המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann על סיוע טכני שלה.
D.W. נתמכה על ידי קרן kade ב Max. סמטת קיבלו מענקים מן Fondation Kröner אחר (2012_EKES.04) פתוח (DE2133/2-1_. ס ס קיבל מענקי מחקר פתוח (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

בעלי חיים קיבל טיפול אנושי בדרישות המדריך העקרונות של חיות מעבדה, שהוכנו על ידי המכון של מעבדה חיה המשאבים, שפורסם על ידי מכוני הבריאות הלאומיים. כל הפרוטוקולים בעלי חיים אושרו על ידי הרשות המקומית אחראית (' Amt לדנציג Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (משרד הבריאות, הגנת הצרכן) המבורג ').
1. קטטר הכנה
הערה: עיין טבלה של חומרי מידע לגבי הצנתר.
<ol><li>סעו צנתר בעל צנתר.</li>
	<li>משוך את guidewire של לומן דרך היציאה דיסטלי החוצה.</li>
	<li>לשים טיפה של דבק מגע דבק בקצה הדיסטלי של קטטר. התראה: ללבוש לטקס או nitrile כפפות.</li>
	<li>מניחים את guidewire בנמל RX של הקטטר, לקדם את זה דרך לומן לנמל דיסטלי. לאחר מכן, תחזיר את guidewire מעט להשאיר רווח של ~ 5 מ מ עד הסוף</li>
	<li>המתן 5 דקות כדי לאפשר את דבק יבש.</li>
	<li>להעביר את guidewire, זה יתוקן. אם זה עדיין ניידים, חזור על השלבים 1.3-1.6.</li>
	<li>ממלאים מזרק 3-mL עם סליין 0.9% 1.5 מ ל וחבר אותו ליציאת האינפלציה בלון.</li>
	<li>לחצו הבוכנה מזרק כדי לבדוק את הבלון האינפלציה. השאר 0.6 מ"ל מלוחים במזרק.</li>
</ol>2. העכבר הכנה
<ol><li>להשיג עכברים זכרים בגיל 14 שבועות במשקל של 30 גרם. הערה: השתמשנו חיות מתקבל מן המכון של חיות מעבדה. השתמשנו C57BL/6J כאן.</li>
	<li>השתמש תא אינדוקציה כדי להרדים את העכבר עם 2.0-2.5% isofurane (קצב הזרימה חמצן 500 mL/min).</li>
	<li>הנח את העכבר על גבו על כרית החימום ולתחזק הרדמה עם facemask לכסות את הפה והאף של העכבר. בדוק עומק מספיק של הרדמה על ידי צובט את הרגליים האחוריות וזנב כדי לוודא העדר רפלקסים.</li>
	<li>להסיר את השיער בבטן באמצעות מכונת תספורת לשיער.</li>
	<li>אפשק את הרגליים האחוריות ולתקן את עמדתם באמצעות הקלטת.</li>
	<li>לחטא את אזור הבטן באמצעות povidone-יוד, ואחריו 80% אתנול. חזור על שלב זה פעמיים נוספות.</li>
	<li>השתמש תלוי כירורגית כדי להבטיח באתר כירורגית לא ללקות. פתח את שכבות העור והשריר לאורך לינאה אלבה עם מספריים (או סכין) לחשוף את אברי הבטן.</li>
	<li>נעוץ המעיים כפפה saline 0.9% לחות, לעטוף כדי לשמור על לחות.</li>
	<li>להשתמש מלקחיים בסדר שני כדי להסיר את רקמת שומן מעל העורק הראשי.</li>
	<li>באמצעות על מזרק אינסולין (30 גרם), להזריק µL 250 של הפארין פתרון (50 U/mL) לתוך נחות הנבוב (IVC) ולא לחכות 3 דקות על תפוצתו מערכתית. הפארין לדכא את hemostasis ומניעת קרישת רצויה במהלך הניתוח.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים שני, לנתח העורקים מתחת לכליות לרדת שלו נגע הסתעפות ואת הקערות ענף היוצא.</li>
	<li>מאתרים ומפסיקים את כלי הדם צד, אשר צפויים להיות ממוקם באזור בחוזקה, עם cauterizer טמפרטורה גבוהה.</li>
	<li>לעצור את זרימת הדם על ידי מחבר חובק למעקה העורקים מתחת לכליות ישירות מתחת העורקים כליות.</li>
	<li>המקום השני מלחציים במיקום דיסטלי מעל ההסתעפות של אבי העורקים.</li>
	<li>לבצע חתך אופקי קטן באמצעות מספריים אל נקודת האמצע בין התפסים לאורך הספינה. הערה: גודל החתך צריך להיות שקול ל- 1/3 של ההיקף של כלי השיט.</li>
	<li>הכנס מזרק עם מחט (30 גרם) לתוך החתך ותורידי את העורקים עם µL 250 הפארין פתרון (50 U/mL).</li>
	<li>בעזרת תפרים 10-0, מקם קשר יחיד אחד בכל צד של החתך.</li>
	<li>מתרחבים העורקים על-ידי הוספת מרחיב את כלי החיתוך ולהפיץ את הכלי מעט. חזור על התרחבות פי 2 עד פי 3.</li>
	<li>לחות הבלון-הקטטר עם סליין 0.9%.</li>
	<li>להכניס הבלון-הצנתר שעברו שיטוח העורקים ולקדם אותו לעבר המלחציים proximal על העורקים.</li>
	<li>כשמגיעים את המלחציים צינתור, בזהירות פתח את המלחציים צינתור, לנפח את הבלון כדי למנוע דליפת דם, על ידי הזרקת ~0.6 מ"ל של תמיסת מלח. הערה: היחס של הבלון המנופח לכלי הוא 1.5:1.</li>
	<li>לקדם הקטטר רטרוגרדית עבור 2 ס מ.</li>
	<li>למשוך את הצנתר מורחבת, תוך מרוקן את הבלון במעט על ידי שחרור את המזרק.</li>
	<li>לחבר מחדש את המלחציים proximal כאשר הקטטר מגיע החתך של אבי העורקים. השטחת קצה הבלון לחלוטין ולהסיר אותו.</li>
	<li>לשטוף את העורקים עם µL 250 הפארין פתרון (50 U/mL) בעזרת מזרק 30 גרם.</li>
	<li>סגירת החתך אבי העורקים בעזרת תפרים 10-0. המקום התפרץ תפרים בכל צד לרוחב, ואחריו תפרים אחד או שניים על הצד הבטני.</li>
	<li>פתח את המלחציים דיסטלי. במקרה של דימום, לסגור את המלחציים שוב ולמקם על תפרים נוספים.</li>
	<li>פתח את המלחציים proximal בקפידה.</li>
	<li>במקום שתי דגימות על התפר לתמוך בה ולעצור את מדממת.</li>
	<li>במקום ועוצרי דימום שנספג על התפר כדי לקיים אותו. הערה: את הדופק של אבי העורקים צריך להיות גלוי רחוק מן החתך.</li>
	<li>מקם את המעיים בחזרה לתוך הבטן.</li>
	<li>יש לשטוף את חלל הבטן עם סליין 0.9% סטרילי, אשר כבר מראש ומחוממת ל- 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>סגור את השכבה שריר הבטן בעזרת תפרים פועל 6-0.</li>
