Sezionamento automatizzato con vibratomo del tessuto polmonare incorporato nell'agarosio per l'imaging a fluorescenza multiplex

Questo protocollo è particolarmente utile nei modelli animali di trapianto e rigenerazione polmonare di grandi dimensioni, come i maiali, dove possiamo campionare piccoli pezzi nel tempo. Questa tecnica può aiutarci a comprendere meglio la biologia spaziale in gioco in questi modelli. Questa tecnica produce fette di polmone minimamente processate adatte per l'imaging a immunofluorescenza senza la necessità di recupero dell'antigene ed è stata efficace con tutti gli anticorpi testati fino ad oggi.

Questa procedura può essere adattata per tagliare sezioni leggermente più spesse, diciamo intorno a un millimetro, che possono poi essere utilizzate nella microscopia a fluorescenza a foglio di luce per studiare l'espressione spaziale della proteina in un volume più tridimensionale. La nostra ricerca sta studiando i fattori che influenzano il rigetto del trapianto di polmone e sta sviluppando terapie per ridurre il rigetto utilizzando il nostro modello suino. Questa tecnica aiuta a comprendere i cambiamenti spaziali delle proteine che influenzano gli esiti del trapianto dopo l'intervento chirurgico.

Attualmente stiamo utilizzando questa tecnica per esplorare il panorama spaziale dell'espressione proteica nel nostro modello di trapianto di polmone suino. Speriamo che ci aiuti a comprendere meglio i meccanismi alla base delle nostre terapie sperimentali. La chiave per avere successo qui risiede negli avvistamenti di vibratomi, nelle alte ampiezze delle pale e nelle velocità di forza inferiori sono cose fondamentali da guardare se il sezionamento va male.