We would like to thank Ms. Ji Hyun Park and Ji Yeon Park for their technical assistance in the animal experiments. This work was supported by a grant from the Seoul National University Bundang Hospital Research Fund (grant number: Grant No. 14-2014-022) and from a grant (CCP-13-02-KIST) from the Convergence Commercialization Project of the National Research Council of Science and Technology, Seoul, Korea.

私たちのプロトコルは、このプロトコルで提示動物処置と動物のケア方法の全てを承認した盆唐ソウル大病院の施設内動物管理および使用委員会（IACUC）のガイドラインに従います。 IACUCは、実験動物の管理と使用に関する指針の第八版（2011年）に完全に準拠しています。すべての手順は、動物における眼科と視覚研究における動物の使用のためのビジョンと眼科計算書の研究のための協会のガイドラインを順守して行われました。個々のケージは、ウサギを収容するために使用されました。この実験を実施する前に、追加の手術または調製（ すなわち 、殺菌）が必要とされないことがあります。 ウサギの眼への薬物の1眼内注射<ol><li>チレタミン塩酸塩とゾラゼパムの混合物の筋肉内注射で1.5〜2キロの体重の健康のニュージーランド白ウサギを麻酔塩酸塩（15ミリグラム/ kg）および塩酸キシラジン（5 mgの/ kgで）。眼瞼（点滅）反射を監視することによって、または耳のピンチによって麻酔を確認します。 注：眼内薬物が眼の顔料に結合する場合、結合の程度は、薬物の眼の薬物動態の変更を誘発する可能性があります。例えば、着色されたウサギの硝子体および水性体液中の顔料結合性薬物の半減期はアルビノウサギ14のそれと比較して増加することができます。人間の目は、ヒト対応物を表していない可能性色素沈着およびアルビノウサギの眼の異なる程度を有するので、この場合には、着色されたウサギの眼から得られたデータは、人間の目に類似し、適用することができます。したがって、薬物顔料の相互作用を考慮すると、色素性またはアルビノウサギの使用は慎重に検討すべきであるとの結果がウサギの株（色素沈着）と一緒に解釈されるべきです。しかし、アルビノウサギをdと薬物動態学的特性を比較した研究で使用するために推奨されています敷物顔料の相互作用は、比較において交絡因子であり得ます。 <ol><li> 1％の塩酸プロパラカイン眼科点眼薬と局所麻酔薬を適用します。麻酔から回復するまで、目の乾燥を防ぐために、獣医軟膏（2％ヒドロキシプロピルメチルセルロース）を使用します。 注：麻酔ながら無人のウサギを残すことはありません。 </li></ol></li><li>塩酸フェニレフリンおよびトロピカミドの一又は二滴で瞳孔を拡張。 </li><li>眼内注射の前に外科手術の準備のために、綿棒5と眼周囲の皮膚に5〜10％ポビドンヨードを適用します。目の結膜に5〜10％ポビドンヨードの一滴を置きます。 </li><li>無菌技術5のいずれかを使用して硝子体内または房内眼薬を管理します。 注：全身循環に吸収された薬物はまた、仲間の目を貫通していてもよいです。薬物を両眼に投与した場合、一方の眼における薬物濃度が中に注入薬剤によって影響を受ける可能性があります他の目。それは、他の目を貫通することができない対側注射の効果は、全身循環における薬剤として無視することができることが確認された場合、それは経済的であり、動物の数のために犠牲に最小化するように、眼内注射のための両眼を使用することは、考えることができます薬物動態試験。眼内注射後の全身濃度に対する薬物動態学的研究のために、片目だけの使用が適切です。 <ol><li>硝子体内注射のために、強膜面5に対して垂直に30 G針とのいずれかの商業1ミリリットル注射器、インスリン注射器、またはガラスシリンジを使用して、硝子体内に1ミリメートルsuperotemporal象限の外科的角膜輪部の背後に薬剤を注入します。 注：房内と硝子体内注射のために使用される薬剤の量は、調査中の薬に依存して変化します。ウサギの眼を用いて、抗VEGF薬に薬物動態学的実験のために、以前の研究では0.025、0.05（最も一般的）、または0.1メートルを使用しました房内または硝子体内注射のためのベバシズマブまたはラニビズマブのリットル。抗血管内皮増殖因子、0.05ベバシズマブ15 mlの、VEGFトラップ16の0.025ラニビズマブのミリリットル、0.03ミリリットルの眼内薬物動態学に関する我々の以前の研究に使用しました。この17をサポートするためにはほとんど証拠があったが、穿刺せずに最大の安全量は0.1 mlであると考えられています。過度のボリュームがいずれか房内または硝子体内に注入されている場合は、眼圧が大幅に増加しています。直接眼圧の上昇（IIOP）によって引き起こされる視神経損傷、すなわち緑内障視神経損傷に加えて、極端な場合には、IIOPは、脳内の脳梗塞に類似しており、障害のある眼灌流および網膜中心動脈閉塞につながります。 </li><li>房内注射のために、ベベルアップで強角膜輪部を通って30 Gの針を挿入し、それにPAを前進させることによって、前房内に薬剤を注入しますアイリスやレンズへの外傷のリスクを最小限に抑えるために、虹彩面にrallel。 注：製剤に応じて、30 Gを使用することができるより大きな針。より大きなゲージの針を必要とする条件は、薬物を含有するマイクロスフェア、大タンパク質薬剤、および高粘度の製剤を含みます。 </li><li>注入後、創傷治癒を促進するために、滅菌綿チップアプリケーターで注射部位を圧縮します。 注：30 G針が眼内注射のために使用される場合、通常、30秒、創傷治癒のために十分です。より大きなゲージの針が眼内注射のために使用される場合は、より長い時間が強膜切開創からの漏れを最小限に抑えるために密封創傷に適切であろう。強膜切開創漏れをチェックするには、より大きなゲージの針が使用されている場合は特に、眼内注射直後に使用する眼内薬物の量は、注入量と同じであることを確認することが重要です。 </li></ol></li><li>毎日処置したウサギを守って1週間、その後週に一度、重度の眼内炎（結膜充血及び前房蓄膿）の兆候のために安楽死まで。 注：鎮痛剤は、注射後30 Gの針を用いて眼内注射として必要とされていないが、手術後の痛みを伴わない低侵襲的処置です。完全に回復するまで、他の動物の会社に手術を受けた動物を返さないでください。 </li></ol> 2.試料の調製<ol><li>除核のために、眼内薬物注射後の様々な時点（ 例えば 、1時間または1、2、5、9、14、または30日）でウサギを安楽死させます。 注：これらの時点は、関心のある薬物と知られている薬物動態プロファイルに依存します。各時点について、少なくとも二つの眼球13を使用します 。信頼性の高いデータ品質を得るには、サンプリング時間は、慎重に薬剤13の2半減期の少なくともタイムスパンのためのバランスのとれたサンプリングで少なくとも4時間のポイントを選択すべきです</SUP&gt;。私たちは、バランスのとれたサンプリングと6-8の時点では適切であるかもしれないと考えています。小分子（≤1,000ダ）18については、特に、1以上の時点最初の24時間の間には非常に重要です。したがって、高分子（&gt;千ダ）18のために、このような1時間と1、2、5、9、14、および30日19としてサンプリング周期は良いオプションをすることができます。小分子（≤1,000ダ）、1、2、4、8時間、および1、3、7日間一つの選択肢20であることができます。分子量に応じて、サンプリング期間をさらに修飾することができます。 <ol><li>安楽死のために、迅速にチレタミン塩酸塩、ゾラゼパム塩酸塩（15ミリグラム/キログラム）、および塩酸キシラジン（/ kgの5 mg）を混合物の筋肉内注射してウサギを麻酔した後、15％の静脈内のKClを10mlを投与。 </li></ol></li><li>まぶたのリトラクターと瞼裂を開きます。角膜輪部に360°結膜切開2〜3ミリメートルの後部を作成し、Cを解剖することによって後方にそれを拡張世界中からonjunctivaとテノン嚢。 </li><li>地球へのそれらの挿入に近い外眼筋を切りました。曲がったピンセットで視神経をクランプした後、ピンセットと地球の間に神経を切断します。無傷の周囲の組織を残しながら、眼球自体を削除してください。眼球摘出後、すぐに眼球を凍結し、-80℃で保管してください。 注：即時凍結するための2つのオプションがあるかもしれません。薬物濃度は、非常に初期の段階（ すなわち 、1時間未満）で測定された場合、液体窒素は、眼球の良い適時凍結を確実にするために、より適切であるかもしれません。しかし、後続の期間について、氷はすぐに眼球を冷却するために使用することができ、その後ディープフリーザーを-80℃で眼球を格納するために使用することができます。 </li><li>時点のすべてのために眼球を取​​得した後、3つの区画、硝子体、房水、および網膜/脈絡膜に凍結された眼球を分けます。 defros前に、これらの区画を分離ティン。 注：3つの区画に分離するために最も重要な点は、手続きの速度です。眼球は、解凍の前に非常に迅速に分離する必要があり、手順は、解凍を遅らせる氷上で行うことができます。 <ol><li>地球を開くには、メスの刃で角膜輪部（300℃以上）で切開を行います。アイリス、房水の前に凍結されたコンパートメントを取得します。 </li><li>引っ張り、組織鉗子を使用してexcoriatingにより冷凍虹彩とレンズを取り外してください。硝子体がアクセス可能になると、残りの組織（網膜/脈絡膜/強膜）からそれを分離することによって凍結した硝子体を得ます。 </li><li> 15番手術用メスの刃を使用して、根本的な強膜から網膜/脈絡膜組織を分離します。 </li></ol></li><li>イムノアッセイのために、房水サンプルを解凍し、各サンプルの体積を測定します。 Tを含むチューブとは、空の管の重量を差し引くことにより凍結試料の重量を測定します彼はサンプルを凍結させました。 注：凍結試料の比重がほぼ1であるので、各試料の重量は、試料の体積を計算するために使用することができます。 </li><li> 、硝子体サンプルを秤量サンプルを解凍し、4℃で一晩、回転体の1％ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝生理食塩水1.0 ml中にそれらを可溶化します。