	<li>סגור את העור עם התפרים פועל 5-0.</li>
	<li>להזריק 4-5 מ"ג/ק"ג Carprofen subcutaneously מתנים את העכבר כדי להתעורר. לנטר את החיה עד זכה להכרה, לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. לשמור את החיה לבד בכלוב עד החלמה מלאה.</li>
	<li>הוסף דיפירון למים (50 מ"ג/100 מ"ל) משכחי כאבים במשך 3 ימים ולעקוב אחר בעל החיים מדי יום. בדרך כלל עכברים כמו סוויט הטעם של דיפירון, להתחיל לשתות מיד אחרי הניתוח. אם מועדף, סוכנים להזרקה שחרור-מתמשכת יכול לשמש במקום דיפירון. הערה: תקופת התצפית של מודל זה הוא 28 יום.</li>
</ol>3. histopathology
<ol><li>הקציר העורקים נפגע בלון לאחר 28 יום על-ידי הכנת העכברים כמתואר בצעדים 2.2 ל 2.9.</li>
	<li>להשתמש במספריים כדי להסיר את העורקים נפגע בלון (בין נגע הסתעפות 0.3 מ מ מעל כלי כליות), המתת חסד העכבר על ידי גזירה החוצה את הלב שלה.</li>
	<li>ריקון לומן של כלי השיט עם 0.9% NaCl.</li>
	<li>את הספינה שנקטפו ב 4% paraformaldehyde (PFA) בן לילה, מייבשים אותו להגדיל את ריכוזי אתנול, החל אתנול 70% עבור 2 שעות, 80% אתנול למשך שעה, אתנול 95% עבור שעתיים, אתנול 100% עבור 5 שעות. לאחר מכן, דגירה הדגימות של קסילן 2 שעות 3 פעמים, לפני שחדר הדגימות עם פרפין. הערה: במקום שטיפה הספינה שנקטפו עם 0.9% NaCl, ניתן לרוקן את זה עם 4% מחברים. התראה: PFA קסילן רעילים, צריך להיות מטופל עם טיפול מיוחד.</li>
	<li>להטביע את הדגימה פרפין וחותכים לפרוסות של עובי 5 מיקרומטר, שימוש של מיקרוטום.</li>
	<li>Deparaffinize השקופיות עם קסילן 3 פעמים במשך 5 דקות.</li>
	<li>נוזלים ברקמות שקופיות באמצעות סדרה יורדת של אתנול. להתחיל עם 100% אתנול 2 פעמים במשך 5 דקות, ואחריו 3 דקות של אתנול 95%, 80% ו- 70%.</li>
	<li>כתם על השקופיות עם צביעת trichrome מאסון, כפי שמתואר18.</li>
	<li>מייבשים שקופיות מוכתם אתנול 100% 2 פעמים למשך 10 דקות לכל. נקה עם קסילן 2 פעמים למשך 10 דקות כל והר במדיום הרכבה.</li>
	<li>הצגת השקופיות עם מיקרוסקופ שדה בהיר. להשתמש עדשה עם 5 x הגדלה של מספרי הצמצם של 0.12 תמונה סקירה או עדשה עם 20 x הגדלה עם צוהר המספרי של 0.35 להשגחה מפורט.</li>
</ol>4. immunofluorescence מיקרוסקופ
<ol><li>נוזלים ברקמות שקופיות באמצעות סדרה יורדת של אתנול. להתחיל עם 100% אתנול 2 פעמים במשך 5 דקות, ואחריו 3 דקות של אתנול 95%, 80% ו- 70%.</li>
	<li>לבצע אחזור אנטיגן על ידי חימום השקופיות בפתרון אנטיגן-אחזור בבאניה כעשרים דקות.</li>
	<li>ומצננים את השקופיות עד לטמפרטורת החדר.</li>
	<li>לאחר כביסה השקופיות עבור שלוש פעמים בתמיסת פוספט buffered (PBS), להחיל פתרון חסימה אנטיגן על חלקים למשך 30 דקות.</li>
	<li>רחץ שקופיות שלוש פעמים במשך חמש דקות עם PBS.</li>
	<li>דגירה מקטעים עם נוגדן ראשוני מעורבבת עם diluent הראשית נוגדן. הערה: ריכוז, דגירה המתאים צריכה להיבחר בנפרד עבור כל נוגדן.</li>
	<li>רחץ שקופיות שלוש פעמים במשך חמש דקות עם PBS להסיר נוגדן לא מאוגד.</li>
	<li>דגירה מקטעים עם נוגדנים משניים מראש מצומדת מעורבבת עם diluent משני נוגדן. הערה: ריכוז, דגירה המתאים צריכה להיבחר בנפרד עבור כל נוגדן.</li>
	<li>הסר נוגדנים לא מאוגד ע י שטיפת השקופיות עבור 5 דקות שלוש פעמים.</li>
	<li>Counterstain את גרעין התא באמצעות 4', 6-diamidino-2-phenylindole (דאפי) למשך 15 דקות; ריכוז דאפי הסופי צריך להיות 350 ננומטר.</li>
	<li>הר שקופיות ב immunofluorescence תואם הרכבה פתרון. הערה: באמצעות הפתרון הלא הרכבה מאפילה את האות זריחה.</li>
	<li>הצגת שקופיות עם מיקרוסקופ זריחה. השתמש עדשת הגדלה 40 x עם הפתח המספרי של 1.3.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths:+final+data+for+2009.">Deaths: final data for 2009.</a> Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).</li><li>Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+proliferation+of+smooth+muscle+cells+as+an+explanation+for+recurrent+coronary+artery+stenosis+after+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty.">Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).</li><li>Greenwald, S. E., Berry, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+vascular+grafts:+the+importance+of+mechanical+and+haemodynamic+properties.">Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties.</a> J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).</li><li>Majesky, M. W., Schwartz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+diversity+in+arterial+wound+repair.">Smooth muscle diversity in arterial wound repair.</a> Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).</li><li>Owens, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+differentiation+of+vascular+smooth+muscle+cells.">Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells.</a> Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).