Chem. Soc. 123 (13), 3135-3136 (2001).</li><li>Lu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+SAR+of+99mTc/Re-labeled+Small+Molecule+Prostate+Specific+Membrane+Antigen+Inhibitors+with+Novel+Polar+Chelates.">Synthesis and SAR of 99mTc/Re-labeled Small Molecule Prostate Specific Membrane Antigen Inhibitors with Novel Polar Chelates.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (5), 1557-1563 (2013).</li><li>Maresca, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+Molecule+Inhibitors+of+PSMA+Incorporating+Technetium-99m+for+Imaging+Prostate+Cancer:+Effects+of+Chelate+Design+on+Pharmacokinetics.">Small Molecule Inhibitors of PSMA Incorporating Technetium-99m for Imaging Prostate Cancer: Effects of Chelate Design on Pharmacokinetics.</a> Inorg. Chim. Acta. 389, 168-175 (2012).</li><li>Bartholom&#228;, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insight+into+the+Mode+of+Action+of+Re(CO)3+Thymidine+Complexes.">Insight into the Mode of Action of Re(CO)3 Thymidine Complexes.</a> ChemMedChem. 5 (9), 1513-1529 (2010).</li></ol>

The authors declare they have no competing financial interests.

تم إعداد مجموعة من يخلب ثلاثي الشعب المرتبطة tetrazine من أقطاب مختلفة، وجرى تقييم فائدة المجمعات 99m ح في رد فعل IEDDA مع مشتق TCO في الجسم الحي. تم وضع 99m ح سيلة فعالة وقابلة للتكرار وضع العلامات لمدة خمس tetrazine-يخلب، حيث كان تركيز يجند 10 -3 م وأعقب خطوة وصفها من قبل deprotection من تي الجماعات بوتيل (للمركبات 2-5). تم استخدام تركيزات عالية من يجند لتحسين العائد الإشعاعية والحد من أوقات رد الفعل الذي التقليل من تدهور tetrazine 21. تم عزل المنتجات وفصلها عن يجند الخالي من الملصقات وأي شوائب الإشعاعية من قبل HPLC، مما أدى إلى عوائد الإشعاعية تتراوح 31-83٪، مع وجود جميع نقاء الإشعاعية&gt; 99٪ ونشاط معين عال من ~ 1.48 من MBq / ميكروغرام. عرضت جميع المركبات لتكون مستقرة في برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.5٪ BSA و 0.01٪ Tween80 لمدة تصل إلى 6 ساعات (الشكل 3). مركبات فوسفونتس، مثل TCO-BP، توطين لمناطق استقلاب العظام نشط أو الإصابة، والتي تشمل الركبة والكتف المفاصل في الفئران. بالتالي يوفر TCO-BP وسيلة بسيطة لتقييم فعالية tetrazines رديولبلد جديدة لتقديم نظائر في الجسم الحي. وأظهر تقييم للتوزيع الحيوي من كل خمسة 99m ح-tetrazines امتصاص في الركبة والكتف المفاصل 6 ساعة بعد الحقن، مما يدل على نجاحها قبل استهداف العظام في الجسم الحي (الشكل 4). وأكدت دراسات سابقة أن رديولبلد TCO-BP يتراكم في العظام 18، في حين أن بناء 99m ح-tetrazine (2) نظرا حده لا (الشكل 5). هذا يسمح لأحد أن نخلص إلى أن امتصاص العظام يرجع إلى رد فعل IEDDA. يبني