その後、10分21 387×gでサンプルを遠心します。 </li><li>均質化のために凍結された網膜/脈絡膜サンプルを計量。 1：10（試薬の組織/ 10ミリリットルの1グラム）の試薬に対する組織の比率でタンパク質抽出試薬を追加します。予備冷却マイクロホモジナイザーを用いて組織をホモジナイズします。 12,000〜20,000×gで10分間の溶解サンプルを遠心分離し、チルドEPPチューブに上清を移します。 </li></ol> 3.イムノアッセイ注：いくつかの分析方法は、タンパク質濃度の測定のために使用することができます。 D、適切な定量法を選択してください検出範囲にepending。 LC-MS / MSは、それぞれ、MRM / PRMモードでプロファイリングのためのタンパク質のナノグラムおよびピコグラムレベルを検出することができ、一方、簡単に言えば、HPLCの選択イオンモニタリングモードでは、分子のピコグラムレベルを検出することができます。 ELISAの検出限界は、ピコグラムレベルであると考えられています。 <ol><li>間接酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、抗VEGF剤の濃度を測定する目的の薬物を検出し、既知の薬物濃度の標準曲線を生成するために、96ウェルプレートでのELISAキットを使用します。 <ol><li>硝子体、房水、および直線範囲内にある濃度の1×リン酸緩衝生理食塩水（PBS）中の0.1％ウシ血清アルブミンを網膜/脈絡膜サンプルを希釈し、アッセイのためにこれらを使用します。 </li></ol></li><li> 100μl/ウェルでプレートにアリコートにサンプルを分割します。 4℃で一晩インキュベートした後、プレート0の洗浄溶液200μlで3回洗浄します。1×PBSで05パーセントのTween20。 注：抗VEGF ELISAのための一次抗体としてサンプルの行為中に存在します。従って、一次抗体のさらなる使用は不要です。 </li><li> 1×PBS中0.1％BSA 20,000、およびウェルあたり希釈液の100μlを添加する：1に二次抗体を希釈します。 4℃で一晩、希釈した二次抗体を用いてプレートをインキュベートした後、波長450nmにおける光学密度を測定します。各標準およびサンプルの重複測定値の平均から平均ゼロ標準光学密度を差し引きます。 </li><li>そのようなプロのSoftMaxような4パラメータロジスティック（4-PL）曲線適合を生成することが可能なコンピュータソフトウエアを使用してデータを削減することによって、既知の濃度の薬剤の溶液からの相対的な光信号に基づいて、標準曲線を作成します。 [フィット] - 標準曲線を作成するために、4-PL曲線フィットは、[検量線]の[4-パラメーター]をクリックすることによって得ることができます。 </li><li>サンプルのFR中の薬物濃度を計算します標準曲線をオム。 注：抗VEGF薬の検出限界（LOD）は、当社の実験で調べました。ベバシズマブのLODはミリリットル0.024から3.125 ngの/であったとアフリベルセプトのそれは0.039から10 ng / mlでした。 </li></ol> 4.薬物動態解析手法注：PK分析のために、1はコンパートメントまたは非コンパートメント解析のいずれかを使用することができます。コンパートメント解析では、分子の配置の動作は、方程式（モデル）によって説明することができます。非コンパートメントモデルは、他の投与計画についての濃度 - 時間プロファイルを視覚化するか予測することはできないのに対し、このように、コンパートメントPK解析は、任意の時間tにおける濃度を予測することができます。しかし、コンパートメントモデルのフィッティングは、複雑で時間のかかるプロセスすることができます。これとは対照的に、仮定は非コンパートメントモデルでは制限の少ないです。ノンコンパートメント方法はシンプルで、このような半減期、クリアランスおよび分布容積のような薬物動態パラメータを計算するために一般的に使用されます。我々は、抗VEGF薬に関する薬物動態学的研究のためのコンパートメントモデルを選びました。 <ol><li>このようなフェニックスWinNonlinソフトウェアとしてモデリングソフトウェアを使用してコンパートメントモデルと薬物濃度データを分析します。 <ol><li> 【WNL5古典的なモデリング]の[PKモデル]をクリックし、[設定]メニューの観測時間、投与量、および薬物濃度をマッピングします。 </li><li> [モデル選択]タブで（ 例えば 、区画の数）コンパートメントモデルを選択して、モデルパラメータを計算するために、[実行]ボタンをクリックします。 </li></ol></li><li> （ 例えば 、標準誤差）（1）赤池情報量基準、（2）パラメータ推定値の精度、および（3）のグラフィカルな分析：分析した後、最高の以下の基準に基づいて薬物濃度データを記述し、最終的なコンパートメントモデルを選択（ 例えば 、フィットプロットの良）。 </li><li>このような時間concentra下の半減期（T 1/2）および領域として関心の薬物動態パラメータを算出コンパートメントモデルによって駆動されるモデルパラメータと方程式からション曲線（AUC）、。 </li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

