Name: pseudomonas aeruginosa induced lung injury model
Uploaded: 2014-10-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model at JoVE.com

This work was supported by National Institutes of Health grants HL105947-01 (YL), HL07829-16 (AM), HL090152 (AM).

הניסויים בבעלי החיים אושרו בועדת הטיפול בבעלי חיים וועדות בטיחות הביולוגית המוסדית של אוניברסיטת אילינוי בשיקגו. הערה: כל הנהלים הקשורים Pseudomonas יש לבצע עם רמת הבטיחות הביולוגית 2 שיטות (BSL2), אשר כוללות, אך לא מוגבלות ל: מסכה, משקפי מגן, שמלה או חליפת הגוף, וכפפות כפולות. לעבוד בקבינט בטיחות ביולוגי מוסמך. פנק את המכשירים במגע עם חיידקים עם חומר חיטוי מבוסס אקונומיקה או כלור דו-חמצני. השתמש בקופסה אטומה עבור דגימות תחבורה. 1. פ aeruginosa תרבות וצמיחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החנות פ aeruginosa PA103 כמו מנית חיידקים בכובע בורג cryovial ב -80 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצנצנת במעמד בקופסא עם מגבות נייר רטוב אתנול 70% ולקחת למעבדה רמת בטיחות הביולוגית 2 (BSL2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פס החיידקים על גבי צלחות אגר דם כבשים ולגדול ב 37 מעלות צלזיוס במשך ~ 15 שעות באינקובטור. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> בברדס BSL2, לשרוט את החיידקים מצלחת עם לולאת חיידקים וגלול ב 5 מיליליטר PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את המניה ב 4 מעלות צלזיוס למשך עד 3 חודשים. עם זאת, לקבוע את כייל כל 2 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סדרתי לדלל את החיידקים בPBS (בדרך כלל מ1:10 4 ל1:10 7) וצלחת את הדילול הידוע על צלחות אגר דם כבשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הצלחות במשך ~ 15 שעות. רוזן מושבות ולחשב מושבה יחידה להרכיב (CFU) כדי לקבוע את ריכוז חיידקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend הריכוזים המתאימים (~ 5 x 10 3 CFU / μl) ב0.5 מיליליטר PBS ב 1.5 מיליליטר cryovials כובע בורג סטרילי. חותם את cryovials ולמקם אותם במעמד cryovial על מגבות נייר עמוסות חומר חיטוי בקופסא מכסה הצמד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את התיבה למתקן בעלי החיים BSL2. ברגע שיש, לפתוח את התיבה בממשלת BSL2. </li></ol> 2. פ aeruginosa החדרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע סביבה נקיה מחיידקי ניתוח הישרדות (כפפות סטריליות, כלים סטריליים, וטכניקות ספטית). השתמש בוילון סטרילי כדי לספק משטח עבודה עבור מכשירי ניתוח סטרילי (autoclaved). לעקר מכשירים באמצעות מעקר חרוז חם בין כל הליך החדרה לקנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול עכברים לפני הרדמה. הרדימי עכברים עם קטמין (100 מ&quot;ג / קילוגרם), xylazine (5 מ&quot;ג / קילוגרם), ב0.1-0.2 מיליליטר PBS intraperitoneally (IP). לקביעת היעילות של ההרדמה על ידי אי-היענות לקמצוץ הבוהן. השתמש במשחת וטרינר על עיניים למניעת יובש בהרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרסן את העכברים על לוח כירורגית בקבינט BSL2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את האזור לחתוך כלפי מטה. לגלח אזור זה ולהכין את העור באמצעות לסירוגין מטליות יוד אלכוהול וpovidone 3 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את אזור החתך עם הרדמה מקומית (לידוקאין) והרדמה זו, די בניתוח קטן כמו חתך בעור כדי לגשת לקנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן (5 מ&quot;מ בערך) על קו האמצע של הצוואר, ולהשתמש F הבוטהorceps להזיז בעדינות את השרירים לגישה לקנה הנשימה. לחשוף את קנה הנשימה על ידי נתיחה כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצייר פתרון חיידקים לתוך מזרק חד פעמי 1 מיליליטר עם 27 מחט G. עבור כל עכבר, לנהל 20-30 μl של חיידקים בריכוז המתאים (עד 10 5 CFU כל עכבר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מחט לתוך קנה הנשימה. הזרק פתרון לאט לתוך קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שההתנשפויות של בעלי החיים, אשר בדרך כלל מצביעה על הפתרון שהגיעו לריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הפצע עם תפרים סטריליים (6-0 monofilament) בתנאי ספטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות על ידי הזרקה תת עורית כשיכוך כאבים לאחר הניתוח לטיפול בכאב לאחר ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהזמן הנדרש מאינדוקצית הרדמה ראשונית לחתך סגר הוא פחות מ -15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזרקה, להיפטר ממזרקים ומחטים במכל חד Biohazard מתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את מכשירי ניתוח עם דסק&quot;ש מבוסס כלור דו-חמצניnfectant במשך 15 דקות, לשטוף ולחזור למעבדה לעיקור ולעשות שימוש חוזר במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בית העכברים ביחידים בכלובים נקיים בסביבה חמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו על בעלי החיים בכל 30 דקות עד שהוא חוזר להכרה ומתחיל לנוע; ולאחר מכן במרווחים של 12 שעות לניתוח שלאחר 3 ימים הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על העכברים במתקן BSL2 בעלי החיים לאורך כל הניסוי. ודא שהרקמה היחידה הכלולה בקופסא אטומה עוזבת את מתקן BSL2 בעלי החיים. אם העכברים לבטא כל אחת מההתנהגויות גוססות (שהוגדר כמצוקה נשימתית, עייפות, אי ambulate בתגובה לגירוי עדין) בכל נקודה במחקר, להרדים את העכברים על ידי ה- CO 2 שאיפה ממקור בבקבוקים ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את נושא הניסיון על ידי exsanguination תחת הרדמה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף רקמת ריאה מעכברים מורדמים. לבצע הליכים אלה בברדס BSL2. במידת הצורך, להעביר את המדגם באמצעות צינורות אטומים ממוקמים בRACk על מגבות נייר עמוסות חומר חיטוי בקופסא מכסה הצמד לתהליך נוסף. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+respiratory+distress+syndrome.">The acute respiratory distress syndrome.</a> N Engl J Med. 342, 1334-1349 (2000).</li><li>Matthay, M. A., Ware, L. B., Zimmerman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+respiratory+distress+syndrome.">The acute respiratory distress syndrome.</a> J Clin Invest. 122, 2731-2740 (2012).</li><li>Shimabukuro, D. W., Sawa, T., Gropper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+and+repair+in+lung+and+airways.">Injury and repair in lung and airways.</a> Crit Care Med. 31 (8), 524-531 (2003).</li><li>Wansleeben, C., Barkauskas, C. E., Rock, J. R., Hogan, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+of+the+adult+lung:+Their+development+and+role+in+homeostasis,+regeneration,+and+disease.">Stem cells of the adult lung: Their development and role in homeostasis, regeneration, and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2, 131-148 (2013).</li><li>Singleton, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamin+2+and+c-abl+are+novel+regulators+of+hyperoxia-mediated+nadph+oxidase+activation+and+reactive+oxygen+species+production+in+caveolin-enriched+microdomains+of+the+endothelium.">Dynamin 2 and c-abl are novel regulators of hyperoxia-mediated nadph oxidase activation and reactive oxygen species production in caveolin-enriched microdomains of the endothelium.</a> J Biol Chem. 284, 34964-34975 (2009).</li><li>Sadikot, R. T., Blackwell, T. S., Christman, J. W., Prince, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen-host+interactions+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia.">Pathogen-host interactions in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> Am J Respir Crit Care Med. 171, 1209-1223 (2005).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxm1+mediates+the+progenitor+function+of+type+ii+epithelial+cells+in+repairing+alveolar+injury+induced+by+pseudomonas+aeruginosa.">Foxm1 mediates the progenitor function of type ii epithelial cells in repairing alveolar injury induced by pseudomonas aeruginosa.</a> J Exp Med. 208, 1473-1484 (2011).</li><li>Kurahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+septic+shock+in+pseudomonas+aeruginosa+pneumonia.">Pathogenesis of septic shock in pseudomonas aeruginosa pneumonia.</a> J Clin Invest. 104, 743-750 (1999).</li><li>Kumar, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+airway+stem+cells+yield+alveoli+in+vitro+and+during+lung+regeneration+following+h1n1+influenza+infection.">Distal airway stem cells yield alveoli in vitro and during lung regeneration following h1n1 influenza infection.</a> Cell. 147, 525-538 (2011).</li><li>Delano, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis+induces+early+alterations+in+innate+immunity+that+impact+mortality+to+secondary+infection.">Sepsis induces early alterations in innate immunity that impact mortality to secondary infection.</a> J Immunology. 186, 195-202 (2011).</li><li>Lange, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+sepsis+following+smoke+inhalation+injury.">A murine model of sepsis following smoke inhalation injury.</a> Biochem Biophys Res Commun. 391 (3), 1555-1560 (2010).</li><li>Kobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+chemokines+in+neutrophil+biology.">The role of chemokines in neutrophil biology.</a> Front Biosci. 13, 2400-2407 (2008).</li><li>Matute-Bello, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+lung+injury.">Animal models of acute lung injury.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, L379-L399 (2008).</li><li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+immunomodulation+of+the+nf-kappab+pathway+in+airway+epithelium+impacts+host+defense+against+pseudomonas+aeruginosa.">Targeted immunomodulation of the nf-kappab pathway in airway epithelium impacts host defense against pseudomonas aeruginosa.</a> J Immunol. 176, 4923-4930 (2006).</li><li>Pinto, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+experimental+model+of+neutrophilic+pulmonary+response+induction+in+mice.">Development of an experimental model of neutrophilic pulmonary response induction in mice.</a> J Pneumologia. 29, 213-214 (2003).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