أكثر محبة للدهون 1 و 2 </قوي&gt; لديها بيانات توزيع مماثل بما في ذلك امتصاص عالية في الركبة (9.1 ± 1.9 (1)؛ 7.6 ± 2.7 (2)) والكتف (4.6 ± 1.4 (1)؛ 4.8 ± 1.9 (2)). وشوهدت تركيزات عالية من النشاط الإشعاعي أيضا في المرارة والكبد والأمعاء، وهو ما يتسق مع توزيع 99m محبة للدهون TC-tetrazine مجمع 2 في غياب TCO-BP (الشكل 5). لم أخرى أنسجة غير المستهدفة والأجهزة مثل الهيكل العظمي والعضلات والطحال لا تظهر أي امتصاص كبير (&lt;1٪) عندما أجريت دراسات توزيع الحيوي على 99m ح-tetrazines في غياب TCO-BP (الشكل 5) ، لذلك لم تؤخذ هذه الأجهزة للتجارب التي تستهدف مسبقا. بالإضافة إلى ذلك، تجارب للتوزيع الحيوي مع 99m ح-tetrazines وحدها كشفت إزالة جيدة من الأنسجة غير المستهدفة في 6 ساعة بعد الحقن. ونتيجة لذلك، ثيالصورة نقطة زمنية، الذي هو في حدود نصف حياة واحدة من النظائر تم اختيار كنقطة الوقت لمقارنة مختلفة بروابط tetrazine رديولبلد. أظهر المزيد من 99m القطبي TC-tetrazine مجمع 3 تحمل PEG 5 رابط الركبة عالية جدا وامتصاص الكتف (16.2 ± 4.8 و 20.7 ± 4.9 على التوالي). كان هناك أيضا انخفاض النشاط لوحظ في الكبد والأمعاء. أظهر المقابلة PEG 10 مشتق أيضا ملزمة حتى العظم وتقليل امتصاص في الكبد مقارنة مع المركبات 1 و 2. مشتق الأكثر القطبية 5، أظهرت انخفاض العظام ملزمة من جميع التركيبات الأخرى التي هي على الأرجح بسبب التخليص السريع. امتصاص العظام عالية والعظام: نسب الدم (الجدول 1) ولا سيما بالنسبة للمركبات 3 و 4 تثبت أن ما قبل الاستهداف وردود الفعل IEDDA يمكن استخدامها لالموضعمركبات اليز 99m ح المسمى في الجسم الحي. الأساليب ذكرت هنا يمكن أن تستخدم لتقييم أي tetrazine رديولبلد بما في ذلك الجيل القادم للتعاون التقني (I) بروابط -tetrazine. وتجدر الإشارة إلى أن لفئة من بروابط التي استخدمت في هذه الدراسة، والهياكل يمكن أن تختلف بسهولة عن طريق تغيير طبيعة المجموعات المانحة وlinkers بين مجمع المعادن وtetrazine، دون إحداث تغييرات كبيرة في يجند طريقة تركيب 21. بعد أن يتم تحديد جزيء الرصاص، طريقة عدة الفورية، والتي من المرجح أن تشمل أساليب تنقية المرحلة الصلبة، يمكن تطويرها لدعم الترجمة السريرية. وح (I) المجمعات ذكرت هنا تهيئ الفرصة للتحضير المواد المشعة 99m ح جديدة باستخدام مجموعة واسعة من مختلف الجزيئات المستمدة TCO تستهدف بما في ذلك الأجسام المضادة. الأجسام المضادة، على الرغم من خصائص استهداف الممتازة قبل إنشاء تكنيتيوم المسمى tetrazines، لن مثال او نموذجحليف استخدامها مع 99m ح بسبب البطئ إزالة (أيام)، والذي هو أطول بكثير من عمر النصف للنظائر (~ 6 ساعات). تطبيق إضافي للكيمياء ذكرت هنا هو أن نفس الفئة من بروابط يمكن أن تكون مستعدة مع بيتا انبعاث النويدات المشعة 186 رد و 188 رد. إعادة (I) نظائرها isostructural من وكلاء ح (أنا) عندما يقترن الورم تسعى خصائص TCO-BP يمكن أن تستخدم لعلاج الانبثاث العظام.