With the increasing use of intraocular drugs, such as anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) agents, for the treatment of diverse ocular diseases, knowledge of the tissue distribution and clearance of the drug after the intraocular injection is important. Understanding the pharmacokinetics of intraocular drugs is important for understanding the efficacy and safety of drugs, determining the optimal dosage of the drugs, and minimizing systemic or intraocular complications. However, detailed pharmacokinetic studies of intraocular drugs in humans are limited owing to safety issues, and an appropriate animal model is necessary.
The rabbit system is a well-established model that is used to study the intracameral, intravitreal, and intraretinal pharmacokinetics of intraocular drugs16,21,31-33. Rabbits are easy to handle and use in experiments. In addition, animal studies that use rabbits are very economical as compared to those that use larger animals such as monkeys. For pharmacokinetic studies, this system allows the simultaneous sampling of the aqueous fluid, whole vitreous, retina, and serum from the same rabbit, and at different time points in different rabbits.
Furthermore, rabbit eyes can be prepared to simulate treated human eyes, such as vitrectomized eyes, thus allowing pharmacokinetic studies under specific conditions15,19. With this model, researchers can analyze the effects of specific modulations or eye conditions to the pharmacokinetic properties of intraocular drugs. For example, previous studies of anti-VEGF agents in vitrectomized and non-vitrectomized eyes suggested that the removal of the vitreous by a vitrectomy does not affect the intraocular pharmacokinetics of anti-VEGF agents15,19.
Our protocol consists of intraocular injection of the drug into the rabbit eyes, sample preparation, immunoassay, and pharmacokinetic analysis methods. Among these, the critical step within this protocol is sample preparation. Separation of the frozen eyeball into three compartments is not easy if the eyeball is thawed. Although the details of the separation are described in this protocol, quick separation of the three compartments while keeping the tissue frozen is the key step for successful partition. It is also possible to modify the sample preparation. For example, anterior chamber samples can be obtained by paracentesis of aqueous humor34,35. Vitreous sample can be also obtained by tapping35, which has not been used commonly owing to high failure rate and the possibility of tissue disruption. For the sample preparation of the retina, retinal tissues can be dissected into two layers with Ames solution36.
The second important point is to determine the appropriate time-points at which to sacrifice rabbits and enucleate the eyeballs. We suggest 1 hr, and 1, 2, 5, 9, 14, and 30 days as sampling time points for large protein drugs, such as bevacizumab or ranibizumab. The half-life of an intravitreal drug depends primarily on its molecular weight. If the half-life of a drug of interest is expected to be shorter or longer than that of bevacizumab or ranibizumab, the sampling time points should be adjusted accordingly. 
Third, using one eye or both eyes of a rabbit is sometimes a matter of concern. Although the systemic absorption of an intraocular drug is usually minimal, intravitreal drugs can move to the contralateral eye and bias the result. Thus, the use of both eyes should be limited to performing a paired comparison of pharmacokinetics of two different drugs in the same animal or to comparing one single drug under two different ocular conditions (such as vitrectomized eyes).
Fourth, we used ELISA, an immunologic assay, to measure the concentration of protein drugs. To measure the concentration of chemical drugs, high-performance liquid chromatography (HPLC) can be used. Multiple-reaction monitoring (MRM) using mass spectrometry is a recent quantitative method for analysis of proteins and peptides with high selectivity and sensitivity. If no reliable antibody-based assay is available for specific drugs, MRM can be a good alternative. 
One limitation of the method is that the differences between rabbit and human eyes could result in altered pharmacokinetics in the rabbit as compared to humans. In particular, humans have a vitreous cavity with a larger volume (4.5 ml) than that of rabbits (1.5 ml)21. In addition, because humans have a larger serum compartment than rabbits, the systemic exposure may be decreased. Furthermore, in humans, the vitreous becomes more liquefied and less homogenous with aging, which is associated with increased convective flow in the vitreous37. Therefore, liquefaction and convection in the vitreous have been suggested to be major pharmacokinetic differences between the rabbit and human38. These differences should be carefully considered when extrapolating the drug pharmacokinetic properties that are obtained from animal studies to humans. Another limitation is that this method measures the intraocular drug concentration in different animals. There might be differences in size, pharmacokinetic properties, and ocular and systemic conditions among rabbits in an experiment. 
To determine accurate pharmacokinetics, repeated longitudinal measurements in the same animal are preferable to using different animals. An alternative method is to use radioisotope-labeled drugs and measure the concentration with PET scans39. However, the PET scan usually has wide measurement deviations, and it is considered inappropriate for accurate measurement of low concentrations. A recent technology of intravital imaging could be a future research tool to overcome this limitation, for intraocular pharmacokinetic study40. 
As more drugs are developed for intravitreal injection, the need for intraocular pharmacokinetic studies will increase. In addition, various drug delivery systems such as fluocinolone acetonide intravitreal implant41-43 and dexamethasone intravitreal implant44,45, are being developed and the prediction of intraocular drug retention would be as important as intravitreal injection itself. Likewise, this protocol can be applied to other ocular delivery routes, such as topical, subconjunctival, and suprachoroidal46 administration. In addition, it can be applied to investigating the pharmacokinetics of long-term sustained intraocular drug-delivery systems, such as PLGA implants47, hydrogels, and microparticles. We believe that this protocol for the pharmacokinetic study of intraocular drugs using rabbit eyes will be useful to many researchers in ophthalmological fields.