</li><li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation+in+development+and+disease.">Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease.</a> Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).</li><li>Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines+and+atherosclerosis:+a+comprehensive+review+of+studies+in+mice.">Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice.</a> Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).</li><li>Karas, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+intimal+proliferation+after+balloon+injury+and+stenting+in+swine:+an+animal+model+of+restenosis.">Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis.</a> J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).</li><li>Ip, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+platelets,+thrombin+and+hyperplasia+in+restenosis+after+coronary+angioplasty.">The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).</li><li>Mason, R. G., Read, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+species+differences+in+fibrinolysis+and+blood+coagulation.">Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation.</a> J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).</li><li>Lafont, A., Faxon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+animal+models+of+post-angioplasty+restenosis+sometimes+poorly+predict+the+outcome+of+clinical+trials?.">Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).</li><li>Matter, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+balloon-induced+inflammation,+proliferation,+and+neointima+formation+in+apolipoprotein+E+(ApoE)+knockout+mice.">Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice.</a> Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).</li><li>Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+arterial+injury.">Mouse model of arterial injury.</a> Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).</li><li>Simon, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+neointimal+formation+in+Mac-1(-/-)+mice+reveals+a+role+for+inflammation+in+vascular+repair+after+angioplasty.">Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty.</a> J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).</li><li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia.">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li><li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide,+gender,+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice.">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li><li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myointimal+hyperplasia:+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors.">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).</li><li>Stubbendorff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+myointimal+hyperplasia+versus+atherosclerosis+in+mice:+an+introduction+of+two+valid+models.">Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models.</a> J Vis Exp. (87), e51459 (2014).</li><li>Deuse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dichloroacetate+prevents+restenosis+in+preclinical+animal+models+of+vessel+injury.">Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury.</a> Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal ומאפשרת חקר התהליכים הפתולוגיים כבסיס ובדיקות של תרופות חדשות או אפשרויות טיפוליות.
השלב הקריטי ביותר ב פרוטוקול זה הוא חסיפה של אבי העורקים. טיפול מיוחד צריך להיות משולם במהלך שלב זה, כפי חסיפה מופרז יוביל היווצרות מפרצת וכישלון מודל. מצד שני, אם חסיפה מבוצע דיו, יפתחו myointima קטן מדי. לכן, האינטנסיביות של השלב חסיפה חיונית התוצאה ואת ההצלחה של מודל זה בעל חיים.
לגבי הליך כירורגי, חיוני שתי החומות של כלי השיט לא חורים על-ידי הגדרת אוקיי, אשר עלול לגרום כשל מוקדם של patency כלי השיט. בעבר תארנו דגם העכבר שבו אנחנו המושרה כלי היצרות של העורק הראשי של עכברים18. עם זאת, זו, רוב הדגמים האחרים מספקים רק כמויות קטנות מאוד של רקמות לצורך ניתוח. היתרון בשיטה זו הוא כמות גדולה יחסית של רקמות שהושג (מקטע כלי ~ 1 ס מ). השתלה לספינה אחת ניתן יהיה ובכך יתחלק לחלקים מרובים, המשמש עבור ניתוחים שונים, ביעילות הפחתת מספר חיות ניסוי הנדרש.
יתר על כן, חיות מעלף מתאימים ניתן ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointima בתנאים מחלות שונות. הרקע הגנטי יכול גם להיות משולב עם מודל זה בעל חיים כדי להבין את המנגנונים של היפרפלזיה myointimal מגוון הגדרות או את ההשפעה של גנים מסוימים.
לסיכום, המודל המתואר כאן הוא לשחזור, קל לביצוע, ולא ניתן להקים במהירות ובאמינות. הטיפול בהצלחה נבדקו אפשרויות במודל זה יכול להיות עוד יותר אישר חיה גדולה מודלים19.

היצרות עורקים בתוך העורקים הכליליים והיקפי יש השפעה גדולה על התחלואה ואת התמותה של חולים1. אחד כבסיס מנגנון פתולוגי הוא myointima היפרפלזיה (MH), אשר מאופיין על ידי התפשטות מוגברת, הגירה, סינתזה של חלבונים מטריצה חוץ-תאית השריר החלק בכלי הדם תאים (SMC)2. התקן SMC ממוקמים בשכבת המדיה של כלי השיט ולהעביר על גירוי על פני השטח של לומן. אותות מופחתים כוללים גורמי גדילה, ציטוקינים, תא-תא מגע, ליפידים, מטריצה חוץ-תאית רכיבים ו הטיה מכני ולמתוח כוחות3,4,5,6. פציעות של הקיר כלי, פתולוגי או iatrogenic, תאי אנדותל לגרום נזק תאי שריר חלק, לעורר תגובות דלקתיות, ובכך להוביל MH7.
מודלים בבעלי חיים שונים זמינים כעת ללמוד פגיעה עורקית ו היפרפלזיה myointima. חיות גדולות כמו חזירים או כלבים יש את היתרון של שיתוף, עורק דומה ו אנטומיה כלילית עם בני אדם, מתאימות במיוחד עבור מחקרים חוקרת אנגיופלסטיה טכניקות, הליך והתקני8. עם זאת, חזיר הדגמים יש החיסרון של9,גבוהה יותר thrombogenicity10, בעוד כלבים יש רק בתגובה כלי פציעה11מתון. בנוסף, כל הדגמים בעלי חיים גדולים דורשים דיור מיוחדים, ציוד ו צוות, אשר מחוברים עם עלויות גבוהות, אינם זמינים ב מוסד. הדגמים בעלי חיים קטנים כוללים חולדות ועכברים. בהשוואה לחולדות, עכברים יש את היתרונות של עלות נמוכה יותר את קיומו של מגוון רחב של דגמים מדהימה. המודל המתואר בסרטון הזה יכול להיות משולב עם ספקיות-/-עכברים שקיבלו עם דיאטה מערבית לחקות מקרוב את ההגדרה הקלינית של אנגיופלסטיה כלי טרשת עורקים12. דגמים קודמים המושרה פגיעה בכלי הדם דרך תיל פציעה13, לייבוש הנוזלים14, האביב15או פציעה השרוול16. מאז מהות הפגיעה ישפיע במידה רבה את הפיתוח ואת חוקת MH, באמצעות צנתר בלון כדי לגרום לפציעה כלי היא הדרך הטובה ביותר כדי לחקות את ההגדרה הקלינית.
במאמר זה אנו מתארים שיטה לזירוז MH עם קטטר בלון בעכברים. השימוש של קטטר בלון (1.2 מ"מ x 6 מ"מ) עם יציאת RX (איור 1 א') מאפשר גירוד השכבה intimal, במקביל, תנאי הגיוס של overdistension של כלי השיט. שני הגורמים הללו הם גורמים חשובים עבור התפתחות MH. הזמן תצפית עבור דגם זה הוא 28 יום17.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10-0 Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2814G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>BD Medical</td>
			<td>309658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 prolene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>EH7229H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 prolene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8706H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid Fuchsin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8129-25G</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigen retrieval solution</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S1699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Azophloxin</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-103</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen Eye and Nose ointment</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>1578675</td>
			<td>Eye ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution</td>
			<td>Betadine Purdue Pharma</td>
			<td>NDC:67618-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>Stock number 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18056-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen 3</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab7778</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG AF555</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21432</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG AF488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG AF488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11055</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbit IgG AF555</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A31572</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>2295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>2246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FAP</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab28246</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps fine</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps standard</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11023-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial Acetic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>537020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>8786-451A ARCO SE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN 3862340</td>
			<td>25.000 I.E./mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High temperature cautery kit</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>18010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image-iT FX Signal Enhancer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I36933</td>
			<td>Blocking solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light Green SF</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-211</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-04</td>
			<td>Micro-Serrefine - 4mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>1012268-06U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molybdatophosphoric acid hydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.00532.0100</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0,9%</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12075-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novaminsulfon</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>PZN 03530402</td>
			<td>Metamizole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orange G</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-221</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Leica biosystems</td>
			<td>REF 39602004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS pH 7,4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA 4%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>#157135S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ponceau S solution</td>
			<td>Serva Electrophoresis</td>
			<td>33427</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibody diluent</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S3022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold Mounting solution</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Mounting solution for immunofluorescence stained slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Replaceable Fine Tip</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>H101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resorcin-Fuchsin Weigert</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>2E-30</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>400684.00.00</td>
			<td>Carprofen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14028-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Vannas-style</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody diluent</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S0809</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting Adhesive MINIS 3x1g</td>
			<td>UHU</td>
			<td>45370</td>
			<td>Cyanoacrylate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Rack</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>21057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SM22</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab10135</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMA</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab21027</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staining dish</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>21075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabotamp fibrillar</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>431962</td>
			<td>Absorbable hemostat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transpore Surgical Tape</td>
			<td>3M</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-100 Insulin syringe</td>
			<td>BD Medical</td>
			<td>324825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessel Dilator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18603-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitro-Clud</td>
			<td>Langenbrinck</td>
			<td>04-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigerts iron hematoxylin Kit</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.15973.0002</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td>3410</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

balloon-based injury to induce myointimal hyperplasia in the mouse abdominal aorta

השימוש במודלים חיוני לצורך הבנה טובה יותר של MH, אחד הגורמים העיקריים עבור היצרות העורקים. במאמר זה נדגים מודל חסיפה מאתר בלון, אשר ניתן להשוות עם כלי ויצר מודלים פגיעה בבעלי חיים גדולים. דגם חסיפה העורקים עם אחרים-קטטרים מחקה את ההגדרה הקלינית ומוביל שינויים דומים pathobiological, פיזיולוגיים. בקצרה, לאחר ביצוע חתך אופקי ב אבי העורקים abdominalis, קטטר בלון להיות מוכנס לתוך הכלי, מנופח, הציג retrogradely. האינפלציה של הבלון יוביל אינטימה פציעה, overdistension של כלי השיט. לאחר הסרת הקטטר, החתך אבי העורקים תהיה סגורה עם אוקיי יחיד. המודל המוצג במאמר זה הוא לשחזור, קל לביצוע, ולא ניתן להקים במהירות ובאמינות. הוא מתאים במיוחד להערכת יקר סוכני טיפולית ניסיוני, אשר יכול להיות מיושם באופן חסכוני. באמצעות זנים נוקאאוט-עכבר, וצריך להעריך את ההשפעה של גנים שונים על פיתוח MH.

חסיפה בלון הוא מודל מתאים ללמוד את התפתחות MH בעכברים. חיות להתאושש טוב הניתוח והצג פוסט-פעולה מצב גופני מעולה. הקמנו מודל זה בעכברים 50 עם פחות משיעור המוות 3% עקב הליך כירורגי. דמויות 1B -C הצג את השלבים החשובים כירורגי. לאחר חתך בעור לאורך לינאה אלבה, לזהות את אבי העורקים abdominalis. במקום מלחציים השתלה (איור 1B). עושים חתך קטן באמצע אב העורקים, לקבוע צנתר בלון לתוך כלי הקיבול שקופיות הוא ייסוג, נגד כיוון זרימת הדם (איור 1C). התנועה של הבלון המנופח מוביל גירוד של אינטימה, באותו הזמן, overdistension של כלי השיט. החתך של אבי העורקים ייסגרו עם אוקיי יחיד. הדופק אבי העורקים צריך להיות גלוי רחוק מן החתך.
MH מתפתח בהדרגה השתל לאורך זמן. היסטולוגית מכתים עם מאסון trichrome מדגים myointima היווצרות בתוך הנדן אלסטית פנימית (איור 2 א). נגעים Myointimal כללה בעיקר חיובי הסלולר רכיבים עבור SM22 ורכיבים מסוימים-מטריצה חוץ-תאית (איור 2B). Myointimal תאים מוערכות עוד יותר על-ידי immunofluorescence מכתים. האוכלוסייה העיקרית myointima מורכב של תאי שריר חלק (שריר חלק אקטין (SMA) חיובי) ותאים (פיברובלסט הפעלת חלבון (FAP) חיובי) myofibroblasts (איור 2B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56477/56477fig1.jpg"> איור 1. . השרטוטים של הקטטר, ההשתלה שלו (א) תכנון מפורט של הקטטר. יציאת הדיסטלי, בלון, יציאה מהירה exchange (RX-יציאה), guidewire, יחיד לומן ל RX-יציאה, כפול לומן מנמל-RX בלון, רכזת, בלון האינפלציה יציאה. (B) איור סכמטי של הליך כירורגי. זרימת הדם אבי העורקים abdominalis מופסק עם שני תופסנים מיקרו, מבוצע חתך קטן. ג קטטר המנופח בתוך העורקים abdominalis. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56477/56477fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56477/56477fig2.jpg"> באיור 2. Myointima צורה בתוך הנדן אלסטית פנימית. (א) Denuded עכבר aortas נקצרים, פרפין מוטבע, חתך רוחב נציג מוצג צביעת trichrome. (B) כפול immunofluorescence מכתים של בלון-חשופה aortae מוצג. בשורה העליונה מתארת נגעים myointimal צבעונית עבור SM22 וקולגן III. בשורה התחתונה, כלי מוכתמים עבור SMA ו- FAP. <a href="https://cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56477/56477fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta at JoVE.com

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

balloon-based-injury-to-induce-myointimal-hyperplasia-mouse-abdominal

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.5K Views.  University Heart Center. מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.

Video: Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The C-seal: A Biofragmentable Drain Protecting the Stapled Colorectal Anastomosis from Leakage

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL varies between 2.5 and 20% 2-5. Over the years, many strategies aimed at lowering the incidence of anastomotic leakage have been examined6, 7. 
The cause of AL is probably multifactorial. Etiological factors include insufficient arterial blood supply, tension on the anastomosis, hematoma and/or infection at the anastomotic site, and co-morbid factors of the patient as diabetes and atherosclerosis8. Furthermore, some anastomoses may be insufficient from the start due to technical failure.
Currently a new device is developed in our institute aimed at protecting the colorectal anastomosis and lowering the incidence of AL. This so called C-seal is a biofragmentable drain, which is stapled to the anastomosis with the circular stapler. It covers the luminal side of the colorectal anastomosis thereby preventing leakage.
The C-seal is a thin-walled tube-like drain, with an approximate diameter of 4 cm and an approximate length of 25 cm (figure 1). It is a tubular device composed of biodegradable polyurethane. Two flaps with adhesive tape are found at one end of the tube. These flaps are used to attach the C-seal to the anvil of the circular stapler, so that after the anastomosis is made the C-seal can be pulled through the anus. The C-seal remains in situ for at least 10 days. Thereafter it will lose strength and will degrade to be secreted from the body together with the gastrointestinal natural contents.
The C-seal does not prevent the formation of dehiscences. However, it prevents extravasation of faeces into the peritoneal cavity. This means that a gap at the anastomotic site does not lead to leakage.
Currently, a phase II study testing the C-seal in 35 patients undergoing (colo-)rectal resection with stapled anastomosis is recruiting. The C-seal can be used in both open procedures as well as laparoscopic procedures. The C-seal is only applied in stapled anastomoses within 15cm from the anal verge. In the video, application of the C-seal is shown in an open extended sigmoid resection in a patient suffering from diverticular disease with a stenotic colon.

The C-seal is a biofragmentable drain protecting the stapled colorectal anastomosis. In this video, details of the manufacturing, deployment and use are shown.

C-חותם: מסננים Biofragmentable הגנה על השקה של המעי הגס תפוסים דליפה

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

CYP2D6 מודל החיה: כיצד לגרום דלקת כבד אוטואימונית עכברים

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current estimates put the prevalence of amblyopia at approximately 1-3%1-3, the majority of cases being monocular2. Amblyopia is most frequently caused by ocular misalignment (strabismus), blur induced by unequal refractive error (anisometropia), and in some cases by form deprivation.
Although amblyopia is initially caused by abnormal visual input in infancy, once established, the visual deficit often remains when normal visual input has been restored using surgery and/or refractive correction. This is because amblyopia is the result of abnormal visual cortex development rather than a problem with the amblyopic eye itself4,5 . Amblyopia is characterized by both monocular and binocular deficits6,7 which include impaired visual acuity and poor or absent stereopsis respectively. The visual dysfunction in amblyopia is often associated with a strong suppression of the inputs from the amblyopic eye under binocular viewing conditions8. Recent work has indicated that suppression may play a central role in both the monocular and binocular deficits associated with amblyopia9,10 .
Current clinical tests for suppression tend to verify the presence or absence of suppression rather than giving a quantitative measurement of the degree of suppression. Here we describe a technique for measuring amblyopic suppression with a compact, portable device11,12 . The device consists of a laptop computer connected to a pair of virtual reality goggles. The novelty of the technique lies in the way we present visual stimuli to measure suppression. Stimuli are shown to the amblyopic eye at high contrast while the contrast of the stimuli shown to the non-amblyopic eye are varied. Patients perform a simple signal/noise task that allows for a precise measurement of the strength of excitatory binocular interactions. The contrast offset at which neither eye has a performance advantage is a measure of the "balance point" and is a direct measure of suppression. This technique has been validated psychophysically both in control13,14 and patient6,9,11 populations.
In addition to measuring suppression this technique also forms the basis of a novel form of treatment to decrease suppression over time and improve binocular and often monocular function in adult patients with amblyopia12,15,16 . This new treatment approach can be deployed either on the goggle system described above or on a specially modified iPod touch device15.

Amblyopia is a developmental disorder of the visual cortex that is often accompanied by strong suppression of one eye. We present a new technique for measuring and treating interocular suppression in patients with amblyopia that can be deployed using virtual reality goggles or a portable iPod Touch device.

המדידה והטיפול בדיכוי בעין עצלה

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Inducing Myointimal Hyperplasia Versus Atherosclerosis in Mice: An Introduction of Two Valid Models

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque formation and stenosis, as observed for example in ischemic heart disease. Two highly reproducible mouse models&#160;&#8211;&#160;both resulting in artery stenosis but each underlying a different pathway of development&#160;&#8211; are introduced here. The models represent the two most common causes of artery stenosis; namely one mouse model for each myointimal hyperplasia, and atherosclerosis are shown. To induce myointimal hyperplasia, a balloon catheter injury of the abdominal aorta is performed. For the development of atherosclerotic plaque, the ApoE -/- mouse model in combination with western fatty diet is used. Different model-adapted options for the measurement and evaluation of the results are named and described in this manuscript. The introduction and comparison of these two models provides information for scientists to choose the appropriate artery stenosis model in accordance to the scientific question asked.

This video shows two models of intimal plaque development in murine arteries and emphasizes the differences in myointimal hyperplasia and atherosclerosis.

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

Various in vivo laboratory rodent models for the induction of artery stenosis have been established to mimic diseases that include arterial plaque ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

פגיעה ברקמות איסכמי בהגבו skinfold לשכת העכבר: דגם דש עור לחקור איסכמיה מתמיד חריפה

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

יצירת הידבקויות בטן עכברים

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

Reproducible Arterial Denudation Injury by Infrarenal Abdominal Aortic Clamping in a Murine Model

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These complications can be attributed to impairments in re-endothelialization within the wound margins. Yet, the cellular and molecular mechanisms of re-endothelialization remain to be defined. While several animal models to study re-endothelialization after arterial denudation are available, few are performed in the mouse because of surgical limitations. This undermines the opportunity to exploit transgenic mouse lines and investigate the contribution of specific genes to the process of re-endothelialization. Here, we present a step-by-step protocol for creating a highly reproducible murine model of arterial denudation injury in the infrarenal abdominal aorta using external vascular clamping. Immunocytochemical staining of injured aortas for fibrinogen and &#946;-catenin demonstrate the exposure of a pro-thrombotic surface and the border of intact endothelium, respectively. The method presented here has the advantages of speed, excellent overall survival rate, and relative technical ease, creating a uniquely practical tool for imposing arterial denudation injury in transgenic mouse models. Using this method, investigators may elucidate the mechanisms of re-endothelialization under normal or pathological conditions.

Understanding the cellular and molecular mechanisms of re-endothelialization following arterial denudation injury is of paramount importance in preventing thrombosis and restenosis of arteries. Here we describe a protocol for reproducible arterial denudation injury of the infrarenal abdominal aorta. The procedure was developed to investigate the underlying mechanisms that regulate endothelial regeneration using mouse models.

פגיעת denudation עורקים לשחזור על ידי infrarenal בטן אב העורקים Clamping במודל Murine

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These ...

A Model of Cardiac Remodeling Through Constriction of the Abdominal Aorta in Rats

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and fluid retention. Changes in myocardial structure, electrical conduction, and energy metabolism develop with heart failure, leading to contractile dysfunction, increased risk of arrhythmias, and sudden death. Hypertensive heart disease is one of the key contributing factors of cardiac remodeling associated with heart failure. The most commonly-used animal model mimicking hypertensive heart disease is created via surgical interventions, such as by narrowing the aorta. Abdominal aortic constriction is a useful experimental technique to induce a pressure overload, which leads to heart failure. The surgery can be easily performed, without the need for chest opening or mechanical ventilation. Abdominal aortic constriction-induced cardiac pathology progresses gradually, making this model relevant to clinical hypertensive heart failure. Cardiac injury and remodeling can be observed 10 weeks after the surgery. The method described here provides a simple and effective approach to produce a hypertensive heart disease animal model that is suitable for studying disease mechanisms and for testing novel therapeutics.

A rat model of abdominal aortic constriction that induces cardiac hypertrophy and remodeling is described. An efficient, highly-reproducible, and minimally-invasive method is used to provide a simple yet useful platform for research in myocardial hypertrophy and dysfunction.

מודל של שיפוץ לב באמצעות התכווצות של אבי העורקים בבטן בחולדות

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and ...