يبقى 99m ح النظائر المشعة المهيمن المستخدمة في الطب النووي التشخيصي، مع أكثر من 50 مليون عملية التصوير التي أجريت في السنة في جميع أنحاء العالم 1، 2، 3. غالبية 99m كلاء ح المستخدمة سريريا هي نوع نضح المواد المشعة. هناك عدد محدود من المركبات المستهدفة بنشاط التي يتم فيها توجيه 99m ح ربط العلامات البيولوجية المحددة من خلال ربط لبناء الاستهداف. وغالبا ما تعوق إنشاء 99m المستهدفة المواد المشعة ح بتأثير 99m المجمعات TC-يجند على قدرة جزيء استهداف لربط العلامات البيولوجية من الفائدة، أو النظائر نصف الحياة ليست طويلة بما فيه الكفاية للاستخدام مع ارتفاع الجزيئات الحيوية الوزن الجزيئي مثل الأجسام المضادة. وهذه الأخيرة عادة ما يتطلب عدة أيام قبل أن يتم الحصول على الصور من أجل أن جزيء حيوي لمسح من غير المستهدفة TISS<html> UES. يقدم قبل استهداف نهجا بديلا للتغلب على هذه التحديات. قبل استهداف جنبا إلى جنب مع الكيمياء bioorthogonal وقد تبين أن يكون وسيلة فعالة لتطوير تحقيقات التصوير الجزيئي جديدة لكل مضان والإذاعة التصوير 4، 5، 6، 7، 8. ومعكوس الطلب الإلكترون ديلز-ألدر (IEDDA) التفاعل بين 1،2،4،5-tetrazine (TZ) ومشتقاتها -cyclooctene عبر (TCO)، كما هو موضح في الشكل رقم 1، وقد ثبت أن تكون فعالة بشكل خاص 6. رد فعل IEDDA مع هذه المكونات يمكن أن يحمل حركية سريعة في برنامج تلفزيوني (ك 2 ≈ 6000 م -1 ق -1) وانتقائية عالية، مما يجعلها مثالية للفي الجسم الحي قبل استهداف التطبيقات 9، 10. <html> e_content &quot;&gt; النهج الأكثر شيوعا ينطوي على إدارة ناقلات TCO المستمدة من الاستهداف وبعد فترة تأخير كافية، يدار من tetrazine رديولبلد. tetrazines رديولبلد على أساس 11 C، 18 F، 64 النحاس و 89 عنصر الزركون، و 111 في كان وذكرت 11، 12، 13، 14، 15. وفي المقابل، هناك واحد فقط تقرير ل99m ح المسمى TZ، الذي تم إعداده باستخدام نوع يجند HYNIC تتطلب استخدام المشترك بروابط لمنع بروتين ملزمة وتدهور في الجسم الحي 16. وكبديل لذلك، ونحن التقرير هنا توليف 99m ح (I) المسمى tetrazines باستخدام عائلة بروابط التي تشكل مجمعات ثلاثي الشعب مستقرة مع [99m ح (CO) 3] + الأساسية. العمر = &quot;1&quot;&gt; <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig1.jpg" /> الشكل 1: IEDDA رد فعل bioorthogonal بين tetrazine و-cyclooctene العابرة. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55188/55188fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> عائلة بروابط أعد تحتوي يخلب ثلاثي الشعب التي تختلف في الاستقطاب وطبيعة المجموعة رابط بين منطقة ملزم المعادن وTZ (الشكل 2). وكان الهدف هو تحديد 99m ح-Tetrazine بناء يمكن أن توطين نحو فعال وتتفاعل مع مواقع المسمى TCO في الجسم الحي واضحة بسرعة عندما لا تكون ملزمة، من أجل انتاج عالية المستهدفة لغير المستهدفة النسب. لاختبار بروابط، تم استخدام TCO المشتقة من البايفوسفونيت (TCO-BP) 17. لقد أظهرنا في وقت سابق ان TCO-BP يموضع إلى مناطق استقلاب العظام نشط ويمكن أن تتفاعل معtetrazines رديولبلد في الجسم الحي 18. وهو كاشف مناسب لاختبار tetrazines الجديدة، لأنها يمكن أن تكون على استعداد في خطوة واحدة والتجارب لا يمكن أن يؤديها في الفئران العادية التي يحدث فيها توطين في المقام الأول في المفاصل (الركبتين والكتفين).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1378">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Argon gas&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Alphagaz</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Na2CO3</td>
			<td style="width:255px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:199px;">106395</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Na2B4O7.10H2O</td>
			<td style="width:255px;">Anachemia</td>
			<td style="width:199px;">S9640</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">KNaC4H4O6.4H2O</td>
			<td style="width:255px;">Anachemia</td>
			<td style="width:199px;">217255</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Technelite 99mTc generator</td>
			<td style="width:255px;">Lantheus medical imaging</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td>Source of 99mTcO4-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">0.9% Saline</td>
			<td style="width:255px;">Lantheus medical imaging</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td>To elute generator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 M HCl</td>
			<td style="width:255px;">Lab Chem</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MeOH</td>
			<td style="width:255px;">Caledon</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACN</td>
			<td style="width:255px;">Caledon</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td>HPLC grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Millipore H2O</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific&#160;&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Barnstead Nanopure</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">DCM</td>
			<td style="width:255px;">Caledon</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">TFA</td>
			<td style="width:255px;">Caledon</td>
			<td style="width:199px;">---</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">PBS</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:199px;">10010023</td>
			<td>pH 7.4 1X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">BSA</td>
			<td style="width:255px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:199px;">A7906</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Tween80</td>
			<td style="width:255px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:199px;">P8047</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Isoflurane&#160;</td>
			<td style="width:255px;">CDMV</td>
			<td style="width:199px;">108737</td>
			<td>Supplier: Fresenius Kabi Animal Health&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:367px;">HPLC&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Waters&#160;</td>
			<td style="width:199px;">1525 Binary Pump, 2998 Photodiodde Array Detector, E-SAT/IN, Bioscan Flowcount PMT detector (item # 15590)</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:367px;">HPLC column for analysis and purification of compounds 2-4</td>
			<td style="width:255px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:199px;">00G-4435-E0</td>
			<td>Gemini&#174; 5 &#181;m C18 110 &#197;, LC Column 250 x 4.6 mm,</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:367px;">HPLC column for analysis and purification of compounds 1 and 5</td>
			<td style="width:255px;">Waters&#160;</td>
			<td style="width:199px;">186003115</td>
			<td>XBridge BEH C18 Column, 130 &#197;, 5 &#181;m, 4.6 mm X 100 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Microwave Reactor&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Biotage&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Initiator 8</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Biotage V10 Evaporator</td>
			<td style="width:255px;">Biotage&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Serial # V1041</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Dose calibrator</td>
			<td style="width:255px;">Capintec, Inc.&#160;</td>
			<td style="width:199px;">CRC-25R</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:367px;">Gamma counter</td>
			<td style="width:255px;">Perkin Elmer</td>
			<td style="width:199px;">Wizard 1470 Automatic Gamma Counter</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Animal room scale&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:199px;">XP105 Delta Range</td>
			<td style="width:559px;">---</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:367px;">Microwave vials&#160;</td>
			<td style="width:255px;">Biotage&#160;</td>
			<td style="width:199px;">355629</td>
			<td>0.5-2 mL&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and evaluation of 99mtc-labeled tridentate chelates for pre-targeting using bioorthogonal chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