眼内薬物送達の出現する前に、眼内疾患に対する薬物療法の主な関心事は、薬物が眼に浸透可能性があると効率でした。血液眼関門は、眼への拡散が、薬物を含む多くの物質を、防ぐことができます。したがって、治療レベルより上である薬物の濃度を容易に得ることがないかもしれません。薬物の治療濃度は、眼4,5で達成することができるように房内および硝子体内注射を含む眼内薬物投与の方法は、直接、血液眼関門1-3をバイパスすることができます。 したがって、硝子体内薬物送達は、いくつかの眼疾患5,6のための治療の一般的な方法となっています。例えば、硝子体内注射が広く、加齢性黄斑変性症、糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞、眼内感染7-10に対して行われます。具体的には、以来、抗VEGF薬の導入は、硝子体内注射の頻度は著しく網膜疾患の治療のために増加しています。したがって、薬物療法の有効性および安全性を評価するためのこのような薬物の眼内薬物動態を理解することが重要です。 薬物の眼内投与は、眼疾患のための医学的治療における画期的な成果であると考えられているが、眼球内薬物濃度を監視することは技術的に厳しいです。人間の目は唯一の房水の少量（およそ200μL）および硝子体（約4.5 mlであり、 表1）を含有するので、薬物濃度を測定するために、眼の流体の十分な量を得ることは技術的に困難です。さらに、このような硝子体タッピングまたは前房の穿刺などの眼の流体を得るために使用される方法は、眼組織に損傷を与え、例えば白内障、眼内炎、又は重篤な合併症をもたらし得ます網膜剥離11,12。従って、動物モデルは、一般的に使用される眼内薬物13の薬物動態学的研究において使用されています。これらの動物モデルの中で、ウサギやサルは、最も頻繁に使用される動物です。 家族のウサギ科で注文ウサギ目の小さな哺乳動物であるウサギは、世界のいくつかの部分で発見されています。ウサギは攻撃的ではないので、取り扱いが容易で、実験に使用し、観察します。低コスト、人間に対する動物、同様の目の大きさが容易に入手できる、と比較好意がウサギの眼を使用して、薬物動態学的研究を行うための情報の大規模なデータベース。本論文では、ウサギの眼における眼薬の薬物動態試験のためのプロトコルが記載されています。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="647">
	<tbody>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:213px;">Zoletil</td>
			<td style="width:143px;">Virbac Laboratories, Carros Cedex, France</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:213px;">Xylazine hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Fort Dodge Laboratories, Fort Dodge, IA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:213px;">Proparacaine hydrochloride (Alcaine)</td>
			<td style="width:143px;">Alcon laboratories, Fort Worth, TX</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:213px;">Phenylephrine hydrochloride and tropicamide</td>
			<td style="width:143px;">Santen Pharmaceutical, Co., Osaka, Japan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:213px;">Recombinant Human VEGF 165</td>
			<td style="width:143px;">R&#38;D systems</td>
			<td style="width:119px;">293-VE-050</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:213px;">Carbobate-Bicarbonate buffer</td>
			<td style="width:143px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C3041-50CAP</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:213px;">NUNC MICROWELL 96F&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; W/LID NUNCLON D SI&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td style="width:119px;">167008</td>
			<td style="width:173px;">96 well plate</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:213px;">Bovine Serum Albumin (BSA) 25grams(Net)</td>
			<td style="width:143px;">BOVOGEN</td>
			<td style="width:119px;">BSA025</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:213px;">Phosphate Buffered Saline (PBS) pH7.4 (1X), 500mL</td>
			<td style="width:143px;">gibco</td>
			<td style="width:119px;">10010-023</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:213px;">Sheep anti-Human IgG Secondary Antibody, HRP conjugate</td>
			<td style="width:143px;">Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td style="width:119px;">PA1-28652</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:213px;">Goat Anti-Human IgG Fc(HRP)</td>
			<td style="width:143px;">abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab97225</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:213px;">Goat anti-Human IgG, Fab&#39;2 Secondary Antibody, HRP conjugate</td>
			<td style="width:143px;">Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td style="width:119px;">PA1-85183</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:213px;">CelLytic MT&#160; Cell Lysis Reagent</td>
			<td style="width:143px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C3228-50ML</td>
			<td style="width:173px;">lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:213px;">100 Scalpel Blades</td>
			<td style="width:143px;">nopa instruments</td>
			<td style="width:119px;">BLADE #15</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:213px;">100 Scalpel Blades</td>
			<td style="width:143px;">nopa instruments</td>
			<td style="width:119px;">BLADE #10</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:213px;">FEATHER SURGICAL BLADE STAINLESS STEEL</td>
			<td style="width:143px;">FEATHER</td>
			<td style="width:119px;">11</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:213px;">1-StepTM TMB-Blotting substrate solution, 250mL</td>
			<td style="width:143px;">Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td style="width:119px;">34018</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:213px;">Stable Peroxide Substrate Buffer (10X), 100mL</td>
			<td style="width:143px;">Thermo SCIENTIFIC</td>
			<td style="width:119px;">34062</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:213px;">Softmax Pro</td>
			<td style="width:143px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">v.5.4.1</td>
			<td style="width:173px;">software for generating standard curve</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:213px;">SAAM II&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Saam Institute, Seattle, WA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:173px;">software for pharmacokinetic modeling</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Phoenix WinNonlin</td>
			<td style="width:143px;">Pharsight, Cary, NC</td>
			<td style="width:119px;">v. 6.3</td>
			<td style="width:173px;">software for pharmacokinetic modeling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:213px;">Avastin (bevacizumab)</td>
			<td style="width:143px;">Genentech</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of rabbit eyes in pharmacokinetic studies of intraocular drugs

