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Genetics

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Un protocollo universale per gRNA su larga scala produzione di libreria da qualsiasi fonte di DNA

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•

10:32 min

•

December 6th, 2017

DOI :

10.3791/56264-v

December 6th, 2017

•

Anna Köferle¹, Stefan H. Stricker¹^,²

¹MCN Junior Research Group, Munich Center for Neurosciences, Ludwig-Maximilian-Universität, BioMedical Center, ²Epigenetic Engineering, Institute of Stem Cell Research, Helmholtz Zentrum, German Research Center for Environmental Health

Riepilogo

Metodi per la generazione di librerie di gRNA su larga scala dovrebbero essere semplice, efficiente e conveniente. Descriviamo un protocollo per la produzione di gRNA librerie basate su digestione enzimatica del DNA bersaglio. Questo metodo, CORALINA (generazione della libreria completa gRNA attraverso attività controllata nucleasi) presenta un'alternativa alla sintesi del oligonucleotide personalizzato costosi.

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gRNA biblioteca

generazione della libreria

Capitoli in questo video

0:05

Title

0:48

Digestion of DNA with MNase and Separation of DNA Fragments by PAGE

3:05

Isolation of DNA Fragments from PAGE Gels and Linker Generation

4:26

End Repair of Gel-purified Fragments and Linker Ligation

5:32

Size Selection and Assembly of Vector-insert Construct

6:18

Electroporation of TG1 Electrocompetent E. coli Cells

8:38

Results: a gRNA Library can be Generated from and Target DNA

9:56

Conclusion

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