تم توليفها بروابط باستخدام الربط، والدوال chelators مختلفة عبر استراتيجية أمينة الاختزالية بسيطة (الشكل 2)، تليها اقتران المنتج إلى tetrazine المتاحة تجاريا 22، 23. تم تنفيذ Radiolabeling باستخدام نفس الأسلوب لجميع المركبات، وكان تكرار للغاية. وكان محسن العملية من خلال تغيير درجة الحموضة، وكمية من يجند وفترة رد الفعل ودرجة الحرارة وعندها 99m ح-رديولبلد المركبات التي تم الحصول عليها 1-5 في معتدلة إلى العائد الإشعاعية العالية: 83٪ (1)، 45٪ (2)، و 31٪ (3)، 42٪ (4)، و 54٪ (5). بعد تنقية HPLC من يجند المتفاعل والتبخر باستخدام المبخر، تم وضع المركبات في برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.5٪ BSA و 0.01٪ Tween80 قبل الحقن. نشاط معين من ع<html> كان tetrazine المسمى TC-99m urified ~ 1.48 من MBq / ميكروغرام. أجريت دراسات لتقييم استقرار 99m ح المسمى بروابط tetrazine قبل الدراسات في الجسم الحي. وقد رصدت الاستقرار من خلال HPLC في 1 و 4 و 6 ساعات مع أي تدهور واضح على مدى 6 ساعات (R ر = 14 دقيقة)، كما رأينا في الشكل (3) لمركب 4 كمثال على ذلك. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig2.jpg" /> الشكل 2: مركبات أنتجت 1-5 استخدام linkers مختلفة (ص) وchelators (X) كما هو مبين (القاع). جميع المركبات ورديولبلد مع [99m ح (CO) 3 (H 2 O) 3] + باستخدام ظروف التفاعل نفسه (أعلى)، باستثناء 1، والتي لا تتطلب خطوة (ب). <img alt="&lt;/ HTML">&quot;الشكل 3&quot; SRC = &quot;/ ملفات / ftp_upload / 55188 / 55188fig3.jpg&quot; /&gt; الشكل (3): الاستقرار اختبار النتائج باستخدام مركب 4. آثار γ-HPLC من 4 المحتضنة في برنامج تلفزيوني في 37 درجة مئوية لمدة 1 و 4 و 6 ساعات. لاختبار في الجسم الحي، واستخدمت صحية الفئران BALB / ج. لفترة وجيزة، لكل مركب، ومجموعات من الفئران (ن = 3) حقنوا TCO-BP (100 ميكرولتر، 20 ملغ / كلغ)، والذي أعقبه إدارة المركبات المسماة ح-99m في وقت لاحق 1 ساعة. في 6 ساعة بعد الحقن من المجمعات ح 99m، تمت التضحية الحيوانات وتركيزات النشاط في مختلف الأنسجة والسوائل تحديدها. وذكرت البيانات الناتجة كنسبة مئوية جرعة حقن في غرام الأنسجة (٪ ID / ز) و هو مبين في الشكل (4). وتظهر نسب تمثيلية من العظام (الركبة أو الكتف) إلى الدم لكل من المركبات TZ المسمى ح خمسة 99m في الجدول 1. وتشير هذه البيانات CLفي وقت مبكر هذا المركب 3 قدم الأمثل استهداف جنبا إلى جنب مع إزالة من الدم، وأنه كان هناك تباين كبير بين المركبات وصفت TC-99m فيما يتعلق بعيدا عن الهدف توطين الأنسجة. دراسة السلبية للسيطرة على استخدام الفئران CD1 (ن = 3) وأجري، حيث تم حقن الفئران مع بروابط 99m ح-tetrazine في غياب TCO-BP. تمت التضحية الفئران عند 0.5، 1 و 4 و 6 ساعات ومعرف٪ / تم تحديد ز لجميع الأنسجة والسوائل. لجميع مركبات اخضعت للاختبار، حيث يتم تقديم بيانات للمجمع 2 في الشكل (5)، واعتبر أي امتصاص كبير في العظم أو الأنسجة الأخرى (القلب والرئتين والطحال والعضلات والهيكل العظمي) ليس هو مبين في الشكل (4). <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig4.jpg" /> الشكل 4. النتائج بيو توزيع 99m ح المسمى المشتقات tetrazine 1-5 (الحانات إنديكاتيد). أظهرت بيانات تم الحصول عليها من الأنسجة المختارة والسوائل التي اتخذت 6 حقن ساعة بعد للمشتقات رديولبلد، وكان النشاط تطبيع للأنسجة أو وزن السوائل، كما يعني في المئة جرعة في كل غرام من الأنسجة أو السوائل (٪ ID / ز) ضخت ± SEM. يشار إلى أهداف العظام التي كتبها •. ملاحظة: جميع الأنسجة المتبقية لا يظهر كان متوسط٪ ID / ز الذي كان أقل من 1٪. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55188/55188fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/55188/55188fig5.jpg" /> الشكل 5. النتائج بيو توزيع للدراسة للسيطرة على استخدام المسمى TC-99m tetrazine (2) من دون حقن مسبق من TCO-BP. وقد تم الحصول على البيانات الواردة من الأنسجة والسوائل مختارة مأخوذة من 3 الفئران عند 0.5، 1، 4، و 6 ساعة بعد الحقن من 2. آخر وتطبيع للأنسجة أووزن السوائل، كما يعني حقنه في المئة جرعة في كل غرام من الأنسجة أو السوائل (٪ ID / ز) ± SEM. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55188/55188fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td colspan="5"> مركب </td></tr><tr><td> نسبة </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> الكتف: الدم </td><td> 3.5: 1 </td><td> 3.5: 1 </td><td> 21: 1 </td><td> 7.8: 1 </td><td> 0.8: 1 </td></tr><tr><td> الركبة: الدم </td><td> 6.9: 1 </td><td> 5.6: 1 </td><td> 26: 1 </td><td> 12: 1 </td><td> 1.3: 1 </td></tr></tbody></table> الجدول 1. العظام نسيج: نسب الدم تحديدها من دراسات توزيع الحيوي.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry at JoVE.com