彼らの全身吸収を最小限に抑えながら、薬物投与の眼内経路は、治療薬の高濃度の配信を可能にします。いくつかの薬剤は、前房または硝子体内に投与され、眼内注射は、様々な眼疾患を硬化させるのに有効でした。動物は、他の哺乳類に比べて取り扱いが容易かつ経済的であるように、ウサギの目は広く、眼科研究のために使用されており、ウサギの眼の大きさは、人間の目と同様です。 30 G針を使用して、薬物は、ウサギの眼の房内および硝子体内空間に注入することができます。眼球は、分析まで凍結され、房水、硝子体、及び網膜/脈絡膜に分けることができます。硝子体および網膜/脈絡膜サンプルを均質化し、分析の前に可溶化することができます。そして、イムノアッセイは、各区画内に、眼内の薬物の濃度を測定するために行うことができます。適切な薬物動態学的モデルは、することができますこのような半減期および薬物の最大濃度などのいくつかのパラメータを計算するために使用されます。ウサギの眼は、眼内の薬物の薬物動態学的研究のための良いモデルとなり得ます。

無菌技術を用いてウサギの眼への関心の薬物の硝子体内注射を行うために使用される手順は、図1に示されている。処置した眼は、スケジュールされた時間に摘出し、-80℃で保存します。分析のために、3つの区画、房水、硝子体、及び網膜/脈絡膜は、 図2に示されているように、凍結されたウサギの眼から分離されている。区画のサンプルをELISAのために用意されています。二次抗体とのインキュベーション後、光学密度を硝子体内注射（ 図た後複数の時点で採取した3つの区画からの標準曲線及びサンプルの対象の薬物の既知の濃度を含有する96ウェルプレート中で測定されます3）。標準曲線（補足図1）から算出された濃度データはpharmacokineに装着することができますチックモデルおよび薬物動態パラメータは、近似直線（ 図4）から求めることができます。 図4では、vitrectomizedおよび非vitrectomized目に硝子体内に注入されたベバシズマブの薬物動態を評価し、比較しました。コンパートメントPK分析は、PKの動作を説明するために以下の式を提供する、行いました。 （ - 2トンをK） - C（トン）= C 1のexp（1トンをK）+ C &#39;2のexp C（μgの/ mL）を：任意の時刻t（時間）での濃度 C 1、C 2：分布および排泄相の後方補外切片目での速度定数：1 で、k 2 k 個電子分布及び排出相 図4に示すように、当てはめモデルに従って推定濃度は実測値に非常によく一致しました。 withや硝子体切除なしの間の半減期としてベバシズマブ及び薬物動態パラメータの硝子体濃度に有意差はなかったです。この実験は、ベバシズマブの分布およびクリアランスにおける硝子体の役割は重要でないことを示唆しています。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/53878/53878fig1.jpg" /> 図1： ウサギ眼の下麻酔眼内薬物の硝子体内注射を行う手順無菌技術を5％ポビドンヨード滴を適用することによって、皮膚の調製で使用され、目的の薬物の硝子体内注射は、装着シリンジを用いて行われますウィットhaの30 G針。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53878/53878fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/53878/53878fig2.jpg" /> 図2：3 つの区画に冷凍ウサギの眼球の分離手術用ブレードと絞りを除去しながら、強膜切開後は、房水および硝子体を分離することができます。続いて、網膜/脈絡膜は、眼球の白い外側の層である、強膜から慎重に分離することができる。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53878/53878fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/53878/53878fig3.jpg" /> 図3： 酵素結合免疫3つの区画を表すサンプルにおける眼内の薬物の吸着剤アッセイ（ELISA）。この図は、免疫測定法に使用された96ウェルプレートを示しています。二次抗体とのインキュベーション後、色の変化をウェルに留意されたいです。色の光学濃度は、目的の薬剤の濃度に依存している。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53878/53878fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/53878/53878fig4.jpg" /> 図4： 薬物動態学的モデルへの観測データをあてはめ vitrectomizedと非vitrectomized目にベバシズマブの薬物動態を比較した。この実験では、ベバシズマブの実際の硝子体内濃度は、ドットとして提示されています。薬物動態によって駆動される濃度データの近似曲線二行で表されているモデルは、描かれたそのような薬物の半減期などの薬物動態パラメーターの計算に使用されます。エラーバーは95％信頼区間を示している。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53878/53878fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 補足図1：ベバシズマブの検出のために使用されるELISAの標準曲線は、これは、4パラメータロジスティック曲線フィットを生成することができるソフトウェアを使用して取得されます。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53878/Supplementary_Figure.tif" target="_blank">このファイルをダウンロードするにはこちらをクリックしてください。</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 種 </td><td> ガラス質の </td><td> 房水 </td><td> 参照しますレンス</td></tr><tr><td>マウス</td><td> 5.3μlの</td><td> 4.4μlの</td><td> 22 </td></tr><tr><td>ラット</td><td> 50〜55μlの</td><td> 13.6μlの</td><td> 22、24 </td></tr><tr><td>ウサギ</td><td> 1.15〜1.7ミリリットル</td><td> 350μlの</td><td> 23、27、28 </td></tr><tr><td>モンキー</td><td> 3.0〜4.0ミリリットル</td><td> 102μlの</td><td> 23、26、28 </td></tr><tr><td>人間</td><td> 3.0〜5.0ミリリットル</td><td> 144から247μlの</td><td> 23、20、21、28 </td></tr></tbody></table> 表1：異なる種 17,22-30 における硝子体と水性ユーモアボリューム 。

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Use of Rabbit Eyes in Pharmacokinetic Studies of Intraocular Drugs

Rabbits are widely used to study the pharmacokinetics of intraocular drugs. We describe a method for conducting pharmacokinetic studies of intraocular drugs using rabbit eyes.

眼薬の薬物動態試験でウサギの眼の使用

The intraocular route of drug administration enables the delivery of high concentrations of therapeutic drugs, while minimizing their systemic absorption. ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

31.6K ビュー.  Seoul National University Bundang Hospital. Rabbits are widely used to study the pharmacokinetics of intraocular drugs. We describe a method for conducting pharmacokinetic studies of intraocular drugs using rabbit eyes.

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Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

マウスにおけるタキサンの薬物動態学的および薬力学的分析のための頸動脈煎茶

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

医学

The Rabbit Blood-shunt Model for the Study of Acute and Late Sequelae of Subarachnoid Hemorrhage: Technical Aspects

Early brain injury and delayed cerebral vasospasm both contribute to unfavorable outcomes after subarachnoid hemorrhage (SAH). Reproducible and controllable animal models that simulate both conditions are presently uncommon. Therefore, new models are needed in order to mimic human pathophysiological conditions resulting from SAH.
This report describes the technical nuances of a rabbit blood-shunt SAH model that enables control of intracerebral pressure (ICP). An extracorporeal shunt is placed between the arterial system and the subarachnoid space, which enables examiner-independent SAH in a closed cranium. Step-by-step procedural instructions and necessary equipment are described, as well as technical considerations to produce the model with minimal mortality and morbidity. Important details required for successful surgical creation of this robust, simple and consistent ICP-controlled SAH rabbit model are described.

The experimental intracranial pressure-controlled blood shunt subarachnoid hemorrhage (SAH) model in the rabbit combines the standard procedures &#8212; subclavian artery cannulation and transcutaneous cisterna magna puncture, which enables close mimicking of human pathophysiological conditions after SAH. We present step-by-step instructions and discuss key surgical points for successful experimental SAH creation.

