We are grateful to anonymous reviewers for comments and suggestions that greatly improved this manuscript. We thank R. Bowes, R. Carreno, and T. Panhuis for assistance in collecting the fish. We also thank M. Lee for assistance with male preference trials. We are grateful to the Ohio Wesleyan University Department of Zoology for helpful advice and suggestions throughout this study and Arizona State University (McGraw Lab) for software advice.

すべての実験は、オハイオウェスリアン大学の施設内動物管理使用委員会の承認を得て行きました。 分光光度計を使用して、魚の1.録音UV反射率<ol><li>楽器やソフトウェアの推奨に従って測定する波長範囲にわたって知られている標準的な白と分光光度計と光源を調整します。 </li><li>魚が応答しなくなるまで、炭酸水素ナトリウムの同量で緩衝3-アミノ安息香酸エチルメタンスルホン酸塩（MS-222）の0.5％溶液中に置くことによって、魚を麻酔。無応答たら、すぐに黒、無反射背景に魚を置きます。注：MS-222は、潜在的に毒性であり、そして手袋を常に着用します。 </li><li>分光計光源のそれを超えた過剰な光を最小限にするために暗い部屋でのすべての測定値を取ります。 </li><li>生物体に対して保持光ファイバプローブを用いて反射率を測定します。作りますいくつかのプローブの設計に組み込まれているように、光ファイバと本体との間の一貫性のある45°の角度を形成するようにしてください。注：測定の一貫性のためには、複数のスキャン（2 - 5）を横切って平均することが望ましいボディ領域当り。 </li><li>適切な反射率解析ソフトウェアとレコード反射率データ。注：ここで使用されるソフトウェアは次のように設定した= 2000秒、平均スキャン= 2積分時間、及び画素平滑= 5.データをスプレッドシートにコピー＆ペーストしました。 </li><li> UV反射率および生物横切って表現型の変化の範囲の有無を判断するために複数の身体領域に繰り返します。注：予備スキャンがあれば、ボディ領域は常にUVマークを表示する、決定することが必要であり得ます。 </li><li>完全に回復するまで、通常の蓋のビートと遊泳行動によって証明されるように、十分に酸素保持水槽に魚を返します。注：体に粘膜コーティングを復元するための商業的保護は、皮膚の回復を助けるために添加されてもよいです。 </li><li>代表必要であれば男女両方を含む、複数の個人渡って食べます。 </li><li>すべてのデータがX軸上のY軸と波長での反射率で、散布図を使用して、プロットデータコピーされたスプレッドシートに。 UV範囲における振幅のピーク（300から400 nm）は、魚へのUV反射率の存在を示します。 </li></ol> 2.二値交配トライアル注：焦点魚、UVフィルター、および不透明フィルタが適切に配置された制御観測を実行します。不透明なフィルタが削除され、これらの試験では、焦点魚がUV光の有無を表示するが、潜在的な交配パートナーを欠くタンクの部分にさらされます。この実験で二分選択テストの妥当性に関する詳細に関しては、これらのテストもあることに注意してくださいが、パーマーとHankison（2015）10は 、11の欠点。 <ol><li>焦点生物と性的受容個体を使用してください。女性P.を使用latipinna &lt;48時間産後5 AND男性は性的動機の可能性を向上させるために、試験前に少なくとも24時間、単離されました。 </li><li> 2選択肢の区画に隣接して中立領域に単焦点個人を置きます。 P.のための2つの等しいサイズの選択区画によって隣接焦点個々のための中央領域を形成し、透明なプレキシガラスパーティションによって3つのセクションに分かれ、latipinna、75.7 L試験水槽（ 図1 30.5センチメートルのx 30.5センチメートル×75センチ）を使用します。全く水や嗅覚は、個々のタンクのセクション間で共有されていないことを確認してください。各個人が観察されるのを繰り返します。 </li></ol><img alt="図1" src="/files/ftp_upload/54453/54453fig1.jpg" /> 図1.実験水族館のセットアップ 3つのセクションに分かれた矩形水族館：。（図は、両端のオブジェクトの男性と途中で女性を示している）オブジェクトのペアを開催焦点個人と二つの端区画を開催中央エリア。交換可能なフィルいずれかのブロックまたは許可紫外線反射率が水族館の男性と女性のセクションを分割ガラスパーティション上に配置することができメータ。この図は、パーマーとHankison（2015）10から変更されている。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54453/54453fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <ol start="3"><li> （そのスペクトルUV-A領域内に延びている照明）フルスペクトル照明条件の下では、試験水槽の両端コンパートメント（選択肢の区画）内の1つの潜在的な交配パートナーを分離します。 2つの絶縁交配パートナーとの主な違いは、彼らは、UV光を透過するブロックまたはフィルタの背後に表示されるかどうかであるように、潜在的な交配パートナーは、サイズ、配色や表示特性にできるだけ密接にお互いに似ていることを確認してください。 注：アル可能な限り最高のカラーマッチングを可能にするために、可視スペクトル内の反射率を記録することが好ましい場合がありますここにかかわらず、マッチングは、目によって行われました。 </li><li> 15分間の視覚的分離の下で個人（不透明なフィルタ）を順応させます。フィルタ現時点では整備されている - UV +とがあることを確認してください。順化後、不透明なフィルタを削除します。各それぞれの試験のためにタンクの側面-その側バイアスが（関係なく、オブジェクトのタンクの一方の側のための固有の好み）が存在しないことを確認するには、ランダムにUV +とUVを割り当てます。 </li><li>焦点個人がストップウォッチを使って、特定の環境ゾーン（この場合の選択肢のコンパートメントに近い領域、約2標準ボディの長さ）内に費やす時間の量を記録します。女性の魚の場合、これは、2つの雄の各々の近くに費やす時間の量、および男性焦点魚その逆です。 注：イベントレコーダーソフトウェアは、記録のために使用することができます。 15分の試験は応答しないように少なくとも一回の結果から除外された各優先ゾーンを訪問していなかったこの実験や魚に使用しました。 </li><li>魚の交配の選択に影響を与える可能性がある特定の照明環境に向けて、固有のバイアスが存在しないことを確実にするためのコンパートメント-魚が空のUV +とUVの近くに費やした時間を記録し、分析します。個人が特定のUV条件を好むかどうかを判断するために対応のあるt検定を使用してください。 </li></ol>

