この作品は、DUKE-NUS大学院医学部シンガポール、Manvendra K.シンへゴー基盤とシンガポールNRFの交わり（NRF-NRFF2016-01）からの資金によってサポートされていました。

すべての実験は、デューク-NUS大学院医学部制度動物実験委員会によって承認されました。 1.胚性心室を取得<ol><li>二酸化炭素ガスの供給または他の承認された安楽死の方法で安楽死チャンバーを用いて所望の胚段階（E11.5またはE12.5）で時限妊娠マウスを生け贄に捧げます。 </li><li>解剖台に背の上にマウスを置きます。 70％エタノールで女性の腹部を消毒します。両手で皮膚を保持し、腹壁を露出するように引き離した後、腹の上に皮膚を持ち上げて、刃で小切開（1-2センチ）を作ります。 </li><li>今、子宮角を露出させるために腹壁をカット。子宮角を持ち上げ、慎重に脂肪組織と子宮角に取り付けられた血管を切り取るために滅菌ピンセットを使用してください。子宮を取得するために、子宮頸部で切断。 </li><li>無菌の冷たい1×リン酸バフを含むペトリ皿に子宮角を配置<html> ered生理食塩水（PBS）と優しく洗い流します。氷上のペトリ皿を置きます。 </li><li>卵黄嚢の内部に残っていると、胎盤を通じて子宮壁に取り付けられた胚を露出させるために（胎盤が配置されているサイトとは反対側）の子宮角の正中線を切断するはさみを使用してください。 </li><li>滅菌ピンセットを用いて、胚を解放するために、胚の卵黄嚢を切り​​開い。 </li><li>滅菌冷たい1×PBSを含む新しいペトリ皿に胚を置きます。胚を刎ねると、その背中の上に置きます。心臓を露出するために胸壁を開いてカットします。 </li><li>心を持ち上げ、胸の壁から心を解放するためにその周りに船を離れてカットする滅菌ピンセットを使用してください。手術ツールで心臓の心外膜に損傷を与えないように注意を払ってください。 </li><li>流出路との両方の心房を切り落とします。冷たい1×PBSで別の皿に心室を転送します。氷の上の皿を置きます。 </li><li>繰り返して、すべての心室が検索されるまで、1.6から1.9を繰り返します。 </li></ol>ル &quot;&gt; 2。心外膜外植片培養注意：文化ガラスチャンバースライド上または下流のアプリケーションのためのコラーゲンゲル上のいずれかのこれらの心外膜の外植片。 <ol><li>ガラスチャンバースライド<ol><li> 、培地を調製したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）に10％ウシ胎児血清（FBS）、1％ペニシリン/ストレプトマイシンおよび2 ngの/ mlの組換え線維芽細胞増殖因子2（FGF2）を追加します。層流フード内のすべての手順を実行します。 </li><li> 8ウェルチャンバーの各ウェルに500μlの培地を追加します。 </li><li>ウェルの中央にそれぞれ切除した心室を置きます。東洋ウェルの底面を下に切開面を維持する脳室。 </li><li>穏やかに37℃、5％CO 2細胞培養インキュベーター中でプレートを置きます。 </li><li>外植片が付着することを可能にするために妨害を最小限にして文化を維持します。心外膜の単分子層の形成は、48〜72時間後に観察することができます。 </li><li> epicardの分化のために平滑筋細胞、培養をさらに6日間分化培地における心外膜単層細胞にIAL細胞。分化培地を調製するために、DMEMに10％FBS、1％ペニシリン/ストレプトマイシンおよび50 ngの/ mlの組換え型トランスフォーミング増殖因子β1（TGF-β1）を加えます。 </li><li>日おきに培地を変更します。 </li></ol></li><li>コラーゲンゲル<ol><li>製造業者のプロトコルに従って、商業用3Dコラーゲン培養キットを用いて96ウェルプレート中のコラーゲンゲルを準備します。 </li><li>コラーゲンゲルの所望のボリュームを準備するには、上下DMEMとピペットの5倍とコラーゲン溶液の適量を混ぜます。溶液は黄色に変わります。 </li><li>中和液の対応するボリュームを追加し、ピペッティングにより十分にすぐに混ぜます。解決策は、ピンク色に変わります。 </li><li>ピペット96ウェルプレートの各ウェルにこの混合物の100μlを。アルに30〜60分間、37℃、5％CO 2インキュベーターでプレートを置き低ゲルが重合します。 </li><li>各ウェルに、上記の培養培地を200μlを追加します。 </li><li>ウェルの中央にそれぞれ切除した心室を置きます。オリエントコラーゲンゲル上で解剖側を下に保つために心室（心室の頂点が実験者に直面している必要があります）。そっと背中細胞培養インキュベーターでプレートを置きます。 </li><li> 3日後、心室を削除します。別の2日間、細胞培養インキュベーターにバックプレートを置きます。 </li><li>日おきに培地を変更します。 </li></ol></li></ol> 3.固定と可視化注：心外膜細胞を、ガラスチャンバースライド、またはコラーゲンゲルのいずれかで可視化することができます。 <ol><li>培地アウト吸引し、細胞を洗浄し、滅菌1×等量のPBSを追加します。 </li><li>セルをカバーするだけの十分な4％パラホルムアルデヒド（PFA）を加えます。 4℃で10分間細胞を固定。 </li><li> PFAを削除し、で1×PBST（1×PBSで外植片を洗います細胞を透過するため、0.1％トリトンX-100）。 </li><li>所望の抗体（ 例えば 、アレクサフルオロ488ファロイジン; ZO-1、αチューブリンおよびα平滑筋アクチン）とイムノ7。 </li></ol>