くも膜下出血の急性および後期後遺症の研究のためのウサギの血液シャントモデル：技術的側面

Early brain injury and delayed cerebral vasospasm both contribute to unfavorable outcomes after subarachnoid hemorrhage (SAH). Reproducible and ...

Assessing Specificity of Anticancer Drugs In Vitro

A procedure for assessing specificity of anticancer drugs in vitro using cultures containing both tumor and non-tumor cells is demonstrated. The key element is the quantitative determination of a tumor-specific genetic alteration in relation to a universal sequence using a dual-probe digital PCR assay and the subsequent calculation of the proportion of tumor cells. The assay is carried out on a culture containing tumor cells of an established line and spiked-in non-tumor cells. The mixed culture is treated with a test drug at various concentrations. After the treatment, DNA is prepared directly from the survived adhesive cells in wells of 96-well plates using a simple and inexpensive method, and subjected to a dual-probe digital PCR assay for measuring a tumor-specific genetic alteration and a reference universal sequence. In the present demonstration, a heterozygous deletion of the NF1 gene is used as the tumor-specific genetic alteration and a RPP30 gene as the reference gene. Using the ratio NF1/RPP30, the proportion of tumor cells was calculated. Since the dose-dependent change of the proportion of tumor cells provides an in vitro indication for specificity of the drug, this genetic and cell-based in vitro assay will likely have application potential in drug discovery. Furthermore, for personalized cancer-care, this genetic- and cell-based tool may contribute to optimizing adjuvant chemotherapy by means of testing efficacy and specificity of candidate drugs using primary cultures of individual tumors.

Assessing Specificity of Anticancer Drugs In Vitro

The goal of this protocol is to assess specificity of anticancer drugs in vitro using mixed cultures containing both tumor and non-tumor cells.

抗がん剤の特異性を評価します<em&gt;インビトロ</em

A procedure for assessing specificity of anticancer drugs in vitro using cultures containing both tumor and non-tumor cells is demonstrated. The key ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Use of a Central Venous Line for Fluids, Drugs and Nutrient Administration in a Mouse Model of Critical Illness

This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting. Critically ill patients require intensive medical support in order to survive. While the majority of patients will recover within a few days, about a quarter of the patients need prolonged intensive care and are at high risk of dying from non-resolving multiple organ failure. Furthermore, the prolonged phase of critical illness is hallmarked by profound muscle weakness, and endocrine and metabolic changes, of which the pathogenesis is currently incompletely understood. The most widely used animal model in critical care research is the cecal ligation and puncture model to induce sepsis. This is a very reproducible model, with acute inflammatory and hemodynamic changes similar to human sepsis, which is designed to study the acute phase of critical illness. However, this model is hallmarked by a high lethality, which is different from the clinical human situation, and is not developed to study the prolonged phase of critical illness. Therefore, we adapted the technique by placing a central venous catheter in the jugular vein allowing us to administer clinically relevant supportive care, to better mimic the human clinical situation of critical illness. This mouse model requires an extensive surgical procedure and daily intensive care of the animals, but it results in a relevant model of the acute and prolonged phase of critical illness.

This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting.

重大な病気のマウスモデルにおける流体、医薬品や栄養管理のための中心静脈ラインの使用

This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce ...

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the subretinal space, and to evaluate toxicity and efficacy in vivo. HR-SD-OCT uses near infrared light (800-880 nm) and has optics specifically designed for the unique optics of the mouse eye with sub-2-micron axial resolution. Transgenic mouse models of outer retinal (photoreceptor) degeneration and controls were imaged to assess the disease progression. Pulled glass microneedles were used to deliver sub retinal injections of adeno-associated virus (AAV) or nanoparticles (NP) via a trans-scleral and trans-choroidal approach. Careful positioning of the needle into the subretinal space was required prior to a calibrated pressure injection, which delivers fluid into the sub retinal space. Real time subretinal surgery was conducted on our retinal imaging system (RIS). HR-SD-OCT demonstrated progressive uniform retinal degeneration due to expression of a toxic mutant human mutant rhodopsin (P347S) (RHOP347S) transgene in mice. HR-SD-OCT allows rigorous quantification of all the retinal layers. Outer nuclear layer (ONL) thickness and photoreceptor outer segment length (OSL) measurements correlate with photoreceptor vitality, degeneration, or rescue. The RIS delivery system allows real-time visualization of subretinal injections in neonatal (~P10-14) or adult mice, and HR-SD-OCT immediately determines success of delivery and maps areal extent. HR-SD-OCT is a powerful tool that can evaluate the success of subretinal surgery in mice, in addition to measuring vitality of photoreceptors in vivo. HR-SD-OCT can also be used to identify uniform animal cohorts to evaluate the extent of retinal degeneration, toxicity, and therapeutic rescue in preclinical gene therapy research studies.

Here we demonstrate a novel approach to using high resolution spectral-domain optical coherence tomography (HR-SD-OCT) to assist delivery of gene therapy agents into the subretinal space, assess its areal coverage, and characterize photoreceptor vitality.