<ol>
	<li>Endler, J. A., Zaret, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+and+sexual+selection+on+color+patterns+in+poeciliid+fishes.">Natural and sexual selection on color patterns in poeciliid fishes.</a> Evolutionary ecology of neotropical freshwater fishes. , 95-111 (1984).</li><li>Cummings, M. E., Rosenthal, G. G., Ryan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+private+ultraviolet+channel+in+visual+communication.">A private ultraviolet channel in visual communication.</a> Proc. R. Soc. Lond. [Biol]. 270 (1518), 897-904 (2003).</li><li>Siebeck, U. E., Parker, A. N., Sprenger, D., M&#228;thger, L. 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B., Travis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mate+Choice+in+the+Sailfin+Molly,+Poecilia+latipinna.">Mate Choice in the Sailfin Molly, Poecilia latipinna.</a> Evolution. 51 (4), 1217-1231 (1997).</li><li>Ptacek, M., Grier, H. J., Uribe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating+signal+divergence,+sexual+selection+and+species+recognition+in+mollies+(Poeciliidae:+Poecilia:+Mollienesia).">Mating signal divergence, sexual selection and species recognition in mollies (Poeciliidae: Poecilia: Mollienesia).</a> Proceedings from the Second International Symposium on Livebearing Fishes. , 71-87 (2005).</li><li>MacLaren, R. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+female+mating+preferences.">Measuring female mating preferences.</a> Anim. Behav. 55 (4), 1029-1042 (1998).</li><li>R&#233;my, A., Gr&#233;goire, A., Perret, P., Doutrelant, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediating+male-male+interactions:+the+role+of+the+UV+blue+crest+coloration+in+blue+tits.">Mediating male-male interactions: the role of the UV blue crest coloration in blue tits.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 64 (11), 1839-1847 (2010).</li><li>Guillermo-Ferreira, R., Ther&#233;zio, E. M., Gehlen, M. H., Bispo, P. C., Marletta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Wing+Pigmentation,+UV+and+Fluorescence+as+Signals+in+a+Neotropical+Damselfly.">The Role of Wing Pigmentation, UV and Fluorescence as Signals in a Neotropical Damselfly.</a> J. Insect Behav. 27 (1), 67-80 (2013).</li><li>Ord, T. J., Stamps, J. A., Losos, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convergent+evolution+in+the+territorial+communication+of+a+classic+adaptive+radiation:+Caribbean+Anolis+lizards.">Convergent evolution in the territorial communication of a classic adaptive radiation: Caribbean Anolis lizards.</a> Anim. Behav. 85 (6), 1415-1426 (2013).</li><li>Siebeck, U. 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M., Li, J., Li, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+UV-reflecting+markings+on+female+mate-choice+decisions+in+Cosmophasis+umbratica,+a+jumping+spider+from+Singapore.">Effect of UV-reflecting markings on female mate-choice decisions in Cosmophasis umbratica, a jumping spider from Singapore.</a> Behav. Ecol. 19, 61-66 (2008).</li><li>Rick, I. P., Bakker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Color+signaling+in+conspicuous+red+sticklebacks:+do+ultraviolet+signals+surpass+others?.">Color signaling in conspicuous red sticklebacks: do ultraviolet signals surpass others?.</a> BMC Evol. Biol. 8, 189 (2008).</li><li>Siebeck, U. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Communication+in+coral+reef+fish:+the+role+of+ultraviolet+colour+patterns+in+damselfish+territorial+behaviour.">Communication in coral reef fish: the role of ultraviolet colour patterns in damselfish territorial behaviour.</a> Anim. Behav. 68 (2), 273-282 (2004).</li><li>Cummings, M. E., De Le&#242;n, F. J. G., Mollaghan, D. M., Ryan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+UV+ornamentation+an+amplifier+in+swordtails?.">Is UV ornamentation an amplifier in swordtails?.</a> Zebrafish. 3, 91-100 (2006).</li><li>Mac&#236;as Garcia, c., de Perera, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet-based+female+preferences+in+a+viviparous+fish.">Ultraviolet-based female preferences in a viviparous fish.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 52 (1), 1-6 (2002).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

