השיטה הסנובית הסלקטיבית היא משמעותית משום שהיא מציעה לחוקרים מודל לשחזור ולא קטלני לחקר פגיעה חריפה בריאות, הגורם העיקרי לתסמונת מצוקה נשימתית חריפה בבני אדם. היתרון של הטכניקה האינטר-ברונכיאלית הסלקטיבית הוא לוקליזציה של התגובה הדלקתית לריאות השמאליות המציעה את הריאה הימנית כשליטה בלתי פצועה ומזעור המצוקה של בעלי החיים. הדגמת הליך זה יהיה אלכסנדר Tavares, טכנאי וסטודנט לתואר ראשון במעבדה שלנו.
כדי להכין 0.1 חומצה הידרוכלורית נורמלית, להוסיף 11 מיליליטר של מים מזוקקים כפולים לבקבוק זכוכית ענבר, ואחריו תוספת איטית של מיליליטר אחד של 37%12 חומצה נורמלית. לאחר מכן, להוסיף לאט ארבעה מיליליטר של חומצה נורמלית אחת עובד מלאי לתוך 35 מיליליטר מים מזוקקים כפול בצינור חרוט 50 מיליליטר. לאחר מכן השתמש בגשוש pH אלקטרוני כדי למדוד את ה- pH של פתרון המלאי הרגיל 0.1, titrating ל- pH של 1.1 באמצעות נתרן הידרוקסידי או פתרון מלאי חומצה לפי הצורך לנפח סופי של 40 מיליליטר.
לפני תחילת ההליך, לסנן אחד עד שני מיליליטר של פתרון החומצה באמצעות מסנן מיקרוליטר סטרילי 0.22 לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי ולאשר חוסר תגובה רפלקס כאב בעכבר הרדמה. באמצעות קוצץ חשמלי בשבץ איטי כלפי מטה לגלח בעדינות את האזור הכירורגי על פני השטח הגחוניים של העכבר מתחת לסנטר באזור צוואר הרחם של הגרון. הסר כל שיער רופף, ולנגב את העור החשוף עם שלושה תווי יוד 10%povidone רצופים 70% isopropyl אלכוהול ספוגיות.
כאשר העור כבר מוכן, מניחים את העכבר בתמונת supine על לוח כירורגי נקי, ולכסות את החיה עם וילון כירורגי סטרילי. הפוך פתח אורך 0.5 ס"מ בעור מעל קנה הנשימה ובלוטות הרוק, ולהשתמש ממטרים משונן מעט מעוקל כדי לסגת בזהירות את העור. מפרידים בעדינות את בלוטות הרוק כדי לחשוף את שרירי קנה הנשימה ולהשתמש בממטרים משונן מעט מעוקל כדי לדחוף בעדינות לגזרים את השרירים הצנחנים.
להקניט את fascia המקיף את קנה הנשימה עד הטבעות סחף של קנה הנשימה נחשפים לחלוטין, ולהשתמש מלקחיים משונן מעוגל לחלוטין כדי לעבוד משם את רקמת החיבור בין רטרוטרצ'ה ואת retrofascia. החלק מדפים משונים מעוגלים לחלוטין מאחורי קנה הנשימה והרם את קנה הנשימה. ברגע קצה המלקחיים הוא מאחורי קנה הנשימה, לתפוס חתיכה 10 עד 15 ס"מ של תפר משי קלוע 4-0 עם קצות המלקחיים ולמשוך את התפר מאחורי קנה הנשימה, כך שיש אורך שווה משני הצדדים.
הלוח הכירורגי עשוי להיות פנה כדי לקרב את האזור הכירורגי ליד הדומיננטית לשלבים הבאים. ואז בעדינות למשוך את הקצוות של התפר לכיוון החלק הראשון של העכבר, ולהחזיק את הקצוות במקום. עבור cannulation של הסוכר mainstem השמאלי, לחשוף את המחט של 24-מד על ידי אנגיוקטר 3/4 אינץ' ולהכניס את הצד משופע המחט לאזור הפנימי של קנה הנשימה בין טבעות קנה הנשימה הראשון והשני.