<ol>
	<li>Mikawa, T., Fischman, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retroviral+analysis+of+cardiac+morphogenesis:+discontinuous+formation+of+coronary+vessels.">Retroviral analysis of cardiac morphogenesis: discontinuous formation of coronary vessels.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 9504-9508 (1992).</li><li>Mikawa, T., Gourdie, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericardial+mesoderm+generates+a+population+of+coronary+smooth+muscle+cells+migrating+into+the+heart+along+with+ingrowth+of+the+epicardial+organ.">Pericardial mesoderm generates a population of coronary smooth muscle cells migrating into the heart along with ingrowth of the epicardial organ.</a> Dev Biol. 174, 221-232 (1996).</li><li>Manner, J., Perez-Pomares, J. M., Macias, D., Munoz-Chapuli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin,+formation+and+developmental+significance+of+the+epicardium:+a+review.">The origin, formation and developmental significance of the epicardium: a review.</a> Cells Tissues Organs. 169, 89-103 (2001).</li><li>Gittenberger-de Groot, A. C., Vrancken Peeters, M. P., Mentink, M. M., Gourdie, R. G., Poelmann, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardium-derived+cells+contribute+a+novel+population+to+the+myocardial+wall+and+the+atrioventricular+cushions.">Epicardium-derived cells contribute a novel population to the myocardial wall and the atrioventricular cushions.</a> Circ Res. 82, 1043-1052 (1998).</li><li>von Gise, A., Pu, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocardial+and+epicardial+epithelial+to+mesenchymal+transitions+in+heart+development+and+disease.">Endocardial and epicardial epithelial to mesenchymal transitions in heart development and disease.</a> Circ Res. 110, 1628-1645 (2012).</li><li>Katz, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+compartments+of+the+proepicardial+organ+give+rise+to+coronary+vascular+endothelial+cells.">Distinct compartments of the proepicardial organ give rise to coronary vascular endothelial cells.</a> Dev Cell. 22, 639-650 (2012).</li><li>Singh, M. K., Lu, M. M., Massera, D., Epstein, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-processing+enzyme+Dicer+is+required+in+epicardium+for+coronary+vasculature+development.">MicroRNA-processing enzyme Dicer is required in epicardium for coronary vasculature development.</a> J Biol Chem. 286, 41036-41045 (2011).</li><li>Degenhardt, K., Singh, M. K., Epstein, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+under+development:+cardiovascular+embryology+applied+to+heart+disease.">New approaches under development: cardiovascular embryology applied to heart disease.</a> J Clin Invest. 123, 71-74 (2013).</li><li>Singh, M. K., Epstein, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardium-derived+cardiac+mesenchymal+stem+cells:+expanding+the+outer+limit+of+heart+repair.">Epicardium-derived cardiac mesenchymal stem cells: expanding the outer limit of heart repair.</a> Circ Res. 110, 904-906 (2012).</li><li>Manner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+study+on+the+formation+of+the+epicardium+in+chick+embryos.">Experimental study on the formation of the epicardium in chick embryos.</a> Anat Embryol (Berl). 187, 281-289 (1993).</li><li>Manner, J., Schlueter, J., Brand, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+analyses+of+the+function+of+the+proepicardium+using+a+new+microsurgical+procedure+to+induce+loss-of-proepicardial-function+in+chick+embryos.">Experimental analyses of the function of the proepicardium using a new microsurgical procedure to induce loss-of-proepicardial-function in chick embryos.</a> Dev Dyn. 233, 1454-1463 (2005).</li><li>Pennisi, D. J., Ballard, V. L., Mikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardium+is+required+for+the+full+rate+of+myocyte+proliferation+and+levels+of+expression+of+myocyte+mitogenic+factors+FGF2+and+its+receptor,+FGFR-1,+but+not+for+transmural+myocardial+patterning+in+the+embryonic+chick+heart.">Epicardium is required for the full rate of myocyte proliferation and levels of expression of myocyte mitogenic factors FGF2 and its receptor, FGFR-1, but not for transmural myocardial patterning in the embryonic chick heart.</a> Dev Dyn. 228, 161-172 (2003).</li><li>Gittenberger-de Groot, A. C., Vrancken Peeters, M. P., Bergwerff, M., Mentink, M. M., Poelmann, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+outgrowth+inhibition+leads+to+compensatory+mesothelial+outflow+tract+collar+and+abnormal+cardiac+septation+and+coronary+formation.">Epicardial outgrowth inhibition leads to compensatory mesothelial outflow tract collar and abnormal cardiac septation and coronary formation.</a> Circ Res. 87, 969-971 (2000).</li><li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocardial+and+epicardial+derived+FGF+signals+regulate+myocardial+proliferation+and+differentiation+in+vivo.">Endocardial and epicardial derived FGF signals regulate myocardial proliferation and differentiation in vivo.</a> Dev Cell. 8, 85-95 (2005).</li><li>Merki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+retinoid+X+receptor+alpha+is+required+for+myocardial+growth+and+coronary+artery+formation.">Epicardial retinoid X receptor alpha is required for myocardial growth and coronary artery formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 18455-18460 (2005).</li><li>Stuckmann, I., Evans, S., Lassar, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+and+retinoic+acid,+secreted+from+the+epicardium,+are+required+for+cardiac+myocyte+proliferation.">Erythropoietin and retinoic acid, secreted from the epicardium, are required for cardiac myocyte proliferation.</a> Dev Biol. 255, 334-349 (2003).</li><li>Huang, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C/EBP+transcription+factors+mediate+epicardial+activation+during+heart+development+and+injury.">C/EBP transcription factors mediate epicardial activation during heart development and injury.</a> Science. 338, 1599-1603 (2012).</li><li>Zhou, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mouse+epicardium+modulates+myocardial+injury+by+secreting+paracrine+factors.">Adult mouse epicardium modulates myocardial injury by secreting paracrine factors.</a> J Clin Invest. 121, 1894-1904 (2011).</li><li>Christoffels, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tbx18+and+the+fate+of+epicardial+progenitors.">Tbx18 and the fate of epicardial progenitors.</a> Nature. 458, 8-9 (2009).</li><li>Rudat, C., Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wt1+and+epicardial+fate+mapping.">Wt1 and epicardial fate mapping.</a> Circ Res. 111, 165-169 (2012).</li><li>Duim, S. N., Kurakula, K., Goumans, M. J., Kruithof, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+endothelial+cells+express+Wilms'+tumor-1:+Wt1+expression+in+the+developing,+adult+and+infarcted+heart.">Cardiac endothelial cells express Wilms' tumor-1: Wt1 expression in the developing, adult and infarcted heart.</a> J Mol Cell Cardiol. 81, 127-135 (2015).</li><li>Iyer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+derivation+of+epicardium+and+its+differentiated+smooth+muscle+cell+progeny+from+human+pluripotent+stem+cells.">Robust derivation of epicardium and its differentiated smooth muscle cell progeny from human pluripotent stem cells.</a> Development. 142, 1528-1541 (2015).</li><li>Witty, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+the+epicardial+lineage+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of the epicardial lineage from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 32, 1026-1035 (2014).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