分光光度計は、PにUVマーキングを同定することに成功しましたlatipinna。 P.の男女ともlatipinnaはその辺に沿ってUVマーキングを有します。また、いくつかの男性は、彼らの背びれにあらかじめ雌嵌合優先7において重要であることが見出さ形質をUVマーキングを有していました。 私たちは、UVマーキングの存在を検出するためのメカニズムとして、UV分光光度計を使用することをお勧めします。さらなる試験は、相手の嗜好（ここでは詳述）を含む社会的相互作用、におけるその役割を決定することができます。また、UV特性は浅水、個人、性別、または種の認識、またはintrasexual相互作用3、12月15日に影響を与える可能性があります。 より自分の社会的行動に特に関連する生物のUV特性を理解する上で、分光光度法の有用性にもかかわらず、B、できることには完全に行動を理解するために必要ないくつかの重要なステップ、およびいくつかの制限がありますeは結論付けました。特に生物が観察「明るさ」や輝度の変化を引き起こす可能性があり、UVを遮断するように、隣接する選択肢タンク内の無テスト個人とコントロールを含めることによって環境-すべての実験は、焦点個人がUV +またはUVための好みを持っているかどうかをテストする必要があります。輝度は密接Pに関連した種の女性の好みに影響を与えることが示されていないが明るさや好みテストの役割を詳細にlatipinna 16-18追加データは、以前の研究19で対処し、輝度の変化に基づいていないこと好みを確保する上で重要なステップである可能性があります。代替的に、照明フラックス（単位時間当たりの全体の輝度）の違いは、これが懸念2,20であるシステムにおける照明条件の一層の制御を可能に等しくすることができます。 また、配偶者選択のテストのために、選択肢の個人がにできるだけ密接に一致させる必要がありますサイズや着色（魅力別名）ので、その選択はより強く、UV +または紫外線に対する選好を反映しています- 。単一の個体は、UV +及びUVの両方で見ることを可能にする代替技術は、 -いくつかの生物21のために有用であり得ます。 （ -同時に条件同じ個体は、UV +と紫外線下で観察されるように）これらの研究は、個人の行動の違いの制御を可能にすることができます。我々は我々の実験デザインで私たちの魚間の動作の違いを見ていないが、この点は、他の生物や実験的なデザインのために重要であり得ます。また、個々のテストを介してUVフィルター2、またはそのスイッチフィルタ途中の側面を切り替えながら、個々の女性を再テストした研究は、個々の側バイアスを制御するための両方に有用であろう。最後に、分光光度法と相手の嗜好試験は生物の表現型のこれらの側面を明らかにすることができますが、ここでプロトコルが行いますエスは、完全に紫外線特性と彼らが焦点個人に明らかにすることができるの意味を決定する能力を持っていません。 UV形質を開発、相続、（そのような食品や捕食者の予測可能性など）環境条件、またはその他の要因によって影響されるかを理解するためのフィットネスの試験では、さらにUV特性の意味や役割を理解する上で有用であろう。