כאשר קצה המחט ניתן לדמיין בתוך לומן קנה הנשימה, לשחרר את התפר ולקדם את cannula מעל המחט לתוך קנה הנשימה angling לכיוון הצד האחורי השמאלי של העכבר. כאשר נתקלו בהתנגדויות, משיכת המחט. לאחר שה cannula הוא במקום, בחוזקה לתפוס את יציאת ההזרקה כדי למנוע קטטר מסט ולהבטיח קצה מיקרופיגט P-200 בתוך הנמל.
ואז להחדיר 50 microliters של פתרון חומצה נורמלית מסוננת 0.1 לתוך קטטר, ואחריו נפח שווה של אוויר. צעד זה דורש מניפולציה מדויקת של ה cannula, בעוד דרכי הנשימה של חסום, ויש להשלים במהירות ובחלקה כדי לשחזר את זרימת האוויר הנכונה כדי למזער את הנזק בדרכי הנשימה. למשוך במהירות את הקטטר ולהטות את הלוח הכירורגי בזווית של 60 מעלות.
לאחר 30 שניות, להניח את הלוח הכירורגי שטוח, ולהסיר את התפר מאחורי קנה הנשימה. לאחר מכן השתמש בתפר משי קלוע מצופה שעווה 4-0 כדי לסגור את חתך העור עם שניים עד שלושה תפרים. הפציעה הריאותית החריפה הנובעת מההטבה של חומצה תוך-ברונכיאלית מערבת את כל הריאה השמאלית.
ואכן, בעקבות ניהול תוך ורדם של צבע כחול אוונס ו תדלוק ריאות, הצבע מזוהה רק בתוך הריאה השמאלית. כימות של פזרנות הצבע לתוך הריאה השמאלית גדל באופן משמעותי יחסית להחדיר סלקטיבית מזויפת. נויטרופילים Interstitial לצבור בריאה השמאלית 24 שעות לאחר החדרת חומצה בניגוד הריאה הימנית שבה כמה נויטרופילים interstitial נצפו.
היסטולוגיה של הריאות חושפת פגיעה ברקמות ודלקת ברמות האיברים והתאיים עם דלקת אקסודיסטיבית 24 שעות לאחר הפציעה כפי שהיא מאופיינת בצקת מטח מסומנת וחדירת נויטרופילים בריאה השמאלית. שים לב כי חוסר פציעה משמעותית או זרם לויוציט לתוך הריאה הימנית שליטה בלתי פצועה. 72 שעות לאחר פציעה בצקת ומסתננים הסלולר מופחתים באופן משמעותי המייצג שלב exudative פתרון.
כפי שהוערך על ידי ציטומטריה זרימה, נויטרופילים alveolar להגדיל את הריאה השמאלית 24 שעות לאחר הפציעה הראשונית, ולהקטין באופן משמעותי ב 48 ו 72 שעות. חשוב לדמיין את הקטטר בקנה הנשימה לפני התקדמות. זווית cannula לכיוון הסמפנוס mainstem השמאלי במהלך החדרה ופעל החדרת החומצה עם 50 microliters של אוויר.
ניתוח נוזלי lavage ברונכואלוולרית, היסטולוגיה של ריאות, פנוטיפים של תאי מערכת החיסון על ידי ציטומטריית זרימה, הדמיית עכבר חיה ובדיקות תפקודי ריאות יכולות להתבצע כולם כדי להעריך את הדלקת והרזולוציה. הפיתוח של מודל זה מוגבל עצמית של פגיעה ריאות חריפה אפשרה לחוקרים לתרום תרומות משמעותיות לתחום הביולוגיה פתרון. זכור כי חומצה הידרוכלורית מרוכזת מסוכנת וצריך לטפל בה במכסה המנוע הכימי כשהיא לובשת את ציוד המגן האישי המתאים.