מודל פציעת ריאות עכבר Pseudomonas שאנחנו מתארים כאן מחקה את כל התהליך של דלקת, פציעת ריאות, תיקון, ורזולוציה המתרחש בעקבות פציעת ריאות חריפה או דלקת ריאות. יש לו יתרונות ייחודיים השוואה עם מספר מודלים פציעה אחרים בכך שהוא קליני רלוונטי ובטוח יחסית וקל לטפל. השלב הקריטי בהליך הוא שההזרקה של תמיסת חיידקים צריך להיות איטיים מאוד. אם הזריקה היא מהירה מדי, העכברים עלולים למות בחנק. לאחר זריקה מוצלחת, העכברים בדרך כלל להראות כמה נשימות עמוקות ונשימה, אשר תסייע לחיידקי חלקיקים להיכנס לריאות. המתח השתמשנו היה PA103 6. אחת הנקודות הקריטיות של המודל הזה הוא שכייל של פ aeruginosa צריך להיות מבוקר היטב. אצווה של פ aeruginosa ממקור אחר יכול להראות דרגות שונות של דלקת ונזק גם כאשרשימוש באותו CFU. לכן, מומלץ כי כל קבוצה חדשה של חיידקים שנבדקה השפעות סיבתי (כגון דלקת, שגשוג תאים, וכו &#39;), ובהתאם לכך להתאים את מספר CFU לשימוש. אם חוסר עקביות של תוצאות מתרחשת באמצעות מניות חיידקים בקירור, ניתן להשתמש במלאי טרי מתקבל על ידי חיידקים גדלו מצלחת טרי עבור כל ניסוי. בנוסף, שלב הצמיחה של החיידקים והבחירה של תקשורת יכול גם להיות השפעה על ההשפעה על תגובת המארח. לכן, יש להקפיד על מנת להבטיח כי חיסונים חיידקים להתרחש במהלך אותו השלב של מחזור צמיחת החיידקים. אולי יש הבדל בתגובה לפ aeruginosa על ידי זנים שונים של עכברים. המתח השתמשנו היה תערובת של C57BL / 6 וFVB / N. פ המתאים כייל aeruginosa יש לקבוע עבור זני עכברים שונים. גורם אחד לשקול עבור דגם זה הואשפגיעתו של החיידק אינה מוגבלת לסוג תא אחד. לדוגמא, אפיתל, אנדותל, פיברובלסטים יכולים כל נפגעו. לכן, מודל זה אינו מתאים לכדי לחקור את ההשפעות של פציעות ריאות ספציפיות תאים מסוג. החיידקים גורמים למוות של תאי ריאה על ידי גירוי תגובות דלקתיות, כמו גם על ידי הפרשת רעלים לרקמות 6. חיידקים חיים בדרך כלל נעלמים מהריאות בתוך לאחר פציעה 48 שעות 7,14. ריכוז גבוה של חיידקים מתים יכול גם לגרום נזק על ידי גרימת תגובות דלקתיות 15. המנגנונים של פגיעת ריאות ותיקון צפויים להיות שונה בתגובה לסוגים שונים של פציעת ריאות. לכן, חשוב להשוות את מספר דגמי פציעה. פ מודל aeruginosa שתואר כאן הוא תוספת נחמדה לדגמים האחרים.