手がかりと動物の社会的相互作用に使用される信号を理解することは、私たちは内および種間の両方の表現型の変化を把握することができます。この変化は、人口の発散性選択、および分化のような進化の過程において重要な役割を果たしています。多くの場合、しかし、研究者たちは、人間の感覚系、視覚や聴覚のレルム内の特にへの最も明白な手がかりを模索に限定されています。分光光度計の使用は、しかし、私たちは人間の可視スペクトルを越えて他の種における社会的相互作用に重要である可能性が波長に我々の調査を拡張することができます。 具体的には、紫外線によってもたらされる近距離通信（UV; 300から400 nm）の感度は、配偶者選択1の間に非常に有利になる可能性があります。鳥や魚の多くは視覚的に狩り捕食者は、例えば、紫外線放射を検出することができません。男性は精巧に表示するシステムでUVスペクトルを利用するのではなく、可視スペクトル2,3で検出可能な手がかりを開発することによって、仲間を誘致する能力を維持しながら、一つは生物はそれぞれと通信している可能性を検討するために失敗した場合、女性のために、これらの男性は..捕食のリスクを減少させるであろう他のこれらの「プライベート通信チャネル」を使用して、行動と進化の重要なドライバーを見逃す可能性があります。 このプロトコルはのSailFinモリー、Poecilia latipinna、全く以前にUVを検出またはUVマーキングを利用する能力を知らなかった一夫多妻魚類の配偶者選択のためのUVキューの使用調査を概説します。この魚種の他のUV感受性ライブベアリング魚に近い系統発生的近接4を有しており、そのP.顕微証拠がありますこのようなP.などの他のモリーの種と一緒にlatipinna、 メキシカーナとP.フォルモサ 、共同の責任コーン（光受容細胞のクラスを持っていますUV波長5に対して最も敏感であるLORビジョン）。この性的二型種では、女性の選択肢は男性&#39;明るく着色された拡大フィン6-9の進化において大きな役割を果たしてきました。この方法論は、私たちは、UVは女性が男性の品質を評価することによって、追加の媒体があるかどうかを探索することができます。 P.のUVマークの検出及び測定latipinna光ファイバープローブを分光光度計を使用して、ここに詳述されています。さらに、受容女性モリーズは差動、UV-Aを含むフルスペクトルの光を透過する光学フィルタを通して見た男性に関連付けるかどうか（[UV +]; 320から700ナノメートル）と紫外線遮断フィルターを通して見た男性（[紫外線]; 400 - 700 nm）が議論されています。この方法は、UVと行動におけるその役割に関わるさまざまな質問への研究を可能にすること、魚や他の生物にUV感度と色のパターンを発見するための広範なアプリケーションを持っています。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1044">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Spectrophotometer, P1000</td>
			<td style="width:217px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:351px;">newer models are availabe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">DT 1000 xenon UV light source</td>
			<td style="width:217px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>newer models are availabe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ocean Optics Overture Software</td>
			<td style="width:217px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>newer software is available</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">R200-Angle-UV bifurcated fiber-optic probe (Guided Wave)</td>
			<td style="width:217px;">Ocean Optics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>newer models are availabe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Certified reflectance standard, white</td>
			<td style="width:217px;">labsphere</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">75.7 L Aquarium, divided</td>
			<td style="width:217px;">Experimental Builder</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">Full Spectrum Bulb</td>
			<td style="width:217px;">Nature&#39;s Sunlight</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:357px;">UV blocking sheet</td>
			<td style="width:217px;">GAM UV Sheet</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assays to detect uv-reflecting structures and determine their importance in mate preference using the sailfin molly poecilia latipinna

多くの生物は、社会的相互作用の間に人間の感性を越え手がかりと信号を使用します。彼らの行動や生態を理解しようとしたときの生物は自分の世界を知覚する方法を考慮することが重要です。紫外スペクトル（UV; 300から400ナノメートル）への感度は、鳥類、魚類、爬虫類、両生類、さらに哺乳類の複数の属全体で発見されました。このプロトコルは、UV反射構造の存在と、これらの手がかりは、仲間の選択のコンテキスト内での社会的信号として使用されているかどうかを試験するための方法のための生物を検査するための技術が記載されています。分光光度計は、個人や男女間の反射強度の紫外線の反射率変動の存在を検出するために使用されます。この技術の例は、二分の配偶者選択のテストは、視覚的な外観フルスペクトルやブロックUV波長を透過いずれかのフィルタによって操作することができる異性の個人への性的受容個人を露出するに提示されています。このこのシステムは、女性が、男性ではないのSailFinモリーズ（Poecilia latipinna）は、その相手方の決定の一部としてUVマーキングを使用していた決意を可能にしました。研究のこれらのタイプは、UVを利用する生物の範囲の知識を拡大し、紫外線が生活の中で役割を果たしているかについての洞察を提供するのに役立ちます。

