פרוטוקול זה נועד לחקות את ההגדרה הקלינית של מחלה שיורית לאחר ניתוח debulking הגידול, ולכן מאפשר לנו לבדוק טיפולים חדשים בסרטן בהקשר של ריפוי פצע לאחר הניתוח. היתרון של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת סטנדרטיזציה של כמות הפצע שנגרם ואת כמות הגידול להישאר. טכניקה זו חשובה במיוחד למחקרים פרה-קליניים בזיהוי טיפולים חדשים לסרטן, שהיא מתדרדרת באופן מקומי כדוגמה לסרקומה של רקמות רכות.
הדגמה חזותית זו היא קריטית כדי להדגים את טכניקת ההיפוך, המאפשרת לנו לחשוף את הגידול המחובר לצד העור. התחל הליך זה עם חיסון תת עורי של תאים סרטניים מוכנים בעכברים, כמתואר בפרוטוקול הטקסט. ביום 12, לאחר חיסון, כאשר גידולים הגיעו לגודל של כ 50 מילימטרים רבועים, עכברים במינון עם 100 microliters של buprenorphine תת עורית ב scruff של הצוואר, 30 דקות לפני הניתוח.
הגדר את האזור הכירורגי עם כרית החום מכוסה מעיל ספסל ולהגדיר חרוט האף עבור הרדמה. סדר ציוד כירורגי נקי, כך שהם נמצאים בהישג יד, כולל chlorhexadine, ספוגית, גזה, ג'ל עיניים, שתי מדפים מעוגלים, מספריים, מוליך קליפ, מסיר קליפ, ומילוי קליפ. מחממים את תא החימום ל-37 מעלות ומגדירים כרית חום נוספת להחלמה.
שים לב שהליך זה דורש שני אנשים. עוזר חייב לפקח על הנשימה של העכבר מקרוב במהלך ההליך. לאחר הרדמה של העכבר כמתואר בפרוטוקול הטקסט, בצע בדיקת קמצוץ ומבחן רפלקס הקרנית כדי להבטיח שהעכבר יהיה הרדמה מלאה לפני תחילת הניתוח.
מכסים את עיני העכבר בכמות קטנה של ג'ל עיניים כדי למנוע יובש בעיניים. התחל ניתוח זה על ידי חיתוי האזור הכירורגי עם כלורקסאדין. באמצעות מדפים וזוג מספריים לעשות חתך ישר סנטימטר אחד לאורך הצד הגבי, שלושה מילימטרים מהגידול.
אין לחתוך את העור ישירות מכסה את הגידול כפי שהוא לא לרפא היטב. הימנע משימוש באזמל כדי לחתוך את הגידול ולהשתמש פינצטה כדי לגרוף את החלקים. באמצעות פינצטה, למשוך את fascia ואת רקמת שומן תת עורית בין הגידול ואת צפק.
הגידול התת עורי מחובר בדרך כלל לצד העור. פתח את הפצע על ידי החזקת העור בעדינות בצד נושא הגידול באמצעות פינצטה ולהפוך את הגידול, כך שהוא נראה בחוץ. באמצעות זוג מספריים, לחתוך את קפסולת הגידול מן החצי כדי להסיר, החל מבסיס הגידול הקרוב ביותר לפתיחה.
עבור 50% ניתוח debulk, לחתוך על פני אמצע הגידול. באמצעות מדחפים מעוגלים לגרוף את החלק של הגידול כדי להסיר. אספו שרידים מאזור דבולק.
עבור 75%debulk, להתחיל על ידי ביצוע debulk גידול 50% ואז לחתוך במחצית 50% הנותרים של הגידול. לגרוף 25% מהגידול באמצעות מדפים מעוגלים. כדי לסגור את האתר הכירורגי, מניחים את הגידול הנותר בחזרה מתחת לעור באמצעות מדפים, למשוך את מדפים העור יחד בשורה העור לאורך הפצע.
החזיקו את העור יחד חמישה מילימטרים מקצה הפצע ולהשתמש קליפים כירורגיים כדי לסגור את הפצע החל בצד, הקרוב ביותר למדפים. יש למרוח כמה קליפים לפי הצורך כדי להבטיח שלא נחשפת רקמה בסיסית. בדרך כלל, שלושה עד ארבעה קליפים מוחלים עם רווחים של שני מילימטרים בין קליפים.
אפשר לעכברים להתאושש על ידי הכנסתם לתא החימום החם. מניחים את כלוב העכבר על כרית החום. לפקח על העכברים בתא החימום עד שהם התאוששו מההרדמה.
לאחר מכן, להחזיר את העכברים לכלוב, להשאיר את הכלוב על כרית החום במשך 10 דקות נוספות עד העכברים הפכו פעילים יותר. תן לעכברים אוכל רטוב ורך. לפקח על העכברים שעה אחת לאחר הניתוח להחלמה.
נטר את העכברים שוב בסוף היום ובבוקר שלמחרת וודא שהסרטונים נשארים במקום. לטפל בעכברים perioperatively עם הרפתקה או טיפול neoadjuvant בכל זמן נתון, בהתאם לטיפול עניין. לדוגמה, לטפל בעכברים עם מנה אחת של 100 מיקרוגרם של אנטי CTLA-4 תוך פרטית ביום 15 לאחר חיסון.
לחלופין, יש לטפל בעכברים בשלוש מנות של 200 מיקרוגרם של אנטי-PD-1 תוך-חיים בימים, 15, 17 ו-19 לאחר החיסון. כריתה כירורגית לא שלמה של 50 גידולים מילימטר מרובע, המצוין כאן על ידי קו מנוקד תוצאות 100%reroducible צמיחה מחדש של הגידולים בהעדר אימונותרפיה סדג'ובנטי. לכן, גידול הגידול לגודל של 50 מילימטרים רבועים הוא גודל אידיאלי עבור debulk חלקית.
המודל שימש אז לבדיקת immunotherapies תריס באמצעות נוגדנים נגד מודולים מחסום, לימפוציטים T cytotoxic הקשורים חלבון ארבע קולטן מוות מתוכנת אחד. טיפול בעכברים עם אנטי CTLA-4, הביא שיעור ריפוי של 80%ואילו טיפול בעכברים עם אנטי PD-1 הביא שיעור ריפוי של 25%התגובה עם אנטי PD-1 מספק הזדמנות לבדוק את זה שילובים חדשניים, כדי לשפר עוד יותר את שיעור התגובה. חשוב שהגידול הנותר יישאר מחובר לעור, אחרת אספקת הדם תיחתך והגידול יהפוך לנמק.
בעקבות הליך זה, גידולים ניתן לנתח על ידי מגוון רחב של שיטות, כגון ציטומטריה זרימה על מנת להעריך כיצד ניתוח משפיע על תאים חודרים הגידול. מודל העכבר הזה איפשר לנו לחקור כיצד ריפוי פצעים משפיע על חיסונים של סרטן.