ריאות נחשפות לפתוגנים סביבתיים ורגישות לדלקת והפגיעה 1-3. במהלך מצבים פתולוגיים כגון דלקת ריאות או מצוקה נשימתית מבוגר תסמונת (ARDS), פתוגנים כמו גם גורמים דלקתיים שפורסמו על ידי כדוריות דם לבנות לגרום לפציעה ולמוות של תאי שומן 1-3. חשוב לפתח מודלים של בעלי חיים לפגיעה ריאות חריפות כדי להקל על המחקר של הפתולוגיה של פגיעה, כמו גם מנגנון של תיקון. נכון לעכשיו, רוב האנשים משתמשים במודלי פציעת ריאות hyperoxia ועכבר מושרה בליאומיצין 4. עם זאת, המנגנונים של hyperoxia גרמו לפציעה היא לא אותו הדבר כמו רוב פציעות ריאות שכיחות המתרחשות במהלך דלקת ריאות או ARDS 5. פציעה אקוטית נגרמת בליאומיצין היא נדירה בהקשר קליני 4. כאן אנו מדווחים מודל פציעת ריאות עכבר באמצעות זריקה תוך קנה הנשימה של פ aeruginosa 6,7. מודל זה הוא רלוונטי מבחינה קלינית, ומחקה את processes שיקרה בעקבות דלקת ריאות 8. כפתוגן אופורטוניסטי, nosocomial של אנשים מדוכאי חיסון, פ aeruginosa בדרך כלל מדביק את מערכת הריאות, בדרכי שתן, כוויות, פצעים, וגם גורם לזיהומים בדם אחרים 6. החיידקים לשחרר exotoxin גורם ארסיות, להתרבות ולגרום לתגובה חיסונית 6. ממשל Intra-trachael של פ aeruginosa משקף את המצב בחשיפה של בני אדם לחיידק שגורם לדלקת ריאות ופתולוגיה עשויה להיות שונה מהמודל שדיווח לאחרונה H1N1 וירוס שפעת הריאות הנגרמות פציעת 9. מאז פ aeruginosa הוא פתוגן אופורטוניסטי, זה בטוח יחסית לטיפול, בהשוואה לחלק מגורמי המחלה האלימה יותר. כאן השתמשנו בהזרקה תוך קנה הנשימה לנהל את החיידקים כי אנחנו ציינו כי שיטה זו הציגה יותר חיידקים לאזור alveoli הדיסטלי של הריאה בהשוואה לכמה נהלים אחרים כגון שימוש בצנתר דרך פה. בהשוואה לדגמי פציעת ריאות חריפות אחרים, פ מודל aeruginosa שתואר כאן הוא מתאים ללימוד פציעת ריאות הנגרמת על ידי חיידקים ועל ידי דלקת מופרזת. בניגוד למודלים של בעלי חיים אחרים המשתמשים בפ aeruginosa לגרום אלח דם 10,11, כאן אנו משתמשים בהזרקה תוך-קנה הנשימה של חיידקים אלה לגרום לפגיעת ריאות חריפה מקומית.

<table><tbody><tr><td>Anesthetic: Ketamin, xylazine, lidocaine, buprenorphine</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical grade</td></tr><tr><td>27 G needle</td><td>Fisher</td><td>1482648</td><td></td></tr><tr><td>syringe</td><td>Fisher</td><td>14823434</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>scissors</td><td>Fine Science tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>forceps</td><td>Fine Science tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>suture&amp;nbsp;</td><td>Fisher</td><td>19-037-526</td><td></td></tr><tr><td>Eye gauge, glove, gown</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biosafety Cabinet</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>chlorine dioxide based disinfectant</td><td></td><td></td><td>Clidox</td></tr><tr><td>sheep blood agar plates&amp;nbsp;</td><td>Medex supply</td><td>HL-1160</td><td></td></tr></tbody></table>