<html> 図1と図 2は、設定交配選好水族館、我々の実験のためのUV測定部位を示します。 P.決意に許さ測定紫外線反射率latipinnaは、これらの特性には個人差に加えて、特に自分の体（ 図3）の側面に沿って、UV特性を有しております。 UV形質が発見された後、テストはその女性ではなく男性、P.を明らかにしましたその交配決定にこれらの特性を使用しlatipinna（女性：15トン = 4.08、P = 0.001;男性：トン14 = 0.67、P = 0.517; 図4）。男女ともは、UV特性を有しているが、特性がメイトの好みの一環として、女性のみで使用されていることは、P。で、このような浅水や採餌などの他の社会的相互作用におけるこれらの形質の役割を示すことができることlatipinna。 1 &quot;&gt;：&quot; =キープtogether.within-ページFO」ontent <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/54453/54453fig2.jpg" /> UV反射率を測定したPoeciliaのlatipinna上図2.場所が。領域は、最初は全体のほぼすべてのボディ領域から採取された反射サンプルを用いた予備反射率試験から決定しました。 1から3、DF（背びれ）とCF（尾びれ）、図3に示したボディ領域を参照してください。この図はパーマーとHankison（2015）10から変更されている。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54453/54453fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/54453/54453fig3.jpg" /> 図3.男性の平均スペクトルと女性Poeciliaはlatipinna。グラフは、平均秒を表示しますpectral反射率が5箇所（サイドエリア、尾びれ、背びれ）SEで測定しました。ボックス内の領域は、UVスペクトルにおける反射率を表しています。この図は、パーマーとHankison（2015）10から変更されている。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54453/54453fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/54453/54453fig4.jpg" /> 男性と女性の図4.平均准タイムズ。グラフは、女性と男性は対照及び実験試験中のUV +と紫外線フィルターを通して見た男性の区画の近くに費やした平均時間SEを示します。この図は、パーマーとHankison（2015）10から変更されている。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54453/54453fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

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Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

このプロトコルは、（この例では、のSailFinモリーPoecilia latipinna）生物に紫外線反射構造を検出するための分光光度計の使用を概説し、推論が配偶者選択中の紫外線手がかりの役割に行うことを可能にする魚用の二分の選択テストを説明しています。

UV反射構造を検出してのSailFinモリーを使用して、メイト優先でその重要性を決定するためのアッセイ<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

assays-to-detect-uv-reflecting-structures-determine-their-importance

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

6.5K ビュー.  Ohio Wesleyan University. このプロトコルは、（この例では、のSailFinモリーPoecilia latipinna）生物に紫外線反射構造を検出するための分光光度計の使用を概説し、推論が配偶者選択中の紫外線手がかりの役割に行うことを可能にする魚用の二分の選択テストを説明しています。 

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Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer basic questions on how light information is processed and shared between rapid and circadian behaviors. Drosophila larvae display a stereotypical avoidance behavior when exposed to light. To investigate light dependent behaviors comparably simple light-dark preference tests can be applied. In vertebrates and arthropods the neural pathways involved in sensing and processing visual inputs partially overlap with those processing photic circadian information. The fascinating question of how the light sensing system and the circadian system interact to keep behavioral outputs coordinated remains largely unexplored. Drosophila is an impacting biological model to approach these questions, due to a small number of neurons in the brain and the availability of genetic tools for neuronal manipulation. The presented light-dark preference assay allows the investigation of a range of visual behaviors including circadian control of phototaxis.

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Here we describe a light-dark preference test for Drosophila larva. This assay provides information about innate and circadian regulation of light sensing and processing photobehavior.

に自然免疫とサーカディアン規制Photobehaviorを勉強する光プアッセイ<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;幼虫

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer ...