心臓の開発と再生に心外膜の重要性が増しに応えるために心外膜の研究を容易にする技術を開発することが極めて重要です。心外膜培養系は、心外膜の研究のための重要な利点をもたらします。 心外膜細胞を単離する別の方法は、蛍光活性化細胞選別（FACS）を使用することです。この方法は、他の系統から心外膜細胞を分離するための心外膜マーカー（または蛍光タンパク質の心外膜細胞特異的トランスジェニック発現）の使用に依存しています。しかし、証拠の増加量は、心外膜マーカーがもっぱら心外膜に発現されないことを示しました。 WT1は、内皮19-21で発現されている間、例えば、Tbx18は心室中隔（IVS）の心筋で発現されます。したがって、単離された心外膜細胞の集団の純度は疑問です。対照的に、本明細書に記載の培養方法を取ります心外膜細胞の遊走性質のdvantage。私たちの遺伝的標識実験によって示されるように、これは心外膜細胞の高度に純粋な集団の単離を可能にします。心外膜細胞を得るための別の方法は、主に、BMP、Wntおよびレチノイン酸シグナル伝達経路を調節することによって心外膜細胞へのヒト多能性幹細胞（hPSCs）の分化です。これらの分化した細胞は密接に胚性心外膜細胞の物理的および分子的特徴に似ています。彼らはだけでなく、EMTを経験することができますが、また、線維芽細胞や平滑筋細胞22,23に分化することができます。この方法は非常に有望であるが、それはかなり複雑で時間本稿で説明した心外膜の文化よりもかかります。 また、この培養技術は、追加の特別な装置を必要とせず、既存の組織培養設定で十分です。このプロトコルに従いながら、sを払うことが重要です心を取得するときに手術ツールと心外膜に損傷を与えないようにpecial注意。また、心外膜細胞移動を容易にするためにコラーゲンゲルまたはチャンバースライドの表面のいずれかに面する切開面で切り出し心室を配向することが重要です。外植片を培養皿に付着することを可能にするように最後に、文化は最小限の妨害で維持されるべきです。 得られた細胞の集団は、その後、心外膜細胞生物学の理解を促進します下流の種々の実験を行うために使用することができます。チャンバースライド上に外植片を培養することは、心臓系統に心外膜細胞の増殖、生存、移動、EMTおよび分化を含む様々な実験のための心外膜の単層を提供します。それはまた、細胞の心外膜の特性ならびに薬物処置に関連した遺伝子発現の変化に対する薬物の効果を試験するための機会を提供します。また、Cuのコラーゲンゲル上で心外膜をlturingする代わりに、in vivoでの生理学のより正確な図を提供する従来の2Dマトリックス、の3次元マトリックス中の細胞の分析を可能にします。 しかし、この手法の欠点は、この方法は、E11.5-E12.5の間の胚の心臓からの培養心外膜細胞にのみ使用することができるであろう。後で妊娠中または新生児期に心外膜が増殖し、移行する能力を失います。したがって、後胚期または成体マウスから心外膜細胞を単離するために、この培養方法を使用することは困難です。 この制限にもかかわらず、この技術は心外膜と心臓の開発と再生におけるその役割を研究するために非常に有益であろうex vivoで心外膜細胞の成長を促進するために、基本的な培養スキルや設定を使用しています。