pseudomonas aeruginosa induced lung injury model

על מנת ללמוד פציעת אדם חריפה ריאות ודלקת ריאות, זה חשוב לפתח מודלים של בעלי חיים כדי לחקות את התכונות פתולוגיים שונות של מחלה זו. כאן יש לנו פיתחנו מודל פציעת ריאות עכבר על ידי הזרקה תוך קנה הנשימה של חיידקי Pseudomonas aeruginosa (פ aeruginosa או הרשות הפלסטינית). שימוש במודל זה, שהיינו מסוגל להראות דלקת ריאות בשלב המוקדם של פציעה. בנוסף, דליפות מחסום האפיתל נֹאדִי נצפו על ידי ניתוח שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL); והמוות של תאי נֹאדִי נצפה על ידי assay Tunel באמצעות רקמה הוכנה מריאות נפגעו. בשלב מאוחר בעקבות פציעה, שצפינו התפשטות תאים הנדרשת לתהליך התיקון. הפציעה הוחלט 7 ימים מהייזום של פ הזרקת aeruginosa. מודל זה מחקה כמובן רציף של דלקת ריאות, פגיעה ותיקון בדלקת ריאות. מודל חיה רלוונטי מבחינה קלינית זה מתאים ללימוד פתולוגיה, מנגנון של תיקון, וollowing פציעת ריאות חריפה, והוא יכול גם לשמש לבדיקת סוכנים טיפוליים פוטנציאליים למחלה זו.