神経科学

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of the dendritic tree, which eventually leads to neuronal output of action potentials at the axon. The influence of diverse spatial and temporal parameters of specific synaptic input on neuronal output is currently under investigation, e.g. the distance-dependent attenuation of dendritic inputs, the location-dependent interaction of spatially segregated inputs, the influence of GABAergig inhibition on excitatory integration, linear and non-linear integration modes, and many more.
With fast micro-iontophoresis of glutamate and GABA it is possible to precisely investigate the spatial and temporal integration of glutamatergic excitation and GABAergic inhibition. Critical technical requirements are either a triggered fluorescent lamp, light-emitting diode (LED), or a two-photon scanning microscope to visualize dendritic branches without introducing significant photo-damage of the tissue. Furthermore, it is very important to have a micro-iontophoresis amplifier that allows for fast capacitance compensation of high resistance pipettes. Another crucial point is that no transmitter is involuntarily released by the pipette during the experiment.
Once established, this technique will give reliable and reproducible signals with a high neurotransmitter and location specificity. Compared to glutamate and GABA uncaging, fast iontophoresis allows using both transmitters at the same time but at very distant locations without limitation to the field of view. There are also advantages compared to focal electrical stimulation of axons: with micro-iontophoresis the location of the input site is definitely known and it is sure that only the neurotransmitter of interest is released. However it has to be considered that with micro-iontophoresis only the postsynapse is activated and presynaptic aspects of neurotransmitter release are not resolved. In this article we demonstrate how to set up micro-iontophoresis in brain slice experiments.

In this article we introduce fast micro-iontophoresis of neurotransmitters as a technique to investigate integration of postsynaptic signals with high spatial and temporal precision.

グルタミン酸とGABAの高速マイクロイオン導入：シナプス統合を調査するために便利なツール

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Isolation and Quantification of Botulinum Neurotoxin From Complex Matrices Using the BoTest Matrix Assays

Accurate detection and quantification of botulinum neurotoxin (BoNT) in complex matrices is required for pharmaceutical, environmental, and food sample testing. Rapid BoNT testing of foodstuffs is needed during outbreak forensics, patient diagnosis, and food safety testing while accurate potency testing is required for BoNT-based drug product manufacturing and patient safety. The widely used mouse bioassay for BoNT testing is highly sensitive but lacks the precision and throughput needed for rapid and routine BoNT testing. Furthermore, the bioassay&#39;s use of animals has resulted in calls by drug product regulatory authorities and animal-rights proponents in the US and abroad to replace the mouse bioassay for BoNT testing. Several in vitro replacement assays have been developed that work well with purified BoNT in simple buffers, but most have not been shown to be applicable to testing in highly complex matrices. Here, a protocol for the detection of BoNT in complex matrices using the BoTest Matrix assays is presented. The assay consists of three parts: The first part involves preparation of the samples for testing, the second part is an immunoprecipitation step using anti-BoNT antibody-coated paramagnetic beads to purify BoNT from the matrix, and the third part quantifies the isolated BoNT&#39;s proteolytic activity using a fluorogenic reporter. The protocol is written for high throughput testing in 96-well plates using both liquid and solid matrices and requires about 2 hr of manual preparation with total assay times of 4-26 hr depending on the sample type, toxin load, and desired sensitivity. Data are presented for BoNT/A testing with phosphate-buffered saline, a drug product, culture supernatant, 2% milk, and fresh tomatoes and includes discussion of critical parameters for assay success.

The BoTest Matrix botulinum neurotoxin (BoNT) detection assays rapidly purify and quantify BoNT from a range of sample matrices.&#160;Here, we present a protocol for the detection and quantification of BoNT from both solid and liquid matrices and demonstrate the assay with BOTOX, tomatoes, and milk.

BoTestマトリックスアッセイを使用して複雑なマトリックスからの単離およびボツリヌス神経毒素の定量化

Accurate detection and quantification of botulinum neurotoxin (BoNT) in complex matrices is required for pharmaceutical, environmental, and food sample ...

Use of a Caspase Multiplexing Assay to Determine Apoptosis in a Hypothalamic Cell Model

The ability to multiplex assays in studies of complex cellular mechanisms eliminates the need for repetitive experiments, provides internal controls, and decreases waste in costs and reagents. Here we describe optimization of a multiplex assay to assess apoptosis following a palmitic acid (PA) challenge in an in vitro hypothalamic model, using both fluorescent and luminescent based assays to measure viable cell counts and caspase-3/7 activity in a 96-well microtiter plate format. Following PA challenge, viable cells were determined by a resazurin-based fluorescent assay. Caspase-3/7 activity was then determined using a luminogenic substrate, DEVD, and normalized to cell number. This multiplexing assay is a useful technique for determining change in caspase activity following an apoptotic stimulus, such as saturated fatty acid challenge. The saturated fatty acid PA can increase hypothalamic oxidative stress and apoptosis, indicating the potential importance of assays such as that described here in studying the relationship between saturated fatty acids and neuronal function.