実験データの富は、心外膜は、心臓の開発における重要なステップに影響を与えることが示されています。開発中に、横中隔はproepicardium 1-4として知られている中皮細胞の塊を生じさせます。 proepicardiumからの細胞は、次に移動して、心外膜を形成する心筋を包みます。これに続いて、心外膜細胞のサブセットは、その後、心筋に侵入心外膜由来細胞（EPDCs）の遊走集団を生じるEMTを起こします。実験トレース遺伝子、ならびにレトロウイルス系統はEPDCsは、平滑筋細胞、線維芽細胞、内皮細胞および心筋細胞（もしあれば）を含む種々の系統に分化することを実証しました。したがってEPDCsは、冠血管系および心筋アーキテクチャ1,2,4-9の発展に大きく貢献しています。さらに、心外膜は、心室緻密層10-12の発展のために不可欠です。 EのXAMPLE Gittenbergerドはグルートら proepicardiumの伸長を阻害することが、このような薄い心筋、心臓や異常心室中隔形成の欠損ループとして、その結果、胚致死13等の欠陥の配列につながることを実証しました。胚性心外膜から分泌パラクリン要因は、心筋細胞の増殖および分化を調節します。これと一致して、レチノイン酸（RA）、線維芽細胞増殖因子（FGF）およびWnt /βカテニンシグナル伝達経路などの心外膜特異的欠失は、欠陥のある心筋の増殖および胚致死14-16もたらしました。 心外膜は、大人の心の中に静止状態であると考えられていたが、最近の研究では、発達プログラムが心外傷17,18以下の心外膜に再活性化されることが示されています。活性化されると、細胞はEPDCの形成をもたらす急速な増殖およびEMTを起こします。これらの細胞は、capacitを示しますyは、線維芽細胞や平滑筋細胞ではなく、心筋細胞または内皮細胞18に分化します。また、EPDCsは、損傷部位の血管新生を助ける、したがって梗塞サイズを減少させることにより改善された心機能を促進する血管新生促進因子を分泌します。これらの知見に、心外膜は、心血管の開発、病気と再生の研究に関心を集めています。 トランスジェニック技術は、21世紀の医学研究に革命をもたらしました。トランスジェニック技術の助けを借りて、代謝および病態生理学的に人間の条件を模倣する病気のマウスモデルが正常に開発されています。しかし、これらの変異体における心外膜細胞の挙動を研究すると、初期胚致死性が主な原因課題でした。心外膜は、心臓の開発と再生に果たしていることが重要な役割を考えると、我々は、マウスの噴門上部のためのin vitro培養系を確立していますL細胞。この方法は、心外膜細胞の長期培養を可能にし、心外膜の二つの重要な特性の詳細な検討が容易：移行と分化する能力を。マウスから切除した心室は、遊走アッセイを実施するために使用することができるコラーゲンゲル上で培養することができます。より良い心外膜下の層のコラーゲンが豊富な細胞外マトリックスを複製インビボの細胞生理学を再現する3Dマトリックスで培養されています。あるいは、それらは、次いで、下流の適用の種々のために使用することができる心外膜単層を確立するために、チャンバースライド上で培養することができます。この単分子膜は、移行のために重要であるEMTを受ける心外膜の能力に関する洞察を提供するタイトジャンクショ​​ンタンパク質を染色するために使用することができます。また、分化実験は、これらの細胞上で行うことができます。さらに、遺伝子発現プロファイルは、細胞からRNAを抽出することによって分析することができると定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）を行います。最後に、単層はまた、潜在的な治療薬をテストするために、分子分析を行っ剤を用いて治療することができます。まとめると、この心外膜培養系は、視覚化し、心外膜の開発についての我々の理解をfurthers分子データを収集する機会を提供してくれます。 この方法の別の望ましい特徴は、それが簡単であり、いかなる精巧なセットアップを必要としないことです。簡単に言えば、胚は、心臓を摘出されたE11.5またはE12.5以下で収穫されています。心室はその後、コラーゲンゲルまたはチャンバースライドのいずれかで培養されます。その後、これらの細胞は、下流の実験を行うために使用することができます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="708">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:447px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td style="width:131px;">Life tech invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:131px;">11995065</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin solution</td>
			<td>Life tech invitrogen&#160;</td>
			<td>15140122</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)&#160;</td>
			<td>Life tech invitrogen&#160;</td>
			<td>10500064</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-5KG</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Recombinant fibroblast growth factor 2 (FGF2)</td>
			<td style="width:131px;">PeproTech</td>
			<td style="width:131px;">450-33</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Recombinant transforming growth factor beta 1 (TGF-&#946;1)</td>
			<td style="width:131px;">PeproTech</td>
			<td style="width:131px;">100-21</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:447px;">ZO-1 antibody</td>
			<td>Life tech invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:131px;">40-2200</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#945;-Tubulin antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:131px;">T 6074</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:447px;">&#945;-smooth muscle actin (SMA) antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:131px;">A 2547</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:447px;">Phalloidin antibody</td>
			<td>Life tech invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:131px;">A12379</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3D Collagen Culture kit&#160;</td>
			<td>Millipore&#160;</td>
			<td>ECM 675</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">8-well chamber slide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NNU 154534-PK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:447px;">Trizol reagent</td>
			<td style="width:131px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:131px;">15596-018</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ViiA 7 Real-Time PCR System</td>
			<td style="width:131px;">Life Technologies</td>
			<td>4453536</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superscript First Strand Synthesis kit</td>
			<td style="width:131px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:131px;">11904-018</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro culture of epicardial cells from mouse embryonic heart

During embryogenesis, the epicardial contribution to coronary vasculature development has been very well established. Cells derived from the epicardium differentiate into smooth muscle cells, fibroblasts and endothelial cells that contribute to the formation of coronary vessels. Here we have established an in vitro culture method for embryonic epicardial cells. Using genetic labelling, we have demonstrated that the majority of the migrating cells in our explant culture are of epicardial origin. Epicardial explant cells also retain the expression of epicardial markers (Wt1 and Tbx18). Furthermore, we provide evidence that epicardial explant cells undergo epithelial to mesenchymal transition (EMT), migrate and differentiate into smooth muscle cells after Transforming growth factor beta 1 (TGF-&#946;1) treatment in a manner indistinguishable from that of epicardial cells in vivo. In conclusion, we provide a novel method for the culture of embryonic epicardial cells, which will help to explore the role of specific genes in epicardial cell biology.

この培養プロトコルを使用して、主要な心外膜細胞は、下流アプリケーションのための高純度で単離することができます。培養した細胞は、EMTを起こし移行し、心外膜細胞が生体内で同じよう分化することができます。 R26 トム/ +胚;当社の主要な心外膜細胞培養物の純度を決定するために、我々はSema3d GFPCre / +から生成された心外膜外植片を分析しました。 Sema3dは、このように、これらの胚に由来心外膜細胞が標識されたRFPになり、早期心臓発生中に心外膜細胞で発現されます。心外膜の外植片のためのR26 トム/ +胚;我々はSema3d GFPCre / +から心室を単離しました。 48〜72時間後、我々は、心外膜細胞の単層を見ることができました。 RFPの免疫蛍光および明視野画像を重ね合わすると、その過半数を示しました心室から移動した細胞の心外膜起源（ - C 図1A）です。我々はさらに、一次心外膜細胞からRNAを単離し、心筋細胞マーカー遺伝子（Nkx2.5）（ 図1C）とは対照的に、心外膜の特定の遺伝子（Tbx18およびWT1）の強い発現を示した定量PCRを行うことによって、我々の結果を検証しました。 次に、心外膜細胞の細胞極性および細胞 - 細胞接触を分析することにより、EMTを受ける細胞の能力を調べました。 EMTは、上皮細胞が遊走間葉細胞に形質転換するために、その細胞極性および細胞 - 細胞接触を失うことを可能にする生物学的プロセスです。 EMTの最初のステップは、細胞 - 細胞接触の剥離です。我々は、細胞が持っていることを示す形質膜にZO-1の局在を示した（またTjp1として知られている、密着結合タンパク質1）、ZO-1と心外膜細胞の免疫染色しましたまだEMT（ 図2A）を受けること。心外膜細胞の指向性遊走を促進する偏光配向を示した心外膜外植片、中の微小管の組織を観察するために、次に我々は、αチューブリン（ 図2B）のための免疫染色を行いました。また、心外膜細胞の分化能を決定するために、我々は、組換えTGF-β1を含有する分化培地で6日間それらを培養しました。 SMAの免疫染色は、平滑筋細胞（ 図2C）に心外膜細胞の正常な分化を示しました。 最後に、心外膜由来細胞の遊走および心外膜EMTを分析するために、我々はまた、コラーゲンゲル浸潤アッセイを行いました。心外膜由来の細胞は、免疫染色をファロイジンで可視化しました。心外膜由来細胞の移行を成功さは、外植（ 図3A）の周りのすべてを見ることができます。 Dを決定するために、コラーゲンマトリックスへの細胞侵入のepth、3次元再構成は、共焦点画像から生成されました。心外膜由来細胞の浸透は、zスタック（ 図3B）に見ることができます。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/53993/53993fig1.jpg" /> 。 図1： マウス胎児ハーツから心外膜細胞の初代培養代表明（A）及びRFP免疫蛍光（B）E12.5 Sema3d GFPCre / +から生成される主心外膜細胞の画像; R26 トム/ +心。マージされた明視野および免疫蛍光画像（C）。主要な心外膜細胞（D）における相対心外膜マーカー（Tbx18およびWT1）のmRNA発現レベルと心筋マーカー（Nkx2.5）。結果は、GAPDH発現に対して標準化し、そして<html>相対的な発現レベルは、Nkx2.5の発現と比較して倍の差として与えられた（n = 3）。データは、平均±SDとして提示されています。スケールバー=200μmです。 *、P &lt;0.05。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53993/53993fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/53993/53993fig2.jpg" /> 図2：一次心外膜細胞は、EMTおよび分化を受けるための能力を保持 ZO-1（A、緑）またはαチューブリン（B、緑）のための心外膜外植片に免疫染色します。 DAPIは核（青）を視覚化するために使用した。心外膜細胞を6日間、平滑筋細胞に分化し、α平滑筋アクチン（SMA）（C、赤）で染色しました。スケールバー=100μmです。3993fig2large.jpg &quot;ターゲット=&quot; _空白 &quot;&gt;この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/53993/53993fig3.jpg" /> 図 3： コラーゲンゲル表面上の心外膜細胞遊走心室E12.5胚からは、3次元コラーゲンゲルマトリックス上で培養し、心外膜由来細胞遊走および浸透（A）を可視化するために、アレクサフルオロ488ファロイジンで染色しました。共焦点画像は、z軸（B）に沿って細胞浸透を決定するために、三次元画像を構築するために使用しました。スケールバー=50μmである。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53993/53993fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

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In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

マウス胚心臓から心外膜細胞の体外培養で

The epicardium is an essential source of multipotent cardiovascular progenitor cells and paracrine factors that are required for cardiovascular development and regeneration. We describe here a method to culture mouse embryonic epicardial cells.

During embryogenesis, the epicardial contribution to coronary vasculature development has been very well established. Cells derived from the epicardium ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Engineering

In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

7.3K ビュー.  Duke-NUS Graduate Medical School. The epicardium is an essential source of multipotent cardiovascular progenitor cells and paracrine factors that are required for cardiovascular development and regeneration. We describe here a method to culture mouse embryonic epicardial cells. 