החל מ 24 - לאחר שעות 72 P. הזרקת aeruginosa, תאי מוגבר נצפה בחלקי ריאה (איור 1 א-ד). הריאות החלו להתאושש מהודעת 96 שעות פציעה (איור 1E). בשעת 7 ימים הודעה P. aeruginosa, מורפולוגיה alveoli נורמלית שוחזרה במידה רבה (איור 1F). חלקי ריאה באמצעות מכתים מנהרה שהוכנו בהודעת שעה 24 P. aeruginosa הראה מוות של תאים בתאי alveoli (איור 1G-I). על מנת ללמוד את תהליך התיקון במודל פגיעה זו, BrdU הוזרק לעכברים בגיל 3 ימים לאחר פ aeruginosa. ריאות היו מבודדות בהזרקה שלאחר BrdU 5 שעות ומעובד למכתים נוגדן BrdU. כפי שניתן לראות באיור 1J וK, גדל באופן משמעותי מספרם של התאים המאוגדת BrdU בעמדת שעות 72 P. ממשל aeruginosa מצביע פרוליפרציה מוגברת. כדי לחקור את השינוי במחסום לפציעת meability ופוסט דלקת, שטיפה ברונכואלוואולרית נוזל (BAL) נאספה בנקודות זמן שונות לפרסם P. הזרקת aeruginosa. ריכוז החלבון בBAL היה גדל באופן משמעותי בעמדת שעות 48 P. הזרקת aeruginosa (איור 2 א), המצביעה על דליפות מחסום האפיתל. המספרים הסלולריים בBAL גם גדלו באופן משמעותי בעמדת שעות 48 P. הזרקת aeruginosa (איור 2), המצביעה על תגובה דלקתית. ב 4 - 5 ימים שלאחר פ הזרקת aeruginosa, הן ברמת חלבון BAL ומספר התא התחילו להקטין התאוששות טוענת (איור 2 א, ב &#39;). יתר על כן, lysate ריאות נאסף בנקודות שונות שלאחר פ ממשל aeruginosa והרמה של מקרופאג החלבון דלקתי 2 (MIP2), ציטוקינים מעורבים במשיכה של נויטרופילים 12, נמדדו על ידי ELISA. עולה בקנה אחד עם תוצאות ניתוח BAL, רמת MIP2 increa באופן משמעותי<html> sed בעמדת שעות 48 P. ההזרקה וaeruginosa חזר לרמה בסיסית בעמדת שעות 96 P. הזרקת aeruginosa (איור 2 ג). יתר על כן, תאים מBAL היו קבועים על שקופיות זכוכית ונתונים לצביעת המטולוגיה. ללא פ aeruginosa, היה רק מספר קטן של מונוציטים בנוזל BAL (איור 2 ד). בניגוד לכך, כמות גדולה של נויטרופילים נכחו בBAL מבודד בעמדת שעות 48 P. הזרקת aeruginosa (2E איור). בדואר שעות 96 P. הזרקת aeruginosa, הרכב התא של BAL חזר לרמת השליטה (איור 2F). לסיכום, תוצאות באיור 2 מצביעות על תגובה דלקתית חריפה neutrophilic יחד עם חדירות מוגברות alveoli מחסום ועלייה בריכוזי ציטוקין, שהם כולם סימני ההיכר של פציעת ריאות חריפה 13. בכל הניסויים, זה הזרקה של תמיסת מלח שימשה כבקרה. ve_content &quot;&gt; חלק מהנתונים, כולל H וצביעת E, תיוג BrdU, assay TUNEL, ניתוח BAL ומדידת רמת MIP2, פורסם בעבר 7. במאמר זה, שחקרנו את התפקיד של FoxM1, גורם שעתוק, בתיקון פציעה נֹאדִי באמצעות מודל פציעת ריאות פ aeruginosa המתואר כאן 7. <img alt="איור 1" fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/52044/52044fig1highres.jpg" width="600" /> איור 1. היסטולוגיה, מוות של תאים והתרבות בפ מודל פציעת ריאות עכבר תיווך aeruginosa. בידוד (AF) ריאות, חתך וצביעת H / E בוצעה באמצעות פ אינו הזריק-aeruginosa (לא PA) ריאות שליטה (), כמו גם ריאות ב 24 שעות (ב &#39;), 48 שעות, 72 שעות (ד) (ג), 96 שעות (E), 7 ימים (F) פוסט פ aeruginosa בjection (פוסט-PA). (GI) סעיפי ריאות הוכנו מריאות שליטה (G) ו- 24 שעות שלאחר פ aeruginosa הוזרק לריאות (H, I) ולהמשיך לassay TUNEL לזהות מוות של תאים. חלקי ריאות היו מוכתמים עבור סמן תא אפיתל הריאה Sp-C (כחול), T1α (אדום) כדי להראות מורפולוגיה וגם מוכתמים עבור TUNEL (ירוק). חיצים ב( H) מצביעים על תאים חיוביים TUNEL. (J, K) BrdU הוזרק בפ אינו aeruginosa הוזרק עכברים (J) ופוסט שעות 72 P. aeruginosa הוזרק עכברים (K) על ידי ה- IP, ריאות הוכנו בהזרקה שלאחר BrdU 5 שעות ומעובד למכתים נוגדן נגד BrdU (כתמים ירוקים). בר סולם = 60 מיקרומטר לAF, 50 מיקרומטר עבור G ו- H, 20 מיקרומטר לי, ו 100 מיקרומטר לJ ו- K. נתון זה שונה מיו <eמ &#39;&gt; et al. 7. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52044/52044fig1highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/52044/52044fig2highres.jpg" width="600" /> איור 2. חדירות מחסום נֹאדִי והדלקת הבאות בפ aeruginosa מושרה פציעת ריאות. (A, B) BAL נאסף מהשליטה ופ aeruginosa טופל ריאות. () ריכוז חלבון בBAL עלה בפוסט שעות 48 P. הזרקת aeruginosa וירד ב 96 שעות, 5 ימים הודעה P. מספרים סלולריים סה&quot;כ aeruginosa הזרקה. (ב) בBAL עלו בפוסט שעות 48 P. הזרקת aeruginosa (B) ורמת שליטת retuned בעמדת שעות 96 P. הזרקת aeruginosa. (ג) 2 MIP רמות נמדדוlysates ריאות ing מבודד מעכברי שליטה, כמו גם עכברים ב 48 שעות ו 96 פוסט שעות פ הזרקת aeruginosa. הנתונים הוצגו בממוצע ± SE, n ≥ 3. (DF) תאים מBAL היו centrifuged וקבוע על שקופיות זכוכית ונתונים לצביעת HEMA3. מספר קטן של מונוציטים נכחו בBAL של עכברי שליטה (ד &#39;). כמות גדולה של נויטרופילים נכחו בBAL מבודד בעמדת שעות 48 P. הזרקת aeruginosa (E). בדואר שעות 96 P. הזרקת aeruginosa, היו מספר קטן של מונוציטים בBAL (F). בר סולם = 10 מיקרומטר, תוצאות אלה הן נציג של לפחות 5 ניסויים בלתי תלויים. נתון זה שונה מהאח ליו אל. 7. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52044/52044fig2highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model at JoVE.com

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant.