Multiplex assays can provide beneficial information for basic cellular mechanisms&#160;and eliminate waste of reagents and unnecessary repetitive experiments. We describe here a multiplex caspase-3/7 activity assay, using fluorescent- and luminescent-based methods, to determine cell viability in an in vitro hypothalamic model following oxidative challenge with palmitic acid.

視床下部細胞モデルでアポトーシスを決定するために、カスパーゼの多重化アッセイの使用

The ability to multiplex assays in studies of complex cellular mechanisms eliminates the need for repetitive experiments, provides internal controls, and ...

Investigating the Function of Deep Cortical and Subcortical Structures Using Stereotactic Electroencephalography: Lessons from the Anterior Cingulate Cortex

Stereotactic Electroencephalography (SEEG) is a technique used to localize seizure foci in patients with medically intractable epilepsy. This procedure involves the chronic placement of multiple depth electrodes into regions of the brain typically inaccessible via subdural grid electrode placement. SEEG thus provides a unique opportunity to investigate brain function. In this paper we demonstrate how SEEG can be used to investigate the role of the dorsal anterior cingulate cortex (dACC) in cognitive control. We include a description of the SEEG procedure, demonstrating the surgical placement of the electrodes. We describe the components and process required to record local field potential (LFP) data from consenting subjects while they are engaged in a behavioral task. In the example provided, subjects play a cognitive interference task, and we demonstrate how signals are recorded and analyzed from electrodes in the dorsal anterior cingulate cortex, an area intimately involved in decision-making. We conclude with further suggestions of ways in which this method can be used for investigating human cognitive processes.

Stereotactic Electroencephalography (SEEG) is an operative technique used in epilepsy surgery to help localize seizure foci. It also affords a unique opportunity to investigate brain function. Here we describe how SEEG can be used to investigate cognitive processes in human subjects.

定位脳波を使用して、ディープ皮質の機能と下構造の調査：前帯状皮質からの教訓は、

Stereotactic Electroencephalography (SEEG) is a technique used to localize seizure foci in patients with medically intractable epilepsy. This procedure ...

Using Single Sensillum Recording to Detect Olfactory Neuron Responses of Bed Bugs to Semiochemicals

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house single or multiple neurons inside, are considered to make the major contribution in responding to the chemical stimuli. By directly recording action potential in the olfactory sensillum after exposure to stimuli, single sensillum recording (SSR) technique provides a powerful approach for investigating the neural responses of insects to chemical stimuli. For the bed bug, which is a notorious human parasite, multiple types of olfactory sensillum have been characterized. In this study, we demonstrated neural responses of bed bug olfactory sensilla to two chemical stimuli and the dose-dependent responses to one of them using the SSR method. This approach enables researchers to conduct early screening for individual chemical stimuli on the bed bug olfactory sensilla, which would provide valuable information for the development of new bed bug attractants or repellents and benefits the bed bug control efforts.

Bed bugs rely on olfactory receptor neurons housed in their antennal olfactory sensilla to detect semiochemicals in the environment. Utilizing single sensillum recording, we demonstrate a method to evaluate bed bug response to semiochemicals and explore the coding process involved.

情報化学物質にトコジラミの嗅覚ニューロンの応答を検出するために単一感覚子録音を使用しました

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival. The most obvious application of these chemosenses is to be able to distinguish good food sources from potentially dangerous food sources. Gustation requires physical contact with a chemical compound which is able to signal through taste receptors that are expressed on the surface of neurons. In insects, these gustatory neurons can be located across the animal's body allowing taste to play an important role in many different behaviors. Insects typically prefer compounds containing sugars, while compounds that are considered bitter tasting are avoided. Given the basic biological importance of taste, there is intense interest in understanding the molecular mechanisms underlying this sensory modality. We describe an adult Drosophila taste assay which reflects the preference of the animals for a given tastant compound. This assay may be applied to animals of any genetic background to examine the taste preference for a desired soluble compound.

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste is an important sensory process which facilitates attraction to beneficial substances and avoidance of toxic substances. This protocol describes a simple ingestion assay for determining Drosophila gustatory preference for a given chemical compound.