ビデオ: In Vitro Culture of Epicardial Cells From Mouse Embryonic Heart

Probing and Mapping Electrode Surfaces in Solid Oxide Fuel Cells

Solid oxide fuel cells (SOFCs) are potentially the most efficient and cost-effective solution to utilization of a wide variety of fuels beyond hydrogen 1-7. The performance of SOFCs and the rates of many chemical and energy transformation processes in energy storage and conversion devices in general are limited primarily by charge and mass transfer along electrode surfaces and across interfaces. Unfortunately, the mechanistic understanding of these processes is still lacking, due largely to the difficulty of characterizing these processes under in situ conditions. This knowledge gap is a chief obstacle to SOFC commercialization. The development of tools for probing and mapping surface chemistries relevant to electrode reactions is vital to unraveling the mechanisms of surface processes and to achieving rational design of new electrode materials for more efficient energy storage and conversion2. Among the relatively few in situ surface analysis methods, Raman spectroscopy can be performed even with high temperatures and harsh atmospheres, making it ideal for characterizing chemical processes relevant to SOFC anode performance and degradation8-12. It can also be used alongside electrochemical measurements, potentially allowing direct correlation of electrochemistry to surface chemistry in an operating cell. Proper in situ Raman mapping measurements would be useful for pin-pointing important anode reaction mechanisms because of its sensitivity to the relevant species, including anode performance degradation through carbon deposition8, 10, 13, 14 ("coking") and sulfur poisoning11, 15 and the manner in which surface modifications stave off this degradation16. The current work demonstrates significant progress towards this capability. In addition, the family of scanning probe microscopy (SPM) techniques provides a special approach to interrogate the electrode surface with nanoscale resolution. Besides the surface topography that is routinely collected by AFM and STM, other properties such as local electronic states, ion diffusion coefficient and surface potential can also be investigated17-22. In this work, electrochemical measurements, Raman spectroscopy, and SPM were used in conjunction with a novel test electrode platform that consists of a Ni mesh electrode embedded in an yttria-stabilized zirconia (YSZ) electrolyte. Cell performance testing and impedance spectroscopy under fuel containing H2S was characterized, and Raman mapping was used to further elucidate the nature of sulfur poisoning. In situ Raman monitoring was used to investigate coking behavior. Finally, atomic force microscopy (AFM) and electrostatic force microscopy (EFM) were used to further visualize carbon deposition on the nanoscale. From this research, we desire to produce a more complete picture of the SOFC anode.

We present a unique platform for characterizing electrode surfaces in solid oxide fuel cells (SOFCs) that allows simultaneous performance of multiple characterization techniques (e.g. in situ Raman spectroscopy and scanning probe microscopy alongside electrochemical measurements). Complementary information from these analyses may help to advance toward a more profound understanding of electrode reaction and degradation mechanisms, providing insights into rational design of better materials for SOFCs.

固体酸化物形燃料電池の電極表面をプロービングとマッピング

Solid oxide fuel cells (SOFCs) are potentially the most efficient and cost-effective solution to utilization of a wide variety of fuels beyond hydrogen ...

工学

Detection and Recovery of Palladium, Gold and Cobalt Metals from the Urban Mine Using Novel Sensors/Adsorbents Designated with Nanoscale Wagon-wheel-shaped Pores

Developing low-cost, efficient processes for recovering and recycling palladium, gold and cobalt metals from urban mine remains a significant challenge in industrialized countries. Here, the development of optical mesosensors/adsorbents (MSAs) for efficient recognition and selective recovery of Pd(II), Au(III), and Co(II) from urban mine was achieved. A simple, general method for preparing MSAs based on using high-order mesoporous monolithic scaffolds was described. Hierarchical cubic Ia3d wagon-wheel-shaped MSAs were fabricated by anchoring chelating agents (colorants) into three-dimensional pores and micrometric particle surfaces of the mesoporous monolithic scaffolds. Findings show, for the first time, evidence of controlled optical recognition of Pd(II), Au(III), and Co(II) ions and a highly selective system for recovery of Pd(II) ions (up to ~95%) in ores and industrial wastes. Furthermore, the controlled assessment processes described herein involve evaluation of intrinsic properties (e.g., visual signal change, long-term stability, adsorption efficiency, extraordinary sensitivity, selectivity, and reusability); thus, expensive, sophisticated instruments are not required. Results show evidence that MSAs will attract worldwide attention as a promising technological means of recovering and recycling palladium, gold and cobalt metals.

Because of the importance and extensive use of palladium, gold and cobalt metals in high-technology equipment, their recovery and recycling constitute an important industrial challenge. The metal recovery system described herein is a simple, low-cost means for the effective detection, removal, and recovery of these metals from the urban mine.

検出とパラジウムの回収は、都市鉱山からの金やコバルト金属は、ナノスケールワゴンホイール形の細孔を有する指定小説センサ/吸着剤を使用しました

Developing low-cost, efficient processes for recovering and recycling palladium, gold and cobalt metals from urban mine remains a significant challenge in ...

Integration of Light Trapping Silver Nanostructures in Hydrogenated Microcrystalline Silicon Solar Cells by Transfer Printing

One of the potential applications of metal nanostructures is light trapping in solar cells, where unique optical properties of nanosized metals, commonly known as plasmonic effects, play an important role. Research in this field has, however, been impeded owing to the difficulty of fabricating devices containing the desired functional metal nanostructures. In order to provide a viable strategy to this issue, we herein show a transfer printing-based approach that allows the quick and low-cost integration of designed metal nanostructures with a variety of device architectures, including solar cells. Nanopillar poly(dimethylsiloxane) (PDMS) stamps were fabricated from a commercially available nanohole plastic film as a master mold. On this nanopatterned PDMS stamps, Ag films were deposited, which were then transfer-printed onto block copolymer (binding layer)-coated hydrogenated microcrystalline Si (&#181;c-Si:H) surface to afford ordered Ag nanodisk structures. It was confirmed that the resulting Ag nanodisk-incorporated &#181;c-Si:H solar cells show higher performances compared to a cell without the transfer-printed Ag nanodisks, thanks to plasmonic light trapping effect derived from the Ag nanodisks. Because of the simplicity and versatility, further device application would also be feasible thorough this approach.

A viable transfer printing-based methodology to introduce plasmonic metal nanostructures in solar cells is described. Using nanopillar poly(dimethylsiloxane) stamps, an Ag-based ordered nanodisk array was integrated with standard hydrogenated microcrystalline Si solar cells, which led to improved device performances due to plasmonic light trapping.

転写印刷により水素化微結晶シリコン太陽電池の光トラッピング銀ナノ構造の統合

One of the potential applications of metal nanostructures is light trapping in solar cells, where unique optical properties of nanosized metals, commonly ...

Printing Fabrication of Bulk Heterojunction Solar Cells and In Situ Morphology Characterization

Polymer-based materials hold promise as low-cost, flexible efficient photovoltaic devices. Most laboratory efforts to achieve high performance devices have used devices prepared by spin coating, a process that is not amenable to large-scale fabrication. This mismatch in device fabrication makes it difficult to translate quantitative results obtained in the laboratory to the commercial level, making optimization difficult. Using a mini-slot die coater, this mismatch can be resolved by translating the commercial process to the laboratory and characterizing the structure formation in the active layer of the device in real time and in situ as films are coated onto a substrate. The evolution of the morphology was characterized under different conditions, allowing us to propose a mechanism by which the structures form and grow. This mini-slot die coater offers a simple, convenient, material efficient route by which the morphology in the active layer can be optimized under industrially relevant conditions. The goal of this protocol is to show experimental details of how a solar cell device is fabricated using a mini-slot die coater and technical details of running in situ structure characterization using the mini-slot die coater.

Printing Fabrication of Bulk Heterojunction Solar Cells and In Situ Morphology Characterization

Here, we present a protocol to fabricate organic thin film solar cells using a mini-slot die coater and related in-line structure characterizations using synchrotron scattering techniques.

バルクヘテロ接合太陽電池の印刷作製と<em&gt;その場で</em&gt;形態キャラクタリゼーション

Polymer-based materials hold promise as low-cost, flexible efficient photovoltaic devices. Most laboratory efforts to achieve high performance devices ...

Fabrication of White Light-emitting Electrochemical Cells with Stable Emission from Exciplexes

The authors present an approach for fabricating stable white light emission from polymer light-emitting electrochemical cells (PLECs) having an active layer which consists of blue-fluorescent poly(9,9-di-n-dodecylfluorenyl-2,7-diyl) (PFD) and &#960;-conjugated triphenylamine molecules. This white light emission originates from exciplexes formed between PFD and amines in electronically excited states. A device containing PFD, 4,4&#39;,4&#39;&#39;-tris[2-naphthyl(phenyl)amino]triphenylamine (2-TNATA), Poly(ethylene oxide) and K2CF3SO3 showed white light emission with Commission internationale de l&#39;&#233;clairage (CIE) coordinates of (0.33, 0.43) and a Color Rendering Index (CRI) of Ra = 73 at an applied voltage of 3.5 V. Constant voltage measurements showed that the CIE coordinates of (0.27, 0.37), Ra of 67, and the emission color observed immediately after application of a voltage of 5 V were nearly unchanged and stable after 300 sec.

The authors present a method for fabricating stable white-light-emitting electrochemical cells utilizing emission from exciplexes formed between a blue-emitting fluorene polymer and aromatic amines.

エキシプレックスからの安定した発光と白色発光電気化学セルの作製

The authors present an approach for fabricating stable white light emission from polymer light-emitting electrochemical cells (PLECs) having an active ...

In Situ Monitoring of the Accelerated Performance Degradation of Solar Cells and Modules: A Case Study for Cu(In,Ga)Se2 Solar Cells

The levelized cost of electricity (LCOE) of photovoltaic (PV) systems is determined by, among other factors, the PV module reliability. Better prediction of degradation mechanisms and prevention of module field failure can consequently decrease investment risks as well as increase the electricity yield. An improved knowledge level can for these reasons significantly decrease the total costs of PV electricity. 
In order to better understand and minimize the degradation of PV modules, the occurring degradation mechanisms and conditions should be identified. This should preferably happen under combined stresses, since modules in the field are also simultaneously exposed to multiple stress factors. Therefore, two 'Combined Stress test with in situ measurement' setups have been designed and constructed. These setups allow the simultaneous use of humidity, temperature, illumination, and electrical biases as independently controlled stress factors on solar cells and minimodules. The setups also allow real-time monitoring of the electrical properties of these samples. This protocol presents these setups and describes the experimental possibilities. Moreover, results obtained with these setups are also presented: various examples about the influence of both deposition and degradation conditions on the stability of thin film Cu(In,Ga)Se2 (CIGS) as well as Cu2ZnSnSe4 (CZTS) solar cells are described. Results on the temperature dependency of CIGS solar cells are also presented.

In Situ Monitoring of the Accelerated Performance Degradation of Solar Cells and Modules: A Case Study for CuIn,GaSe2 Solar Cells

Two &#39;Combined Stress test with in situ measurement&#39; setups, which allow real-time monitoring of accelerated degradation of solar cells and modules, were designed and constructed. These setups allow the simultaneous use of humidity, temperature, electrical biases, and illumination as independently controlled stress factors. The setups and various experiments executed are presented.

その場で太陽電池とモジュールの加速劣化のモニタリング: Cu (In, Ga) Se2太陽電池に関するケーススタディ

The levelized cost of electricity (LCOE) of photovoltaic (PV) systems is determined by, among other factors, the PV module reliability. Better prediction ...