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

pseudomonas-aeruginosa-induced-lung-injury-model

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

18.4K Views.  University of Illinois at Chicago. We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant. 

Video: Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

כרוני לטווח ארוך<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; זיהום דרכי הנשימה בעכברים

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models of ALI are key in enhancing our understanding of disease pathogenesis. Lipopolysaccharide (LPS) derived from gram positive bacteria induces neutrophilic inflammation in the airways and lung parenchyma of mice. Efficient pulmonary delivery of compounds such as LPS is, however, difficult to achieve. In the approach described here, pulmonary delivery in mice is achieved by challenge to aerosolized Pseudomonas aeruginosa LPS. Dissolved LPS was aerosolized by a nebulizer connected to compressed air. Mice were exposed to a continuous flow of LPS aerosol in a Plexiglas box for 10 min, followed by 2 min conditioning after the aerosol was discontinued. Tracheal intubation and subsequent bronchoalveolar lavage, followed by formalin perfusion was next performed, which allows for characterization of the sterile pulmonary inflammation. Aerosolized LPS generates a pulmonary inflammation characterized by alveolar neutrophilia, detected in bronchoalveolar lavage and by histological assessment. This technique can be set up at a small cost with few appliances, and requires minimal training and expertise. The exposure system can thus be routinely performed at any laboratory, with the potential to enhance our understanding of lung pathology.

We describe a method for inducing neutrophilic pulmonary inflammation by challenge to aerosolized lipopolysaccharide by nebulization, to model acute lung injury. In addition, basic surgical techniques for lung isolation, tracheal intubation and bronchoalveolar lavage are also described.

שיטה ליצירת ריאות neutrophilia שימוש התרסיס lipopolysaccharide

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

לומד קהילות חיידקים<em&gt; In vivo</em&gt;: דגם של אינטראקציה בתיווך בין מארח<em&gt; קנדידה אלביקנס</em&gt; ו<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; באיירווייס

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, preferably in models which mimic the intended clinical indication. A method for inducing robust lung infections in immunocompetent rats and mice is described which allows for the assessment of treatments in a model of serious pneumonia caused by S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae or A. baumannii. Animals are anesthetized, and an agar-based inoculum is deposited deep into the lung via nonsurgical intratracheal intubation. The resulting infection is consistent, reproducible, and stable for at least 48 h and up to 96 h for most isolates. Studies with marketed antibacterials have demonstrated good correlation between in vivo efficacy and in vitro susceptibility, and concordance between pharmacokinetic/pharmacodynamic targets determined in this model and clinically accepted targets has been observed. Although there is an initial time investment when learning the technique, it can be performed quickly and efficiently once proficiency is achieved. Benefits of the model include elimination of the neutropenic requirement, increased robustness and reproducibility, ability to study more pathogens and isolates, improved flexibility in study design and establishment of a challenging infection in an immunocompetent host.

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. אינפלואנזה</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; או<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the pro-inflammatory capabilities of various factors is challenging and requires terminal procedures, such as bronchoalveolar lavage and the removal of lungs for in situ analysis, precluding longitudinal visualization in the same mouse. Here, lung inflammation is induced through the intratracheal instillation of Pseudomonas aeruginosa culture supernatant (SN) in transiently transgenized mice expressing the luciferase reporter gene under the control of a heterologous IL-8 bovine promoter. Luciferase expression in the lung is monitored by in vivo bioluminescent image (BLI) analysis over a 2.5- to 48-h timeframe following the instillation. The procedure can be repeated multiple times within 2 - 3 months, thus permitting the evaluation of the inflammatory response in the same mice without the need to terminate the animals. This approach permits the monitoring of pro- and anti-inflammatory factors acting in the lung in real time and appears suitable for functional and pharmacological studies.

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

The method described here allows for the visualization of IL-8 promoter-dependent inflammation activation in the lungs of mice through non-invasive bioluminescence imaging (BLI). The same animal can be subjected to BLI multiple times for up to two months from the time of delivery of the luciferase reporter construct.