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

إعداد وتقييم<sup&gt; 99m</sup&gt; ح المسمى ثلاثي الشعب يخلب لما قبل استهداف عن طريق Bioorthogonal الكيمياء

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

preparation-evaluation-99mtc-labeled-tridentate-chelates-for-pre

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

8.1K Views.  McMaster University. Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry. 

Video: Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under appropriate conditions. The glycan nanoparticles are useful carriers for protein factors, which facilitate the in vivo delivery of the proteins and sustain their retention in the targeted tissue. The glycan polyelectrolyte complexes are also ideal for protein delivery, as the incorporation is carried out in aqueous solution, which reduces the likelihood of inactivation of the proteins. Proteins with a heparin-binding site adhere to dextran sulfate readily, and are, in turn, stabilized by the binding. These particles are also less inflammatory and toxic when delivered in vivo. In the protocol described below, SDF-1&#945; (Stromal cell-derived factor-1&#945;), a stem cell homing factor, is first mixed and incubated with dextran sulfate. Chitosan is added to the mixture to form polyelectrolyte complexes, followed by zinc sulfate to stabilize the complexes with zinc bridges. The resultant SDF-1&#945;-DS-CS particles are measured for size (diameter) and surface charge (zeta potential). The amount of the incorporated SDF-1&#945; is determined, followed by measurements of its in vitro release rate and its chemotactic activity in a particle-bound form.

The objective of this protocol is to incorporate SDF-1&#945;, a stem cell homing factor, into dextran sulfate-chitosan nanoparticles. The resultant particles are measured for their size and zeta potential, as well as the content, activity, and in vitro release rate of SDF-1&#945; from the nanoparticles.

إعداد وتوصيف SDF-1α-الشيتوزان-ديكستران سلفات النانوية

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

Preparation of Mica and Silicon Substrates for DNA Origami Analysis and Experimentation

The designed nature and controlled, one-pot synthesis of DNA origami provides exciting opportunities in many fields, particularly nanoelectronics. Many of these applications require interaction with and adhesion of DNA nanostructures to a substrate. Due to its atomically flat and easily cleaned nature, mica has been the substrate of choice for DNA origami experiments. However, the practical applications of mica are relatively limited compared to those of semiconductor substrates. For this reason, a straightforward, stable, and repeatable process for DNA origami adhesion on derivatized silicon oxide is presented here. To promote the adhesion of DNA nanostructures to silicon oxide surface, a self-assembled monolayer of 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) is deposited from an aqueous solution that is compatible with many photoresists. The substrate must be cleaned of all organic and metal contaminants using Radio Corporation of America (RCA) cleaning processes and the native oxide layer must be etched to ensure a flat, functionalizable surface. Cleanrooms are equipped with facilities for silicon cleaning, however many components of DNA origami buffers and solutions are often not allowed in them due to contamination concerns. This manuscript describes the set-up and protocol for in-lab, small-scale silicon cleaning for researchers who do not have access to a cleanroom or would like to incorporate processes that could cause contamination of a cleanroom CMOS clean bench. Additionally, variables for regulating coverage are discussed and how to recognize and avoid common sample preparation problems is described.

Reproducible cleaning processes for substrates used in DNA origami research are described, including bench-top RCA cleaning and derivatization of silicon oxide. Protocols for surface preparation, DNA origami deposition, drying parameters, and simple experimental set-ups are illustrated.