Fabrication of Ultra-thin Color Films with Highly Absorbing Media Using Oblique Angle Deposition

Ultra-thin film structures have been studied extensively for use as optical coatings, but performance and fabrication challenges remain.&#160; We present an advanced method for fabricating ultra-thin color films with improved characteristics. The proposed process addresses several fabrication issues, including large area processing. Specifically, the protocol describes a process for fabricating ultra-thin color films using an electron beam evaporator for oblique angle deposition of germanium (Ge) and gold (Au) on silicon (Si) substrates.&#160; Film porosity produced by the oblique angle deposition induces color changes in the ultra-thin film. The degree of color change depends on factors such as deposition angle and film thickness. Fabricated samples of the ultra-thin color films showed improved color tunability and color purity. In addition, the measured reflectance of the fabricated samples was converted into chromatic values and analyzed in terms of color. Our ultra-thin film fabricating method is expected to be used for various ultra-thin film applications such as flexible color electrodes, thin film solar cells, and optical filters. Also, the process developed here for analyzing the color of the fabricated samples is broadly useful for studying various color structures.

We present a detailed method for fabricating ultra-thin color films with improved characteristics for optical coatings. The oblique angle deposition technique using an electron beam evaporator allows improved color tunability and purity. Fabricated films of Ge and Au on Si substrates were analyzed by reflectance measurements and color information conversion.

斜め蒸着を使用してメディアを高吸収極薄カラー フィルムの作製

Ultra-thin film structures have been studied extensively for use as optical coatings, but performance and fabrication challenges remain.&#160; We present ...

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

We demonstrate the use of two nuclear-based analytical methods that can follow the modifications of microstructural arrangement of iron-based metallic glasses (MGs). Despite their amorphous nature, the identification of hyperfine interactions unveils faint structural modifications. For this purpose, we have employed two techniques that utilize nuclear resonance among nuclear levels of a stable 57Fe isotope, namely M&#246;ssbauer spectrometry and nuclear forward scattering (NFS) of synchrotron radiation. The effects of heat treatment upon (Fe2.85Co1)77Mo8Cu1B14 MG are discussed using the results of ex situ and in situ experiments, respectively. As both methods are sensitive to hyperfine interactions, information on structural arrangement as well as on magnetic microstructure is readily available. M&#246;ssbauer spectrometry performed ex situ describes how the structural arrangement and magnetic microstructure appears at room temperature after the annealing under certain conditions (temperature, time), and thus this technique inspects steady states. On the other hand, NFS data are recorded in situ during dynamically changing temperature and NFS examines transient states. The use of both techniques provides complementary information. In general, they can be applied to any suitable system in which it is important to know its steady state but also transient states.

Methods of Ex Situ and In Situ Investigations of Structural Transformations: The Case of Crystallization of Metallic Glasses

Here, we present a protocol to describe ex situ and in situ investigations of structural transformations in metallic glasses. We employed nuclear-based analytical methods which inspect hyperfine interactions. We demonstrate the applicability of M&#246;ssbauer spectrometry and nuclear forward scattering of synchrotron radiation during temperature-driven experiments.

Ex その場その場で調査構造変換の方法: 金属ガラスの結晶化の事例

We demonstrate the use of two nuclear-based analytical methods that can follow the modifications of microstructural arrangement of iron-based metallic ...

Label-Free Imaging of Single Proteins Secreted from Living Cells via iSCAT Microscopy

We demonstrate interferometric scattering (iSCAT) microscopy, a method capable of detecting single unlabeled proteins secreted from individual living cells in real time. In this protocol, we cover the fundamental steps to realize an iSCAT microscope and complement it with additional imaging channels to monitor the viability of a cell under study. Following this, we use the method for real-time detection of single proteins as they are secreted from a living cell which we demonstrate with an immortalized B-cell line (Laz388). Necessary steps concerning the preparation of microscope and sample as well as the analysis of the recorded data are discussed. The video protocol demonstrates that iSCAT microscopy offers a straightforward method to study secretion at the single-molecule level.

We present a protocol for the real-time optical detection of single unlabeled proteins as they are secreted from living cells. This is based on interferometric scattering (iSCAT) microscopy, which can be applied to a variety of different biological systems and configurations.

無料のラベル画像の単一蛋白質細胞から分泌される生活 iSCAT 顕微鏡を介して

We demonstrate interferometric scattering (iSCAT) microscopy, a method capable of detecting single unlabeled proteins secreted from individual living ...

Nerve Stem Cell Differentiation by a One-step Cold Atmospheric Plasma Treatment In Vitro

As the development of physical plasma technology, cold atmospheric plasmas (CAPs) have been widely investigated in decontamination, cancer treatment, wound healing, root canal treatment, etc., forming a new research field named plasma medicine. Being a mixture of electrical, chemical, and biological reactive species, CAPs have shown their abilities to enhance nerve stem cells differentiation both in vitro and in vivo and are becoming a promising way for neurological disease treatment in the future. The much more exciting news is that using CAPs may realize one-step, and safely directed, differentiation of neural stem cells (NSCs) for tissue transportation. We demonstrate here the detailed experimental protocol of using a self-made CAP jet device to enhance NSC differentiation in C17.2-NSCs and primary rat neural stem cells, as well as observing the cell fate by inverted and fluorescence microscopy. With the help of immunofluorescence staining technology, we found both the NSCs showed an accelerated differential rate than the untreated group, and ~75% of the NSCs selectively differentiated into neurons, which are mainly mature, cholinergic, and motor neurons.

Nerve Stem Cell Differentiation by a One-step Cold Atmospheric Plasma Treatment In Vitro

This protocol aims to provide detailed experimental steps of a cold atmospheric plasma treatment on neural stem cells and immunofluorescence detection for differentiation enhancement.

ワンステップ低温大気プラズマ治療体外で神経幹細胞の分化

As the development of physical plasma technology, cold atmospheric plasmas (CAPs) have been widely investigated in decontamination, cancer treatment, ...