大人のための味の好みアッセイ<em&gt;ショウジョウバエ</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. NSCs and neural progenitors (NPs) are commonly cultured in vitro as neurospheres. This protocol describes in detail how to determine the NSC frequency in a given cell population under clonal conditions. The protocol begins with the seeding of the cells at a density that allows for the generation of clonal neurospheres. The neurospheres are then transferred to chambered coverslips and differentiated under clonal conditions in conditioned medium, which maximizes the differentiation potential of the neurospheres. Finally, the NSC frequency is calculated based on neurosphere formation and multipotency capabilities. Utilities of this protocol include the evaluation of candidate NSC markers, purification of NSCs, and the ability to distinguish NSCs from NPs. This method takes 13 days to perform, which is much shorter than current methods to enumerate NSC frequency.

Neural stem cells (NSCs) refer to cells&#160;which can self-renew and differentiate into the three neural lineages. Here, we describe a protocol to determine NSC frequency in a given cell population using neurosphere formation and differentiation under clonal conditions.

クローンのアッセイを用いて神経幹細胞の列挙

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Microglia as a Surrogate Biosensor to Determine Nanoparticle Neurotoxicity

Nanoparticles found in air pollutants can alter neurotransmitter profiles, increase neuroinflammation, and alter brain function. Therefore, the assay described here will aid in elucidating the role of microglia in neuroinflammation and neurodegenerative diseases. The use of microglia, resident immune cells of the brain, as a surrogate biosensor provides novel insight into how inflammatory responses mediate neuronal insults. Here, we utilize an immortalized murine microglial cell line, designated BV2, and describe a method for nanoparticle exposure using silver nanoparticles (AgNPs) as a standard. We describe how to expose microglia to nanoparticles, how to remove nanoparticles from supernatant, and how to use supernatant from activated microglia to determine toxicity, using hypothalamic cell survival as a measure. Following AgNP exposure, BV2 microglial activation was validated using a tumor necrosis factor alpha (TNF-&#945;) enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The supernatant was filtered to remove the AgNP and to allow cytokines and other secreted factors to remain in the conditioned media. Hypothalamic cells were then exposed to supernatant from AgNP activated microglia and survival of neurons was determined using a resazurin-based fluorescent assay. This technique is useful for utilizing microglia as a surrogate biomarker of neuroinflammation and determining the effect of neuroinflammation on other cell types.

Microglia (immune cells of the brain), are used as a surrogate biosensor to determine how nanoparticles influence neurotoxicity. We describe a series of experiments designed to assay microglial response to nanoparticles and exposure of hypothalamic neurons to supernatant from activated microglia to determine neurotoxicity.

ナノ粒子神経毒性を決定するために、代理バイオセンサーとしてミクログリア

Nanoparticles found in air pollutants can alter neurotransmitter profiles, increase neuroinflammation, and alter brain function. Therefore, the assay ...

Exploring Deep Space - Uncovering the Anatomy of Periventricular Structures to Reveal the Lateral Ventricles of the Human Brain

Anatomy students are typically provided with two-dimensional (2D) sections and images when studying cerebral ventricular anatomy and students find this challenging. Because the ventricles are negative spaces located deep within the brain, the only way to understand their anatomy is by appreciating their boundaries formed by related structures. Looking at a 2D representation of these spaces, in any of the cardinal planes, will not enable visualisation of all of the structures that form the boundaries of the ventricles. Thus, using 2D sections alone requires students to compute their own mental image of the 3D ventricular spaces. The aim of this study was to develop a reproducible method for dissecting the human brain to create an educational resource to enhance student understanding of the intricate relationships between the ventricles and periventricular structures. To achieve this, we created a video resource that features a step-by-step guide using a fiber dissection method to reveal the lateral and third ventricles together with the closely related limbic system and basal ganglia structures. One of the advantages of this method is that it enables delineation of the white matter tracts that are difficult to distinguish using other dissection techniques. This video is accompanied by a written protocol that provides a systematic description of the process to aid in the reproduction of the brain dissection. This package offers a valuable anatomy teaching resource for educators and students alike. By following these instructions educators can create teaching resources and students can be guided to produce their own brain dissection as a hands-on practical activity. We recommend that this video guide be incorporated into neuroanatomy teaching to enhance student understanding of the morphology and clinical relevance of the ventricles.

This paper demonstrates the effective use of a fiber dissection method to reveal the superficial white matter tracts and periventricular structures of the human brain, in three-dimensional space, to aid student comprehension of ventricular morphology.

人間の脳の側脳室を明らかにする脳室周囲構造の解剖学を暴く - 深宇宙の探索

Anatomy students are typically provided with two-dimensional (2D) sections and images when studying cerebral ventricular anatomy and students find this ...