إعداد ميكا والسيليكون ركائز لDNA اوريغامي التحليل والتجريب

The designed nature and controlled, one-pot synthesis of DNA origami provides exciting opportunities in many fields, particularly nanoelectronics. Many of ...

Preparation of Biopolymer Aerogels Using Green Solvents

Although the first reports on aerogels made by Kistler1 in the 1930s dealt with aerogels from both inorganic oxides (silica and others) and biopolymers (gelatin, agar, cellulose), only recently have biomasses been recognized as an abundant source of chemically diverse macromolecules for functional aerogel materials. Biopolymer aerogels (pectin, alginate, chitosan, cellulose, etc.) exhibit both specific inheritable functions of starting biopolymers and distinctive features of aerogels (80-99% porosity and specific surface up to 800 m2/g). This synergy of properties makes biopolymer aerogels promising candidates for a wide gamut of applications such as thermal insulation, tissue engineering and regenerative medicine, drug delivery systems, functional foods, catalysts, adsorbents and sensors. This work demonstrates the use of pressurized carbon dioxide (5 MPa) for the ionic cross linking of amidated pectin into hydrogels. Initially a biopolymer/salt dispersion is prepared in water. Under pressurized CO2 conditions, the pH of the biopolymer solution is lowered to 3 which releases the crosslinking cations from the salt to bind with the biopolymer yielding hydrogels. Solvent exchange to ethanol and further supercritical CO2 drying (10 - 12 MPa) yield aerogels. Obtained aerogels are ultra-porous with low density (as low as 0.02 g/cm3), high specific surface area (350 - 500 m2/g) and pore volume (3 - 7 cm3/g for pore sizes less than 150 nm).

A new way for the production of biopolymer-based aerogels by carbon dioxide (CO2) induced gelation is shown. The technique utilizes pressurized carbon dioxide (5 MPa) for the production of biopolymer hydrogels and supercritical CO2 (12 MPa) to convert gels into aerogels. The only solvents needed besides CO2 are water and ethanol.

إعداد BIOPOLYMER Aerogels عن طريق المذيبات الخضراء

Although the first reports on aerogels made by Kistler1 in the 1930s dealt with aerogels from both inorganic oxides (silica and others) and biopolymers ...

The Preparation and Properties of Thermo-reversibly Cross-linked Rubber Via Diels-Alder Chemistry

A method for using Diels Alder thermo-reversible chemistry as cross-linking tool for rubber products is demonstrated. In this work, a commercial ethylene-propylene rubber, grafted with maleic anhydride, is thermo-reversibly cross-linked in two steps. The pending anhydride moieties are first modified with furfurylamine to graft furan groups to the rubber backbone. These pendant furan groups are then cross-linked with a bis-maleimide via a Diels-Alder coupling reaction. Both reactions can be performed under a broad range of experimental conditions and can easily be applied on a large scale. The material properties of the resulting Diels-Alder cross-linked rubbers are similar to a peroxide-cured ethylene/propylene/diene rubber (EPDM) reference. The cross-links break at elevated temperatures (&#62; 150 &#176;C) via the retro-Diels-Alder reaction and can be reformed by thermal annealing at lower temperatures (50-70 &#176;C). Reversibility of the system was proven with infrared spectroscopy, solubility tests and mechanical properties. Recyclability of the material was also shown in a practical way, i.e., by cutting a cross-linked sample into small parts and compression molding them into new samples displaying comparable mechanical properties, which is not possible for conventionally cross-linked rubbers.

A simple two-step approach involving rubber modification and cross-linking yields fully reworkable, elastic rubber products.

إعداد وخصائص الحرارية عكسية عبر ربط الكيمياء المطاط عن طريق ديلز-ألدر

A method for using Diels Alder thermo-reversible chemistry as cross-linking tool for rubber products is demonstrated. In this work, a commercial ...

Simple Methods for the Preparation of Non-noble Metal Bulk-electrodes for Electrocatalytic Applications

The rock material pentlandite with the composition Fe4.5Ni4.5S8 was synthesized via high temperature synthesis from the elements. The structure and composition of the material was characterized via powder X-ray diffraction (PXRD), M&#246;ssbauer spectroscopy (MB), scanning electron microscopy (SEM), differential scanning calorimetry (DSC) and energy dispersive X-ray spectroscopy (EDX). Two preparation methods of pentlandite bulk electrodes are presented. In the first approach a piece of synthetic pentlandite rock is directly contacted via a wire ferrule. The second approach utilizes pentlandite pellets, pressed from finely ground powder, which is immobilized in a Teflon casing. Both electrodes, whilst being prepared by an additive-free method, reveal high durability during electrocatalytic conversions in comparison to common drop-coating methods. We herein showcase the striking performance of such electrodes to accomplish the hydrogen evolution reaction (HER) and present a standardized method to evaluate the electrocatalytic performance by electrochemical and gas chromatographic methods. Furthermore, we report stability tests via potentiostatic methods at an overpotential of 0.6 V to explore the material limitations of the electrodes during electrolysis under industrial relevant conditions.

A facile preparation method of electrodes using the bulk material Fe4.5Ni4.5S8 is presented. This method provides an alternative technique to conventional electrode fabrication and describes prerequisites for unconventional electrode materials including a straightforward electrocatalytic testing method.

طرق بسيطة لإعداد المعادن غير النبيلة السائبة الأقطاب لتطبيقات إليكتروكاتاليتيك

The rock material pentlandite with the composition Fe4.5Ni4.5S8 was synthesized via high temperature synthesis from the elements. The structure and ...

Optimizing the Genetic Incorporation of Chemical Probes into GPCRs for Photo-crosslinking Mapping and Bioorthogonal Chemistry in Live Mammalian Cells

The genetic incorporation of non-canonical amino acids (ncAAs) via amber stop codon suppression is a powerful technique to install artificial probes and reactive moieties onto proteins directly in the live cell. Each ncAA is incorporated by a dedicated orthogonal suppressor-tRNA/amino-acyl-tRNA-synthetase (AARS) pair that is imported into the host organism. The incorporation efficiency of different ncAAs can greatly differ, and be unsatisfactory in some cases. Orthogonal pairs can be improved by manipulating either the AARS or the tRNA. However, directed evolution of tRNA or AARS using large libraries and dead/alive selection methods are not feasible in mammalian cells. Here, a facile and robust fluorescence-based assay to evaluate the efficiency of orthogonal pairs in mammalian cells is presented. The assay allows screening tens to hundreds of AARS/tRNA variants with a moderate effort and within a reasonable time. Use of this assay to generate new tRNAs that significantly improve the efficiency of the pyrrolysine orthogonal system is described, along with the application of ncAAs to the study of G-protein coupled receptors (GPCRs), which are challenging objects for ncAA mutagenesis. First, by systematically incorporating a photo-crosslinking ncAA throughout the extracellular surface of a receptor, binding sites of different ligands on the intact receptor are mapped directly in the live cell. Second, by incorporating last-generation ncAAs into a GPCR, ultrafast catalyst-free receptor labeling with a fluorescent dye is demonstrated, which exploits bioorthogonal strain-promoted inverse Diels Alder cycloaddition (SPIEDAC) on the live cell. As ncAAs can be generally applied to any protein independently on its size, the method is of general interest for a number of applications. In addition, ncAA incorporation does not require any special equipment and is easily performed in standard biochemistry labs.

A facile fluorescence assay is presented to evaluate the efficiency of amino-acyl-tRNA-synthetase/tRNA pairs incorporating non-canonical amino-acids (ncAAs) into proteins expressed in mammalian cells. The application of ncAAs to study G-protein coupled receptors (GPCRs) is described, including photo-crosslinking mapping of binding sites and bioorthogonal GPCR labeling on live cells.

تحسين إدماج الجينية الكيميائية تحقيقات في جبكرس لرسم خرائط الصور-crosslinking والكيمياء بيورثوجونال في خلايا الثدييات الحية

The genetic incorporation of non-canonical amino acids (ncAAs) via amber stop codon suppression is a powerful technique to install artificial probes and ...

Preparation and Characterization of C60/Graphene Hybrid Nanostructures

Physical thermal deposition in a high vacuum environment is a clean and controllable method for fabricating novel molecular nanostructures on graphene. We present methods for depositing and passively manipulating C60 molecules on rippled graphene that advance the pursuit of realizing applications involving 1D C60/graphene hybrid structures. The techniques applied in this exposition are geared towards high vacuum systems with preparation areas capable of supporting molecular deposition as well as thermal annealing of the samples. We focus on C60 deposition at low pressure using a homemade Knudsen cell connected to a scanning tunneling microscopy (STM) system. The number of molecules deposited is regulated by controlling the temperature of the Knudsen cell and the deposition time. One-dimensional (1D) C60 chain structures with widths of two to three molecules can be prepared via tuning of the experimental conditions. The surface mobility of the C60 molecules increases with annealing temperature allowing them to move within the periodic potential of the rippled graphene. Using this mechanism, it is possible to control the transition of 1D C60 chain structures to a hexagonal close packed quasi-1D stripe structure.

Preparation and Characterization of C60/Graphene Hybrid Nanostructures

Here we present a protocol for the fabrication of C60/graphene hybrid nanostructures by physical thermal evaporation. Particularly, the proper manipulation of deposition and annealing conditions allow the control over the creation of 1D and quasi 1D C60 structures on rippled graphene.

إعداد وتوصيف ج60/Graphene الهجين النانو

Physical thermal deposition in a high vacuum environment is a clean and controllable method for fabricating novel molecular nanostructures on graphene. We ...

Preparation of Stable Bicyclic Aziridinium Ions and Their Ring-Opening for the Synthesis of Azaheterocycles

Bicyclic aziridinium ions were generated by the removal of an appropriate leaving group through internal nucleophilic attack by nitrogen atom in the aziridine ring. The utility of bicyclic aziridinium ions, specifically 1-azoniabicyclo[3.1.0]hexane and 1-azoniabicyclo[4.1.0]heptane tosylate highlighted in the aziridine ring openings by the nucleophile with the release of the ring strain to yield the corresponding ring-expanded azaheterocycles such as pyrrolidine, piperidine and azepane with diverse substituents on the ring in regio- and stereospecific manner. Herein, we report a simple and convenient method for the preparation of the stable 1-azabicyclo[4.1.0]heptane tosylate followed by selective ring opening via a nucleophilic attack either at the bridge or at the bridgehead carbon to yield piperidine and azepane rings, respectively. This synthetic strategy allowed us to prepare biologically active natural products containing piperidine and azepane motif including sedamine, allosedamine, fagomine and balanol in highly efficient manner.

Bicyclic aziridinium ions such as 1-azoniabicyclo[4.1.0]heptane tosylate were generated from 2-[4-tolenesulfonyloxybutyl]aziridine, which was utilized for the preparation of substituted piperidines and azepanes via regio- and stereospecific ring-expansion with various nucleophiles. This highly efficient protocol allowed us to prepare diverse azaheterocycles including natural products such as fagomine, febrifugine analogue and balanol.

إعداد أيونات أزيريدينيوم تربين مستقرة وعلى فتح الحلقة لتوليف أزاهيتيروسيكليس

Bicyclic aziridinium ions were generated by the removal of an appropriate leaving group through internal nucleophilic attack by nitrogen atom in the ...

Preparation of Functional Silica Using a Bioinspired Method

The goal of the protocols described herein is to synthesize bioinspired silica materials, perform enzyme encapsulation therein, and partially or totally purify the same by acid elution. By combining sodium silicate with a polyfunctional bioinspired additive, silica is rapidly formed at ambient conditions upon neutralization. 
The effect of neutralization rate and biomolecule addition point on silica yield are investigated, and biomolecule immobilization efficiency is reported for varying addition point. In contrast to other porous silica synthesis methods, it is shown that the mild conditions required for bioinspired silica synthesis are fully compatible with the encapsulation of delicate biomolecules. Additionally, mild conditions are used across all synthesis and modification steps, making bioinspired silica a promising target for the scale-up and commercialization as both a bare material and active support medium.
The synthesis is shown to be highly sensitive to conditions, i.e., the neutralization rate and final synthesis pH, however tight control over these parameters is demonstrated through the use of auto titration methods, leading to high reproducibility in reaction progression pathway and yield. 
Therefore, bioinspired silica is an excellent active material support choice, showing versatility towards many current applications, not limited to those demonstrated here, and potency in future applications.

Here, we present a protocol to synthesize bioinspired silica materials and immobilize enzymes therein. Silica is synthesized by combining sodium silicate and an amine &#39;additive&#39;, which neutralize at a controlled rate. Material properties and function can be altered either by in situ enzyme immobilization or post-synthetic acid elution of encapsulated additives.

إعداد والسليكا الوظيفية باستخدام أسلوب بيوينسبيريد

The goal of the protocols described herein is to synthesize bioinspired silica materials, perform enzyme encapsulation therein, and partially or totally ...

Genetic Encoding of a Non-Canonical Amino Acid for the Generation of Antibody-Drug Conjugates Through a Fast Bioorthogonal Reaction

Antibody-drug conjugates (ADCs) used nowadays in clinical practice are mixtures of antibody molecules linked to a varying number of toxins at different positions. Preclinical studies have shown that the therapeutic index of these traditional ADCs can be improved by the site-specific linkage of toxins. However, current approaches to produce homogeneous ADCs have several limitations, such as low protein expression and slow reaction kinetics. In this protocol we describe how to set up an expression system to incorporate a cyclopropene derivative of lysine (CypK) into antibodies using genetic code expansion. This minimal bioorthogonal handle allows rapid conjugation of tetrazine derivatives through an inverse-demand Diels-Alder cycloaddition. The expression system here reported enables the facile production and purification of trastuzumab bearing CypK in each of the heavy chains. We explain how to link the antibody to the toxin monomethyl auristatin E and characterize the immunoconjugate by hydrophobic interaction chromatography and mass spectrometry. Finally, we describe assays to assess the stability in human serum of the dihydropyridazine linkage resulting from the conjugation and to test the selective cytotoxicity of the ADC for breast cancer cells with high levels of HER2 receptor.

Incorporating a cyclopropene derivative of lysine into antibodies allows the site-specific, rapid and efficient linkage of tetrazine-bearing molecules to generate antibody-drug conjugates.

ترميز الوراثية الأحماض الأمينية غير المقبول لتوليد الأجسام المضادة-المخدرات يرتبط من خلال رد فعل سريع بيورثوجونال

Antibody-drug conjugates (ADCs) used nowadays in clinical practice are mixtures of antibody molecules linked to a varying number of toxins at different ...