超高解像度マウス光コヒーレンストモグラフィー網膜遺伝子治療研究における眼内注入を支援するために

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles

Treatment of dyslipidemia patients with lipid-lowering drugs leads to a significant reduction in low-density lipoproteins (LDL) level and a low to moderate level of increase in high-density lipoprotein (HDL) cholesterol in plasma. However, a possible role of these drugs in altering morphology and distribution of cholesterol particles is poorly understood. Here, we describe the in vitro evaluation of lipid-lowering drug effects in modulating morphological features of cholesterol particles using the plaque array method in combination with imaging flow cytometry. Image analyses of the cholesterol particles indicated that lovastatin, simvastatin, ezetimibe, and atorvastatin induce the formation of both globular and linear strand-shaped particles, whereas niacin, fibrates, fluvastatin, and rosuvastatin induce the formation of only globular-shaped particles. Next, purified very low-density lipoprotein (VLDL) and LDL particles incubated with these drugs showed changes in the morphology and image texture of cholesterol particles subpopulations. Furthermore, screening of 50 serum samples revealed the presence of a higher level of linear shaped HDL cholesterol particles in subjects with dyslipidemia (mean of 18.3%) compared to the age-matched normal (mean of 11.1%) samples. We also observed considerable variations in lipid-lowering drug effects on reducing linear shaped LDL and HDL cholesterol particles formation in serum samples. These findings indicate that lipid-lowering drugs, in addition to their cell-mediated hypolipidemic effects, may directly modulate morphology of cholesterol particles by a non-enzymatic mechanism of action. The outcomes of these results have potential to inform diagnosis of atherosclerosis and predict optimal lipid-lowering therapy.

The objective of this study was to evaluate in vitro lipid-lowering drug effects in modulating the morphology of cholesterol particles. Comparison of lipid-lowering drugs revealed variations in their effect in modulating the morphological features of cholesterol particles.

コレステロール粒子の形態を調節することで脂質低下薬の効果

Treatment of dyslipidemia patients with lipid-lowering drugs leads to a significant reduction in low-density lipoproteins (LDL) level and a low to ...

Transthoracic Echocardiographic Examination in the Rabbit Model

Large animal models such as the rabbit are valuable for translational preclinical research. Rabbits have a similar cardiac electrophysiology compared to that of humans and that of other large animal models such as dogs and pigs. However, the rabbit model has the additional advantage of lower maintenance costs compared to other large animal models. The longitudinal evaluation of cardiac function using echocardiography, when appropriately implemented, is a useful methodology for preclinical assessment of novel therapies for heart failure with reduced ejection fraction (e.g. cardiac regeneration). The correct use of this non-invasive tool requires the implementation of a standardized examination protocol following international guidelines. Here we describe, step by step, a detailed protocol supervised by veterinary cardiologists for performing echocardiography in the rabbit model, and demonstrate how to correctly obtain the different echocardiographic views and imaging planes, as well as the different imaging modes available in a clinical echocardiography system routinely used in human and veterinary patients.

Here we describe, step by step, a detailed protocol for performing echocardiography in the rabbit model. We show how to correctly obtain the different echocardiographic views and imaging planes, as well as the different imaging modes available in a clinical echocardiography system routinely used in human and veterinary patients.

ウサギモデルにおける経胸部心エコー検査

Large animal models such as the rabbit are valuable for translational preclinical research. Rabbits have a similar cardiac electrophysiology compared to ...

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for quality of life and health care costs. The lack of informative animal models that recapitulate its key features impedes the search for new therapeutic agents for DED. Available DED animal models have limited reproducibility and efficacy. A model is presented here in which DED is induced by injecting the mitogen concanavalin A (Con A) into the orbital lacrimal glands of rabbits. Innovative aspects of this model are the use of ultrasound (US) guidance to ensure optimal and reproducible injection of Con A into the inferior lacrimal gland; injection of Con A into all orbital lacrimal glands that limits compensatory production of tears; and use of periodic repeat injections of Con A that prolong the state of DED at will. DED and its response to test agents are monitored with a panel of parameters that assess tear production, the stability of the tear film, and the status of the corneal and conjunctival mucosa. They include tear osmolarity, tear break-up time, Schirmer&#39;s tear test, rose bengal staining, and tear lactoferrin levels. The induction of DED and the monitoring of its parameters are described in detail. This model is simple, robust, reproducible, and informative. This animal model is suitable for the study of tear physiology and of the pathophysiology of DED as well as for the assessment of the efficacy and safety of candidate agents for the treatment of DED.

This article describes the development of a method to induce acute or chronic dry eye disease in rabbits by injecting concanavalin A to all portions of the orbital lacrimal gland system. This method, superior to those already reported, generates a reproducible, stable model of dry eye suitable for the study of pharmacological agents.

コンカナバリンによる涙腺への注射によって誘発される水性欠損性ドライアイ病のウサギモデル:薬物有効性研究への応用

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...

Self-Administration of Drugs in Mouse Models of Feeding and Obesity

Preclinical studies in mice often rely on invasive protocols, such as injections or oral gavage, to deliver drugs. These stressful routes of administration have significant effects on important metabolic parameters including food intake and body weight. Although an attractive option to circumvent this is to compound the drug in rodent food or dissolve it in water, these approaches also have limitations as they are affected by drug stability at room temperature for extended periods of time, the drug's solubility in water, and that the dosing is highly dependent on timing of food or water intake. The constant availability of the drug also limits translational relevance on how drugs are administered to patients. To overcome these limitations, drugs can be mixed with highly palatable food, such as peanut butter, allowing mice to self-administer compounds. Mice reliably and reproducibly consume the drug/peanut butter pellet in a short time frame. This approach facilitates a delivery approach with minimal stress compared with an injection or gavage. This protocol demonstrates the approach of drug preparation, animal acclimatization to placebo delivery, and drug delivery. The implications of this approach are discussed in studies related to timing of drug administration and the circadian rhythm.

The overall goal of this procedure is to describe a method for self-administration of drugs that can be used in mouse models of feeding and obesity.