דגם IL-8 עכבר transgenized חולף עבור<em&gt; בויבו</emמעקב ארוך טווח אחר תגובות דלקתיות

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

להרחיב הנשמת קיבת חומצה שאיפת Murine הדגם של פגיעה החריפה ריאות תוצאות ב מקסימלי חריפה קטלנית פגיעת ריאות

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Medicine

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic findings similar to human acute respiratory distress syndrome (ARDS). The resulting alveolar edema, alveolar-capillary barrier damage, and leukocyte infiltration predominantly affect the left lung, preserving the right lung as an uninjured control and allowing animals to survive. This model of self-limited acute lung injury enables investigation of tissue resolution mechanisms, such as macrophage efferocytosis of apoptotic neutrophils and restitution of alveolar-capillary barrier integrity. This model has helped identify important roles for resolution agonists, including specialized pro-resolving mediators (SPMs), providing a foundation for the development of new therapeutic approaches for patients with ARDS.

Selective intra-bronchial acid instillation to the left lung in mice results in unilateral and self-limited acute lung injury that models human acute respiratory distress syndrome (ARDS) induced by gastric acid aspiration.

מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of chronic wound infections in diabetic and hospitalized patients. There is an urgent need for chronic infection models to aid in the investigation of wound pathogenesis and the development of new therapies against this pathogen. Here, we describe a protocol that uses delayed inoculation 24 hours after full-thickness excisional wounding. The infection of the provisional wound matrix present at this time forestalls either rapid clearance or dissemination of infection and instead establishes chronic infection lasting 7&#8211;10 days without the need for implantation of foreign materials or immune suppression. This protocol mimics a typical temporal course of post-operative infection in humans. The use of a luminescent P. aeruginosa strain (PAO1:lux) allows for quantitative daily assessment of bacterial burden for P. aeruginosa wound infections. This novel model may be a useful tool in the investigation of bacterial pathogenesis and the development of new therapies for chronic P. aeruginosa wound infections.

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

We describe a delayed inoculation protocol for generating chronic wound infections in immunocompetent mice.

מדבקת החיסון נגד הידבקות כרונית בנגיף הדלקת בפצע

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of bacteria in lung models can re-adapt epithelial arrangement, while immune cells coordinate an inflammatory response against the bacteria in the microenvironment. While in vivo models have been the choice for testing new anti-infectives in the context of cystic fibrosis, they still do not accurately mimic the in vivo conditions of such diseases in humans and the treatment outcomes. Complex in vitro models of the infected airways based on human cells (bronchial epithelial and macrophages) and relevant pathogens could bridge this gap and facilitate the translation of new anti-infectives into the clinic. For such purposes, a co-culture model of the human cystic fibrosis bronchial epithelial cell line CFBE41o- and THP-1 monocyte-derived macrophages has been established, mimicking an infection of the human bronchial mucosa by P. aeruginosa at air-liquid interface (ALI) conditions. This model is set up in seven days, and the following parameters are simultaneously assessed: epithelial barrier integrity, macrophage transmigration, bacterial survival, and inflammation. The present protocol describes a robust and reproducible system for evaluating drug efficacy and host responses that could be relevant for discovering new anti-infectives and optimizing their aerosol delivery to the lungs.

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

We describe a protocol for a three-dimensional co-culture model of infected airways, using CFBE41o- cells, THP-1 macrophages, and Pseudomonas aeruginosa, established at the air-liquid interface. This model provides a new platform to simultaneously test antibiotic efficacy, epithelial barrier function, and inflammatory markers.

פ. ארוגינוזה נגוע 3D שיתוף תרבות של תאים אפיתל הסיפונות מקרופאגים בממשק אוויר נוזלי להערכה פרה-סרטנית של אנטי זיהומים

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

כרוני לטווח ארוך

שיטה ליצירת ריאות neutrophilia שימוש התרסיס lipopolysaccharide

לומד קהילות חיידקים

מודל דלקת ריאות חזק במכרסמי immunocompetent להערכת יעילות אנטיבקטריאלי נגד

דגם IL-8 עכבר transgenized חולף עבור

להרחיב הנשמת קיבת חומצה שאיפת Murine הדגם של פגיעה החריפה ריאות תוצאות ב מקסימלי חריפה קטלנית פגיעת ריאות

מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות

מדבקת החיסון נגד הידבקות כרונית בנגיף הדלקת בפצע

פ. ארוגינוזה נגוע 3D שיתוף תרבות של תאים אפיתל הסיפונות מקרופאגים בממשק אוויר נוזלי להערכה פרה-סרטנית של אנטי זיהומים

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה