המחברים יש אין תודות לעשות.

כל ההליכים אושרו על ידי המועצה המכללה הרפואית טונגג'י חיה טיפול הוועדה של Huazhong האוניברסיטה למדעים וטכנולוגיה (ווהאן, סין). כתב היד הוכן לפי יגיעו (חיה מחקר: דיווח של ניסויים ב- Vivo ) הנחיות6.
1. גידול
<ol><li>השתמש חולדות ספראג-Dawley (SD) (n = 20, 10 אנשים, 8 בת שבוע, שוקל 261 ל 291 g, כלומר = 272.85 ±9.07 g) מאוניברסיטת מרכז חיות הניסוי של Huazhong של המדע והטכנולוגיה ולשמור על חולדות לפי המדריך טיפול ושימוש חיות מעבדה שפרסם את בנו המכון הלאומי לבריאות (NIH הפרסום No.85-23, תוקן 1996)</li>
	<li>בית בתנאים סטנדרטיים עם גישה חופשית מזון ומים לשתיה. לשמור על מצעים חולדות בכלובים2 ס מ 530 עם עץ-גילוח. בית שני עכברושים בכל כלוב. פקח כל הכלובים לסביבת חדר (לא מיקרו-בידוד או שכולאת מאוורר)</li>
	<li>ודא הצוות מעורב פרוטוקול נסיוני לטפל באופן קבוע את החולדות.</li>
	<li>לשמור על טמפרטורת חדר בין 21 ° C ל- 23 ° C. תן המחירים מלח דיאטה רגילה (0.3% NaCl) לאורך כל תקופת המחקר.</li>
</ol>2. הליך איסוף הדם
הערה: מערכת איסוף הדם ואקום מורכב מחט דו-ראשי [22 גרם (0.7 מ"מ x 25 מ"מ)], בעל פלסטיק, וסדרה של שפופרות ואקום (2 מ"ל) עם stoppers גומי (איור 1).
<ol><li>מניחים את החולדה בעל הרחקה פלסטיק ולשטוף את הזנב עם מים חמים (20-30 ° C) כדי להסיר את כל הלכלוך גלוי או צואה. בעוד עוזרת מחזיקה בזנב במצב מורחב, לנגב את הזנב עם 70% אתנול, ולנקות עם גזה כדי להפוך את הווריד לנקות.</li>
	<li>להוסיף 22 גרם פרפר מחט לתוך אחד העורקים הזנב לרוחב (בסביבות 5 מ מ) במיקום כ 2-3 ס מ מן קצה הזנב בזווית של 20 ° (איור 2). איסוף הדם לתוך הצינור אוסף אבק על-ידי הוספת הסוף גומי של המחט הפרפר לתוך הצינור אוסף דם ואקום (איור 3). הערה: נפח הדם אוסף המקסימלי הוא 1.2 מ ל7.</li>
	<li>לאחר איסוף דם, הסר את המחט, בעדינות אל תפעילו לחץ על החדירה עם גזה עבור 15-30 s לעצור את זרימת הדם. לאחר מכן, לשחרר את החולדה ממחזיק הרחקה פלסטיק וחוזרים העכברוש בכלוב.</li>
	<li>השתמש צינורות מכילה EDTA בתור נוגדת קרישה כדי לאסוף פלזמה דם. בעדינות היפוך ברכבת התחתית מספר פעמים כדי לערבב קרישה בדם ומניחים את הדגימות על הקרח אנכית.</li>
	<li>Centrifuge את צינורות אוסף דגימת דם צנטריפוגה בקירור ב g x 2,000 10 דקות להפריד בין פלזמה או סרום.</li>
	<li>תמצית הפלזמה/הסרום, דואגת שלא להפריע את השכבות תא דם אדום ולבן. כדי לאסוף דם בסרום, השתמש צינורות ללא נוגד קרישה. שני סוגי הדגימה שאפשר שימוש באופן מיידי או לאחסן ב- 80 ° C עד שנה אחת. הערה: איסוף דם מוצלח מוגדר כקבלת 1.2 מ ל דם בכל פעם. ניקוב מקסימלי פעם היה להגדיר שלושה ניסויים, אם נפח הדם הכולל היה נמוך יותר מ 1.2 לאחר הניקוב השלישי, הוא הוגדר כאוסף דם שנכשלו. משך דגימת מתחיל מ הניקוב וריד הזנב הסרת המחט פרפר לאחר איסוף דם.</li>
	<li>
לאסוף דם פעמיים בתוך שבועיים7.
	<ol>
<li>כדי לבדוק ולוודא את הכדאיות של שיטה זו, הרכבת שני סטודנטים לרפואה (למתחילים) כבר שעתיים לפני ביצוע פרוטוקול אוסף זה דם. השתמש חולדות עשרים, דם של 10 חולדות על ידי העמיתים מנוסים 2 (קבוצת הניסוי) ושל 10 חולדות על ידי 2 סטודנטים לרפואה (קבוצה למתחילים).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. ניתוח סטטיסטי
<ol><li>אקספרס נתונים כמו הערך הממוצע ± סטיית תקן ולנתח עם SPSS 17 סטטיסטיקה. ערך α של 0.05 נבחר, לכן p < 0.05 נחשב משמעותי סטטיסטית.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

המחברים אין לחשוף

ח הנוכחי מתאר את שיטת איסוף דם קל-כדי-ללמוד אצל חולדות. התוצאות שלנו הראה כי שיטה זו אפשרית לאיסוף שוב ושוב כמויות גדולות של דם של עכברים. יתר על כן, שיטה זו יכולה להיות בקלות מומחה עם עקומת למידה לטווח קצר. הליך זה יכול להתבצע בחולדות שאינם מרדימים וגורם רק לחץ מינימלי החיות.
ניתן לאסוף דם של עכברים במקומות שונים. תקחי את הזנב הוא מיקום מעולה עבור דגימה דם4. עם זאת, זה לא תמיד קל להשיג מספיק נפח הדם של וריד הזנב זרימת דם דליל ונמוך העכברושים מערכת איסוף הדם ואקום משמש בדרך כלל לאיסוף דגימות דם מחולים יומי הקלינית. זו מערכת איסוף הדם ואקום שימש בבית חולים ובעלי מחקר במשך זמן רב8,9,10. מערכת זו מורכבת צינור אוסף דם ואקום עם מחט קיר, פרפר של הצינור הפנימי מצופה סיליקון. הוא היה מבוסס על העיקרון לחץ שלילי ואקום ומאפשר את הציור רציף של דם ללא הסיכון של איסוף הדם, אשר גם מפחית את הסיכוי לזיהום וזיהום המוליזה11. אמצעי האחסון של דגימת דם הקטטר נמצא בערך 0.3 מ. לאחר נסיגתה המחט מן הווריד של הזנב, יזרום הדם החסומים הקטטר לתוך שפופרת הואקום איסוף בשל הוואקום. שיטה זו ישימה גם עבור איסוף דם של עכברים במשקל של פחות מ- 100 גרם עם השימוש של מחט דקירה קטנה יותר.
שיטה זו של אוסף דם יש מספר יתרונות. הליך זה רק גורמת פגיעה מינימלית חולדות, איסוף דם יכול להתבצע ללא השימוש בהרדמה, ובכך ניתן למנוע את השפעת תגובת המתח ואת חומרי הרדמה על דגימת הדם. התצפיות הראו כי חולדות היו שקטים, המחזיק הרחקה פלסטיק במהלך ההליך, היו מקרי מוות לא במהלך ניסויים אלה. שנית, חזר על איסוף דם כל אחד או יומיים אפשרית, אשר מאפשר בתדירות דגימה של דם עם אמצעי אחסון נאותים למטרות מחקר שונים. לבסוף, שיטה זו קל ללמוד, היה בקלות לשלוט על ידי מתחילים אחרי תקופה קצרה (2h) למידה, כפי שמציין את שיעורי הצלחה דומים והשעות לנקב בין הקבוצות ניסיוני ואני מתחיל בדו ח זה. בדוח הקודם, הוכיח לי. et al. שיטה דומה של דגימת דם וריד הזנב לרוחב העכברוש4. השיטה שלנו היא פשוט יותר מזה שדווח על ידי Lee. et al. 4 כי אנחנו ישירות להכניס את המחט לנקב את הווריד הזנב ואת הקצה השני של הצינור מחובר ישירות אל שפופרת הואקום לאיסוף הדם, ללא השימוש מזרק נוסף ושאיפה ידנית של הדם וללא הצורך של ' חלב אינג ' הווריד כדי להקל על זרימת הדם. איסוף דם עם מערכת סגורה זו מקטינה את הסיכוי לזיהום דם. שימוש של בעל הרחקה פלסטיק גם מפחית את הלחץ חולדה ואסטמה ומקילה על הקיבעון של הזנב.
שני השלבים הבאים הם קריטיים עבור היישום המוצלח של שיטה זו. 1) להרחיב את הזנב ולהימנע התנועה של הזנב; 2) בעדינות לנקב את הווריד בזווית של ° 20 כדי למנוע חדירה דרך הווריד של ולשמור את המחט לנקב בווריד.
לסיכום, שיטת איסוף דם ואקום המאומץ בחולדות הוא בטוח, ריאלי וקל להתאמן. שיטה זו מאפשרת בתדירות דגימה של דם עם אמצעי אחסון הדם המתקבל חולדות שאינם מרדימים.

לקיחת דמים של חולדות נדרש עבור מגוון רחב של מחקרים ניסיוניים. טכניקות לאיסוף דם מהחולדה כוללות ניקוב של הלב, מקלעת רטרו-מסלולית, ומוחלף, וריד saphenous, כלי הדם הזנב, העורק הראשי, העורק הראשי, הנבוב. רוב הטכניקות (למעט וריד saphenous ואת הזנב כלי דם פנצ'רים) לדרוש הרדמה1,2. ורידים של זנב החולדה הן ניקב באופן שגרתי עבור לקיחת דמים, הזרקת הדם. לאחר טיפול הזנב עם מים חמים, כלי הדם הם מורחבים טוב ומתאים מניפולציה, אפילו כאשר הם מרדימים3.
למרות ההתפתחות של טכניקות חדשות ומשופרות להשיג דגימות דם חיות מעבדה קטנה2, זה לא תמיד קל להשיג מספיק דם בעת דגימה של חיות קטנות. וריד הזנב חולדות הוא מיקום מעולה עבור דגימה דם4. אולם, וריד הזנב הוא דק, ובכך זה לפעמים קשה לנקב, היה לוקח זמן רב להגיע מספיק דם עקב זרימת דם נמוך שלו. איסוף הדם באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום היא שיטה אופיינית יומי הקלינית. זו מערכת סגורה. דם איסוף מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם והוא עשה את זה קל יותר לקחת מספר דגימות venipuncture יחידה5. ח הנוכחי מתאר את שיטת דגימה דם וריד הזנב פשוטה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו קל לשלוט והוא יכול לשמש כדי לקבל כמויות גדולות של דם שוב ושוב אצל חולדות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:192px;">a double-pointed needle</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">22G&#160;</td>
			<td style="width:79px;">(0.7&#215;25mm)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">vacuum tubes</td>
			<td style="width:244px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">2 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:192px;">rat restraining holder&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">250g rat hoder model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="140">
			<td height="140" style="height:140px;width:192px;">normal salt diet for rats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:79px;">Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td>SPSS Inc,&#160; Chicago; USA&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Version 17.0.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

ניתן לאסוף דם של עכברים במספר מיקומי הדגימה. למשל, וריד הזנב הוא מיקום מעולה עבור לקיחת דמים. אולם, וריד הזנב הוא דק כך שקשה לפעמים לנקב. בנוסף, וריד הזנב יש זרימת דם נמוך ודורש זמן הדגימה ארוך כדי לקבל מספיק דם. ח הנוכחי מתאר את שיטת דגימה דם פשוטה, שיטת איסוף דם ואקום, אשר משמש בדרך כלל כדי להשיג דגימות דם מחולים, משמש כאן חולדות שאינם מרדימים. קצה המחט פרפר 22 גרם הוכנס לתוך אחד העורקים הזנב לרוחב כ- 2-3 ס מ בקצה הזנב בזווית של 20°, ואת הדם נאסף בצינור אוסף אבק על-ידי הוספת הסוף גומי של המחט פרפר החיילים המשוחררים cuum דם אוסף שפופרת. תוצאות הניסוי הנוכחי הראה כי שיעור ההצלחה היה 95% בקבוצה ניסיוני ל- 90% בקבוצה למתחילים. שיעור ההצלחה לנקב פעמים היו דומים בין שתי הקבוצות. משך דגימת היה נמוך באופן משמעותי בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת למתחילים. לסיכום, דם ואקום אוסף שיטה זו עבור לקיחת דמים רציפים של וריד הזנב שאינם מרדימים עכברי - היא ריאלי, קל-אל-ללמוד, אשר יכול לשמש אלטרנטיבה אמינה השני בשימוש כמקובל טכניקות דגימה דם חולדות.

משך דגימת, מסת הגוף, ונפח הדם אוסף של שתי הקבוצות דם נאסף מתוך 10 חולדות (5 גברים) פעמיים תוך שבועיים בכל קבוצה. מסת הגוף אומר בשתי הקבוצות הייתה דומה (272.00 ±9.66 g ו g 273.70 ±8.87). משך דגימת היה נמוך באופן משמעותי בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת מתחילים (2.77 min ±0.53 לעומת 3.28 ±0.83 מין, p < 0.05) (טבלה 1).
הצלחה דרג ו לנקב פעמים של שתי הקבוצות שיעור ההצלחה היה 95% (19/20) בתוך קבוצת הניסוי ו- 90% (18/20) בקבוצה למתחילים (p > 0.05). ניקוב פעמים לא היו שונים באופן משמעותי בין שתי הקבוצות (1.50 min ±0.61 לעומת 1.85 ±0.75 מין, p > 0.05) (טבלה 2). תוצאות אלה מצביעים על שיטה זו קל ללמוד הטכניקה יכולה להיות מומחה לאחר אימון עבור 2 h.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> איור 1 : 2 מ"ל דם ואקום אוסף שפופרת (משמאל); 22 גרם פרפר המחט (מרכז); בעל הרחקה פלסטיק (מימין)- <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> איור 2 : קצה המחט היה מוכנס לתוך הווריד של הזנב לרוחב (בסביבות 5 מ מ) במיקום כ 2-3 ס מ מן קצה הזנב בזווית של ° 20 משוער. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> איור 3 : מוצלח venipuncture. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">קבוצת הניסוי</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">קבוצה למתחילים</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>מגדר</td>
			<td>משקל הגוף (g)</td>
			<td>נפח הדם שנאספו (mL)</td>
			<td>משך דגימת (שלי)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>מגדר</td>
			<td>משקל הגוף (g)</td>
			<td>נפח הדם שנאספו (mL)</td>
			<td>משך דגימת (שלי)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>זכר</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>זכר</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>274</td>
			<td>0.9</td>
			<td>4.87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>נקבה</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>ממוצע</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2.77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-1: מספר סידורי של חולדות בקבוצה ניסיוני לאיסוף הדם הראשונה.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-2: מספר סידורי של חולדות בקבוצה ניסיוני לאיסוף הדם השני.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">בסון-1: מספר סידורי של חולדות בקבוצה למתחילים לאיסוף הדם הראשונה.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">בסון-2: מספר סידורי של חולדות בקבוצה למתחילים עבור האוסף השני של דם.</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: תוצאות של דם שנאסף קבוצת הניסוי וקבוצת למתחילים.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>דם אוסף פעמים</td>
			<td>ניקוב הממוצע פעמים</td>
			<td>ניקוב בפעם אחת</td>
			<td>שתי פעמים לנקב</td>
			<td>שלוש פעמים לנקב</td>
			<td>נכשל</td>
			<td>אחוזי הצלחה</td>
		</tr>
<tr>
<td>קבוצת הניסוי</td>
			<td>20</td>
			<td>1.50 ±0.61</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95%</td>
		</tr>
<tr>
<td>קבוצה למתחילים</td>
			<td>20</td>
			<td>1.85 ±0.75</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">ניקוב הזמן אחד: מספר עכברים עם איסוף דם מוצלח לאחר הניקוב הראשון</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">ניקוב פעמיים: מספר עכברים עם איסוף דם מוצלח לאחר הניקוב השני</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">ניקוב שלוש פעמים: מספר עכברים עם איסוף דם מוצלח לאחר הניקוב השלישי</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">נכשל: מספר עכברים עם נכשל איסוף דם לאחר הניקוב השלישי</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 2: השוואה של ניקוב פעמים, אחוזי ההצלחה של קבוצת הניסוי וקבוצת למתחילים.

Watch this Scientific Journal Video about Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System at JoVE.com

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה הזנב וריד דם הדגימה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם ומפשטת לקיחת דגימות מרובים venipuncture יחיד.

חזר על איסוף דם של וריד הזנב של חולדות שאינם מרדימים עם מערכת איסוף דם ואקום

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

repeated-blood-collection-from-tail-vein-non-anesthetized-rats-with

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

35.4K Views.  Jianghan University. כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה הזנב וריד דם הדגימה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם ומפשטת לקיחת דגימות מרובים venipuncture יחיד.

Video: Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

אוסף פרוטוקול לבלב אנוש

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

יבש של אוסף דם ספוט בריאות סמנים למקסם את ההשתתפות בלימודי אוכלוסייה

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

אוסף, בידוד, וניתוח תזרים cytometric של דוגמאות האנדוצרוויקאלית אדם

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

השגרה הקרנת שיטה עבור Microparticles ב עירויי טסיות

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. Research focusing on cardiovascular disease models, potential cardiovascular therapeutic targets or pharmaceutical agents requires assessment of systemic arterial pressure and heart rhythm changes. In situations where radio telemetry systems are not available or affordable, the technique of femoral artery cannulation is an alternative way to obtain intra-arterial pressure waveform recordings and systemic BP measurements. This technique is economical and can be performed with standard equipment in animal facilities. However, invasive arterial pressure recording requires cannulation of small arteries, which can be a challenging surgical skill. Here, we present step-by-step protocols for femoral artery cannulation procedures. Key procedures include the calibration of the data acquisition system, tissue dissection and femoral artery cannulation, and setup of the arterial cannulation system for pressure recording. Surface electrocardiography recording procedures are also included. We also present examples of BP recordings from normotensive and hypertensive rats. This protocol allows reliable direct recordings of systemic BP with simultaneous electrocardiography.

Here, we describe a setup for simultaneous recording of electrocardiography and intra-arterial blood pressure (BP) in experimental rats, which can be done with standard equipment in animal facilities and can be applied to physiological or pharmacological studies to investigate pathogenic or therapeutic mechanisms in cardiovascular medicine.

ההקלטה סימולטני אלקטרוקרדיוגרם ודם פולשנית בלחץ מדידה בחולדות

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

עבודה חדשה מומלצת עבור אימות זריקות וריד הזנב עכברוש עם סוכנים ליד אינפרא אדום-שכותרתו

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

איסוף דם באמצעות ניקוב ורידים תת-מותני בעכברים

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central nervous system (CNS). However, further optimization of these technologies would benefit from methods allowing rapid and streamline determination of the extent of CNS and cell-specific targeting upon administration of viral vectors or nanoparticles in the body. Here, we present a protocol that takes advantage of the high throughput and multiplexing capabilities of flow cytometry to allow a straightforward quantification of different cell subtypes isolated from mouse brain or spinal cord, namely microglia/macrophages, lymphocytes, astrocytes, oligodendrocytes, neurons and endothelial cells. We apply this approach to highlight critical differences between two tissue homogenization methods in terms of cell yield, viability and composition. This could instruct the user to choose the best method depending on the cell type(s) of interest and the specific application. This method is not suited for analysis of anatomical distribution, since the tissue is homogenized to generate a single-cell suspension. However, it allows to work with viable cells and it can be combined with cell-sorting, opening the way for several applications that could expand the repertoire of tools in the hands of the neuroscientist, ranging from establishment of primary cultures derived from pure cell populations, to gene-expression analyses and biochemical or functional assays on well-defined cell subtypes in the context of neurodegenerative diseases, upon pharmacological treatment or gene therapy.

We present a flow cytometry method to identify simultaneously different cell types retrieved from mouse brain or spinal cord. This method could be exploited to isolate or characterize pure cell populations in neurodegenerative diseases or to quantify the extent of cell targeting upon in vivo administration of viral vectors or nanoparticles.

אפיון מרובה של סוגי תאים שאוחזרו ממוח העכבר/חוט השדרה דרך שיטות הומוקות שונות

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...